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un máximo de absorción a 415 nm y una serie de máximos secundarios de absorción
a 645, 660, 734, 815 y 820 nm (Re et al., 1999). La generación del radical ABTS•
por reacciones químicas, se hace reaccionando persulfato potásico con 2,2’-azo-bis-
(2-amidinopropano) (ABAP).
Una vez formado el radical ABTS• se diluyó con etanol hasta obtener un
valor de absorbancia de 0,700 ± 0,100 a 754 nm (longitud de máxima absorción).
Ciento ochenta microlitros de la dilución del radical ABTS•, se mezcló con 20 µL de
la muestra y se determinó la absorbancia a 754 nm a 25 ºC. El resultado se expresa
como la Capacidad Antioxidante Equivalente en Trolox (CAET o TEAC por sus
siglas en ingles).
7.3.3 Captura del radical DPPH
Este método se basa en la reducción del radical 2,2-difenil-1-picrilhidracilo
(DPPH•) por los antioxidantes de la muestra. El radical es estable y tiene una
coloración púrpura que se pierde progresivamente cuando se añade la muestra
conteniendo sustancias antioxidantes.
Para este ensayo se siguieron dos vías, primero se calculó la CAET del
extracto, para lo cual se realizó una curva con trolox y la segunda vía calculando la
concentración efectiva media (CE 50 , µg/mL), esto para dar seguimiento al
fraccionamiento dirigido: en microplacas de 96 pozos se colocaron diferentes
concentraciones de cada muestra con DPPH (2 mg/L) disuelto en metanol, se dejó
reposar 5 min a temperatura ambiente y posteriormente se leyó la absorbancia a 520
nm utilizando un lector de microplacas (Schmeda et al., 2003). Se utilizó como
control positivo la catequina.
7.4 Aislamiento Dirigido
El extracto crudo se sometió a partición sucesiva con diclorometano (DCM) y
mezclas de DCM-MeOH (1:1, v/v). Se tomó como base la capacidad atrapadora de
radicales libres (DPPH) para continuar con el fraccionamiento dirigido y aislamiento
de sus compuestos activos. Se realizaron fraccionamientos por permeación en gel
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