Activated Immunobead® Matrix - Irvine Scientific

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C. Aliquoten so klein wie 50 µg Immunobead-Reagenz können quantitativ getrennt und gewaschen werden, obwohl der Niederschlag unsichtbar ist. Immunobead Rabbit Gamma Globulin (Kaninchen-Gamma-Globulin) oder Goat Gamma Globulin (Ziegen- Gamma-Globulin) können als Verdünnungsmitteln hinzugefügt werden, um die Totalanzahl zu 100-200 µg zu bringen, um einen leicht sichtbaren Niederschlag zu ergeben. D. Waschsequenz Diese Sequenz wird allen nicht kovalent gebundenen Stoff mit minimale Schadenaktivität total wegnehmen. Alle Schritte sind wichtig und sollen streng befolgt werden. Puffer sollen bei 4ºC beibehaltet werden. Sobald der Hochsalz-Schritt angefangen worden ist, sollen die restlichen Schritte in minimalem Zeitraum ausgeführt werden. 1. Den Stoff in gleiche Mengen in Zentrifugenbecher aufteilen. Ein Waschvolumen von mindestens 80 ml/200 mg Immunobead- Reazenz ist notwendig. 2. Die Becher zu voller Kapazität auffüllen und mit PBS aufwiegen. Für mindestens 10 Minuten bei mindestens 1.000 g zentrifugieren. 3. Sofort nachdem die Zentrifuge stillsteht, dekantieren und den Überstand durch Umkehrung der Becher wegwerfen. 4. Ein kleines Volumen PBS zu jedem Becher hinzufügen. Den Niederschlag entweder mit einem Wirbelmischer oder durch energische Mischung wieder suspendieren. 5. Schritte 2 und 3 wieder ausführen. 6. Den Niederschlag in einem kleinen Volumen von 1,4 M NaCl-PBS wieder suspendieren. Den/die Becher zu voller Kapazität auffüllen und mit 1,4 M NaCl-PBS aufwiegen. Deutsch 5/7
7. Für 10 Minuten bei 1.000 x g zentrifugieren. 8. Sofort nach die Zentrifuge stillsteht, den Niederschlag durch eine einzelne vollständige Umkehrung der Becher dekantieren. Den Becher kurz leeren. 9. Schritte 6, 7, und 8 wieder ausführen. 10. Zweimal mit PBS waschen. (Schritte 4, 2, und 3 wieder ausführen.) 11. In PBS wieder suspendieren und für mindestens 3 Stunden auf Eis (4ºC) stehen lassen, um vollständige Renaturierung des gebundenen Antikörpers zu ermöglichen. 12. a.) An diesem Punkt kann das Reagenz gebraucht werden. Zweimal wie angewiesen waschen und zu einem Endvolumen von 20 ml (10 mg/ml Immunobead-Reagenz) kombinieren. ODER b.) Gewöhnlich ist es günstig, das fertige Reagenz vor dem Gebrauch in einem analytischen System mit BSA aufzusaugen. Zweimal mit 0,005 M Phosphat (pH-Wert 7,2) waschen und in 0,005 M Phosphat – 1% BSA Puffer wieder suspendieren. 13. Das Reagenz kann durch Zentrifugierung in andere Puffer gewascht werden. Falls ohne Lyophilisierung gelagert, 1 ml 2% (2 g/100 ml) NaN 3 als Konservierungsmittel hinzufügen. Immunobead-Reagenz, das mit Natriumazid konserviert wird, ist gewöhnlich für mindestens 180 Tage bei 4ºC stabil. Deutsch 6/7
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