Activated Immunobead® Matrix - Irvine Scientific

Falls mehr als 1 ml dialysiertes Antikörper nötig ist, um die
notwendigen 8 mg Protein zu ergeben, die Suspension zentrifugieren
und dekantieren, vor der Hinzufügung des Antikörpers. Nach der
Hinzufügung des dialysierten Antikörpers das Volumen mit dem
Kupplungspuffer zu einem Endvolumen von 20 ml bringen. Die Perlen
wieder suspendieren und bis zu einem von 6,3 bringen, falls nötig.
3. Für 1 Stunde bei 4ºC bebrüten.
4. 40,0 mg EDAC (1-ethyl-3 [3-dimethylaminopropyl] carbodiimide-HCl)
zur Reaktionsmischung hinzufügen. Vollständig und energisch
mischen.
5. Für mindestens 3 Stunden bei 4ºC lagern. Die Reaktionsmischung
kann an diesem Punkt über Nacht gelagert werden, aber falls Ihr
Protein nicht stabil ist, das Protein zentrifugieren und mindestens
einmal mit PBS waschen.
6. Das Waschverfahren (Abteilung D) fortühren.
C. Vorbereitung des Immunobead-Reagenzes mit
Whole Antisera (ganzen Heilsera)
Hinweis: Dieses Verfahren ergibt eine niedrigere spezifische Aktivität
als das Globulinverfahren.
1. 200 µL Heilsera bei 5.000 x g zentrifugieren, um unlöslichen Stoff
wegzunehmen.
2. Die Immunobead-Suspension zentrifugieren und den Überstand
wegwerfen.
3. 100 µL Heilsera und 6,5 ml Kupplungspuffer zum Immunobead-
Niederschlag von Schritt 2 hinzufügen. Wieder suspendieren und
gründlich mischen.
Deutsch 3/7