Suplemento 2011 - Facultad de Medicina - Universidad Nacional ...

Wilensky Luciana y col. Rev. Fac. Med. UNNE XXXI: Supl., 11 - 16, 2011
INTRODUCCIÓN
Es conocido que el ejercicio produce efectos
beneficiosos reduciendo factores de riesgo cardiovascular
como la hipertensión, la diabetes melitus, la obesidad, trombosis,
la disfunción endotelial, y la dislipedemia (1). Como
resultado de la actividad física, el músculo cardíaco remodela
fisiológicamente desarrollando una hipertrofia miocárdica en
respuesta al incremento crónico del trabajo cardíaco (2),
pudiéndose observar también un incremento del diámetro del
ventrículo izquierdo (3). A su vez, dependiendo del tipo de
ejercicio que se realice, la hipertrofia compensadora puede ser:
1) concéntrica (ejercicios isométricos como el levantamiento
de pesas), 2) excéntrica (ejercicios isotónicos o auxotónicos
como el observado en corredores y nadadores) o 3) mixta
(combinación de tipos de ejercicio) (4). Durante el ejercicio
aumenta la demanda metabólica de oxígeno por los músculos
en actividad, y comienza a jugar un rol adaptativo importante
la interrelación de las fibras musculares esqueléticas, el sistema
nervioso y el circulatorio (5). Esto determinará el grado de
entrenamiento del individuo, con una función cardíaca normal
o aumentada (3). Asimismo, se ha descripto que el ejercicio
puede modificar favorablemente estados patológicos previamente
establecidos y vinculados a hiperactividad simpática
como la hipertensión, el infarto de miocardio y la insuficiencia
cardíaca (1). Sin embargo, los mecanismos subyacentes por los
cuales el ejercicio produciría efectos benéficos no se conocen
completamente. Garciarena y col. (6) mostraron en ratas
espontáneamente hipertensas que el ejercicio de baja intensidad
resulta en adaptaciones benéficas, revirtiendo la hipertrofia
miocárdica patológica en fisiológica, inhibiendo la apoptosis
y mejorando de esta manera la función ventricular. Waard y
col. (7) mostraron en ratones transgénicos con distinto grado
de expresión de eNOS con infarto de miocardio, que el ejercicio
redujo la fibrosis, la apoptosis y atenuó la disfunción
sistólica mientras que la pérdida de eNOS exacerbó la disfunción
ventricular y la congestión pulmonar sugiriendo que los
efectos benéficos del ejercicio dependen de la activación de la
eNOS endógena. Es por ello, que sería interesante estudiar en
un modelo de hiperactividad simpática cardíaca la respuesta
compensadora del miocardio, la función ventricular basal y la
reserva inotrópica, en un modelo de ejercicio intenso crónico.
MATERIALES Y METODOS
Modelo Transgénico
En este trabajo se utilizó una línea de ratones
transgénicos con sobreexpresión de la proteína Gsα. La sobreexpresión
de esta proteína fue realizada a partir de la microinyección
de un fragmento de ADN en la célula huevo fertilizada
y posteriormente transferida a los oviductos de una hembra
pseudo-preñada hasta el momento del nacimiento. El transgén
se construyó a partir de la inserción de la secuencia correspondiente
a continuación del gen promotor de la cadena pesada de
α-miosina de expresión diferencial en los cardiomiocitos. El
análisis de cada una de las cepas para la distribución por
grupos se realizará a priori y a posteriori. A priori, mediante la
utilización de técnicas de selección (PCR) para el análisis de las
líneas transgénicas, por aislamiento de ADN genómico de la
oreja de los animales (8) (9). De esta manera, se identifican los
ratones portadores del transgén, observando la sobreexpresión
cardíaca específica de la proteína Gsα en el corazón.
Protocolo de ejercicio
Los ratones fueron colocados en una pileta de
40x70x30 cm con agua entre 30-32º C mantenida de forma
estable con un estabilizador de temperatura (10) (Figura 1). Se
realizó un protocolo de ejercicio de 2 sesiones diarias de 90
minutos durante 4 semanas. Al inicio del protocolo se realizó
un período de adaptación de una semana, en donde los animales
nadaron 20 minutos diarios y luego se incrementó gradualmente
el tiempo de ejercicio hasta llegar al tiempo indicado en
el protocolo (11) (12).
Los animales de todos los grupos se mantuvieron
en ciclos de 12 hs luz/oscuridad a una temperatura de 20-22º
C, con disponibilidad de alimento y agua durante todo el
tiempo de protocolo, tanto para los grupos de entrenamiento
como los sedentarios.
Grupos Experimentales
Los grupos experimentales que se utilizaron en el proyecto
fueron los siguientes:
-Grupo1: Grupo Control noTG (ratones noTG que no
realizaron ningún tipo de ejercicio): los animales pertenecientes
a este grupo no realizaron natación y se los mantuvo en sus
respectivas jaulas hasta el momento de la eutanasia, realizando
previamente el estudio de la función ventricular basal, la
reserva inotrópica y posteriormente la necropsia completa.
-Grupo2: Grupo Control TG (ratones TG que no realizaron
ningún tipo de ejercicio): los animales pertenecientes a este
grupo no realizaron natación y se los mantuvo en sus respectivas
jaulas hasta el momento de la eutanasia, realizando previamente
el estudio de la función ventricular basal, la reserva
inotrópica y posteriormente la necropsia completa.
-Grupo3: Grupo noTG+E (ratones noTG de ejercicio
intenso): los animales pertenecientes a este grupo nadaron 90
minutos dos veces al día, 6 veces por semana durante 4 semanas.
Durante el protocolo, a estos animales se los mantuvo en
sus respectivas jaulas hasta el momento de la eutanasia,
realizando previamente el estudio de la función ventricular
basal, la reserva inotrópica y posteriormente la necropsia
completa.
-Grupo4: Grupo TG+E (ratones TG de ejercicio intenso):
los animales pertenecientes a este grupo nadaron 90 minutos
dos veces al día, 6 veces por semana durante 4 semanas.
Durante el protocolo, a estos animales se los mantuvo en sus
respectivas jaulas hasta el momento de la eutanasia, realizando
previamente el estudio de la función ventricular basal, la
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