Descargar Catálogo Preparación de Muestras - Grupo BioMaster

análiSiS dmS
guía de flujo de trabajo y métodos para
el análisis de manchas de sangre seca
1. análiSiS de mancHaS
• Use el flujo de trabajo de obtención de muestras existente y el
volumen de sangre preferido (normalmente, 15 µl, aunque se
obtiene una mejor respuesta para MS con 30 µl).
• Sostenga la punta de la pipeta o el capilar sobre el papel en el
centro del círculo de puntos (EVITE EL CONTACTO DE LA PUNTA
CON LA SUPERFICIE DE LA TARJETA).
• Para la dispensación, permita que la gota de sangre entre en
contacto con la superficie para el análisis de manchas de la tarjeta.
• La mancha de sangre se absorbe rápidamente en la superficie y
deja una mancha circular.
2. Secado
• El tiempo de secado de las tarjetas DMS Bond Elut es comparable
al de las tarjetas con celulosa.
• Se recomienda un tiempo de secado mínimo de 2 horas de la
muestra antes de la perforación.
3. PeRFoRación
La tarjeta Agilent DMS es compatible con las herramientas de
perforación portátiles y se puede configurar fácilmente para los sistemas
de perforación automatizados compatibles con el formato de tarjeta de
cuatro manchas.
• Realice una perforación del tamaño adecuado en el centro de la
mancha de sangre (normalmente, 3 mm).
• Transfiera el disco perforado con la muestra de sangre a un vial o
una placa de 96 pocillos adecuados.
4. extRacción
• Añada 300 µl de ácido fórmico al 0,1%* en metanol al 80% al disco
perforado.
• Añada un patrón interno adecuado a la muestra y mezcle en el vórtex.
• Centrifugue durante 15 minutos o filtre si fuera necesario.
• Deje que la muestra se evapore hasta secarse y reconstituya en
100 µl de fase móvil.
• Inyecte en LC/MS/MS.
*El uso de ácido fórmico al 0,1% puede facilitar la elución de una mayor cantidad de
analitos hidrófobos.
otRaS conSideRacioneS PRácticaS
Muestras de sangre: se puede usar sangre reciente no tratada si no
presenta signos de coagulación. En la mayoría de los casos, se puede
usar sangre con un anticoagulante (EDTA o heparina). No se recomienda
el uso de muestras de sangre congeladas, ya que se pueden producir
daños celulares tras la descongelación.
Manchas ovaladas: se pueden formar manchas ovaladas por el movimiento
manual brusco durante el proceso de análisis de manchas. Esto no supone
ningún problema para el experimento, ya que la perforación posterior en el
centro de la mancha normaliza el volumen de análisis.
Niveles de hematocrito: DMS Bond Elut ofrece un nivel de
homogeneidad de manchas y una recuperación mejorados en
comparación con los dispositivos con celulosa para un amplio intervalo
de niveles de hematocrito.
Fuerza de perforación: las tarjetas DMS Bond Elut requieren una
fuerza de perforación 4 veces menor en comparación con las tarjetas
con celulosa. No es necesario girar la herramienta de corte durante
la perforación de la mancha de sangre.
Contaminación cruzada: si se espera el tiempo suficiente para que se
sequen las manchas de sangre, no es probable que se produzca
contaminación cruzada.
Efecto de la humedad: las tarjetas DMS Bond Elut no son higroscópicas
y no absorben el agua, incluso en entornos con altos niveles de humedad.
Tarjeta no tratada: DMS Bond Elut no contiene ninguna impregnación
química.
Otras matrices: DMS Bond Elut es compatible con una amplia variedad
de matrices biológicas (incluido el plasma).
RecomendacioneS y HeRRamientaS
Para consultar la nota de aplicación de Agilent "Improving Sensitivity of Basic Drugs in Dried Blood Spotting through Optimal Desorption"
(sobre el aumento de la sensibilidad para fármacos básicos mediante el análisis de manchas de sangre seca con una desorción óptima),
visite www.agilent.com/chem/driedbloodspotting.
www.agilent.com/cHem/SamPlePReP 121