Activated Immunobead® Matrix - Irvine Scientific

Si le bruit de fond devient un problème, le tampon suivant est suggéré
à la place du NaCl 1,4M –PBS: hydrochlorure de guanidine (GuHCl)
5M -PBS.
Dissoudre 478g de GuHCl et 8,77g de NaCl dans 700 ml d’eau.
Ajouter 33 ml de solution mère KH 2 PO 4 0,3M, ajuster le pH à 7,2.
Filtrer (si nécessaire) et compléter le volume à un litre avec de l’eau.
4. Tampon phosphate 0,005M, pH 7,2 (un tampon à faible force ionique
utilisé pour la lyophilisation des réactifs de billes).
Diluer 16,7 ml de solution mère KH 2 PO 4 0,3M avec 800 ml d’eau.
Ajuster le pH à 7,2 avec du KOH 1M. compléter le volume à 1 litre
avec de l’eau.
. Tampon phosphate 0,005M – 1% BSA (utilisé pour bloquer toute
adsorption non spécifique sur le réactif Immunobead final). Si la BSA
est indésirable, un réactif similaire doit être préparé utilisant une autre
protéine “porteuse”). Dissoudre 5g de BSA de grande qualité (Irvine
Scientific, réf. 1092) dans 500ml du tampon si dessus.
B. Préparation de la matrice Immunobead avec la fraction anticorps
des globulines
1. La fraction globuline de l’antisérum doit être complètement soluble
dans le PBS. Centrifuger pour éliminer tout matériel insoluble.
2. Le rapport de densité optique OD196 est de 13 pour les globulines
280
de lapin et 14 pour les globulines de chèvre. En utilisant ce rapport,
déterminer la concentration des globulines dans votre préparation.
Dialyser un volume de cette préparation contenant 8 à 10 mg de
protéines contre le tampon de couplage.
Ajouter la préparation d’anticorps dialysée (en incluant tout matériel
ayant précipité dans le tampon de couplage) au réactif Immunobead.
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