Activated Immunobead® Matrix - Irvine Scientific
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de anticorpos. Depois da adição da preparação de anticorpos<br />
dializados, ajustar o volume total a 20 mL com o tampão de ligação.<br />
Ressuspender as gotas e ajustar ao pH de 6.3, se necessário.<br />
3. Incube a 4°C por 1 hora.<br />
4. Adicione 40.0 mg EDAC (1-etil-3 [3-dimetilaminopropil] carbodiimida<br />
HCl) a mistura de reacção. Misturar muito bem e vigorosamente.<br />
5. Conservar a 4° C por pelo menos 3 horas. A mistura da reacção<br />
pode guardar-se durante a noite tal qual está, mas se a proteína é<br />
instável centrifugue e lave pelo menos uma vez com PBS.<br />
6. Siga com os procedimentos de lavagem (Secção D).<br />
C. Preparação de Imunoesferas com Antisoro intacto<br />
Nota: Este procedimento produz uma actividade especifica menor<br />
que o procedimento da Globulina<br />
1. Centrifugue 200 µL de antisoro a 5,000 x g para remover qualquer<br />
material insolúvel.<br />
2. Centrifugue a suspensão de imunoesferas e descarte o<br />
sobrenadante.<br />
3. Adicione 100 µL de antisoro e 6.5 mL de tampão de ligação ao pellet<br />
de imunoesferas do passo 2. Ressuspender e agitar muito bem.<br />
4. Incube a 40° C por 1 hora.<br />
5. Adicione 20.0 mg EDAC e agite vigorosamente. Conserve a 4° C<br />
por pelo menos 3 horas.<br />
6. Continue com a sequência de lavagem (Secção D).<br />
Português 3/6