âEstudio de la actividad antifúngica del quitosano en solución y en ...
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Resum<strong>en</strong>.<br />
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QUE PARA OBTENER EL GRADO DE<br />
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P R E S E N T A:<br />
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Comité tutorial:<br />
Dra. C. Keiko Shirai Matsumoto 1 (Directora <strong>de</strong> tesis)<br />
Dr. Gustavo Viniegra González 1<br />
Dr. Roberto O<strong>la</strong>yo González 2<br />
Dra. María Mónica Castillo Ortega 3<br />
1Departam<strong>en</strong>to <strong>de</strong> Biotecnología, UAM-Iztapa<strong>la</strong>pa.<br />
2Departam<strong>en</strong>to <strong>de</strong> Física, UAM-Iztapa<strong>la</strong>pa.<br />
3 Departam<strong>en</strong>to <strong>de</strong> Investigación <strong>en</strong> Polímeros y Materiales, UNISON.<br />
México, D.F., 29 <strong>de</strong> Junio <strong>de</strong> 2004<br />
Evaluación <strong>de</strong> <strong>la</strong> <strong>actividad</strong> antifúngica <strong>de</strong>l <strong>quitosano</strong> <strong>en</strong> solución y <strong>en</strong> pelícu<strong>la</strong>s.<br />
Maribel P<strong>la</strong>sc<strong>en</strong>cia Jatomea<br />
x
Resum<strong>en</strong>.<br />
-&<br />
En el pres<strong>en</strong>te proyecto <strong>de</strong> tesis doctoral se estudió el efecto antifúngico <strong>de</strong> soluciones y<br />
pelícu<strong>la</strong>s <strong>de</strong> <strong>quitosano</strong> sobre el crecimi<strong>en</strong>to <strong>de</strong> hongos fi<strong>la</strong>m<strong>en</strong>tosos como Aspergillus niger y<br />
P<strong>en</strong>icillium chrysog<strong>en</strong>um. En este docum<strong>en</strong>to se muestra información acerca <strong>de</strong> <strong>la</strong> importancia<br />
<strong>de</strong>l <strong>quitosano</strong> como polímero natural, así como también <strong>de</strong> sus fu<strong>en</strong>tes <strong>de</strong> obt<strong>en</strong>ción,<br />
características, aplicaciones y propieda<strong>de</strong>s antimicrobianas (Capítulo 2). Los resultados<br />
obt<strong>en</strong>idos se pres<strong>en</strong>tarán <strong>en</strong> <strong>la</strong>s sigui<strong>en</strong>tes etapas fundam<strong>en</strong>tales:<br />
1. Efecto inhibitorio <strong>de</strong>l <strong>quitosano</strong> sobre el crecimi<strong>en</strong>to apical y <strong>la</strong> germinación <strong>de</strong><br />
esporas <strong>de</strong> Aspergillus niger, utilizando medio <strong>de</strong> cultivo sólido Czapeck (Capítulos 8.1<br />
y 8.2)<br />
2. Efecto inhibitorio <strong>de</strong>l <strong>quitosano</strong> (CQ 50) sobre <strong>la</strong> po<strong>la</strong>rización y germinación <strong>de</strong> esporas<br />
<strong>de</strong> Aspergillus niger, utilizando medio <strong>de</strong> cultivo líquido Czapeck (Capítulo 8.3).<br />
3. E<strong>la</strong>boración y caracterización <strong>de</strong> pelícu<strong>la</strong>s <strong>de</strong> <strong>quitosano</strong> (Capítulo 8.4 y 8.5).<br />
4. Evaluación antifúngica <strong>de</strong> pelícu<strong>la</strong>s <strong>de</strong> <strong>quitosano</strong> sobre el crecimi<strong>en</strong>to <strong>de</strong> Aspergillus<br />
niger y P<strong>en</strong>icillium chrysog<strong>en</strong>um (Capítulo 8.5.5).<br />
Etapa 1. Efecto inhibitorio <strong>de</strong>l <strong>quitosano</strong> sobre el crecimi<strong>en</strong>to apical y <strong>la</strong> germinación <strong>de</strong><br />
esporas <strong>de</strong> Aspergillus niger, utilizando medio <strong>de</strong> cultivo sólido Czapeck.<br />
En esta etapa se realizaron diversos estudios para <strong>de</strong>terminar el efecto antifúngico <strong>de</strong>l<br />
biopolímero sobre <strong>la</strong> germinación <strong>de</strong> esporas y el crecimi<strong>en</strong>to apical <strong>de</strong> Aspergillus niger<br />
mediante experim<strong>en</strong>tos in vitro, a 30°C, <strong>en</strong> dón<strong>de</strong> se <strong>de</strong>terminó <strong>la</strong> capacidad inhibitoria <strong>de</strong>l<br />
<strong>quitosano</strong> sobre el crecimi<strong>en</strong>to radial, diámetros y longitu<strong>de</strong>s <strong>de</strong> <strong>la</strong>s hifas y producción <strong>de</strong><br />
biomasa. Asimismo se realizó un análisis <strong>de</strong> microscopía electrónica <strong>de</strong> barrido <strong>en</strong> ambas<br />
fases <strong>de</strong> crecimi<strong>en</strong>to (germinación <strong>de</strong> esporas y crecimi<strong>en</strong>to apical) (Capítulo 8.1).<br />
Evaluación <strong>de</strong> <strong>la</strong> <strong>actividad</strong> antifúngica <strong>de</strong>l <strong>quitosano</strong> <strong>en</strong> solución y <strong>en</strong> pelícu<strong>la</strong>s.<br />
Maribel P<strong>la</strong>sc<strong>en</strong>cia Jatomea<br />
xi
Resum<strong>en</strong>.<br />
Si bi<strong>en</strong> es cierto que exist<strong>en</strong> numerosos reportes re<strong>la</strong>cionados con el estudio <strong>de</strong>l efecto <strong>de</strong>l<br />
<strong>quitosano</strong> sobre el crecimi<strong>en</strong>to <strong>de</strong> hongos fi<strong>la</strong>m<strong>en</strong>tosos, <strong>la</strong> mayoría <strong>de</strong>scribe el efecto <strong>de</strong>l<br />
biopolímero sobre el crecimi<strong>en</strong>to apical <strong>de</strong> difer<strong>en</strong>tes tipos <strong>de</strong> hongos. No obstante,<br />
consi<strong>de</strong>rando que <strong>la</strong>s alteraciones pue<strong>de</strong>n ocurrir <strong>de</strong>s<strong>de</strong> que el microorganismo se ha puesto<br />
<strong>en</strong> contacto con el alim<strong>en</strong>to y <strong>de</strong> acuerdo a los resultados obt<strong>en</strong>idos, <strong>en</strong> este trabajo se<br />
realizaron experim<strong>en</strong>tos posteriores sobre el estudio <strong>de</strong>l efecto combinado <strong>de</strong>l <strong>quitosano</strong> y<br />
temperatura <strong>de</strong> incubación (12, 17, 22, 25 y 37°C) sobre <strong>la</strong> germinación <strong>de</strong> esporas <strong>de</strong> A. niger<br />
(Capítulo 8.2). Las <strong>de</strong>terminaciones realizadas fueron <strong>la</strong>s sigui<strong>en</strong>tes: conc<strong>en</strong>tración inhibitoria<br />
media (CQ 50), porc<strong>en</strong>taje <strong>de</strong> inhibición <strong>de</strong> <strong>la</strong> germinación, estimación <strong>de</strong> los parámetros <strong>de</strong><br />
germinación (S, S 0 , S max y k), cálculo <strong>de</strong> <strong>la</strong> <strong>en</strong>ergía <strong>de</strong> activación y efecto sinérgico <strong>en</strong>tre el<br />
biopolímero y <strong>la</strong> temperatura.<br />
Todos los experim<strong>en</strong>tos fueron realizados utilizando p<strong>la</strong>cas con agar Czapeck y los<br />
resultados obt<strong>en</strong>idos indicaron que <strong>la</strong> utilización <strong>quitosano</strong> a un nivel re<strong>la</strong>tivam<strong>en</strong>te bajo<br />
(
Resum<strong>en</strong>.<br />
Etapa 3. E<strong>la</strong>boración y caracterización <strong>de</strong> <strong>la</strong>s pelícu<strong>la</strong>s <strong>de</strong> <strong>quitosano</strong>.<br />
En esta etapa <strong>de</strong> <strong>la</strong> tesis se <strong>de</strong>tal<strong>la</strong>rán los estudios re<strong>la</strong>cionados con <strong>la</strong> e<strong>la</strong>boración (Capítulo<br />
8.4) y caracterización mecánica <strong>de</strong> <strong>la</strong>s pelícu<strong>la</strong>s e<strong>la</strong>boradas a base <strong>de</strong> <strong>quitosano</strong>, ya sea solo o<br />
<strong>en</strong> combinación con otros materiales naturales (sorbitol, sacarosa) o sintéticos (polietil<strong>en</strong>o <strong>de</strong><br />
baja <strong>de</strong>nsidad), utilizando <strong>la</strong>s técnicas <strong>de</strong> evaporación <strong>de</strong> solv<strong>en</strong>tes y extrusión,<br />
respectivam<strong>en</strong>te (Capítulo 8.5). Las pelícu<strong>la</strong>s fueron caracterizadas <strong>en</strong> cuanto a sus<br />
propieda<strong>de</strong>s mecánicas <strong>de</strong> esfuerzo-<strong>de</strong>formación, morfología (utilizando análisis <strong>de</strong><br />
microscopía electrónica <strong>de</strong> barrido) y permeabilidad al oxíg<strong>en</strong>o; <strong>de</strong> ésta última solo se<br />
discutirán los resultados <strong>de</strong> <strong>la</strong>s pelícu<strong>la</strong>s obt<strong>en</strong>idas por <strong>la</strong> técnica <strong>de</strong> evaporación.<br />
Etapa 4. Evaluación antifúngica <strong>de</strong> pelícu<strong>la</strong>s <strong>de</strong> <strong>quitosano</strong> sobre el crecimi<strong>en</strong>to <strong>de</strong><br />
Aspergillus niger y P<strong>en</strong>icillium chrysog<strong>en</strong>um.<br />
En <strong>la</strong> última etapa <strong>de</strong>l trabajo experim<strong>en</strong>tal se pres<strong>en</strong>tarán los resultados obt<strong>en</strong>idos al evaluar<br />
<strong>la</strong> <strong>actividad</strong> antifúngica <strong>de</strong> <strong>la</strong>s pelícu<strong>la</strong>s <strong>de</strong> <strong>quitosano</strong> preparadas mediante evaporación <strong>de</strong><br />
solv<strong>en</strong>tes (Capítulo 8.5.5). Para lo anterior se llevaron a cabo experim<strong>en</strong>tos in vivo <strong>en</strong> dón<strong>de</strong> se<br />
prepararon empaques, los cuales se utilizaron para guardar piezas <strong>de</strong> queso manchego<br />
comercial inocu<strong>la</strong>das con esporas <strong>de</strong> Aspergillus niger (a 30°C); los parámetros evaluados<br />
fueron crecimi<strong>en</strong>to radial y porc<strong>en</strong>taje <strong>de</strong> unida<strong>de</strong>s experim<strong>en</strong>tales contaminadas. Con base<br />
<strong>en</strong> los resultados obt<strong>en</strong>idos, se diseñó un experim<strong>en</strong>to posterior <strong>en</strong> dón<strong>de</strong> se evaluó el efecto<br />
<strong>de</strong> <strong>la</strong>s pelícu<strong>la</strong>s sobre el crecimi<strong>en</strong>to <strong>de</strong> P<strong>en</strong>icillium chrysog<strong>en</strong>um, seleccionado <strong>en</strong> base a su<br />
mayor inci<strong>de</strong>ncia para <strong>de</strong>sarrol<strong>la</strong>rse <strong>en</strong> el producto alim<strong>en</strong>ticio utilizado, con respecto a A.<br />
niger. La temperatura <strong>de</strong> incubación utilizada fue <strong>de</strong>