Activated Immunobead® Matrix - Irvine Scientific

Cloridrato guanidina(GuHCl) – PBS.
Dissolva 478 g GuHCl e 8.77 g NaCl em 700 mL de água. Adicione
33.3 mL de stock 0.3 M KH 2 PO 4 e ajuste a pH 7.2. Filtrar (se
necessário) e diluir a 1.0 litro com água.
4. Tampão de fosfato 0.005 M, pH 7.2 ( é utilizado um tampão de baixa
força iónica para a liofilização das gotas de reagentes).
Diluir 16.7 mL de stock 0.3 M KH 2 PO 4 com 800 mL de água. Ajustar
o pH 7.2 com 1 M KOH. Diluir a 1.0 litro
5. 0.005 M tampão de fosfato– 1% BSA (usado para impedir alguma
absorção não especifica sobre os reagentes Immunobead finais).
Se o BSA é indesejado, um reagente similar deve ser preparado
usando outro transportador de proteínas). Dissolva 5 g de BSA de
alta qualidade (I.S. Cat #1092) em 500 mL do tampão utilizado.
B. Preparação da Matriz Immunobead com anticorpos
de fracções de Globulina
1. Fracções de Globulina de antisoros devem ser completamente
solúveis em PBS. Centrifugue para remover material insolúvel.
2. Usando um valor de OD196 de 14 para Globulina de Coelho e para
280
Globulina de Cabra, determine a concentração da sua preparação.
Dialize um volume da sua preparação contendo 8-10 mg de proteína
contra um Tampão de ligação.
Adicione a preparação de anticorpos dializada, incluindo qualquer
material que precipite no tampão de ligação, aos reagentes
Immunobead.
Se forem requeridos mais de 1 mL de anticorpos dializados
para completar o requisito de 8mg de proteína, a suspensão
deimunoesferas deve ser centrifugada e decantada antes da adição
Português 2/6