Activated Immunobead® Matrix - Irvine Scientific

di cloruro di guanidina (GuHCl) - PBS. Dissolvere 478 g di GuHCl
e 8,77 g di NaCl in 700 mL d’acqua. Aggiungere 33,3 mL della
soluzione standard 0,3 M di KH 2 PO 4 e regolare il pH a 7,2. Filtrare
(se necessario) e diluire a 1,0 litri con acqua.
4. 0,005 M di tampone fosfato, ad un pH di 7,2 (un tampone a forza
ionica bassa utilizzato per la liofilizzazione di reagenti bead). Diluire
16,7 mL di soluzione standard 0,3 M di KH 2 PO 4 con 800 mL di acqua.
Regolare il pH a 7,2 con un M di KOH. Diluire a 1,0 litri.
5. 0,005 M di tampone fosfato - 1% di BSA (usato per bloccare ogni
assorbimento non specifico sui reagenti Immunobead finali). Se
la BSA non è desiderata, un reagente simile dev’essere preparato
usando un’altra “portatrice” proteica. Dissolvere 5 g di BSA di alta
qualità (I.S. Cat. #1092) con 500 mL del precedente tampone.
B. Preparazione della matrice Immunobead con
l’Anticorpo Frazione Globulina
1. Le frazioni globuline di antisieri devono essere completamente solubili
in PBS. Centrifugare per rimuovere il materiale insolubile.
2. Usando un valore per OD196 di 14 per globulina di coniglio e di
280
13 per globulina di capra si può determinare la concentrazione
della propria preparazione. Dializzare un volume della propria
preparazione contenente 8 - 10 mg di proteina dal tampone
accoppiato.
Aggiungere la preparazione di anticorpo dializzato, includendo ogni
materiale che precipita nel tampone per l’accoppiamento, ai reagenti
Immunobead.
Se più di un mL di anticorpo dializzato è necessario per ottenere
i richiesti 8 mg di proteina, la sospensione Immunobead deve
essere centrifugata e decantata prima di aggiungere l’anticorpo.
Dopo l’aggiunta della preparazione di anticorpo dializzato, regolare
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