Resumen de los Trabajos - Sociedad de Cirujanos de Chile

IDENTIFICACIÓN DE MUTACIONES
GERMINALES EN EL GEN STK11 EN
PACIENTES CHILENOS CON SÍNDROME
DE PEUTZ-JEGHERS
Drs. P. Orellana 1 , K. Álvarez 1 , E. Pinto 1 , C. Heine 1 ,
C. Suazo 1 , J. Church 2 , P. Carvallo 3 , F. López-
Kostner 1 .
Laboratorio de Oncología y Genética Molecular,
Unidad de Coloproctología, Clínica las Condes,
Santiago-Chile 1 . Cleveland Clinic Foundation, Ohio-
USA 2 . Departamento Biología Celular y Molecular,
Facultad Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad
Católica de Chile, Santiago-Chile 3 .
Introducción: El Síndrome Peutz-Jeghers (SPJ) es
un desorden autosómico dominante causado por
mutaciones en la línea germinal en el gen
serina/treonina kinasa 11 (STK11). Este síndrome
se caracteriza por la presentación de máculas
mucocutáneas en boca, manos y pies; pólipos
hamartomatosos en el tracto gastrointestinal que
pueden producir sangrado, anemia e intususcepción;
y un riesgo aumentado de neoplasias en distintos
órganos. El objetivo de este estudio fue determinar
la causa genética en pacientes chilenos con Síndrome
de Peutz-Jeghers.
Metodología: El ADN genómico fue extraído desde
sangre venosa periférica. Se reclutaron 13 pacientes
desde 8 familias con SPJ. En una primera etapa, el
gen STK11 fue amplificado por PCR y analizado
mediante secuenciación de ADN. En pacientes sin
mutación puntual identificada se realizó el análisis
de rearreglos genómicos mediante la técnica de
multiplex ligation-dependent probe amplification
(MLPA).
Resultados: Un total de 13 pacientes (10 mujeres y
3 hombres, rango edad actual: 9-54 años), desde
ocho familias fueron incluidas en el estudio. La edad
de diagnóstico osciló entre 1-37 años de edad. Cinco
familias presentan historia familiar de la enfermedad,
en tanto que las demás familias son aparentemente
casos de novo. En seis familias, los pacientes
presentaron intususcepción debiendo someterse a
múltiples cirugía. Ninguno de los pacientes incluidos
en este estudio ha desarrollado cáncer. Entre los
antecedentes familiares, se encontraron dos casos
afectados por cáncer y SPJ, uno con cáncer
colorrectal y otro con cáncer pancreático, ambos
fallecidos a los 71 y 53 años, respectivamente.
El estudio genético demostró la presencia de 7
mutaciones diferentes en el gen STK11 en 7/8
familias (88%), las cuales corresponden a 3
mutaciones puntuales (una proteína trunca y dos
cambios intrónicos) identificadas por secuenciación,
y 4 grandes deleciones que involucran desde un
exón o el gen completo identificadas por MLPA.
Todas las mutaciones conducen a la pérdida de
dominios funcionales de la enzima. Las mutaciones
puntuales no han sido previamente descritas en otras
poblaciones.
Conclusión: Nuestros resultados demostraron
mutaciones en el gen STK11 en el 88% de las
familias que cumplen con los criterios diagnósticos
de SPJ. La combinación de dos técnicas moleculares
en el estudio permitió identificar un alto porcentaje
de mutaciones.
Financiado por Cleveland Clinic Foundation and
Clínica Las Condes.
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ANÁLISIS DE MUTACIONES PUNTUALES
Y REARREGLOS GENÓMICOS EN LOS
GENES MLH1, MSH2, MSH6 Y PMS2 EN EL
SÍNDROME DE LYNCH.
Drs. P. Orellana, A. Wielandt, K. Alvarez, C. Hurtado,
E. Pinto, P. Carvallo, J. Church, U. Kronberg, F.
Lopez-Köstner
Laboratorio de Oncología y Genética Molecular,
Unidad de Coloproctología, Clínica las Condes
Introducción: La estrategia de estudio del Síndrome
de Lynch incluye la selección de las familias por
criterios clínicos (Amsterdam y Bethesda), y el
análisis de inestabilidad microsatelital (MSI).
Inicialmente, el análisis genético se realizó mediante
búsqueda de mutaciones puntuales en los genes
MLH1 y MSH2. Desde el año 2009, se agregaron
estudios para mutaciones puntuales en los genes
MSH6 y PMS2, y el análisis de rearreglos genómicos
en los 4 genes.
Objetivo: Evaluar la estrategia aplicada en el estudio
genético de pacientes con Síndrome de Lynch.
Métodos: Inicialmente, pacientes sospechosos de
Síndrome de Lynch fueron clasificados según
criterios de Amsterdam y Bethesda. Las biopsias de
los pacientes fueron analizados para MSI utilizando
5 marcadores (panel de Bethesda). El estudio genético
de los genes MLH1, MSH2, MSH6 y PMS2 se
realizó utilizando diferentes técnicas como SSCP
(Single Strand Conformation Polymorphism),
secuenciación directa y MLPA (Multiplex Liganddependent
Probe Amplification).
Resultados: Estudios genéticos fueron realizados en
50 familias sospechosas de Síndrome de Lynch, 21
de ellos con criterios de Amsterdam y 29 de Bethesda.
Se identificaron 17 mutaciones diferentes en 20
familias (17 Amsterdam y 3 Bethesda). Las
mutaciones de 15 familias están localizados en el
gen MLH1, y de las 5 restantes en MSH2. Catorce
familias portan mutaciones puntuales, y en 6 se
observaron rearreglos genómicos (30%). En los
genes MSH6 y PMS2, se detectaron solamente
variantes alélicas. Para el análisis de MSI se contaba
con muestras tumorales en 41 familias, de las cuales
33 mostraron MSI-alta (18 Amsterdam y 15
Bethesda).
Conclusiones: Aplicando las diferentes técnicas de
análisis genético, se logró identificar una mutación
en MLH1 ó MSH2 en el 94% de las familias
Asterdam y 20% de las familias Bethesda con MSIalta.
En familias Amsterdam, se permite realizar el
estudio genético directamente, mientras en familias
Bethesda se recomienda analizar el estado de MSI
primero para aumentar la probabilidad de encontrar
una mutación. Las variantes alélicas encontradas en
MSH6 y PMS2 requieren estudios funcionales para
determinar su eventual patogenicidad.
REARREGLOS GENÓMICOS EN EL GEN
APC Y MUTACIONES EN EL GEN MUTYH
EN PACIENTES CON POLIPOSIS
ADENOMATOSA FAMILIAR.
Drs. K. Alvarez, A. Wielandt, P.Orellana, M. De la
Fuente, C. Hurtado, E. Pinto, U. Kronberg, P.
Carvallo, J. Church, F. Lopez-Köstner
Laboratorio de Oncología y Genética Molecular,
Unidad de Coloproctología, Clínica las Condes