SERION ELISAclassic - virion\serion

7.5 Realização do teste pelo método manual
1. Colocar o número necessário de poços na moldura da microplaca e preparar a
folha de protocolo.
2. Adicionar 100 µl de cada uma das amostras diluídas, ou dos controles prontos
para uso, nos respectivos poços das tiras da microplaca. Deixe um poço livre para
o Branco do substrato, p. ex.:
IgA/IgG/IgM quantitativo
poço n. o
poço A1
poço B2
poço C1
poço D1
branco do substrato
controle negativo
soro padrão
soro padrão
poço E1 paciente - 1....
3. Incubação das amostras durante 60 minutos (+/- 5 min.) a 37°C (+/- 1°C) em
câmara húmida.
4. No fim do tempo de incubação, lavar todos os poços (com equipamento
automatizado ou manual):
- Aspirar ou esvaziar o líquido de incubação dos poços
- Encher cada poço com 300 µl de solução de lavagem
- Aspirar ou esvaziar a solução de lavagem
- Repetir o processo mais 3 vezes (isto é, lavar 4 vezes no total)
- Esvaziar a placa, batendo-a sobre toalhas de papel
5. Adição do conjugado
Adicionar 100 µl do conjugado IgA/IgG/IgM pronto para uso nos respectivos poços
(exceto branco do substrato)
6. Incubação do conjugado durante 30 minutos (+/- 1 min.)* a 37°C (+/- 1 °C) em
câmara húmida.
7. No fim do tempo de incubação, lavar todos os poços (como descrito acima)
8. Adição do substrato
Adicionar 100 µl do substrato pronto para uso em cada um dos poços (também no
do branco do substrato)
9. Incubação do conjugado durante 30 minutos (+/- 1 min.)* a 37°C (+/- 1 °C) em
câmara húmida.
10. Parada da reação
Adicionar 100 µl da solução de parada em cada um dos poços e agitar levemente a
microplaca para misturar a solução.
11. Leitura da absorção
Dentro de 60 minutos, determinar a densidade ótica (DO) a 405 nm contra o branco
do substrato; comprimento de onda de referência entre 620 nm e 690 nm (p. ex.
650 nm).
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* Leve em consideração que, sob condições de trabalho especiais, poderá ser necessário
ajustar os tempos de incubação internos do laboratório.
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