Portada Simposios - Supplements - Haematologica
Portada Simposios - Supplements - Haematologica Portada Simposios - Supplements - Haematologica
246 Haematologica (ed. esp.), volumen 85, supl. 2, octubre 2000 Figura 4. Imágenes del fenotipo normal en linfocitos B en sangre periférica. 1) Ventana donde se sitúan los linfocitos según sus características de SSC/FSC. 2) CD5 FITC+ en linfocitos T, CD19 PE+ en linfocitos B de intensidad media (log 10 (2) ). En el cuadrante 3 se observa la imagen de una población que corresponde a linfocitos B normales que coexpresan CD19/CD5. 3) CD22 PE de intensidad m/i. y CD10 FITC negativo 4) CD23 PE de expresión débil. 5) FMC-7 FITC de intensidad débil. 6) CD79b PE de intensidad media, 7) Coexpresión de CD19 FITC/CD38 PE; los linfocitos CD38 PE corresponden a linfocitos T y los linfocitos CD19 FITC corresponden a linfocitos B que no expresan CD38. 8) Kappa FITC+, Lambda PE+; expresión policlonal de cadenas de IgS. lab/B-D), CD10 Fitc (Dako/B-D), CD79b PE (Dako/ Immunotech), FMC-7 Fitc (Serotec), Kappa/Lambda (B-D), CD25 Fitc (B-D), CD19Fitc/CD38 PE (B-D), CD11c Fitc (B-D), CD11b PE (B-D). Se utilizan simples y dobles marcajes. El análisis se realiza mediante un citómetro FACScan de B-D ® . Se han utilizado los programas de análisis: Simulset, Lysis II y Paint-a-gate. Se ha seleccionado la ventana de linfocitos según su disposición en SSC/FSC. Como control se ha utilizado anticuerpos monoclonales marcados con idéntico idiotipo. Se han adquirido en la ventana a analizar entre 3.000 y 10.000 eventos. Un antígeno se considera positivo cuando es expresado en más del 20% de las células B neoplásicas. Las intensidades de expresión de cada monoclonal las definimos según la escala logarítmica: débil < 10 (2) y media/intensa 10 (2) /10 (3) . En figura 4 y 5 se representa el comportamiento de los linfocitos B normales en sangre periférica y ganglio respectivamente. Resultados En la tabla 1 se muestran los resultados obtenidos en LCM, LF y LLC atípica expresados en porcentaje de casos positivos para los distintos marcadores. Los patrones de intensidad de los mismos se comentan en el texto. Los resultados del estudio de 24 casos de LCM son: la positividad para CD19, CD22 y HLA-DR fue constante; la coexpresión de CD19/CD5 se detectó en 22/24 (92%) de los casos. La intensidad de expresión del CD22 fue débil en 9/16 (56%) y media/intensa en 7/16 (44%). El CD10 fue negativo en todos los casos. El CD79b fue débil en 4/16 (25%) de casos y media en 12/16 (75%). El FMC-7 fue débil en 3/16 (19%) y media en 13/16 (81 %). La expresión de cadenas de IgS fue lambda 14/24 (58%) y kappa en 10/24 (42%). La intensidad de las mismas fue débil en 7/16 (44 %) y media en 9/16 (56%) de los casos. La intensidad de expresión de éstos marcadores es una ayuda muy valiosa para distinguir el LCM de otros síndromes linfoproliferativos crónicos B (SLPC-B). El CD23 resultó positivo en 42 % casos y negativo en el resto (58%). Este es el dato más discordante respecto a lo que se describe en la mayoría de trabajos que insistentemente se otorga CD23 negativo al linfoma del manto. La explicación de esta diferencia esta probablemente en la técnica utilizada y en la sensibilidad del CD23 en IHQ. En nuestra experiencia el CD23 discrimina entre el LCM y la LLC por la intensidad de expresión y no porque sea positivo/negativo. La expresión de CD23 por CF es constante en la LLC con intensidad media/intensa, mientras que en el LCM la intensidad es débil en los casos positivos. En algunas series que hemos revisado 14,15 obtienen resultados parecidos concluyendo que el CD23 no es un marcador válido para discriminar entre LCM y LLC. El CD5 es positivo en la mayoría de casos lo que nos ayuda para diferenciarlo del linfoma folicular que
XLII Reunión Nacional de la AEHH y XVI Congreso de la SETH. Simposios 247 Figura 5. Imágenes del fenotipo normal de los linfocitos B en un ganglio. Superponibles a las descritas en la figura 1. es constantemente CD5 negativo. En los dos casos de LCM CD5– de esta serie se confirmó el diagnóstico por histología ganglionar, expresión de ciclina D1 y biología molecular. La utilidad del CD79b quedó reflejada en los trabajos de Zomas et al 16 como un marcador útil para distinguir LLC de otros linfomas/leucemias crónicas. Concluyen que el CD79b es negativo en la LLC y positivo en los demás SLPC-B. En nuestra serie todos los linfomas del manto expresaron CD79b la mayoría de intensidad media (75 %), mientras que las LLC fueron negativas o de intensidad débil los casos positivos (42 %). De nuevo, en nuestra experiencia, lo que discrimina es la intensidad de expresión del marcador siendo siempre débil en los casos de LLC positivos. Sin embargo, la expresión débil de CD79b se puede hallar en otros SLPC-B. El CD22 y el CD20 se han descrito clásicamente como positivos en todos los SLPC-B salvo en la LLC que suele ser negativo o débil. Si comparamos en la tabla estas tres entidades, en el LCM resultó positivo en el 100 % de casos la mayoría con intensidad media 11 casos (69 %) y los 5 restantes débil (31 %). En el linfoma folicular fue positivo en 100 %, con 15 casos de intensidad media (75 %) y los 3 restantes débil (15 %). En los casos de LLC atípica resultó positivo en 93 % de las cuales el 93 % fue débil y el 7 % fue medio. El comportamiento, pues, es similar al CD79b y a las cadenas de IgS, lo que discrimina es la intensidad de expresión. En nuestra experiencia el CD22 es un marcador con el que se obtienen resultados dispares según la clona que se utilice, por lo que creemos que no es un buen discriminador entre los diferentes SLPC. Tabla 1. Porcentaje de reactividad frente a diversos anticuerpos monoclonales en el linfoma del manto, linfoma folicular y LLC atípica Linfoma Linfoma LLC Anticuerpo del manto folicular atípica monoclonal N = 24 (%) N = 24 (%) N = 90 (%) CD19 PE 100 100 100 CD5 FITC/CD19 PE 92 0 99 CD22 PE 100 100 82 CD10 FITC/CD22PE 0 38 0 CD23 PE 42 25 99 CD79b PE 100 67 72 FMC-7 FITC 100 67 51 Kappa FITC 42 50 68 Lambda PE 58 38 23 No expresa IgS 0 12 9 El inmunofenotipo además de ser un arma diagnóstica nos permite valorar la respuesta al tratamiento. En el caso de LCM la coexpresión de CD19/CD5 que es positiva en el 92% de casos, no es útil para detectar poblaciones residuales en SP o MO. En la figura 6 se muestran las imágenes de expresión de CD19/CD5 en un LCM al diagnóstico (A) y seguimiento al finalizar el tratamiento (B). Se compara con un caso de LLC al diagnóstico (C) y post-tratamiento (D) y con la expresión de éstos marcadores en los linfocitos B de una sangre control normal (E). Como se observa la disposición de las células CD19/CD5 positivas en la población linfoide normal es diferente. En el linfoma folicular los resultados de los 24 casos estudiados en sangre periférica (7), en ganglio
- Page 193 and 194: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 195 and 196: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 197 and 198: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 199 and 200: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 201 and 202: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 203 and 204: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 205 and 206: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 207 and 208: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 209 and 210: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 211 and 212: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 213 and 214: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 215 and 216: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 217 and 218: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 219 and 220: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 221 and 222: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 223 and 224: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 225 and 226: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 227 and 228: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 229 and 230: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 231 and 232: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 233 and 234: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 235 and 236: CLUB ESPAÑOL DE CITOLOGÍA HEMATOL
- Page 237 and 238: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 239 and 240: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 241 and 242: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 243: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 247 and 248: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 249 and 250: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 251 and 252: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 253 and 254: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 255 and 256: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 257 and 258: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 259 and 260: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 261 and 262: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 263 and 264: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 265 and 266: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 267 and 268: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 269 and 270: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 271 and 272: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 273 and 274: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 275 and 276: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 277 and 278: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 279 and 280: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 281 and 282: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 283 and 284: CASOS CLÍNICO-CITOLÓGICOS CLUB ES
- Page 285 and 286: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 287 and 288: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 289 and 290: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 291 and 292: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
- Page 293 and 294: XLII Reunión Nacional de la AEHH y
XLII Reunión Nacional de la AEHH y XVI Congreso de la SETH. <strong>Simposios</strong><br />
247<br />
Figura 5. Imágenes del fenotipo normal de los linfocitos B en un ganglio. Superponibles a las descritas en la figura 1.<br />
es constantemente CD5 negativo. En los dos casos de<br />
LCM CD5– de esta serie se confirmó el diagnóstico<br />
por histología ganglionar, expresión de ciclina D1 y<br />
biología molecular. La utilidad del CD79b quedó reflejada<br />
en los trabajos de Zomas et al 16 como un marcador<br />
útil para distinguir LLC de otros linfomas/leucemias<br />
crónicas. Concluyen que el CD79b es negativo<br />
en la LLC y positivo en los demás SLPC-B. En nuestra<br />
serie todos los linfomas del manto expresaron CD79b<br />
la mayoría de intensidad media (75 %), mientras que<br />
las LLC fueron negativas o de intensidad débil los casos<br />
positivos (42 %). De nuevo, en nuestra experiencia,<br />
lo que discrimina es la intensidad de expresión del<br />
marcador siendo siempre débil en los casos de LLC<br />
positivos. Sin embargo, la expresión débil de CD79b<br />
se puede hallar en otros SLPC-B.<br />
El CD22 y el CD20 se han descrito clásicamente<br />
como positivos en todos los SLPC-B salvo en la LLC<br />
que suele ser negativo o débil. Si comparamos en la<br />
tabla estas tres entidades, en el LCM resultó positivo<br />
en el 100 % de casos la mayoría con intensidad media<br />
11 casos (69 %) y los 5 restantes débil (31 %).<br />
En el linfoma folicular fue positivo en 100 %, con<br />
15 casos de intensidad media (75 %) y los 3 restantes<br />
débil (15 %). En los casos de LLC atípica resultó<br />
positivo en 93 % de las cuales el 93 % fue débil y el<br />
7 % fue medio. El comportamiento, pues, es similar<br />
al CD79b y a las cadenas de IgS, lo que discrimina es<br />
la intensidad de expresión. En nuestra experiencia el<br />
CD22 es un marcador con el que se obtienen resultados<br />
dispares según la clona que se utilice, por lo<br />
que creemos que no es un buen discriminador entre<br />
los diferentes SLPC.<br />
Tabla 1. Porcentaje de reactividad frente a diversos<br />
anticuerpos monoclonales en el linfoma del manto,<br />
linfoma folicular y LLC atípica<br />
Linfoma Linfoma LLC<br />
Anticuerpo del manto folicular atípica<br />
monoclonal N = 24 (%) N = 24 (%) N = 90 (%)<br />
CD19 PE 100 100 100<br />
CD5 FITC/CD19 PE 92 0 99<br />
CD22 PE 100 100 82<br />
CD10 FITC/CD22PE 0 38 0<br />
CD23 PE 42 25 99<br />
CD79b PE 100 67 72<br />
FMC-7 FITC 100 67 51<br />
Kappa FITC 42 50 68<br />
Lambda PE 58 38 23<br />
No expresa IgS 0 12 9<br />
El inmunofenotipo además de ser un arma diagnóstica<br />
nos permite valorar la respuesta al tratamiento.<br />
En el caso de LCM la coexpresión de CD19/CD5 que<br />
es positiva en el 92% de casos, no es útil para detectar<br />
poblaciones residuales en SP o MO. En la figura 6 se<br />
muestran las imágenes de expresión de CD19/CD5 en<br />
un LCM al diagnóstico (A) y seguimiento al finalizar el<br />
tratamiento (B). Se compara con un caso de LLC al<br />
diagnóstico (C) y post-tratamiento (D) y con la expresión<br />
de éstos marcadores en los linfocitos B de una<br />
sangre control normal (E). Como se observa la disposición<br />
de las células CD19/CD5 positivas en la población<br />
linfoide normal es diferente.<br />
En el linfoma folicular los resultados de los 24 casos<br />
estudiados en sangre periférica (7), en ganglio