Número 1 - EII al día

Revisiones
racterísticas adicionales. Este microorganismo causa paratuberculosis,
una enfermedad intestinal entérica crónica
en animales. La cepa de referencia es ATCC 19698 (9) .
La principal característica que diferencia esta especie del
resto, es el lento crecimiento y la dependencia de micobactinas
exógenas en cultivo in vitro. Las micobactinas
son proteínas quelantes del hierro producidas por
el resto de especies de micobacterias; sin embargo, Map
no la produce o produce una cantidad insuficiente. Se
han notificado diferencias entre cepas de esta especie:
una cepa aislada de bovino, una cepa pigmentada y cepas
aisladas de pequeños rumiantes que crecen más lentamente
que el resto de cepas aisladas en general (10) . Cepas
aisladas a partir de muestras tomadas en ovejas y
cabras presentan mayor dificultad para su cultivo (11) , habiéndose
notificado una secuencia de inserción específica
para Map, IS900 (12) .
Diversidad de M. avium subsp. paratuberculosis
y diferenciación de cepas
El desarrollo de técnicas fiables (estudios de caracteres
genéticos y fenotípicos) han permitido examinar la diversidad
de cepas que componen el complejo M.
avium (13) . Por ejemplo, un análisis de taxonomía numérica
empleando un panel de caracteres fenotípicos puede
distinguir tres subespecies de M. avium con respecto
a M. a. avium, M. a. subsp. silvaticum y M. a. subsp.
paratuberculosis (9) . Sin embargo, este análisis es un enfoque
complejo, y la vía mas común de diferenciar las
especies estrechamente relacionadas es a través del estudio
de su genoma. Las técnicas moleculares que abarcan
el estudio del rRNA de los genes han sido usadas extensivamente
para establecer las relaciones taxonómicas
y evolutivas entre organismos estrechamente relacionados.
Desafortunadamente, cada uno de los genes
rRNA (16S, 23S, y 5S), así como sus regiones intergénicas,
son altamente conservados en el complejo M.
avium (14-16) . El análisis de estas regiones ha demostrado
una alta homología genética entre estas bacterias y estos
hallazgos son poco representativos a la hora de diferenciar
M. avium y Map. Afortunadamente, la identificación
de la secuencia de inserción IS900 en Map simplificó
enormemente la detección de este organismo y
su diferenciación con respecto a M. avium (12) .
Se han llevado a cabo investigaciones en cuanto a la diversidad
y diferenciación de cepas del complejo M. avium
utilizando técnicas moleculares (empleo de los RFLPs),
las cuales han sido utilizadas sucesivamente para revelar
la diversidad genética en muchos organismos. El análisis
de endonucleasas de restricción convencional y la
electroforesis en gel de campo invertido pueden discriminar
Map de las otras especies que componen el complejo
M. avium, pero es incapaz de diferenciar cepas diferentes
de Map (17-19) .
El análisis de RFLP puede ser mejorado utilizando la hibridación
de fragmentos de DNA con pruebas específicas,
teniendo en cuenta que el análisis de aislamientos
de M. avium utilizando IS1245 e IS1311 han revelado un
alto grado de diversidad entre cepas aisladas de cerdos
y de humanos (20-22) . Análisis similares se han utilizado en
diversas cepas de Map empleando las secuencias de inserción
IS900 e IS1311. Utilizando el IS900 como prueba
de hibridación se ha podido identificar alrededor de 20
tipos diferentes de RFLP, reflejando algunas diferencias
entre cepas (23-25) . En general la presencia de polimorfismos
no ha sido asociada con aislamientos de origen animal
(13,26) . Sin embargo, esta secuencia de inserción cumple
marcadores específicos de integración, que sitúan limitaciones
en el número posible de polimorfismos. El
análisis por RFLP utilizando la secuencia de inserción
IS1311 detecta menos polimorfismos que el IS900, por
lo cual se necesita de mayor información epidemiológica
hasta el momento no evaluada. Resulta interesante
que los puntos de mutación encontrados en IS1311 han
permitido diferenciar aislamientos obtenidos de ovejas
y ganado en Australia (27) . A menos que nuevas sucesiones
repetidas de DNA específicas para Map sean identificadas,
el uso del análisis de RFLP en estudios epidemiológicos
de Map será limitado.
El estudio de campos pulsados [pulse field gel electrophoresis
(PFGE)] se utiliza comúnmente para diferenciar
cepas de M. avium aisladas de humanos, particularmente
de pacientes enfermos de SIDA (28-29) . Esta técnica no ha
sido aplicada extensamente en estudios con cepas de
Map, por lo que se necesitan más trabajos que determinen
su potencial (30) .
Aunque la secuencia de inserción IS900 presenta entre
14-16 sitios específicos, seis de ellos parecen ser variables,
lo que permite la discriminación entre 8 genotipos.
Esta característica ha permitido desarrollar una PCR multiplex
para identificar los sitios de integración presentes
en el genoma, siendo capaz de discriminar aislamientos
de diferentes especies de huésped, por ejemplo,
ganado, ovejas y hombre. Esta técnica por lo tanto,
justifica la evaluación completa y puede ser un instrumento
útil en investigaciones epidemiológicas.
En resumen, las evidencias actuales disponibles reflejan
un alto grado de homogeneidad genética dentro de
Map, y las técnicas de caracterización utilizadas en la actualidad
no son suficientes para sostener el desarrollo
de estudios epidemiológicos que permitan la diferenciación
entre cepas de micobacterias.
Evidencias científicas de la relación entre Map
y la enfermedad de Crohn (EC)
Desde que en el año 1913 (incluso casi 20 años antes de
que la enfermedad de Crohn (31) se bautizase con este
nombre) Dalziel formulase la teoría de que las enfermedades
inflamatorias intestinales estuviesen causadas
por micobacterias (32) , esta teoría ha sido ampliamente
estudiada y continúa sin resolverse a pesar de la gran
cantidad de trabajos publicados en este campo.
A diferencia de otros aspectos de las enfermedades inflamatorias
intestinales, los grandes avances que se han
producido en los últimos años con la biología molecular
y la genética no han logrado alcanzar unos resulta-
11 • Enfermedad Inflamatoria Intestinal al día - Vol. 6 - Nº. 1 - 2007