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Sephadex LH-20, utilizando columnas de 60.5 x 5 cm, utilizando mezclas de MeOH-
H 2 O. El análisis de los patrones cromatográficos de las fracciones obtenidas se
realizó por cromatografía en capa delgada o TLC, por sus siglas en ingles (Merck,
silica gel 60 F 254 ) eluidas en el sistema: acetato de etilo: ácido acético: acido fórmico:
agua, (100:10:10:30), usando como revelador ácido difenil bórico disuelto en
metanol al 0,5 % p/v. Las manchas fueron visualizadas bajo luz UV (365 y 254 nm).
Las fracciones obtenidas con Rf similar fueron combinadas y concentradas a
sequedad total en un rotavapor. Aquellas fracciones con mayor actividad atrapadora
de radicales libres fueron sometidas al aislamiento de sus componentes por
cromatografía liquida de alta resolución (CLAR o HPLC por sus siglas en ingles)
utilizando un equipo HPLC-DAD Merck-Hitachi (LaChrom, Tokio, Japan) equipado
con una bomba L-7100, un detector UV con arreglo de diodos L-7455 UV y un
cromatointegrador D-7000, de forma analítica se utilizó una columna Phenomenex,
Torrence C18-RP (250 x 4,60 mm d.i., 5 µm) y de forma semipreparativa una Merck
Lichrospher C18-RP (250 x 25 mm i.d., 7 µm). Los compuestos fenólicos
mayoritarios fueron monitoreados a una longitud de onda de 254 nm, entre 200 y 400
nm. El gradiente de elución se hizo con agua-1 % ácido fórmico (solvente A) y
MeOH (solvente B) a un flujo de 1 mL/min de forma analítica y 5 mL/ min de forma
semipreparativa.
7.4.1 Identificación de Compuestos
Las estructuras de los compuestos fueron determinadas usando técnicas de
RMN de 1 H mayoritariamente. En caso necesario se midieron otros parámetros como
RMN bidimensional y espectroscopia de UV. Se realizó una comparación de datos
con aquellos publicados con anterioridad.
Resonancia magnética nuclear (RMN): Los espectros de RMN fueron
obtenidos en un espectrómetro Bruker a 400 MHz para 1 H. Para realizar las
mediciones se utilizó metanol deuterado (MeOH-d 4 ). Los valores de desplazamiento
químico (δ) se expresaron en ppm. En caso necesario se utilizaron programas de
correlación bidimensional
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