Suplemento 2011 - Facultad de Medicina - Universidad Nacional ...

More documents

Recommendations

Info

Wilensky Luciana y col. Rev. Fac. Med. UNNE XXXI: Supl., 11 - 16, 2011 INTRODUCCIÓN Es conocido que el ejercicio produce efectos beneficiosos reduciendo factores de riesgo cardiovascular como la hipertensión, la diabetes melitus, la obesidad, trombosis, la disfunción endotelial, y la dislipedemia (1). Como resultado de la actividad física, el músculo cardíaco remodela fisiológicamente desarrollando una hipertrofia miocárdica en respuesta al incremento crónico del trabajo cardíaco (2), pudiéndose observar también un incremento del diámetro del ventrículo izquierdo (3). A su vez, dependiendo del tipo de ejercicio que se realice, la hipertrofia compensadora puede ser: 1) concéntrica (ejercicios isométricos como el levantamiento de pesas), 2) excéntrica (ejercicios isotónicos o auxotónicos como el observado en corredores y nadadores) o 3) mixta (combinación de tipos de ejercicio) (4). Durante el ejercicio aumenta la demanda metabólica de oxígeno por los músculos en actividad, y comienza a jugar un rol adaptativo importante la interrelación de las fibras musculares esqueléticas, el sistema nervioso y el circulatorio (5). Esto determinará el grado de entrenamiento del individuo, con una función cardíaca normal o aumentada (3). Asimismo, se ha descripto que el ejercicio puede modificar favorablemente estados patológicos previamente establecidos y vinculados a hiperactividad simpática como la hipertensión, el infarto de miocardio y la insuficiencia cardíaca (1). Sin embargo, los mecanismos subyacentes por los cuales el ejercicio produciría efectos benéficos no se conocen completamente. Garciarena y col. (6) mostraron en ratas espontáneamente hipertensas que el ejercicio de baja intensidad resulta en adaptaciones benéficas, revirtiendo la hipertrofia miocárdica patológica en fisiológica, inhibiendo la apoptosis y mejorando de esta manera la función ventricular. Waard y col. (7) mostraron en ratones transgénicos con distinto grado de expresión de eNOS con infarto de miocardio, que el ejercicio redujo la fibrosis, la apoptosis y atenuó la disfunción sistólica mientras que la pérdida de eNOS exacerbó la disfunción ventricular y la congestión pulmonar sugiriendo que los efectos benéficos del ejercicio dependen de la activación de la eNOS endógena. Es por ello, que sería interesante estudiar en un modelo de hiperactividad simpática cardíaca la respuesta compensadora del miocardio, la función ventricular basal y la reserva inotrópica, en un modelo de ejercicio intenso crónico. MATERIALES Y METODOS Modelo Transgénico En este trabajo se utilizó una línea de ratones transgénicos con sobreexpresión de la proteína Gsα. La sobreexpresión de esta proteína fue realizada a partir de la microinyección de un fragmento de ADN en la célula huevo fertilizada y posteriormente transferida a los oviductos de una hembra pseudo-preñada hasta el momento del nacimiento. El transgén se construyó a partir de la inserción de la secuencia correspondiente a continuación del gen promotor de la cadena pesada de α-miosina de expresión diferencial en los cardiomiocitos. El análisis de cada una de las cepas para la distribución por grupos se realizará a priori y a posteriori. A priori, mediante la utilización de técnicas de selección (PCR) para el análisis de las líneas transgénicas, por aislamiento de ADN genómico de la oreja de los animales (8) (9). De esta manera, se identifican los ratones portadores del transgén, observando la sobreexpresión cardíaca específica de la proteína Gsα en el corazón. Protocolo de ejercicio Los ratones fueron colocados en una pileta de 40x70x30 cm con agua entre 30-32º C mantenida de forma estable con un estabilizador de temperatura (10) (Figura 1). Se realizó un protocolo de ejercicio de 2 sesiones diarias de 90 minutos durante 4 semanas. Al inicio del protocolo se realizó un período de adaptación de una semana, en donde los animales nadaron 20 minutos diarios y luego se incrementó gradualmente el tiempo de ejercicio hasta llegar al tiempo indicado en el protocolo (11) (12). Los animales de todos los grupos se mantuvieron en ciclos de 12 hs luz/oscuridad a una temperatura de 20-22º C, con disponibilidad de alimento y agua durante todo el tiempo de protocolo, tanto para los grupos de entrenamiento como los sedentarios. Grupos Experimentales Los grupos experimentales que se utilizaron en el proyecto fueron los siguientes: -Grupo1: Grupo Control noTG (ratones noTG que no realizaron ningún tipo de ejercicio): los animales pertenecientes a este grupo no realizaron natación y se los mantuvo en sus respectivas jaulas hasta el momento de la eutanasia, realizando previamente el estudio de la función ventricular basal, la reserva inotrópica y posteriormente la necropsia completa. -Grupo2: Grupo Control TG (ratones TG que no realizaron ningún tipo de ejercicio): los animales pertenecientes a este grupo no realizaron natación y se los mantuvo en sus respectivas jaulas hasta el momento de la eutanasia, realizando previamente el estudio de la función ventricular basal, la reserva inotrópica y posteriormente la necropsia completa. -Grupo3: Grupo noTG+E (ratones noTG de ejercicio intenso): los animales pertenecientes a este grupo nadaron 90 minutos dos veces al día, 6 veces por semana durante 4 semanas. Durante el protocolo, a estos animales se los mantuvo en sus respectivas jaulas hasta el momento de la eutanasia, realizando previamente el estudio de la función ventricular basal, la reserva inotrópica y posteriormente la necropsia completa. -Grupo4: Grupo TG+E (ratones TG de ejercicio intenso): los animales pertenecientes a este grupo nadaron 90 minutos dos veces al día, 6 veces por semana durante 4 semanas. Durante el protocolo, a estos animales se los mantuvo en sus respectivas jaulas hasta el momento de la eutanasia, realizando previamente el estudio de la función ventricular basal, la 12
Wilensky Luciana y col. Rev. Fac. Med. UNNE XXXI: Supl., 11 - 16, 2011 reserva inotrópica y posteriormente la necropsia completa. Función Ventricular Basal y Reserva Inotrópica de Receptores β-Adrenérgicos Una vez concluido el tiempo de protocolo, los animales fueron pesados y anestesiados con Ketamina (100 mg/kg) y Xilazina (2,5 mg/kg). Se realizó la disección y colocación de un catéter heparinizado por la arteria carótida derecha hasta el ventrículo izquierdo (VI). A su vez, se diseccionó la vena yugular izquierda y se introdujo otro catéter para administrar un bolo endovenoso de isoproterenol (ISO, 56 ng/kg). Luego, se dejó estabilizar (10 minutos) y se registró los valores basales de presión arterial media (PAM), presión ventricular izquierda sistólica y diastólica (LVSP y LVEDP; mmHg), su derivada (+dP/dt y –dP/dt; mmHg/seg) y la frecuencia cardíaca (FC; latidos/min). Para cada uno de los grupos se registraron las mismas variables luego de la administración de ISO de la forma y dosis ya indicadas, en tiempo real en una computadora PC pentium 4 con plaqueta conversora analógica-digital (National Instruments) y un software para tal fin. Evaluación Histomorfométrica Una vez culminado el tiempo de protocolo, los animales fueron pesados y anestesiados (ver anterior), y una vez registrada la función ventricular, se realizó la eutanasia de los ratones y la correspondiente necropsia de los mismos. Se extrajo el bloque cardiopulmonar completo y se realizó una disección en VI y ventrículo derecho (VD), y aurícula izquierda y derecha, para registrar los pesos, y el VI se guardó en formol buffer para estudio histomorfométricos. También se registró la longitud de la tibia (LT) para el cálculo del cociente de hipertrofia VI/LT. Densidad Capilar (Inmunohistoquímica) Cortes seriados y montados en vidrios polarizados fueron inmunomarcados para CD34 (monoclonal Mouse anti-human CD34 class II clone QBEnd 10, Dako), y luego revelado con diaminobenzidina, obteniendo una marcación marrón en sitios correspondientes a vasos CD34 positivos. Se utilizó un analizador de imágenes, Image-Pro Plus 6.0, para la cuantificación del número de vasos de pequeño calibre (capilares) por mm2 para cada uno de los grupos Cuantificación del % de Colágeno Una vez fijado el VI con formol buffer, se incluyó en parafina, y se realizarán cortes seriados a los que se les realizó la tinción de Picrosirius Red para la coloración del colágeno y la cuantificación por colorimetría a partir de un analizador de imágenes Image-Pro Plus 6.0, realizándose una marcación diferencial en rojo para el colágeno y amarillenta para el tejido no colágeno (sin considerar el colágeno perivascular) para cada uno de los grupos. Se expresó como porcentaje del área de colágeno sobre el total de no colágeno. FIGURAS Figura 1: Entrenamiento de ratones (A) Figura 1: (A) Sistema de natación para el entrenamiento animal; (B) sesión de entrenamiento. RESULTADOS El cociente peso del VI/LT (ventrículo izquierdo (g)/longitud de la tibia (mm)) fue de 5.08±0.3 en el Grupo1, 5.46±0.2 para el Grupo2, 6.82±0.2 para el Grupo3 (p
Page 1 and 2: ISSN - 0326 - 7083 Revista de la Fa
Page 3: INDICE Revista de la Facultad de Me
Page 7 and 8: PRIMER PREMIO Canale L. Hernán y C
Page 9 and 10: Canale L. Hernán y Col. Rev. Fac.
Page 11: SEGUNDO PREMIO Wilensky Luciana y c
Page 15 and 16: Wilensky Luciana y col. Rev. Fac. M
Page 17 and 18: RESUMENES V Jornadas Científicas y
Page 19 and 20: V Jornadas Científicas y Pedagógi
Page 59: V Jornadas Científicas y Pedagógi
Page 62 and 63:
Rev. Fac. Med. UNNE XXXI: Supl. 201
Page 64:
Rev. Fac. Med. UNNE XXXI: Supl. 201
Page 68:
80 Revista de la Facultad de Medici
show all

Suplemento 2011 - Facultad de Medicina - Universidad Nacional ...

You also want an ePaper? Increase the reach of your titles

Delete template?

Save as template?