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Espectroscopia ultravioleta/visible: Los espectros ultravioleta (UV) y visible
se midieron en un espectrofotómetro Heλios α V-3.06 UV/VIS de doble haz. Como
disolvente se empleó metanol. Los valores de longitud de onda (λ) se expresan en
nm.
Cromatografía de gases acoplada a espectroscopía de Masas (CG.EM): la
fracción aromática de H. drummondii se sometió a CG-EM con el fin de identificar a
los compuestos mayoritarios, se utilizó un equipo Perkin-Elmer AutoSystem con
columna Quadrex 007.5MS, (30 m, 0.25 mm, film D.I. 250 µm). Utilizando gas
Helio como acarreador y flujo de 50 mL/min. Tiempo total de corrida de 45 min
utilizando un EM: PE Turbomass full scan 40 a 400 uma, EI+ (centroide).
7.5 Evaluación de la Actividad Antiproliferativa
7.5.1. Ensayo MTT
Para el tamizaje preliminar de los extractos crudos se realizó el ensayo de
MTT [bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio)] que se basa en la
reducción de esta sal mediada por las enzimas succinato deshidrogenada
mitocondrial y formación de cristales de formazán, los cuales se disuelven en alcohol
isopropilico acidificado, determinándose la viabilidad celular midiendo el cambio
de la absorbancia a 545 nm (Mosmann, 1983).
Para el ensayo se utilizaron microplacas de 96 pozos donde se colocaron
5000 células por pozo, después de 24 h se incubaron las líneas celulares con
diferentes concentraciones de los extractos por periodo de 48 h, después de este
tiempo se realizó el ensayo de MTT descrito a continuación: una vez decantado el
medio de cultivo se agregaron 100 µL de una mezcla de MTT (2 mg/mL): PMS (3.5
mg/mL) a razón 5:1, se incubó 75 min, transcurrido el tiempo se decantó el reactivo
y lavó cada pozo con 200 µL de solución salina balanceada de Hank’s,
posteriormente se disolvieron los cristales de formazán (morados) en alcohol
isopropílico ácido (0.04M) y se leyó a 545 nm, se relacionó directamente la
absorbancia con viabilidad celular. Se realizaron tres ensayos independientes con
seis repeticiones cada uno, los resultados se calcularon con probit, donde se expresa
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