Activated Immunobead® Matrix - Irvine Scientific

de anticorpos. Depois da adição da preparação de anticorpos
dializados, ajustar o volume total a 20 mL com o tampão de ligação.
Ressuspender as gotas e ajustar ao pH de 6.3, se necessário.
3. Incube a 4°C por 1 hora.
4. Adicione 40.0 mg EDAC (1-etil-3 [3-dimetilaminopropil] carbodiimida
HCl) a mistura de reacção. Misturar muito bem e vigorosamente.
5. Conservar a 4° C por pelo menos 3 horas. A mistura da reacção
pode guardar-se durante a noite tal qual está, mas se a proteína é
instável centrifugue e lave pelo menos uma vez com PBS.
6. Siga com os procedimentos de lavagem (Secção D).
C. Preparação de Imunoesferas com Antisoro intacto
Nota: Este procedimento produz uma actividade especifica menor
que o procedimento da Globulina
1. Centrifugue 200 µL de antisoro a 5,000 x g para remover qualquer
material insolúvel.
2. Centrifugue a suspensão de imunoesferas e descarte o
sobrenadante.
3. Adicione 100 µL de antisoro e 6.5 mL de tampão de ligação ao pellet
de imunoesferas do passo 2. Ressuspender e agitar muito bem.
4. Incube a 40° C por 1 hora.
5. Adicione 20.0 mg EDAC e agite vigorosamente. Conserve a 4° C
por pelo menos 3 horas.
6. Continue com a sequência de lavagem (Secção D).
Português 3/6