MONOLISA® HBs Ag ULTRA 72408 CONFIRMATORY 25 tests

MONOLISA ® HBs Ag ULTRA 72408
CONFIRMATORY
25 tests
English p. 3
Français p. 11
Español p. 19
Deutsch p. 27
Italiano p. 35
Portugese p. 43
Svensk p. 51
Dansk p. 59
The other languages required in conformity to the European Directive
can be obtained from your local Bio-Rad agent

MONOLISA ® HBs Ag ULTRA 72408
CONFIRMATORY
25 tests
TEST FOR THE CONFIRMATION OF HBs Ag IN HUMAN SERUM
OR PLASMA
IVD
Manufacturer Quality Control
All products manufactured and commercialised by Bio-Rad are subject to a complete
quality system starting from reception of raw materials to the final commercialisation of the
product.
Each lot is submitted to a quality control and only is released on the market when
conforming to the acceptance criteria.
The records relating to production and control of each single lot are kept within our
company.
3

CONTENTS
1. INTENDED USE
2. PRINCIPLE OF THE MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY TEST
3. COMPOSITION OF THE KIT
4. PRECAUTIONS
5. HEALTH AND SAFETY INSTRUCTIONS
6. MATERIAL REQUIRED BUT NOT PROVIDED
7. SHELF LIFE - STABILITY
8. COLLECTION AND HANDLING OF SPECIMENS
9. ASSAY PROCEDURE
10. CALCULATION AND INTERPRETATION OF THE RESULTS
11. PERFORMANCES
12. LIMITS OF THE TEST
13. LITERATURE
4

1 - INTENDED USE
The MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY test is used to confirm the presence of hepatitis
B surface Ag (HBs Ag) in samples of human serum or plasma found reactive by the MONOLISA ® HBs
Ag ULTRA screening test (codes 72346/72348).
2 - PRINCIPLE OF THE MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY TEST
The MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY test uses the principle of neutralization by excess
of antibodies to anti-HBs (anti-HBs diluent: neutralization reagent) of the Ag HBs found in serum or
plasma samples.
It is recommended to test samples repeatedly found positive by the MONOLISA ® HBs Ag ULTRA
screening test with the reagents from the MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY kit.
If a sample is positive in HBs antigen, the anti-HBs antibodies in the neutralization reagent saturate
the HBs antigen determinants of the sample which can no longer bind to the antibody fixed on the
solid phase. A decrease in optical density will be observed when comparing the same sample in
which the neutralization reagent is replaced by a negative control diluent not containing anti-HBs
antibodies. Several dilutions of the sample will be analyzed, as required, to take into account
variations in HBs Ag concentration.
The test includes the following reactional phases :
1) Incubation of controls and samples positive in HBs Ag with the neutralization reagent and the
conjugate in the presence of anti-HBs antibodies fixed on the solid phase.
For each sample, control wells are provided by replacing the neutralization reagent with a negative
control diluent.
The remainder of the procedure is identical to the protocol for the MONOLISA ® HBs Ag ULTRA kit :
2) Washing, then development of the enzyme activity bound to the solid phase by addition of the
substrate.
3) Stop of the development step, then reading of the optical densities at 450/620-700 nm and
interpreting the results.
3 - COMPOSITION OF THE KIT
LABEL NATURE OF THE REAGENTS PRESENTATION
RA Neutralization reagent 1 vial
Tris NaCl buffer (pH 8.0) containing sheep serum and
human serum negative in HBs antigen and in anti-HCV
0.7 ml
and anti-HIV1/2 antibodies and supplemented
with anti-HBs antibodies.
Ready-to-use reagent
Preservative : ProClin 300 (0.25%)
RB Negative control diluent 1 vial
Tris NaCl buffer (pH 8.0) containing sheep serum and
human serum negative in HBs antigen and in anti-HCV
0.7 ml
and anti-HIV1/2 antibodies.
Ready-to-use reagent
Preservative : ProClin 300 (0.25%)
RC Sample diluent 1 vial
0.85% physiological saline solution.
Ready-to-use reagent
27 ml
Preservative : ProClin 300 (0.1%)
5

4 - PRECAUTIONS
The quality of results is dependent upon the following good laboratory practices:
• Do not use expired reagents.
• Do not mix or combine reagents from MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY kits with
different batch numbers during the same procedure.
• Before use, allow the reagents to stabilize at ambient temperature (18-30°C) for 30 minutes.
• Use glassware that is thoroughly washed and rinsed in distilled water or, preferably, use disposable
material.
• Refer to MONOLISA ® HBs Ag ULTRA kit package insert.
5 - HEALTH AND SAFETY INSTRUCTIONS
• All of the reagents included in the kit are intended for in vitro diagnostic use.
• The material of human origin used for the preparation of reagents RA and RB has been tested and
found negative in HBs antigen and in anti-HIV1, anti-HIV2 and anti-HCV antibodies. Since no
method can absolutely guarantee the absence of HIV, HBV or HCV viruses or other infectious
agents, consider these reagents, as well as patient samples, as potentially infections and handle
them with precaution.
• For common health and safety instructions, refer to the MONOLISA ® HBs Ag ULTRA kit package
insert.
Some reagents contain ProClin 300 (0.04%, 0.1% and/or 0.5%)
Xi Irritant
R43 : may cause sensitisation by skin contact
S28-37 : After contact with skin, wash immediately with plenty of soap and water. Wear
suitable protective gloves.
6 - MATERIAL REQUIRED BUT NOT PROVIDED
Refer to the MONOLISA ® HBs Ag ULTRA kit package insert.
7 - SHELF LIFE - STABILITY
• Store the kit between +2°C and +8°C before use.
• Once opened, all of the reagents can be used up to the expiry date indicated on the box if they are
stored between +2°C and +8°C.
8 - SAMPLES
• Refer to the MONOLISA ® HBs Ag ULTRA kit package insert.
• Samples with a very high concentration of HBs Ag can not be neutralized by the neutralization
regent if they are tested in undiluted form.
Refer to section 10 “CALCULATION AND INTERPRETATION OF RESULTS”, sub-section “Test
validation criteria”.
NOTE : samples with a high HBs Ag concentration, with an optical density greater than 3.000 with
the MONOLISA ® HBs Ag ULTRA test, can be tested directly when diluted to 1/100 in the sample
diluent.
9 - ASSAY PROCEDURE
Proceed as follows using the reagents from the MONOLISA ® HBs Ag ULTRA kit.
1. Prepare the washing solution (R2) and the reconstituted conjugate solution (R6+R7) : refer to
section 8 “PREPARATION OF REAGENTS”, sub-section “Reagents to be reconstituted” in the
MONOLISA ® HBs Ag ULTRA kit package insert.
2. Remove the microplate frame and the number of required strips (reagent R1) from the protective
packing.
3. Distribute in the wells in the following order :
• Wells A1, A2 : 100 µl of the negative control (R3) from the MONOLISA ® HBs Ag ULTRA kit.
• Wells B1, B2 : 100 µl of the positive control (R4) from the MONOLISA ® HBs Ag ULTRA kit.
• Wells C1, C2, D1, D2 : 100 µl of the first sample to be confirmed.
• Wells E1, E2, F1, F2 : 100 µl of the second sample to be confirmed.
6

• Wells G1, G2, H1, H2 : 100 µl of the third sample to be confirmed, and so forth.
Depending on the used system, it is possible to modify the position of controls or the order of
distribution.
4. Add 20 µl of the negative control diluent (RB) in wells A1, B1, C1, D1, E1, F1, G1, H1 and 20 µl of
the neutralization reagent (RA) in wells A2, B2, C2, D2, E2, F2, G2, H2, etc.
5. Distribute 50 µl of the reconstituted conjugate solution (R6+R7) in all the wells. Homogenize each
mixture using a minimum of 3 aspirations.
6. Follow with step 7 and all subsequent steps contained in section 11 “PROCEDURE” in the
MONOLISA ® HBs Ag ULTRA kit package insert.
10 - CALCULATION AND INTERPRETATION OF RESULTS
1) Reactivity ratio of the controls and of the samples
1. For the positive control (R4) and the negative control (R3) from the MONOLISA ® HBs Ag ULTRA kit,
calculate :
OD controls with RB
Reactivity ratio = -----------------------------------------------------
[(OD R3 with RB + OD R3 with RA)/2] + 0.050
2. For each sample, calculate :
Mean OD samples with RB
Reactivity ratio = ------------------------------------------------------
[(OD R3 with RB + OD R3 with RA)/2] + 0.050
2) Inhibition percentage
1. Calculate the inhibition percentages of the optical densities recorded for the positive control (R4)
and the negative control (R3) treated with the neutralization reagent (RA) and the negative control
diluent (RB).
(OD controls with RB) - (OD controls with RA)
Inhibition percentage = ------------------------------------------------------ X 100
(OD controls with RB)
2. Calculate the inhibition percentages of the optical densities recorded for the samples treated with
the neutralization reagent (RA) and the negative control diluent (RB).
(mean OD samples with RB) - (mean OD samples with RA)
Inhibition percentage = -------------------------------------------------------------------- X 100
(mean OD samples with RB)
3) Test validation criteria
1. The values of the negative control (R3) with addition of negative control diluent (RB) or
neutralization reagent (RA) must be less than or equal to 0.080 OD units.
For this same negative control (R3), the reactivity ratio must be less than 0.8.
For the positive control (R4) with addition of negative control diluent (RB), the recorded optical
density must be greater than 0.800.
For this same positive control (R4), the inhibition percentage must be greater than or equal to 50%.
2. For samples with an inhibition percentage < 50% and with a reactivity ratio ≥ 0.8, it is necessary
to re-test these samples diluted in the sample diluent (1/100; 1/10,000; 1/1,000,000; etc., 100 X
dilution) in order to obtain a reactivity ratio < 0.8 (sample not confirmed in this case) or confirmation
of the neutralization of the sample tested (inhibition percentage ≥ 50%).
4) Interpretation of results
A sample will be confirmed positive for HBs Ag if the reactivity ratio is greater than or equal to 0.8
and the inhibition percentage is greater than or equal to 50%.
Sample reactivity ratio Inhibition percentage Interpretation
≥ 0.8 ≥ 50% Confirmed
≥ 0.8 < 50% Not confirmed; to be diluted
< 0.8 Whatever result Not reactive*
* Not confirmed for diluted samples
7

Examples :
Test OD values OD values Sample Inhibition Interpretation
with RA with RB reactivity ratio percentage
Positive 0.095 2.025 32.66 95% Confirmed
control (R4)
Negative 0.011 0.013 0.21 15% Not reactive
control (R3)
Sample 0.009 0.027 0.40 68% Not reactive
1 0.007 0.023
Sample 2.585 3.906
2 2.570 3.880 63.00 34% Not confirmed;
to be diluted
Sample 0.049 2.079 33.36 98% Confirmed
2 0.045 2.058
Dil. 1/100
Sample 0.132 0.151 2.52 13% Not confirmed;
3 0.140 0.161 to be diluted
Sample 0.032 0.036 0.55 12% Not confirmed
3 0.028 0.032
Dil. 1/100
11 - PERFORMANCES
The performances of MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY assay associated with
MONOLISA ® HBs Ag ULTRA has been determined by testing samples from clinical patients with
acute and chronic hepatitis B infection or with diseases unrelated to hepatitis B infection, and from
commercial samples and seroconversion panels.
More over the sensitivity limit has been tested using the French EFS HB panel, and the WHO
standards (NIBSC code 00/588).
Analytical Sensitivity
All diluted sample concentrations from 0.06 ng/ml to 2.2 ng/ml from the EFS HB sensitivity panel and
all positive results from WHO NIBSC panel were all confirmed with MONOLISA ® HBs Ag ULTRA
CONFIRMATORY assay.
An HBs Ag concentration higher than 10 mg/ml was neutralised after dilution of this sample.
Sensitivity
Sensitivity studies have been performed on 337 positive samples from follow-up of chronic or acute
HBV infected. All the positive samples were confirmed with MONOLISA ® HBs Ag ULTRA
CONFIRMATORY assay.
A total of 15 well documented commercial HBV seroconversion panels (45 samples) were also
studied. All the positive samples were neutralised.
Specificity and Cross Reactivity
An internal panel of 16 false positive samples with MONOLISA ® HBs Ag ULTRA was tested with
MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY assay and were not confirmed.
The analysis of 102 patients showing different pathologies or status not linked to the hepatitis B
(pregnant women, rheumatoid factor, anti-nuclear antibodies, anti-mouse Ig or other viral or bacterial
infections) were tested with MONOLISA ® Ag HBs ULTRA CONFIRMATORY and confirmed negative .
More over, 37 samples positive with HBs Ag and also positive with different markers (Rheumatoid
factors samples, antinuclear antibody samples, anti mouse Ig or viral infection samples) were tested
with MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY assay; all these samples were confirmed positive
for HBs Ag.
23 HBs Ag positive samples from the co infection Panel PCA201 BBI (with HBV, HIV, HCV and /or
HTLV) were all confirmed with MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY assay pure or after
dilution.
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Assay Reproducibility
The reproducibility of MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY assay has been determined, by
the analysis of 4 samples : 1 negative sample (sample 1), 2 HBs Ag positive samples (samples 2 and
3) and 1 high HBs Ag positive sample (sample 4).
The intra assay reproducibility has been evaluated by testing these 4 samples 30 times in the same
run.
The inter assay reproducibility has been evaluated by testing these 4 samples in duplicate during 20
days on 2 independent runs each days.
Results are shown in the following tables :
Table 1 : Intra assay reproducibility
n = 30 sample 1 sample 2 sample 3 sample 4
(ratio 0.37) (ratio =1.32) (ratio =3.39) (ratio =18.39)
Mean of percent 4 85.37 94.89 98.38
of inhibition
Standard deviation 12.6 1.59 0.66 0.21
(SD)
CV (%) NA 1.86% 0.69% 0.22%
Table 2 : Inter assay reproducibility
n = 40 sample 1 sample 2 sample 3 sample 4
(ratio 0.37) (ratio =1.32) (ratio =3.39) (ratio =18.39)
Mean of percent 3.74 81.46 92.76 98.08
of inhibition
Standard deviation 15.84 7.07 3.43 0.75
CV (%) NA 8.68% 3.70% 0.76%
The results obtained during these reproducibility studies were conformed to those expected.
12 - LIMITS OF THE TEST
The MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY test is strictly limited to the confirmation of the
presence of the hepatitis B surface antigen (HBs Ag) in human serum and plasma.
Samples which repeatedly test weakly positive (ratio less than 2) with the MONOLISA ® HBs Ag
ULTRA test and which are determined not reactive for an undiluted sample with the MONOLISA ® HBs
Ag ULTRA CONFIRMATORY test (reactivity ratio less than 0.8) must be interpreted with precaution.
It is recommended to re-test these patients with another method or with a second sample taken later.
13 - LITERATURE
Refer to French package insert.
9

MONOLISA ® HBs Ag ULTRA 72408
CONFIRMATORY
25 tests
TEST POUR LA CONFIRMATION DE LA PRÉSENCE DE L’Ag
DE SURFACE DU VIRUS DE L’HÉPATITE B DANS LE SÉRUM
OU LE PLASMA HUMAIN
IVD
Contrôle de qualité du fabriquant
Tous les produits fabriqués et commercialisés par la société Bio-Rad sont placés sous un
système d'assurance qualité de la réception des matières premières jusqu'à la
commercialisation des produits finis.
Chaque lot du produit fini fait l'objet d'un contrôle de qualité et n'est commercialisé que s'il
est conforme aux critères d'acceptation.
La documentation relative à la production et au contrôle de chaque lot est conservée par
notre société.
11

SOMMAIRE
1. BUT DU DOSAGE
2. PRINCIPE DU TEST MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY
3. COMPOSITION DE LA TROUSSE
4. PRÉCAUTIONS
5. CONSIGNES D'HYGIÈNE ET DE SÉCURITÉ
6. MATÉRIEL NÉCESSAIRE MAIS NON FOURNI
7. CONSERVATION - VALIDITÉ
8. ÉCHANTILLONS
9. MODE OPÉRATOIRE
10. CALCUL ET INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS
11. PERFORMANCES
12. LIMITES DU TEST
13. RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES
12

1 - BUT DU DOSAGE
Le test MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY est utilisé pour confirmer la présence de l’Ag
de surface du virus de l’hépatite B (Ag HBs) dans les échantillons sériques ou plasmatiques humains
trouvés réactifs par le test de screening MONOLISA® HBs Ag ULTRA codes 72346/72348.
2 - PRINCIPE DU TEST MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY
Le test MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY utilise le principe de la neutralisation par un
excès d'anticorps anti-HBs (diluant anti-HBs; réactif de neutralisation) de l'Ag HBs présent dans les
échantillons sériques ou plasmatiques.
Il est conseillé de tester les échantillons trouvés positifs répétables en test de screening MONOLISA ®
HBs Ag ULTRA avec les réactifs de la trousse MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY. Dans
le cas d’un échantillon positif en antigène HBs, les anticorps anti-HBs du réactif de neutralisation
saturent les déterminants antigéniques HBs de l’échantillon qui ne pourront plus se lier à l'anticorps
immobilisé sur la phase solide. Une réduction de la densité optique sera observée lors de la
comparaison avec le même échantillon où le réactif de neutralisation est remplacé par un contrôle
diluant négatif ne contenant pas d'anticorps anti-HBs. Plusieurs dilutions de l'échantillon seront
éventuellement contrôlées pour prendre en compte les variations de concentration en Ag HBs de
l’échantillon.
L'essai comprend les étapes réactionnelles suivantes :
1) Incubation des contrôles ou des échantillons positifs en Ag HBs avec le réactif de neutralisation et
le conjugué en présence d'anticorps anti-HBs immobilisés sur la phase solide.
Pour chaque échantillon, des cupules témoins sont réalisées en remplaçant le réactif de
neutralisation par un contrôle diluant négatif.
La suite de la procédure est identique au protocole de la trousse MONOLISA ® HBs Ag ULTRA :
2) Lavage puis révélation de l'activité enzymatique liée à la phase solide par addition du substrat.
3) Arrêt de la révélation puis lecture des densités optiques à 450/620-700 nm et interprétation des
résultats.
3 - COMPOSITION DE LA TROUSSE
ETIQUETAGE NATURE DES RÉACTIFS PRÉSENTATION
RA Réactif de neutralisation Tampon Tris NaCl pH 8.0 1 flacon
contenant du sérum de mouton et du sérum humain négatif
en antigène HBs, en anticorps anti-VHC et anti-VIH1/2,
0,7 ml
additionné d’anticorps anti- HBs.
Réactif prêt-à-l’emploi
Conservateur : ProClin 300 (0.25%)
RB Contrôle diluant négatif 1 flacon
Tampon Tris NaCl pH 8.0 contenant du sérum de mouton
et du sérum humain négatif en antigène HBs,
0,7 ml
en anticorps anti-VHC et anti-VIH1/2.
Réactif prêt-à-l’emploi
Conservateur : ProClin 300 (0.25%)
RC Diluant échantillon 1 flacon
Eau physiologique à 0.85%.
Réactif prêt-à-l’emploi
27 ml
Conservateur : ProClin 300 (0.1%)
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4 - PRÉCAUTIONS
La qualité des résultats dépend du respect des bonnes pratiques de laboratoire suivantes :
• Ne pas utiliser des réactifs dont la validité est expirée.
• Ne pas mélanger, ni associer des réactifs provenant de trousses MONOLISA ® HBs Ag ULTRA
CONFIRMATORY portant des numéros de lots différents au cours d'une même manipulation.
• Avant utilisation, attendre 30 minutes que les réactifs s'équilibrent à la température ambiante
(18-30°C).
• Utiliser une verrerie parfaitement lavée et rincée à l'eau distillée ou de préférence du matériel à
usage unique.
• Se reporter également à la notice de la trousse MONOLISA® HBs Ag ULTRA.
5 - CONSIGNES D'HYGIÈNE ET DE SÉCURITÉ
• Tous les réactifs de la trousse sont destinés à l'usage du diagnostic in vitro .
• Le matériel d'origine humaine utilisé pour la préparation des réactifs RA et RB a été testé et trouvé
négatif en antigène HBs, en anticorps anti-VIH1, anti-VIH 2 et anti-VHC. Du fait qu’aucune
méthode ne peut garantir de façon absolue l'absence des virus VIH, VHB, VHC ou d'autres agents
infectieux, considérer ces réactifs, ainsi que les échantillons de patients, comme potentiellement
infectieux et les manipuler avec les précautions d'usage.
• Pour les consignes d'hygiène et de sécurité usuelles, se reporter à la notice de la trousse
MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
Certains réactifs contiennent du ProClin 300 (0.04%, 0,1 % et/ou 0,5%)
Xi Irritant
R43 : peut entraîner une sensibilisation par contact avec la peau
S28-37 : Après contact avec la peau, se laver immédiatement et abondamment avec
de l'eau et du savon. Porter des gants appropriés.
6 - MATÉRIEL NÉCESSAIRE MAIS NON FOURNI
Se reporter à la notice de la trousse MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
7 - CONSERVATION - VALIDITÉ
• Conserver la trousse à + 2-8°C avant utilisation.
• Après ouverture tous les réactifs sont utilisables jusqu'à la date de péremption indiquée sur le
coffret, si conservés à 2-8°C.
8 - ÉCHANTILLONS
• Se reporter à la notice de la trousse MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
• Certains échantillons ayant une concentration très élevée en Ag HBs peuvent ne pas être
neutralisés par le réactif de neutralisation s'ils sont testés non dilués.
Se reporter au chapitre 10 «CALCUL ET INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS», sous-chapitre :
«Conditions de validation du test».
NB : les échantillons ayant une concentration très élevée en Ag HBs, densité optique supérieure à
3.000 avec le test MONOLISA ® HBs Ag Ultra, peuvent être testés directement dilués au 1/100 dans
le diluant échantillon.
9 - MODE OPÉRATOIRE
Procéder de la façon suivante en utilisant les réactifs de la trousse MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
1. Préparer la solution de lavage R2 et la solution de conjugué reconstituée (R6+R7) : se reporter au
chapitre 8 «PREPARATION DES REACTIFS», sous-chapitre «réactifs à reconstituer» de la notice de
la trousse MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
2. Sortir de l'emballage protecteur le cadre support et le nombre de barrettes nécessaires (Réactif
R1).
3. Distribuer dans les cupules dans l'ordre suivant :
• Cupules A1, A2 : 100 µl de contrôle négatif R3 de la trousse MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
• Cupules B1, B2 : 100 µl de contrôle positif R4 de la trousse MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
• Cupules C1, C2, D1, D2 : 100 µl du premier échantillon à confirmer.
14

• Cupules E1, E2, F1, F2 : 100 µl du deuxième échantillon à confirmer
• Cupules G1, G2, H1, H2 : 100 µl du troisième échantillon à confirmer, etc…
En fonction du système utilisé, il est possible de modifier la position ou l’ordre de distribution des
témoins.
4. Rajouter 20 µl de contrôle diluant négatif RB dans les cupules A1, B1, C1, D1, E1, F1, G1, H1 et
20 µl de réactif de neutralisation RA pour les cupules A2, B2, C2, D2, E2, F2, G2, H2 etc...
5. Distribuer 50 µl de la solution de conjugué reconstitué (R6 + R7) dans toutes les cupules.
Homogénéiser par 3 aspirations/refoulements au minimum.
6. Poursuivre avec l’étape 7 et les étapes suivantes du chapitre 11 «MODE OPERATOIRE» de la
notice de la trousse MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
10 - CALCUL ET INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS
1) Ratio de réactivité des contrôles et des échantillons
1. Pour les contrôles positif R4 et négatif R3 de la trousse MONOLISA ® HBs Ag ULTRA, calculer :
DO contrôles avec RB
Le ratio de réactivité = ---------------------------------------------------------
[(DO R3 avec RB + DO R3 avec RA)/2] + 0.050
2. Pour chaque échantillon, calculer :
Moyenne DO échantillon avec RB
Le ratio de réactivité = ---------------------------------------------------------
[(DO R3 avec RB + DO R3 avec RA)/2] + 0.050
2) Pourcentage d’Inhibition
1. Calculer les pourcentages d’inhibition des densités optiques enregistrées pour les contrôles positif
R4 et négatif R3 traités par le réactif de neutralisation RA et le contrôle diluant négatif RB.
(DO contrôles avec RB) - (DO contrôles avec RA)
Pourcentage d’Inhibition = --------------------------------------------------------- X 100
(DO contrôles avec RB)
2. Calculer les pourcentages d’inhibition des densités optiques enregistrées pour les échantillons
traités par le réactif de neutralisation RA et le contrôle diluant négatif RB.
(moyenne DO échantillons avec RB) - (moyenne DO échantillons avec RA)
Pourcentage d’Inhibition = -------------------------------------------------------------------------- X 100
(moyenne DO échantillons avec RB)
3) Conditions de validation du test
1. Les valeurs du contrôle négatif (R3) additionné de contrôle diluant négatif (RB) ou de réactif de
neutralisation (RA) doivent être inférieures ou égales à 0,080 unité de densité optique.
Pour ce même contrôle négatif (R3), le ratio de réactivité doit être inférieur à 0.8
Pour le contrôle positif (R4) additionné de contrôle diluant négatif (RB), la densité optique
enregistrée doit être supérieure à 0.800.
Pour ce même contrôle positif (R4), le pourcentage d’Inhibition doit être supérieur ou égal à 50%.
2. Pour les échantillons avec un pourcentage d’Inhibition < 50% et avec un ratio de réactivité ≥ 0.8,
il est nécessaire de retester cet échantillon dilué dans le diluant échantillon (1/100, 1/10 000,
1/1 000 000, dilution de facteur 100) pour obtenir un ratio de réactivité < 0,8 (échantillon non
confirmé dans ce cas) ou la confirmation de la neutralisation de l'échantillon testé (Pourcentage
d’Inhibition ≥ 50%).
4) Interprétation des résultats
Un échantillon sera confirmé positif pour l'Ag HBs si le ratio de réactivité est supérieur ou égal à 0.8
et le pourcentage d’Inhibition est supérieur ou égal à 50%.
Ratio de réactivité des échantillons Pourcentage d’Inhibition Interprétation
≥ 0.8 ≥ 50% Confirmé
≥ 0.8 < 50% Non confirmé à diluer
< 0.8 Quelque soit le résultat Non réactif*
* Non confirmé pour les échantillons testés en dilution
15

Exemples :
Test Valeurs de DO Valeurs de DO Ratio de Pourcentage
avec RA avec RB réactivité d’Inhibition Interprétation
des échantillons
Contrôle positif 0.095 2.025 32.66 95% Confirmé
(R4)
Contrôle négatif 0.011 0.013 0.21 15% Non réactif
(R3)
Echantillon 0.009 0.027 0.40 68% Non réactif
1 0.007 0.023
Echantillon 2.585 3.906 63.00 34% Non confirmé
2 2.570 3.880 à diluer
Echantillon 0.049 2.079 33.36 98% Confirmé
2 0.045 2.058
Dil.1/100
Echantillon 0.132 0.151 2.52 13% Non confirmé
3 0.140 0.161 à diluer
Echantillon 0.032 0.036 0.55 12% Non confirmé
3 0.028 0.032
Dil. 1/100
11 - PERFORMANCES
Les performances du test MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY associé au test
MONOLISA ® HBs Ag ULTRA ont été déterminées à l’aide d’échantillons de patients atteints
d’Hépatite B aiguë et chronique ou atteints d’infections sans relation avec l’Hépatite B ainsi que sur
des échantillons provenant de panels commerciaux et de séroconversions commerciales.
La limite de sensibilité a été étudiée à l’aide du panel HB EFS français ainsi que du second étalon
international OMS 2004 ref (NIBSC 00/588)
Sensibilité analytique
Toutes les concentrations du panel HB EFS de 0.06 ng/ml à 2.2ng /ml ainsi que les concentrations
du standard OMS de 0.031 UI /ml à 1 UI /ml trouvées positives avec le test Monolisa HBs Ag Ultra
ont été confirmées à l’aide du test MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY.
Une concentration supérieure à 10 mg / ml d’ Ag HBs a été neutralisée après dilution de cet
échantillon .
Sensibilité
L’étude de sensibilité a été réalisée sur 337 échantillons positifs provenant de suivis d’Hépatite B
chronique ou aiguë de patients infectés.
Tous les échantillons positifs ont été confirmés à l’aide du test MONOLISA ® HBs Ag ULTRA
CONFIRMATORY.
15 séroconversions VHB commerciales bien documentées (45 échantillons) ont été étudiées : tous
les échantillons positifs ont été neutralisés.
Spécificité et Réactions Croisées
Un panel interne de 16 échantillons trouvés faux positifs avec le test Monolisa HBs Ag ULTRA ont
été testés et trouvés non confirmés avec le test MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY.
102 échantillons provenant de patients avec différentes pathologies ou statut immunitaire sans
relation avec l’Hépatite B (femmes enceintes, facteurs rhumatoïdes, anticorps anti nucléaires,
anticorps anti souris ou autres infections virales et bactériennes) ont été testés avec le test
MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY et sont confirmés négatifs.
De plus 37 échantillons positifs à la fois en Ag HBs et pour d’autres marqueurs (facteurs
rhumatoïdes, anticorps anti nucléaires, anticorps anti souris ou autres infections virales et
bactériennes) ont été testés avec le test MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY et confirmés
avec celui ci.
16

De plus, 23 échantillons provenant du panel de coinfection BBI PCA 201 ( coinfections VHB/VIH/
VHC /VHTL) positifs en Monolisa HBS Ag Ultra ont été confirmés purs ou après dilution.
Etudes de Reproductibilité
La reproductibilité du test MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY a été déterminée à l’aide
de 4 échantillons : 1 échantillon négatif (échantillon 1), 2 échantillons positifs (échantillons 2 et 3 ) et
1 échantillon positif fort (échantillon 4).
L’étude intra essai a été réalisée en testant ces 4 échantillons 30 fois lors du même essai ;
L’étude inter essai a été réalisée en testant ces 4 échantillons en duplicats à raison de 2 essais
différents par jour et pendant une période de 20 jours .
Les résultats exprimés en moyenne, écart type et CV sont présentés dans les tableaux suivants
Tableau 1 : Reproductibilité Intra essai
n = 30 Echantillon 1 Echantillon 2 Echantillon 3 Echantillon 4
(ratio 0.37) (ratio =1.32) (ratio =3.39) (ratio =18.39)
Moyenne 4 85.37 94.89 98.38
du % d’inhibition
Ecart type (ET) 12.6 1.59 0.66 0.21
CV (%) NA 1,86% 0,69% 0,22%
Tableau 2 : Reproductibilité Inter essai
n = 40 Echantillon 1 Echantillon 2 Echantillon 3 Echantillon 4
(ratio 0.37) (ratio =1.32) (ratio =3.39) (ratio =18.39)
Moyenne 3,74 81,46 92,76 98,08
du % d’inhibition
Ecart type (ET)) 15,84 7,07 3,43 0,75
CV (%) NA 8,68% 3,70% 0,76%
Les résultats obtenus durant ces études sont conformes à ceux attendus.
12 - LIMITES DU TEST
Le test MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY est strictement limité à la confirmation de la
présence de l’antigène de surface du virus de l’hépatite B (Ag HBs) dans le sérum et le plasma
humain.
Les échantillons réactifs répétables faiblement positifs (ratio inférieur à 2) avec le test MONOLISA ®
HBs Ag ULTRA et obtenus non réactifs sur l'échantillon non dilué dans le test MONOLISA ® HBs Ag
ULTRA CONFIRMATORY (ratio de réactivité inférieur à 0.8), doivent être interprétés avec précaution.
Il est conseillé de retester ce patient avec une autre méthode ou avec un deuxième échantillon
prélevé ultérieurement.
13 - BIBLIOGRAPHIE
1. COUROUCE A.M., LEE H., DROUET J., CANAVAGGIO M. and SOULIER J.P. (1983)
- Monoclonal antibodies to HBs Ag : a study of their specificities for eight different HBs subtypes.
Developments in Biological Standardization, 54, 527-534.
2. COUROUCE A.M., PLANCON A. and SOULIER J.P. (1983)
- Distribution of HBs Ag subtypes in the world. Vox Sang. 44, 197-211.
3. DAVID G.S., PRESENT W., MARTINIS J., WANG R., BATHOLOMEW R., DESMOND W. and SEVIER
E.D., (1981)
- Monoclonal antibodies in the detection of hepatitis infection. Medical Laboratory Sciences, 38,
341-.348.
4. DROUET J., COUROUCE A.M., KALIL J., LEE H., and FELLOUS M. (1981)
- Monoclonal antibodies to HBs Ag produced by murine hybridomas. In viral hepatitis, edited by
Szmuness W. Alter H.J., Maynard J.E. The Franklin Institute Press, 706.
17

18
5. FIELDS H.A., DAVID C.L., BRADLEY D.W. and MAYNARD J.E. (1983)
- Experimental conditions affecting the sensitivity of enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)
for detection of hepatitis B surface antigen (HBs Ag) - Bulletin of the World Health Organization,
61, 1, 135-142.
6. LEE H.H., COUROUCE A.M., PERE M., CANAVAGGIO M., DROUET J. and SOULIER J.P. (1983)
- Monoclonal antibodies to HBs Ag; a study of their specificities against HBs Ag subtypes and their
utilization in ELISA. International Association of Biological Standardization. International
Symposium on Monoclonal Antibodies : Paris, France.
7. SOULIER J.P., COUROUCE A.M., LEE H. DROUET J., MULLER A. and CANAVAGGIO M. (1983)
- Monoclonal antibodies against HBs antigen. Bulletin Biotest (vol. 4, 353-358).
8. WANDS J.P., CARLSON R.L., SCHOEMAKER H., ISSELBACHER K.J. and ZURAWSKI V.R. (1981)
- Immunodiagnosis of hepatitis B with high-affinity IgM monoclonal antibodies. Proc. Nat. Acad.
Sci., 78, 2, 1214-1218.
9. M. CANAVAGGIO, A.M. COUROUCE, M. PERE, H. LEE
- Spécificité d'anticorps monoclonaux dirigés contre le déterminant a de l'Ag HBs (1985). Nouvelle
Revue Française d'Immunohématologie (Springer International), 27, 2, 134.
10. J. DROUET, G. CHARRIER, A.M. COUROUCE, M. PERE, J.F. DELAGNEAU, J. ROISIN (1985)
- Nouveaux réactifs de dépistage de l'Ag HBs et de dosage de l'anticorps anti-HBs. Nouvelle
Revue Française d'Immunohématologie (Springer International), 27, 2, 134

MONOLISA ® HBs Ag ULTRA 72408
CONFIRMATORY
25 tests
PRUEBA PARA LA CONFIRMACIÓN DE LA PRESENCIA
DEL ANTÍGENO DE SUPERFICIE DEL VIRUS DE LA HEPATITIS B
EN EL SUERO O EL PLASMA HUMANO
IVD
Control de calidad del fabricante
Todos los productos fabricados y comercializados lo son bajo un sistema de calidad
completo que se inicia en la recepción de las materias primas y se termina en la
comercialización del producto.
Cada parte se ve sometida a un control de calidad y sólo sale al mercado cuando está
conforme a los criterios de aceptación.
Los registros relacionados con la producción y el control de cada parte individual
permanecen en nuestra empresa.
19

RESUMEN
1 - OBJETIVO DEL TEST
2 - PRINCIPIO DE LA PRUEBA MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY
3 - COMPOSICIÓN DEL EQUIPO
4 - PRECAUCIONES
5 - NORMAS DE HIGIENE Y SEGURIDAD
6 - MATERIAL NECESARIO NO INCLUIDO
7 - CONSERVACIÓN Y CADUCIDAD
8 - MUESTRAS
9 - PROCEDIMIENTO
10 - CÁLCULO E INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
11 - RENDIMIENTOS
12 - LÍMITES DE LA PRUEBA
13 - BIBLIOGRAFÍA
20

1 - OBJETIVO DEL TEST
La prueba MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY se emplea para confirmar la presencia del
antígeno de superficie del virus de la hepatitis B (Ag HBs) en las muestras séricas o plasmáticas
humanas que hayan resultado positivas en la prueba de screening MONOLISA ® HBs Ag ULTRA
códigos 72346/72348.
2 - PRINCIPIO DE LA PRUEBA MONOLISA ® HBS AG ULTRA CONFIRMATORY
La prueba MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY utiliza el principio de la neutralización por
exceso de anticuerpos anti-HBs (diluyente antiHBs, reactivo de neutralización) del Ag HBs presente
en las muestras séricas o plasmáticas.
Se aconseja realizar la prueba a las muestras que hayan dado positivo dudoso en la prueba de
screening MONOLISA ® HBs Ag ULTRA con los reactivos del equipo MONOLISA ® HBs Ag ULTRA
CONFIRMATORY. En el caso de una muestra positiva en antígeno HBs, los anticuerpos anti-HBs del
reactivo de neutralización saturan los determinantes antigénicos HBs de la muestra, que no se
podrán unir al anticuerpo inmovilizado en la fase sólida. Se observará una reducción de la densidad
óptica al compararlo con la misma muestra en la que se ha sustituido el reactivo de neutralización
por un control diluyente negativo que no contenga anticuerpos anti-HBs. Se controlarán
eventualmente varias diluciones de la muestra para tomar en cuenta las variaciones de
concentración en Ag HBs de la muestra.
El ensayo incluye las siguientes etapas reactivas:
1) Incubación de los controles o de las muestras positivas en Ag HBs con el reactivo de
neutralización y el conjugado en presencia de anticuerpos antiHBs inmovilizados en la fase sólida.
Por cada muestra, los pocillos testigo se realizan sustituyendo el reactivo de neutralización por un
control diluyente negativo.
El procedimiento continúa de la misma forma que el protocolo del equipo MONOLISA ® HBs Ag
ULTRA :
2) Lavado y posterior revelado de la actividad enzimática relacionada con la fase sólida por adición
del sustrato.
3) Parada del revelado y posterior lectura de las densidades ópticas a 450/620-700 mm e
interpretación de los resultados.
3 - COMPOSICIÓN DEL EQUIPO
ETIQUETADO TIPO DE REACTIVO PRESENTACIÓN
RA Reactivo de neutralización 1 frasco
Tampón Tris NaCl pH 8,0 con suero de cordero
y suero humano negativo en antígeno HBs,
0,7 ml
anticuerpos anti-VHC y antiVIH1/2, al que se han añadido
anticuerpos anti-HBs.
Reactivo listo para su uso
Conservante : ProClin 300 (0,25%)
RB Control diluyente negativo 1 frasco
Tampón Tris NaCl pH 8,0 con suero de cordero
y suero humano negativo en antígeno HBs,
0,7 ml
anticuerpos anti-VHC y antiVIH1/2.
Reactivo listo para su uso
Conservante : ProClin 300 (0,25%)
RC Diluyente para muestras 1 frasco
Suero fisiológico al 0,85% . 27 ml
Reactivo listo para su uso
Conservante : ProClin 300 (0,1%)
21

4 - PRECAUCIONES
La calidad de los resultados depende del seguimiento de las siguientes buenas prácticas de
laboratorio :
• No utilizar reactivos caducados.
• No mezclar ni asociar durante una misma manipulación reactivos procedentes de equipos
MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY con números de lote diferentes.
• Antes de su utilización, esperar 30 minutos para que los reactivos alcancen la temperatura
ambiente (18-30ºC).
• Utilizar instrumental de cristal perfectamente lavado y aclarado con agua destilada, o,
preferiblemente, material de un solo uso.
• Consultar también las instrucciones del equipo MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
5 - NORMAS DE HIGIENE Y SEGURIDAD
• Todos los reactivos del equipo están destinados al uso diagnóstico in vitro.
• El material de origen humano utilizado para la preparación de los reactivos RA y RB ha sido
sometido a pruebas, resultando negativo en antígeno HBs y en anticuerpos anti-VIH1, anti-VIH2 y
anti-VHC. Puesto que ningún método puede garantizar completamente la ausencia de los virus
VIH, VHB, VHC o de otros agentes infecciosos, estos reactivos, así como las muestras de los
pacientes, deberán considerarse como potencialmente infecciosos y deberán manipularse con
precaución.
• Para las normas de higiene y seguridad habituales, consultar las instrucciones del equipo
MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
Algunos reactivos contienen ProClin 300 (0,04%, 0,1% y/o 0,5%)
Xi Irritante
R43 : puede provocar reacción alérgica por contacto con la piel
S28-37 : En caso de contacto con la piel, lavarse inmediatamente con agua abundante
y jabón. Llevar guantes adecuados.
6 - MATERIAL NECESARIO NO INCLUIDO
Consultar las instrucciones del equipo MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
7 - CONSERVACIÓN Y CADUCIDAD
• Conservar el equipo a + 2-8ºC antes de su utilización.
• Una vez abierto, todos los reactivos pueden utilizarse hasta la fecha de caducidad indicada en el
estuche si se han conservado a 2-8ºC.
8 - MUESTRAS
• Consultar las instrucciones del equipo MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
• Es posible que algunas muestras con una concentración muy elevada de Ag HBs no puedan ser
neutralizadas por el reactivo de neutralización si no se diluyen antes.
Consultar el capítulo 10 “CÁLCULO E INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS”, sección:
“Condiciones de validación de la prueba”.
NOTA : A las muestras con una concentración muy elevada de Ag HBs y densidad óptica superior a
3.000 con la prueba MONOLISA ® HBs Ag Ultra se les puede hacer la prueba diluidas directamente
al 1/100 en el diluyente para muestras.
9 - PROCEDIMIENTO
Proceder de la siguiente forma cuando se utilicen los reactivos del equipo MONOLISA ® HBs Ag
ULTRA.
1. Preparar la solución de lavado R2 y la solución de conjugado reconstituido (R6+R7): consultar el
capítulo 8 “PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS”, sección “Reactivos que se deben reconstituir”
de las instrucciones del equipo MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
2. Sacar del envoltorio protector el bastidor de soporte y el número de unidades necesarias (reactivo
R1).
3. Distribuir en los pocillos en el orden siguiente:
• Pocillos A1 y A2: 100 µl de control negativo R3 del equipo MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
22

• Pocillos B1 y B2: 100 µl de control positivo R4 del equipo MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
• Pocillos C1, C2, D1 y D2: 100 µl de la primera muestra que se desea confirmar.
• Pocillos E1, E2, F1 y F2: 100 µl de la segunda muestra que se desea confirmar.
• Pocillos G1, G2, H1 y H2: 100 µl de la tercera muestra que se desea confirmar, etc.
En función del sistema utilizado, se puede modificar la posición o el orden de distribución de los
controles.
4. Añadir 20 µl de control diluyente negativo RB en los pocillos A1, B1, C1, D1, E1, F1, G1, H1 y 20 µl
de reactivo de neutralización RA en los pocillos A2, B2, C2, D2, E2, F2, G2, H2, etc.
5. Distribuir 50 µl de la solución de conjugado reconstituido (R6+R7) en todos los pocillos.
Homogeneizar mediante 3 aspiraciones/dispensaciones como mínimo.
6. Proseguir con la etapa 7 y siguientes del capítulo 11 “PROCEDIMIENTO” de las instrucciones del
equipo MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
10 - CÁLCULO E INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
1) Relación entre reactividad de los controles y de las muestras
1. Para los controles positivo R4 y negativo R3 del equipo MONOLISA ® HBs Ag ULTRA, calcular :
DO de controles con RB
la relación de reactividad = -----------------------------------------------------------
[(DO de R3 con RB + DO de R3 con RA)/2] + 0,050
2. Para cada muestra, calcular :
DO media de las muestras con RB
la relación de reactividad = -----------------------------------------------------------
[(DO de R3 con RB + DO de R3 con RA)/2] + 0,050
2) Porcentaje de inhibición
1. Calcular los porcentajes de inhibición de las densidades ópticas registradas para los controles
positivo R4 y negativo R3 tratados con el reactivo de neutralización RA y el control diluyente
negativo RB.
(DO de los controles con RB) - (DO de los controles con RA)
Porcentaje de inhibición = ------------------------------------------------------------------------ X 100
(DO de los controles con RB)
2. Calcular los porcentajes de inhibición de las densidades ópticas registradas para las muestras
tratadas con el reactivo de neutralización RA y el control diluyente negativo RB.
(DO media de las muestras con RB) - (DO media de las muestras con RA)
Porcentaje de inhibición = ------------------------------------------------------------------------- X 100
DO media de las muestras con RB
3) Condiciones de validación de la prueba
1. Los valores del control negativo (R3) al que se ha añadido control diluyente negativo (RB) o
reactivo de neutralización (RA) deben ser iguales o inferiores a 0,080 unidades de densidad óptica.
Para el propio control negativo (R3), la relación de reactividad debe ser inferior a 0,8.
Para el control positivo (R4) al que se ha añadido control diluyente negativo (RB) la densidad óptica
registrada debe ser superior a 0,800.
Para el propio control positivo (R4), el porcentaje de inhibición debe ser igual o superior al 50%.
2. Para las muestras con un porcentaje de inhibición

4) Interpretación de los resultados
Una muestra se confirmará como positiva en Ag HBs si la relación de reactividad es igual o superior
a 0,8 y el porcentaje de inhibición es igual o superior al 50%.
Relación de reactividad Porcentaje de inhibición Interpretación
de las muestras
≥ 0,8 ≥ 50% Confirmado
≥ 0,8 < 50% No confirmado; diluir
< 0,8 Sea cual sea el resultado No reactivo*
* No confirmado para las muestras probadas en dilución
Ejemplos :
Prueba Valores Valores Relación de Porcentaje Interpretación
de DO de DO reactividad de de inhibición
con RA con RB las muestras
Control positivo 0,095 2,025 32,66 95% Confirmado
(R4)
Control negativo 0,011 0,013 0,21 15% No reactivo
(R3)
Muestra 1 0,009 0,027 0,40 68% No reactivo
0,007 0,023
Muestra 2 2,585 3,906 63,00 34% No confirmado;
2,570 3,880 diluir
Muestra 2 0,049 2,079 33,36 98% Confirmado
Dil.1/100 0,045 2,058
Muestra 3 0,132 0,151 2,52 13% No confirmado;
0,140 0,161 diluir
Muestra 3 0,032 0,036 0,55 12% No confirmado
Dil. 1/100 0,028 0,032
11 - RENDIMIENTOS
Los rendimientos de la prueba MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY asociada a la prueba
MONOLISA ® HBs Ag ULTRA se determinaron mediante muestras de pacientes afectados por
hepatitis B aguda y crónica o afectados por infecciones sin relación con la hepatitis B, así como a
partir de muestras procedentes de paneles comerciales y de seroconversiones comerciales.
El límite de sensibilidad fue estudiado con ayuda del panel HB EFS francés, así como del segundo
estándar internacional OMS 2004 (ref. NIBSC 00/588).
Sensibilidad analítica
Todas las concentraciones del panel HB EFS de 0,06 ng/ml a 2,2 ng/ml, así como las
concentraciones del estándar OMS de 0,031 UI/ml a 1 UI/ml que resultaron positivas con la prueba
MONOLISA HBs Ag ULTRA fueron confirmadas con ayuda de la prueba MONOLISA ® HBs Ag ULTRA
CONFIRMATORY.
Una concentración superior a 10 mg/ml de Ag HBs se neutralizó tras la dilución de esta muestra.
Sensibilidad
El estudio de sensibilidad se realizó sobre 337 muestras positivas procedentes de seguimientos de
hepatitis B crónica o aguda de pacientes infectados.
Todas las muestras positivas fueron confirmadas con ayuda de la prueba MONOLISA ® HBs Ag
ULTRA CONFIRMATORY.
Se estudiaron 15 seroconversiones VHB comerciales bien documentadas (45 muestras). Todas las
muestras positivas fueron neutralizadas.
24

Especificidad y reacciones cruzadas
Un panel interno de 16 muestras que dieron falsos positivos con la prueba MONOLISA HBs Ag
ULTRA fue sometido a pruebas y resultaron no confirmadas con la prueba MONOLISA ® HBs Ag
ULTRA CONFIRMATORY.
Se sometieron a la prueba MONOLISAv HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY 102 muestras procedentes
de pacientes con diferentes patologías o estado inmunitario sin relación con la hepatitis B (mujeres
embarazadas, factores reumatoides, anticuerpos antinucleares, anticuerpos antirratón u otras
infecciones virales y bacterianas); confirmándose todas ellas como negativas.
Además se sometieron a la prueba MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY 37 muestras
positivas a la vez en Ag HBs y en otros marcadores (factores reumatoides, anticuerpos antinucleares,
anticuerpos antirratón u otras infecciones virales y bacterianas), que fueron confirmadas con esta
prueba.
También se confirmaron como positivas con MONOLISA HBs Ag ULTRA 23 muestras, puras o después
de dilución, procedentes del panel de coinfección BBI PCA 201 (coinfecciones VHB/VIH/VHC/VHTL).
Estudios de reproductibilidad
La reproductibilidad de la prueba MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY quedó determinada
con 4 muestras: 1 muestra negativa (muestra 1), 2 muestras positivas (muestras 2 y 3) y 1 muestra
positiva fuerte (muestra 4).
El estudio intraensayo se realizó sometiendo estas 4 muestras a la prueba 30 veces durante el
mismo ensayo.
El estudio intraensayo se realizó sometiendo estas 4 muestras por duplicado a la prueba, a razón de
2 ensayos diferentes al día durante un periodo de 20 días.
Los resultados expresados en media, desviación típica y CV se presentan en las tablas siguientes :
Tabla 1 : Reproductibilidad intraensayo
n = 30 muestra 1 muestra 2 muestra 3 muestra 4
(relación 0,37) (relación = 1,32) (relación = 3,39) (relación = 18,39)
Media del % 4 85,37 94,89 98,38
de inhibición
Desviación típica 12,6 1,59 0,66 0,21
(DT)
CV (%) NA 1,86% 0,69% 0,22%
Tabla 2 : Reproductibilidad intraensayo
n = 40 muestra 1 muestra 2 muestra 3 muestra 4
(relación 0,37) (relación = 1,32) (relación = 3,39) (relación = 18,39)
Media del % 3,74 81,46 92,76 98,08
de inhibición
Desviación típica 15,84 7,07 3,43 0,75
(DT)
CV (%) NA 8,68% 3,70% 0,76%
Los resultados obtenidos durante estos estudios se corresponden con los que se esperaban.
12 - LÍMITES DE LA PRUEBA
La prueba MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY está limitada exclusivamente a la
confirmación de la presencia del antígeno de superficie del virus de la hepatitis B (Ag HBs) en el
suero y el plasma humano.
Las muestras reactivas dudosas ligeramente positivas (relación inferior a 2) con la prueba
MONOLISA ® HBs Ag ULTRA y que hayan resultado no reactivas en la muestra no diluida de la prueba
MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY (relación de reactividad inferior a 0,8), deben
interpretarse con precaución. Se aconseja volver a realizar la prueba al paciente con otro método o
con una segunda muestra extraída posteriormente.
13 - BIBLIOGRAFÍA
Véase la versión francesa.
25

MONOLISA ® HBs Ag ULTRA 72408
CONFIRMATORY
25 tests
TEST ZUR BESTÄTIGUNG VON HBs Ag IN HUMANSERUM ODER -
PLASMA
IVD
Qualitätskontrolle des Herstellers
Alle von der Firma Bio-Rad hergestellten und verkauften Produkte unterliegen einem
umfassenden Qualitätssicherungssystem vom Rohstoffeingang bis zur Vermarktung der
Fertigprodukte.
Jede Charge unterliegt der Qualitätskontrolle und wird nur dann verkauft, wenn sie den
Freigabekriterien entspricht.
Die Aufzeichnungen zu Produktion und Qualitätskontrolle einer jeden Charge befinden sich
in unserer Firma.
27

INHALT
1 - VERWENDUNGSZWECK
2 - PRINZIP DES MONOLISA ® HBS AG ULTRA BESTÄTIGUNGSTESTS
3 - ZUSAMMENSETZUNG DES KITS
4 - VORSICHTSMASSNAHMEN
5 - SICHERHEITSVORSCHRIFTEN
6 - ZUSÄTZLICH BENÖTIGTES MATERIAL
7 - HALTBARKEIT - STABILITÄT
8 - PROBENENTNAHME UND -AUFBEREITUNG
9 - TESTVERFAHREN
10 - BERECHNUNG UND INTERPRETATION DER ERGEBNISSE
11 - LEISTUNGSMERKMALE
12 - GRENZEN DES TESTS
13 - LITERATUR
28

1. VERWENDUNGSZWECK
Der MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY-KIT dient der Bestätigung des Vorhandenseins
von Hepatitis-B-Oberflächenantigen (HBs Ag) in Humanserum- oder Humanplasma-Proben, die im
MONOLISA ® HBs Ag ULTRA Screening-Test reaktiv waren (Bestellnummer 72346/72348).
2 - PRINZIP DES MONOLISA ® HBS AG ULTRA BESTÄTIGUNGSTESTS
Der MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY-KIT verwendet das Prinzip der Neutralisation
durch überschüssige HBs-Antikörper (Anti-HBs-Verdünnungsmittel: Neutralisationsreagenz) von in
Plasma- und Serumproben vorhandenem HBs Ag.
Es empfiehlt sich, das Ergebnis von Proben, die im MONOLISA ® HBs Ag ULTRA Screeningtest
wiederholt reaktiv waren, unter Verwendung der Reagenzien aus dem MONOLISA ® HBs Ag ULTRA
CONFIRMATORY-KIT zu bestätigen. Wenn eine Probe HBs-Antigen enthält, sättigen die Anti-HBs-
Antikörper im Neutralisationsreagenz die in der Probe vorhandenen HBs-Antigendeterminanten und
verhindern somit deren Bindung an die Antikörper auf der Festphase. Bei dem Vergleich der selben
reaktiven Probe, bei der das Neutralisationsreagenz durch eine Negativkontrolle ohne HBs-
Antikörper ersetzt wurde, wird eine Abnahme der optischen Dichte beobachtet. Entsprechend der
unterschiedlich hohen HBs Ag-Konzentration kann es erforderlich sein, die Probe mehrfach zu
verdünnen.
Das Testverfahren besteht aus folgenden Reaktionsschritten :
1) Inkubation des Kontrollserums und der HBs-Ag-positiven Proben mit Neutralisationsreagenz und
Konjugat in Anwesenheit von Anti-HBs-Antikörpern auf der Festphase.
Für jedes Serum werden durch Ersetzen des Neutralisationsreagenzes durch eine Negativkontrolle
Kontrollvertiefungen mitgetestet.
Die übrigen Testschritte sind identisch zu denen im Protokoll des MONOLISA ® HBs Ag ULTRA Kits :
2) Waschzyklus und anschließende Entwicklung der an die Festphase gebundenen Enzymaktivität
durch Zugabe von Substrat.
3) Stoppen der Reaktion, anschließend Ablesen der optischen Dichte bei 450/620-700 nm und
Ergebnisauswertung.
3 - ZUSAMMENSETZUNG DES KITS
ETIKETT ART DER REAGENZIEN DARREICHUNGSFORM
RA Neutralisationsreagenz 1 Flasche
Tris NaCl-Puffer (pH 8,0) mit Schafserum und
Humanserum ohne HBs-Antigen und ohne Anti-HCV
0,7 ml
und Anti-HIV1/2-Antikörper; mit zugefügten
Anti-HBs-Antikörpern.
Gebrauchsfertiges Reagenz.
Konservierungsmittel : ProClin 300 (0,25%)
RB Negativkontrolle/Verdünnungsmittel 1 Flasche
Tris NaCl-Puffer (pH 8,0) mit Schafserum und
Humanserum ohne HBs-Antigen und ohne
0,7 ml
Anti- HCV - und Anti-HIV1/2-Antikörper.
Gebrauchsfertiges Reagenz.
Konservierungsmittel : ProClin 300 (0,25%)
RC Probenverdünnungsmittel 1 Flasche
0,85% physiologische Kochsalzlösung. 27 ml
Gebrauchsfertiges Reagenz.
Konservierungsmittel : ProClin 300 (0,1%)
29

4 - VORSICHTSMASSNAHMEN
Die Qualität der Ergebnisse hängt von der Einhaltung folgender GLP-Richtlinien ab :
• Die Reagenzien nicht über das Verfallsdatum hinaus verwenden.
• Keine Reagenzien aus dem MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY-KIT mit Kits anderer
Chargen innerhalb einer Messreihe vermischen oder miteinander verwenden.
• Vor der Verwendung 30 Minuten abwarten, bis die Reagenzien Raumtemperatur (18-30°C) erreicht
haben.
• Sorgfältig gewaschene und mit destilliertem Wasser gespülte Glasgefäße oder vorzugsweise
Einwegmaterial verwenden.
• Die Hinweise in der Packungsbeilage des Kits MONOLISA ® HBs Ag ULTRA beachten.
5 - SICHERHEITSVORSCHRIFTEN
• Alle Reagenzien in diesem Kit sind für die In-vitro-Diagnostik bestimmt.
• Das Material menschlichen Ursprungs, das zur Herstellung der Reagenzien RA und RB verwendet
wurde, ist mit negativem Ergebnis auf HBs-Antigen und auf Antikörper gegen HIV1, HIV2 und HCV
getestet worden. Da keine Testmethode mit absoluter Sicherheit ausschließen kann, dass HIV-,
Hepatitis B- oder C-Viren oder andere infektiöse Erreger vorhanden sind, sollten alle Reagenzien
und Patientenproben als potentiell infektiös angesehen und mit entsprechender Sorgfalt
gehandhabt werden.
• Allgemein gültige Sicherheitshinweise sind der Packungsbeilage des MONOLISA ® HBs Ag ULTRA
Kits zu entnehmen.
Einige Reagenzien enthalten ProClin TM 300 (0,04%, 0,1% und/oder 0,5%).
Xi Reizend
R43 : Sensibilisierung durch Hautkontakt möglich.
S28-37 : Bei Berührung mit der Haut sofort mit viel Wasser und Seife abwaschen.
Bei der Arbeit geeignete Schutzkleidung tragen.
6 - ZUSÄTZLICH BENÖTIGTES MATERIAL
Die Hinweise in der Packungsbeilage des MONOLISA ® HBs Ag ULTRA Kit beachten.
7 - HALTBARKEIT – STABILITÄT
• Lagerung des Kits vor der Verwendung bei 2 - 8°C.
• Nach dem Öffnen können alle Reagenzien bis zu dem auf der Schachtel aufgedruckten
Verfalldatum verwendet werden, wenn sie bei +2-8°C gelagert werden.
8 - PROBEN
• Die Hinweise in der Packungsbeilage des Kits MONOLISA ® HBs Ag ULTRA beachten.
• Proben mit einer sehr hohen HBs-Ag-Konzentration werden womöglich nicht durch das
Neutralisationsreagenz neutralisiert, wenn sie unverdünnt getestet werden.
Siehe Kapitel 10. „BERECHNUNG UND INTERPRETATION DER ERGEBNISSE”, Abschnitt
„Kriterien für die Testvalidierung“.
Anmerkung: Proben mit hoher Konzentration von HBs Ag mit einer optischen Dichte über 3.000 im
MONOLISA ® HBs Ag ULTRA-Test können direkt getestet werden, wenn sie 1/100 im
Probenverdünnungsmittel verdünnt werden.
9 - TESTVERFAHREN
Zur Testdurchführung die folgenden Schritte beachten und die Reagenzien aus dem MONOLISA ®
HBs Ag ULTRA-Kit verwenden.
1. Die Waschlösung (R2) und die rekonstituierte Konjugatlösung (R6 + R7) vorbereiten : Siehe
Kapitel 8 „AUFBEREITUNG DER REAGENZIEN“, Abschnitt „Aufzulösende Reagenzien“ in der
Packungsbeilage des MONOLISA ® HBs Ag ULTRA-Kit.
2. Den Mikrotiterplattenrahmen und die benötigte Anzahl an Streifen (Reagenz R1) aus der
Schutzpackung nehmen.
3. Die Verteilung in die Vertiefungen erfolgt in dieser Reihenfolge:
• Vertiefung A1, A2 : 100 µl Negativkontrolle R3 aus dem Kit MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
• Vertiefung B1, B2 : 100 µl Positivkontrolle R4 aus dem Kit MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
30

• Vertiefungen C1, C2, D1, D2: 100 µl der ersten zu bestätigenden Probe.
• Vertiefungen E1, E2, F1, F2 : 100 µl der zweiten zu bestätigenden Probe.
• Vertiefungen G1, G2, H1, H2 : 100 µl der dritten zu bestätigenden Probe usw.
Ja nachdem, welches System verwendet wird, können die Positionen der Kontrolllösungen oder
die Reihenfolge der Dispensierung verändert werden.
4. 20 µl Negativkontrolle RB in die Vertiefungen A1, B1, C1, D1, E1, F1, G1, H1 und 20 µl
Neutralisationsreagenz RA in die Vertiefungen A2, B2, C2, D2, E2, F2, G2, H2, usw. geben.
5. 50 µl der Konjugatarbeitslösung (R6+R7) in alle Vertiefungen geben. Das Reaktionsgemisch durch
mindestens 3-faches Aufsaugen homogenisieren.
6. Mit Schritt 7 und allen anschließenden Arbeitsschritten in Kapitel 11 „TESTVERFAHREN“ in der
Packungsbeilage des MONOLISA ® HBs Ag ULTRA Kit fortfahren.
10 - BERECHNUNG UND INTERPRETATION DER ERGEBNISSE
1) Verhältnis der Reaktivität von Kontrollen und Proben
1. Für die Positivkontrollen (R4) und die Negativkontrollen (R3) aus dem Kit MONOLISA ® HBs Ag
ULTRA sind folgende Berechnungen durchzuführen :
OD der mit RB behandelten Kontrollen
Verhältnis der Probenreaktivität† = ----------------------------------------------------
[(OD R3 mit RB + OD R3 mit RA)/2] + 0,050
2. Berechnung für jede Probe :
Mittlere OD der mit RB behandelten Proben
Verhältnis der Probenreaktivität† = -----------------------------------------------------
[(OD R3 mit RB + OD R3 mit RA)/2] + 0,050
2) Prozentuale Inhibition
1. Die prozentuale Inhibition der optischen Dichte der mit dem Neutralisationsreagenz (RA) und der
Negativkontrolle (RB) behandelten Positivkontrollen (R4) und der Negativkontrollen (R3) berechnen.
(OD von-RB behandelten Kontrollen) - (OD von RA behandelten Kontrollen)
Prozentuale Inhibition = ----------------------------------------------------------------------------- x 100
(OD von RB behandelten Kontrollen)
2. Die prozentuale Inhibition der optischen Dichte der mit dem Neutralisationsreagenz (RA) und der
Negativkontrolle (RB) behandelten Proben berechnen.
(mittlere OD von RB behandelten Proben) - (mittlere OD von RA behandelten Proben)
Prozentuale Inhibition = ---------------------------------------------------------------------------- x 100
(mittlere OD von RB behandelten Proben)
3) Kriterien für die Testvalidierung
1. Die Werte der Negativkontrolle (R3) mit Zugabe der Negativkontrolle/Verdünnungsmittel (RB) oder
des Neutralisationsreagenz (RA) dürfen bei höchstens 0,080 OD-Einheiten liegen.
Für dieselbe Negativkontrolle (R3) muss das Verhältnis der Probenreaktivität unter 0.8 betragen.
Die gemessene optische Dichte der Positivkontrolle (R4) mit Zugabe von Negativkontrolle (RB)
sollte über 0,800 liegen.
Für dieselbe Positivkontrolle (R4) muss das Verhältnis der Probenreaktivität mindestens 50%
betragen.
2. Bei Proben mit einer prozentualen Inhibition < 50% und einem Reaktivitätsverhältnis > 0,8 sollten
die mit RB verdünnte Proben (1/100; 1/10.000; 1/1.000.000; etc., 100-fache Verdünnungen) erneut
getestet werden, bis ein Probenreaktivitätsverhältnis < 0,8 erhalten wird (die Probe wurde in
diesem Fall nicht bestätigt) oder bis eine Bestätigung der Neutralisation der getesteten Probe
erreicht wurde (d. h. prozentuale Inhibition ≥ 50%).
4) Interpretation der Ergebnisse
Eine Probe wird als positiv auf HBs Ag bestätigt, wenn das Probenreaktivitätsverhältnis mindestens
0,8 oder höher und die prozentuale Inhibition mindestens 50% oder höher beträgt.
Probenreaktivitäts-Verhältnis Prozentuale Inhibition Auswertung
≥ 0.8 ≥ 50% Bestätigt
≥ 0.8 < 50% Nicht bestätigt, muss verdünnt werden
< 0.8 Unabhängig vom Ergebnis Nicht reaktiv*
* Nicht bestätigt bei verdünnten Proben
31

Beispiele:
Test OD-Werte OD-Werte Probenreaktivitäts Prozentuale Auswertung
mit RA mit RB -Verhältnis Inhibition
Positivkontrolle 0.095 2.025 32.66 95% Bestätigt
(R4)
Negativkontrolle 0.011 0.013 0.21 15% Nicht reaktiv
(R3)
Probe 1 0.009 0.027 0.40 68% Nicht reaktiv
0.007 0.023
Probe 2 2.585 3.906 63.00 34% Nicht bestätigt,
2.570 3.880 muss verdünnt
werden
Probe 2 0.049 2.079 33.36 98% Bestätigt
Verd. 1/100 0.045 2.058
Probe 3 0.132 0.151 2.52 13% Nicht bestätigt,
0.140 0.161 muss
verdünnt werden
Probe 3 0.032 0.036 0.55 12% Nicht bestätigt
Verd. 1/100 0.028 0.032
11 - LEISTUNGSMERKMALE DES TESTS
Die Leistung des MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY-KIT in Verbindung mit dem
MONOLISA ® HBs Ag ULTRA wurden durch Testung der Proben von Klinikpatienten mit akuter oder
chronischer Hepatitis-B-Infektion oder einer Erkrankung, die nicht mit einer Hepatitis-B-Infektion
zusammenhängt, sowie von handelsüblichen Proben und Serokonversionsreihen bestimmt.
Ferner wurde die Empfindlichkeitsgrenze mit dem französischen EFS HB und den WHO-Standards
(NIBSC, Nr. 00/588) getestet.
Analytische Empfindlichkeit
Alle verdünnten Probenkonzentrationen von 0,06-2,2 ng/ml aus der EFS HB-Empfindlichkeitsreihe
und alle positiven Ergebnisse der WHO NIBSC-Reihe wurden mit dem MONOLISA ® HBs Ag ULTRA
CONFIRMATORY-KIT bestätigt.
Eine HBs Ag-Konzentration über 10 mg/ml wurde nach Verdünnung der betreffenden Probe
neutralisiert.
Empfindlichkeit
Die Studien zur Empfindlichkeit wurden an 337 Positivproben aus der Nachbeobachtung chronischer
und akuter HBV-Infektionen durchgeführt. Alle diese Positivproben wurden mit dem MONOLISA ®
HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY-KIT bestätigt.
Außerdem wurden insgesamt 15 handelsübliche, gut dokumentierte HBV-Serokonversionsreihen (45
Proben) untersucht. Alle Positivproben wurden neutralisiert.
Spezifität und Kreuzreaktivität
Eine interne Reihe von 16, mit dem MONOLISA ® HBs Ag ULTRA ermittelten falsch positiven Proben
wurde mit dem MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY-KIT getestet und nicht bestätigt.
Die Analysen von 102 Patienten mit verschiedenen Erkrankungen oder Zuständen, die nicht mit der
Hepatitis B zusammenhängen (schwangere Frauen, Rheumafaktor, antinukleäre Antikörper, Anti-
Maus-Ig oder andere virale oder bakterielle Infektionen), wurden mit dem MONOLISA ® Ag HBs
ULTRA CONFIRMATORY-KIT getestet und als negativ bestätigt.
Ferner wurden 37 Positivproben für HBs Ag und verschiedene Marker (Rheumafaktor, antinukleäre
Antikörper, Anti-Maus-Ig oder virale Infektionen) mit dem MONOLISA ® HBs Ag ULTRA
CONFIRMATORY-KIT getestet und durchwegs als HBs Ag-positiv bestätigt.
23 HBs Ag-positive Proben der Reihe PCA201 BBI mit Co-Infektionen (HBV, HIV, HCV oder HTLV)
wurden vom MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY-KIT in unverdünnter und verdünnter
Form bestätigt.
32

Reproduzierbarkeit des Tests
Die Reproduzierbarkeit des MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY-KIT wurde durch Analyse
von 4 Proben bestimmt : 1 Negativprobe (Probe 1), 2 HBs Ag-positive Proben (Probe 2 und 3) sowie
1 für HBs Ag hochpositive Probe (Probe 4).
Die Intra-Assay-Reproduzierbarkeit wurde durch Testung dieser 4 Proben dreißigmal in ein und
demselben Testdurchlauf bewertet.
Die Inter-Assay-Reproduzierbarkeit wurde durch Doppeltestung dieser 4 Proben an 20 Tagen in 2
unabhängigen Testdurchläufen pro Tag bewertet.
Die Ergebnisse sind aus den folgenden Tabellen zu entnehmen:
Tabelle 1 : Intra-Assay-Reproduzierbarkeit
n = 30 Probe 1 Probe 2 Probe3 Probe 4
(Quotient 0,37) (Quotient =1,32) (Quotient =3,39) (Quotient =18,39)
Prozentuale 4 85,37 94,89 98,38
Inhibition (Mittel)
Standard- 12,6 1,59 0,66 0,21
abweichung (SD)
CV (%) NA 1,86% 0,69% 0,22%
Tabelle 2 : Inter-Assay-Reproduzierbarkeit
n = 40 Probe 1 Probe 2 Probe3 Probe 4
(Quotient 0,37) (Quotient =1,32) (Quotient =3,39) (Quotient =18,39)
Prozentuale 3,74 81,46 92,76 98,08
Inhibition (Mittel)
Standard- 15,84 7,07 3,43 0,75
abweichung (SD)
CV (%) NA 8,68% 3,70% 0,76%
Die in diesen Reproduzierbarkeitsstudien erhaltenen Ergebnisse stimmten mit den erwarteten
überein.
12 - GRENZEN DES TESTS
Das MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY-KIT ist ausschließlich für die Bestätigung des
Vorhandenseins des Hepatitis-B-Oberflächenantigens (HBs Ag) in Humanserum oder -plasma
bestimmt.
Proben, die im MONOLISA ® HBs Ag ULTRA Test wiederholt schwach reaktiv getestet wurden
(Verhältnis unter 2) und die als unverdünnte Probe im MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY-
KIT nicht reaktiv sind (Reaktivitätsverhältnis unter 0,8) sind mit Vorsicht zu interpretieren. Diese
Patienten sollten mit einer anderen Methode erneut getestet bzw. es sollte zu einem späteren
Zeitpunkt eine weitere Probe getestet werden.
13 - BIBLIOGRAPHIE
Siehe Packungsbeilage in französischer Sprache.
17 - LITERATUR
Siehe französische Version.
33

MONOLISA ® HBs Ag ULTRA 72408
CONFIRMATORY
25 tests
TEST PER LA CONFERMA DELLA PRESENZA DELL’ANTIGENE
DI SUPERFICIE DEL VIRUS DELL'EPATITE B NEL SIERO
O NEL PLASMA UMANO
IVD
Controllo di qualità del produttore
Tutti i prodotti fabbricati e commercializzati dalla società Bio-Rad sono sottoposti ad
un sistema di assicurazione di qualità dal ricevimento delle materie prime fino alla
commercializzazione dei prodotti finiti.
Ciascun lotto di prodotto finito è soggetto a un controllo di qualità e viene messo in
commercio soltanto se risulta conforme ai criteri di approvazione.
La documentazione relativa alla produzione e al controllo di ciascun lotto è conservata negli
archivi della nostra società.
35

SOMMARIO
1 - USO PREVISTO
2 - PRINCIPIO DEL TEST MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY
3 - COMPOSIZIONE DEL KIT
4 - PRECAUZIONI
5 - ISTRUZIONI DI SICUREZZA E IGIENE
6 - MATERIALE NECESSARIO NON FORNITO
7 - CONSERVAZIONE - VALIDITÀ
8 - CAMPIONI
9 - PROCEDURA
10 - CALCOLO E INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI
11 - EFFICACIA
12 - LIMITI DEL TEST
13 - RIFERIMENTI BIBLIOGRAFICI
36

1 - USO PREVISTO
Il test MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY viene utilizzato per confermare la presenza
dell'antigene di superficie del virus dell'epatite B (Ag HBs) nei campioni di siero o plasma umani
risultati reattivi al test di screening MONOLISA ® HBs Ag ULTRA codici 72346/72348.
2 - PRINCIPIO DEL TEST MONOLISA ® HBS AG ULTRA CONFIRMATORY
Il test MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY utilizza il principio della neutralizzazione
mediante un eccesso di anticorpi anti-HBs (diluente anti-HBs; reagente di neutralizzazione) dell'Ag
HBs presente nei campioni di siero o di plasma.
Si consiglia di analizzare i campioni risultati positivi ripetibili al test di screening MONOLISA ® HBs Ag
ULTRA con i reagenti forniti insieme al kit MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY. In caso di
campione positivo per l'antigene HBs, gli anticorpi anti-HBs del reagente di neutralizzazione saturano
i determinanti antigenici HBs del campione affinché non possano più legarsi all'anticorpo
immobilizzato su fase solida. Durante il confronto con lo stesso campione in cui il reagente di
neutralizzazione è stato sostituito da un controllo negativo (diluente) non contenente anticorpi anti-
HBs, si osserverà una riduzione della densità ottica. Al fine di prendere in considerazione le variazioni
di concentrazione dell'Ag HBs del campione potrà essere necessario controllarne più diluizioni.
Il test comprende le seguenti fasi reattive :
1) Incubazione dei controlli o dei campioni positivi per l'Ag HBs con il reagente di neutralizzazione e
il coniugato in presenza di anticorpi anti-HBs immobilizzati su fase solida.
Per ogni campione vengono realizzati pozzetti di controllo sostituendo il reagente di
neutralizzazione con un controllo negativo (diluente).
Il resto della procedura è identico al protocollo del kit MONOLISA ® HBs Ag ULTRA :
2) Lavaggio, quindi rivelazione dell'attività enzimatica legata alla fase solida mediante l'aggiunta del
substrato.
3) Arresto della rivelazione, lettura delle densità ottiche a 450/620-700 nm e interpretazione dei
risultati.
3 - COMPOSIZIONE DEL KIT
ETICHETTATURA NATURA DEI REAGENTI PRESENTAZIONE
RA Reagente di neutralizzazione 1 flacone
Tampone Tris NaCl pH 8,0 contenente siero
di pecora e siero umano negativo per antigene HBs, 0,7 ml
anticorpi anti-HCV e anti-HIV1/2,
addizionato con anticorpi anti-HBs.
Reagenti pronti all’uso
Conservante : ProClin 300 (0,25%)
RB Controllo negativo (diluente) 1 flacone
Tampone Tris NaCl pH 8,0 contenente siero
di pecora e siero umano negativo per antigene HBs, 0,7 ml
anticorpi anti-HCV e anti-HIV1/2.
Reagenti pronti all’uso
Conservante : ProClin 300 (0,25%)
RC Diluente campione 1 flacone
Acqua fisiologica allo 0,85%.
27 ml
Reagenti pronti all’uso
Conservante : ProClin 300 (0,1%)
37

4 - PRECAUZIONI
L'affidabilità dei risultati dipende dalla corretta implementazione delle buone prassi di laboratorio
riportate di seguito:
• Non utilizzare reagenti scaduti.
• Non mischiare, né combinare reagenti del kit MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY
provenienti da lotti diversi in uno stesso ciclo.
• Prima dell'uso, attendere 30 minuti per consentire al reagente di raggiungere la temperatura
ambiente (18-30°C).
• Utilizzare preferibilmente materiale monouso oppure elementi in vetro perfettamente lavati e
risciacquati con acqua distillata.
• Consultare anche il foglietto delle istruzioni contenuto nel kit MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
5 - ISTRUZIONI DI SICUREZZA E IGIENE
• Tutti i reagenti forniti nel kit sono destinati all'uso esclusivo nella diagnostica in vitro.
• Il materiale di origine umana utilizzato nella preparazione dei reagenti è stato analizzato e
classificato negativo per l'antigene HBs e per gli anticorpi anti-HIV1, anti-HIV 2 e anti-HCV. Dato
che nessun metodo può garantire con assoluta certezza l'assenza dei virus HIV, HBV, HCV o di altri
agenti infettivi, manipolare detti reagenti e i campioni dei pazienti come potenzialmente infetti
seguendo le apposite precauzioni d’uso.
• Per le istruzioni di sicurezza e igiene comuni, consultare il foglietto delle istruzioni contenuto nel kit
MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
• Alcuni reagenti contengono ProClin 300 (0,04%, 0,1% e/o 0,5%)
Xi Irritante
R43 : potrebbe provocare sensibilizzazione per contatto cutaneo
S28-37 : in caso di contatto con la pelle, lavarsi immediatamente e abbondantemente
con acqua e sapone. Indossare guanti adatti.
6 - MATERIALE NECESSARIO NON FORNITO
Consultare il foglietto delle istruzioni contenuto nel kit MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
7 - CONSERVAZIONE - VALIDITÀ
• Il kit deve essere conservato a +2-8°C.
• Se viene conservato a +2-8°C prima dell'apertura, ogni componente può essere utilizzato fino alla
data di scadenza indicata sull'etichetta applicata al kit.
8 - CAMPIONI
• Consultare il foglietto delle istruzioni contenuto nel kit MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
• Se analizzati senza previa diluizione, alcuni campioni con concentrazioni particolarmente elevate
di Ag HBs potrebbero non essere neutralizzati dal reagente di neutralizzazione.
Consultare il capitolo 10 "CALCOLO E INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI", sottocapitolo:
"Condizioni di convalida del test".
N.B.: i campioni che presentano una concentrazione particolarmente elevata di Ag HBs e una
densità ottica superiore a 3.000 con il test MONOLISA ® HBs Ag Ultra, possono essere analizzati
direttamente diluiti in rapporto 1/100 nel diluente campione.
9 - PROCEDURA
Procedere come segue utilizzando i reagenti del kit MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
1. Preparare la soluzione di lavaggio R2 e la soluzione del coniugato ricostituito (R6+R7): fare
riferimento al capitolo 8 "PREPARAZIONE DEI REAGENTI", sottocapitolo "Reagenti da ricostituire"
del foglietto illustrativo contenuto nel kit MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
2. Estrarre il vassoio e il numero di strip necessarie dall'involucro protettivo (Reagente R1).
3. Distribuire nei pozzetti nel seguente ordine:
• Pozzetti A1, A2 : 100 µl di controllo negativo R3 del kit MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
• Pozzetti B1, B2 : 100 µl di controllo positivo R4 del kit MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
• Pozzetti C1, C2, D1, D2 : 100 µl del primo campione da confermare.
38

• Pozzetti E1, E2, F1, F2 : 100 µl del secondo campione da confermare
• Pozzetti G1, G2, H1, H2 : 100 µl del terzo campione da confermare, ecc.
In funzione del sistema utilizzato, è possibile modificare la posizione dei oppure l’ordine di
distribuzione dei controlli.
4. Aggiungere 20 µl di controllo negativo (diluente) RB nei pozzetti A1, B1, C1, D1, E1, F1, G1, H1 e
20 µl di reagente di neutralizzazione RA nei pozzetti A2, B2, C2, D2, E2, F2, G2, H2 ecc...
5. Distribuire 50 µl della soluzione di coniugato ricostituito (R6 + R7) in tutti i pozzetti. Omogeneizzare
con almeno 3 aspirazioni/dispensazioni.
6. Procedere con la fase 7 e successive del capitolo 11 "PROCEDURA" del foglietto illustrativo fornito
con il kit MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
10 - CALCOLO E INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI
1) Rapporto di reattività dei controlli e dei campioni
1. Per i controlli positivo R4 e negativo R3 del kit MONOLISA ® HBs Ag ULTRA, calcolare :
DO controlli con RB
il rapporto di reattività = ------------------------------------------------------
[(DO R3 con RB + DO R3 con RA)/2] + 0,050
2. Per ogni campione, calcolare :
Media DO campione con RB
il rapporto di reattività = ------------------------------------------------------
[(DO R3 con RB + DO R3 con RA)/2] + 0,050
2) Percentuale di inibizione
1. Calcolare le Percentuali di inibizione delle densità ottiche registrate per i controlli positivo R4 e
negativo R3 trattati con il reagente di neutralizzazione RA e il controllo negativo (diluente) RB.
(DO controlli con RB) - (DO controlli con RA)
Percentuale di inibizione = ----------------------------------------------------- X 100
(DO controlli con RB)
2. Calcolare le Percentuali di inibizione delle densità ottiche registrate per i campioni trattati con il
reagente di neutralizzazione RA e il controllo negativo (diluente) RB.
(media DO campioni con RB) - (media DO campioni con RA)
Percentuale di inibizione = -------------------------------------------------------------------------- X 100
(media DO campioni con RB)
3) Condizioni di convalida del test
1. I valori del controllo negativo (R3) addizionato al controllo negativo (diluente) (RB) o al reagente di
neutralizzazione (RA) devono essere inferiori o uguali a 0,080 unità di densità ottica.
Per questo stesso controllo negativo (R3), il rapporto di reattività deve essere inferiore a 0,8
Per il controllo positivo (R4) addizionato al controllo negativo (diluente) (RB), la densità ottica
registrata deve essere superiore a 0,800.
Per questo stesso controllo positivo (R4), la Percentuale di inibizione deve essere superiore o
uguale al 50%.
2. Per i campioni con una Percentuale di inibizione < 50% e con un rapporto di reattività ≥ 0,8, è
necessario rianalizzare questo campione diluito nel diluente campione (1/100, 1/10.000,
1/1.000.000, fattore di diluizione 100) al fine di raggiungere un rapporto di reattività < 0,8
(campione non confermato in questo caso) oppure ottenere la conferma della neutralizzazione del
campione analizzato (Percentuale di inibizione > 50%).
4) Interpretazione dei risultati
Un campione viene confermato positivo per l'Ag HBs se il rapporto di reattività è superiore o uguale
a 0,8 e la percentuale di inibizione è superiore o uguale al 50%.
Rapporto di reattività Percentuale di inibizione Interpretazione
dei campioni
≥ 0,8 ≥ 50% Confermato
≥ 0,8 < 50% Non confermato da diluire
< 0,8 Indipendentemente dal risultato Non reattivo*
* Non confermato per i campioni testati in diluizione
39

Esempi:
Test Valori di DO Valori di DO Rapporto Percentuale Interpretazione
con RA con RB di reattività di inibizione
dei campioni
Controllo positivo 0,095 2,025 32,66 95% Confermato
(R4)
Controllo negativo 0,011 0,013 0,21 15% Non reattivo
(R3)
Campione 1 0,009 0,027 0,40 68% Non reattivo
0,007 0,023
Campione 2 2,585 3,906 63,00 34% Non confermato
2,570 3,880 da diluire
Campione 2 0,049 2,079 33,36 98% Confermato
Dil.1/100 0,045 2,058
Campione 3 0,132 0,151 2,52 13% Non confermato
da diluire
0,140 0,161
Campione 3 0,032 0,036 0,55 12% Non confermato
Dil. 1/100 0,028 0,032
11 - EFFICACIA
L'efficacia del test MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY associato al test MONOLISA ® HBs
Ag ULTRA è stata determinata utilizzando campioni di pazienti affetti da epatite B acuta e cronica o
da infezioni non correlate all'epatite B, nonché campioni provenienti da panel commerciali e da
sieroconversioni commerciali.
Il limite di sensibilità è stato studiato basandosi sul panel HB EFS francese e sul secondo campione
di riferimento internazionale OMS 2004 rif. (NIBSC 00/588)
Sensibilità analitica
Tutte le concentrazioni del panel HB EFS da 0,06 ng/ml a 2,2 ng /ml, nonché le concentrazioni dello
standard OMS da 0,031 UI /ml a 1 UI /ml risultate positive al test Monolisa HBs Ag Ultra sono state
confermate dal test MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY.
Una concentrazione superiore a 10 mg / ml d'Ag HBs è stata neutralizzata previa diluizione di questo
campione.
Sensibilità
Lo studio di Sensibilità è stato condotto su 337 campioni positivi provenienti da monitoraggi di
epatite B cronica o acuta di pazienti infetti.
Tutti i campioni positivi sono stati confermati mediante il test MONOLISA ® HBs Ag ULTRA
CONFIRMATORY.
Sono state studiate 15 sieroconversioni HBV commerciali ben documentate (45 campioni): tutti i
campioni positivi sono stati neutralizzati.
Specificità e reazioni crociate
Un panel interno costituito da 16 campioni risultati falsi positivi al test Monolisa HBs Ag ULTRA sono
stati analizzati e non confermati dal test MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY.
102 campioni provenienti da pazienti con diverse patologie o stati immunitari non correlati all'epatite
B (donne incinte, fattori reumatoidi, anticorpi anti-nucleari, anticorpi anti-topo o altre infezioni virali o
batteriche) sono stati analizzati con il test MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY e
confermati negativi.
Inoltre, 37 campioni positivi sia per l'Ag HBs sia per altri marcatori (fattori reumatoidi, anticorpi antinucleari,
anticorpi anti-topo o altre infezioni virali e batteriche) sono stati analizzati e confermati con
il test MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY.
Infine, 23 campioni provenienti dal panel di coinfezione BBI PCA 201 (coinfezioni HBV / HIV / HCV /
HTLV) positivi al test Monolisa HBS Ag Ultra sono stati confermati puri o previa diluizione.
40

Studi di riproducibilità
La riproducibilità del test MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY è stata determinata
sulla base di 4 campioni: 1 campione negativo (campione 1), 2 campioni positivi (campioni 2 e 3) e
1 campione positivo forte (campione 4).
Al fine di valutare la riproducibilità intra-saggio tutti e 4 i campioni sono stati analizzati 30 volte
durante lo stesso ciclo.
Al fine di valutare la riproducibilità inter-saggio tutti e 4 i campioni sono stati analizzati in duplicati in
2 diversi cicli al giorno e per un periodo di 20 giorni.
La tabella riportata di seguito fornisce la media dei rapporti, la deviazione standard e il coefficiente
di variazione (CV) :
Tabella 1 : Riproducibilità intra-saggio
n = 30 campione 1 campione 2 campione 3 campione 4
(rapporto 0,37) (rapporto = 1,32) (rapporto = 3,39) (rapporto = 18,39)
Media della % 4 85,37 94,89 98,38
di inibizione
Dev. Stan. (DS) 12,6 1,59 0,66 0,21
CV (%) NA 1,86% 0,69% 0,22%
Tabella 2 : Riproducibilità inter-saggio
n = 40 campione 1 campione 2 campione 3 campione 4
(rapporto 0,37) (rapporto = 1,32) (rapporto = 3,39) (rapporto = 18,39)
Media della % 3,74 81,46 92,76 98,08
di inibizione
Dev. Stan. (DS) 15,84 7,07 3,43 0,75
CV (%) NA 8,68% 3,70% 0,76%
I risultati ottenuti durante questi studi sono conformi a quelli attesi.
12 - LIMITI DEL TEST
Il test MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY è strettamente limitato alla conferma della
presenza dell’antigene di superficie del virus dell'epatite B (Ag HBs) nel siero e nel plasma umano.
I campioni reattivi ripetibili debolmente positivi (rapporto inferiore a 2) con il test MONOLISA ® HBs Ag
ULTRA e risultati non reattivi nel campione non diluito al test MONOLISA ® HBs Ag ULTRA
CONFIRMATORY (rapporto di reattività inferiore a 0,8) devono essere interpretati con precauzione. Si
consiglia di rianalizzare questo paziente con un altro metodo o con un secondo campione prelevato
successivamente.
13 - RIFERIMENTI BIBLIOGRAFICI
Vedere la versione francese.
41

MONOLISA ® HBs Ag ULTRA 72408
CONFIRMATORY
25 tests
TESTE PARA CONFIRMAÇÃO DA PRESENÇA DO ANTIGÉNIO
DE SUPERFÍCIE DO VÍRUS DA HEPATITE B NO SORO OU PLASMA
HUMANOS
IVD
Controlo da qualidade de fabrico
Todos os produtos fabricados e comercializados pela empresa Bio-Rad são submetidos a
um sistema de garantia da qualidade, desde a recepção das matérias primas até à
comercialização do produto final.
Cada lote de produto final é objecto de um controlo de qualidade, sendo comercializado
apenas quando em total conformidade com os critérios de aceitação.
A documentação relativa à produção e ao controlo de cada lote encontra-se arquivada na
nossa empresa.
43

ÍNDICE
1 - UTILIZAÇÃO PRETENDIDA
2 - PRINCÍPIO DO TESTE MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY
3 - COMPOSIÇÃO DO CONJUNTO
4 - PRECAUÇÕES
5 - INSTRUÇÕES DE HIGIENE E SEGURANÇA
6 - MATERIAL NECESSÁRIO MAS NÃO FORNECIDO
7 - CONSERVAÇÃO – PRAZO DE VALIDADE
8 - AMOSTRAS
9 - MODO DE UTILIZAÇÃO
10 - CALCULO E INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS
11 - CARACTERÍSTICAS DO DESEMPENHO
12 - LIMITAÇÕES DO TESTE
13 - BIBLIOGRAFIA
44

1 - UTILIZAÇÃO PRETENDIDA
O teste MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY é utilizado para confirmar a presença do
antigénio de superfície do vírus da hepatite B (Ag HBs) nas amostras de soro ou plasma humanos,
consideradas reactivas para o teste de rastreio MONOLISA ® HBs Ag ULTRA, códigos 72346/72348.
2 - PRINCÍPIO DO TESTE MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY
O teste MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY utiliza o princípio da neutralização por
excesso de anticorpos anti-HB (diluente anti-HB; reagente de neutralização) do antigénio da hepatite
B presente nas amostras de soro ou plasma.
Recomenda-se a análise das amostras consideradas positivas e repetíveis no teste de rastreio
MONOLISA ® HBs Ag ULTRA com os reagentes do conjunto MONOLISA ® HBs Ag ULTRA
CONFIRMATORY. No caso de uma amostra positiva para o antigénio HB, os anticorpos anti-HB do
reagente de neutralização saturam os determinantes antigénicos HBs presentes na amostra, que
não poderão mais ligar-se ao anticorpo imobilizado na fase sólida. É observada uma redução da
densidade óptica quando da comparação com a mesma amostra cujo reagente de neutralização é
substituído por um diluente de controlo negativo que não contém anticorpos anti-HBs.
Eventualmente, serão controladas várias diluições da amostra para ter em consideração as
variações de concentração em Ag HBs da mesma.
O ensaio inclui as seguintes etapas de reacção :
1) Incubação dos controlos ou das amostras positivas para Ag HBs com o reagente de neutralização
e o conjugado, na presença de anticorpos anti-HB imobilizados na fase sólida.
Para cada amostra, são preparados recipientes de amostras de referência substituindo o reagente
de neutralização por um diluente de controlo negativo.
O resto do procedimento é idêntico ao protocolo do conjunto MONOLISA ® HBs Ag ULTRA :
2) Lavagem seguida de revelação da actividade enzimática ligada à fase sólida por adição do
substrato.
3) Paragem da revelação, seguida de leitura das densidades ópticas a 450/620-700 nm e
interpretação dos resultados.
3 - COMPOSIÇÃO DO CONJUNTO
ROTULAGEM COMPOSIÇÃO DOS REAGENTES APRESENTAÇÃO
RA Reagente de neutralização 1 frasco
Tampão Tris NaCl pH 8,0 com soro de carneiro
e soro humano negativo em antigénios HB,
0,7 ml
em anticorpos anti-VHC e anti-VIH1/2,
com adição de anticorpos anti-HBs.
Reagente pronto a usar
Conservante: ProClin 300 (0,25%)
RB Diluente de controlo negativo 1 frasco
Tampão Tris NaCl pH 8,0 com soro de carneiro
e soro humano negativo em antigénios HBs,
0,7 ml
em anticorpos anti-VHC e anti-VIH1/2.
Reagente pronto a usar
Conservante: ProClin 300 (0,25%)
RC Diluente de amostra 1 frasco
Água fisiológica a 0,85%
27 ml
Reagente pronto a usar
Conservante : ProClin 300 (0,1%)
45

4 - PRECAUÇÕES
A qualidade dos resultados depende do cumprimento das boas práticas de laboratório seguintes:
• Não utilizar reagentes cujo prazo de validade tenha expirado.
• Não misturar ou associar reagentes provenientes de outros conjuntos MONOLISA ® HBs Ag ULTRA
CONFIRMATORY com números de lote diferentes, durante a mesma manipulação.
• Antes da utilização, aguarde 30 minutos para que os reagentes equilibrem à temperatura ambiente
(18-30°C).
• Utilizar objectos de vidro perfeitamente lavados e enxaguados com água destilada ou, de
preferência, material descartável.
• Consultar igualmente o folheto informativo do conjunto MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
5 - INSTRUÇÕES DE HIGIENE E SEGURANÇA
• Todos os reagentes do conjunto destinam-se a utilização de diagnóstico in vitro.
• O material de origem humana utilizado para a preparação dos reagentes RA e RB foi testado e
considerado negativo em antigénios HBs, em anticorpos anti-VIH1, anti-VIH 2 e anti-VHC. Dado
que nenhum método pode garantir de forma absoluta a ausência dos vírus VIH, VHB, VHC ou de
outros agentes infecciosos, deve considerar estes reagentes, bem como as amostras dos
pacientes, como potencialmente infecciosos e manuseá-los com as precauções de utilização
recomendadas para o efeito.
• Para obter as instruções de higiene e segurança, consulte o folheto informativo do conjunto
MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
Alguns reagentes contêm ProClin 300 (0,04%, 0,1% e/ou 0,5%)
Xi Irritante
R43 : pode causar sensibilização em contacto com a pele
S28-37 : Após contacto com a pele, lavar imediata e abundantemente com água e
sabão. Utilizar luvas adequadas.
6 - MATERIAL NECESSÁRIO MAS NÃO FORNECIDO
Consultar o folheto informativo do conjunto MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
7 - CONSERVAÇÃO – PRAZO DE VALIDADE
• Conservar o conjunto a + 2-8°C antes da sua utilização.
• Após abertura dos frascos, todos os reagentes são utilizáveis até à data de expiração indicada na
embalagem, quando conservados a 2-8°C.
8 - AMOSTRAS
• Consultar o folheto informativo do conjunto MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
• Algumas amostras com uma concentração muito elevada em Ag HBs podem não ser
neutralizadas pelo reagente de neutralização se forem testadas não diluídas.
Consultar o capítulo 10 «CÁLCULO E INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS», sub-capítulo :
«Condições de validação do teste».
OBSERVAÇÃO : as amostras que apresentem uma concentração muito elevada em Ag HBs e
densidade óptica superior a 3.000 com o teste MONOLISA ® HBs Ag Ultra, podem ser testadas
directamente diluídas na relação de 1/100 com o diluente de amostras.
9 - MODO DE UTILIZAÇÃO
Proceder da seguinte forma ao utilizar os reagentes do conjunto MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
1. Preparar a solução de lavagem R2 e a solução de conjugado reconstituído (R6+R7) : consultar o
capítulo 8 «PREPARAÇÃO DOS REAGENTES», sub-capítulo «reagentes para reconstituição» do
folheto informativo do conjunto MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
2. Retirar da embalagem de protecção a placa de suporte e o número de tiras necessárias (Reagente
R1).
3. Distribuir nos recipientes pela seguinte ordem:
• Recipientes A1, A2: 100 µl de controlo negativo R3 do conjunto MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
• Recipientes B1, B2: 100 µl de controlo positivo R4 do conjunto MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
46

• Recipientes C1, C2, D1, D2: 100 µl da primeira amostra a confirmar.
• Recipientes E1, E2, F1, F2: 100 µl da segunda amostra a confirmar.
• Recipientes G1, G2, H1, H2: 100 µl da terceira amostra a confirmar, etc...
Em função do sistema utilizado é possível modificar a posição ou a ordem de distribuição dos
controlos.
4. Adicionar 20 µl de diluente de controlo negativo RB nos recipientes A1, B1, C1, D1, E1, F1, G1,
H1 e 20 µl de reagente de neutralização RA nos recipientes A2, B2, C2, D2, E2, F2, G2, H2 etc...
5. Distribuir 50 µl da solução de conjugado reconstituído (R6 + R7) em todos os recipientes.
Homogeneizar através de, pelo menos, 3 aspirações/ descargas.
6. Prosseguir com a etapa 7 e as etapas seguintes do capítulo 11 «MODO DE UTILIZAÇÃO» do
folheto informativo do conjunto MONOLISA ® HBs Ag ULTRA.
10 - CALCULO E INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS
1) Rácio de reactividade dos controlos e das amostras
1. Para os controlos positivo R4 e negativo R3 do conjunto MONOLISA ® HBs Ag ULTRA, calcular:
DO dos controlos com RB
Rácio de reactividade = -------------------------------------------------------
[(DO R3 com RB + DO R3 com RA)/2] + 0,050
2. Para cada amostra, calcular :
DO média da amostra com RB
Rácio de reactividade = -------------------------------------------------------
[(DO R3 com RB + DO R3 com RA)/2] + 0,050
2) Percentagem de inibição
1. Calcular as percentagens de inibição das densidades ópticas registadas para os controlos positivo
R4 e negativo R3, tratados com o reagente de neutralização RA e o diluente de controlo negativo
RB.
(DO controlos com RB) - (DO controlos com RA)
Percentagem de inibição = ---------------------------------------------------------- X 100
(DO dos controlos com RB)
2. Calcular as percentagens de inibição das densidades ópticas registadas para as amostras
tratadas com o reagente de neutralização RA e o diluente de controlo negativo RB.
(DO média das amostras com RB) - (DO média das amostras com RA)
Percentagem de inibição = ------------------------------------------------------------------------------ X 100
(DO média das amostras com RB)
3) Condições de validação do teste
1. Os valores do controlo negativo (R3) a que se adicionou diluente de controlo negativo (RB) ou
reagente de neutralização (RA) devem ser inferiores ou iguais a 0,080 unidades de densidade
óptica.
Para este mesmo controlo negativo (R3), o rácio de reactividade deve ser inferior a 0,8
Para o controlo positivo (R4) a que se adicionou diluente de controlo negativo (RB), a densidade
óptica registada deve ser superior a 0,800.
Para este mesmo controlo positivo (R4), a percentagem de inibição deve ser superior ou igual a
50%.
2. Em relação às amostras com uma percentagem de inibição < 50% e com um rácio de reactividade
≥ 0,8, é necessário repetir a análise das mesmas, diluindo-as com diluente de amostras (1/100,
1/10 000, 1/1 000 000, diluição de factor 100) para obter um rácio de reactividade < 0,8 (amostra
não confirmada neste caso) ou a confirmação da neutralização da amostra analisada
(Percentagem de inibição > 50%).
47

4) Interpretação dos resultados
Uma amostra será confirmada positiva para o Ag HBs se o rácio de reactividade for superior ou igual
a 0,8 e a percentagem de inibição for superior ou igual a 50%.
Rácio de reactividade das amostras Percentagem de inibição Interpretação
≥ 0,8 ≥ 50% Confirmado
≥ 0,8 < 50% Não confirmado, para diluição
< 0,8 Qualquer resultado Não reagente*
* Não confirmado para as amostras testadas com diluição
Exemplos :
Teste Valores de Valores de Rácio de Percentagem Interpretação
DO com RA DO com RB reactividade de inibição
das amostras
Controlo positivo 0,095 2,025 32,66 95% Confirmado
(R4)
Controlo negativo 0,011 0,013 0,21 15% Não reagente
(R3)
Amostra 1 0,009 0,027 0,40 68% Não reagente
0,007 0,023
Amostra 2 2,585 3,906 63,00 34% Não confirmado,
2,570 3,880 para diluição
Amostra 2 0,049 2,079 33,36 98% Confirmado
Dil.1/100 0,045 2,058
Amostra 3 0,132 0,151 2,52 13% Não confirmado,
0,140 0,161 para diluição
Amostra 3 0,032 0,036 0,55 12% Não confirmado
Dil. 1/100 0,028 0,032
11 - CARACTERÍSTICAS DO DESEMPENHO
Os desempenhos do teste MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY associado ao teste
MONOLISA ® HBs Ag ULTRA foram determinados com a ajuda de amostras de doentes portadores
de Hepatite B aguda e crónica ou com infecções não relacionadas com Hepatite B, bem como com
amostras provenientes de painéis comerciais e de seroconversões comerciais.
O limite de sensibilidade foi estudado com a ajuda do painel HB EFS francês, bem como do 2º
Padrão Internacional da OMS 2004 refª (NIBSC 00/588)
Sensibilidade analítica
Todas as concentrações do painel HB EFS entre 0,06 ng/ml e 2,2 ng /ml, bem como as
concentrações do Padrão OMS entre 0,031 UI /ml e 1 UI /ml consideradas positivas com o teste
Monolisa HBs Ag Ultra foram confirmadas com a ajuda do teste MONOLISA ® HBs Ag ULTRA
CONFIRMATORY.
Uma concentração superior a 10 mg / ml de Ag HBs foi neutralizada após diluição desta amostra.
Sensibilidade
O estudo da sensibilidade foi realizado em 337 amostras positivas provenientes do
acompanhamento de doentes infectados com Hepatite B crónica ou aguda.
Todas as amostras positivas foram confirmadas com a ajuda do teste MONOLISA ® HBs Ag ULTRA
CONFIRMATORY.
Foram estudadas 15 seroconversões comerciais do VHB bem documentadas (45 amostras) : todas
as amostras positivas foram neutralizadas.
48

Especificidade e reacções cruzadas
Um padrão interno de 16 amostras consideradas amostras falsas positivas com o teste Monolisa
HBs Ag ULTRA foi testado com o teste MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY, não tendo
sido confirmado o resultado positivo.
102 amostras provenientes de doentes com diferentes patologias ou estatuto imunitário sem relação
com a Hepatite B (grávidas, factores reumatóides, anticorpos anti-nucleares, anticorpos anti-rato ou
outras infecções virais ou bacterianas) foram analisadas com o teste MONOLISA ® HBs Ag ULTRA
CONFIRMATORY e confirmadas como sendo negativas.
Além disso, 37 amostras positivas em simultâneo para Ag HBs e para outros marcadores (factores
reumatóides, anticorpos anti-nucleares, anticorpos anti-rato ou outras infecções virais ou
bacterianas) foram analisadas com o teste MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY e
confirmadas com o mesmo.
Finalmente, 23 amostras provenientes do painel de co-infecção BBI PCA 201 (co-infecções
VHB/VIH/ VHC /VHTL), positivas com o Monolisa HBS Ag Ultra, foram confirmadas no estado puro
ou após diluição.
Estudos de reprodutibilidade
A reprodutibilidade do teste MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY foi determinada com a
ajuda de 4 amostras : 1 amostra negativa (amostra 1), 2 amostras positivas (amostras 2 e 3) e
1 amostra positiva forte (amostra 4).
O estudo intra-ensaio foi realizado analisando 4 amostras, 30 vezes durante o mesmo ensaio;
O estudo inter-ensaio foi realizado analisando 4 amostras em duplicado, à razão de 2 ensaios
diferentes por dia e durante um período de 20 dias.
Os resultados expressos segundo a média, desvio padrão e CV são apresentados nos quadros
seguintes
Quadro 1 : Reprodutibilidade intra - ensaio
n = 30 amostra 1 amostra 2 amostra 3 amostra 4
(rácio = 0,37) (rácio =1,32) (rácio =3,39) (rácio =18,39)
Média da % 4 85,37 94,89 98,38
de inibição
Desvio padrão (DP) 12,6 1,59 0,66 0,21
CV (%) NA 1,86% 0,69% 0,22%
Quadro 2 : Reprodutibilidade inter - ensaio
n = 40 amostra 1 amostra 2 amostra 3 amostra 4
(rácio = 0,37) (rácio =1,32) (rácio =3,39) (rácio =18,39)
Média da % 3,74 81,46 92,76 98,08
de inibição
Desvio padrão (DP) 15,84 7,07 3,43 0,75
CV (%) NA 8,68% 3,70% 0,76%
Os resultados obtidos durante estes estudos estão em conformidade com os resultados previstos.
12 - LIMITAÇÕES DO TESTE
O teste MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY é estritamente limitado à confirmação da
presença do antigénio de superfície do vírus da hepatite B (Ag HBs) no soro e plasma humanos.
As amostras reactivas repetíveis, com resultados positivos fracos (rácio inferior a 2) com o teste
MONOLISA ® HBs Ag ULTRA e consideradas não reactivas (amostra não diluída) quando analisadas
com o teste MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY (rácio de reactividade inferior a 0,8),
devem ser interpretadas com precaução. Recomenda-se a realização de um novo teste a este
paciente, utilizando um método diferente ou uma segunda amostra colhida posteriormente.
13 - BIBLIOGRAFIA
Ver a versão francesa.
49

MONOLISA ® HBs Ag ULTRA 72408
CONFIRMATORY
25 tester
TEST FÖR FASTSTÄLLANDE AV HBS AG I MÄNSKLIGT SERUM
ELLER PLASMA
IVD
Tillverkarens kvalitetskontroll
Alla produkter som tillverkas och säljs av Bio-Rad genomgår fullständiga kvalitetskontroller
från mottagande av råmaterial till slutlig kommersialisering av produkten.
Varje enhet genomgår en kvalitetskontroll och släpps bara på marknaden när den
överensstämmer med acceptanskraven.
Dokumenteringen i samband med tillverkning och kontroll av varje enhet förvaras på vårt
företag.
51

INNEHÅLLSFÖRTECKNING
1 - AVSEDD ANVÄNDNING
2 - PRINCIP FÖR MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY-TESTET
3 - SATSENS INNEHÅLL
4 - FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER
5 - HÄLSO- OCH SÄKERHETSANVISNINGAR
6 - MATERIAL SOM BEHÖVS MEN INTE MEDFÖLJER
7 - HÅLLBARHETSTID – STABILITET
8 - INSAMLING OCH HANTERING AV PROVER
9 - TESTPROCEDUR
10 - BERÄKNING OCH TOLKNING AV RESULTATEN
11 - UTFÖRANDEN
12 - TESTETS BEGRÄNSNINGAR
13 - LITTERATUR
52

1 - AVSEDD ANVÄNDNING
MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY-testet används för att fastställa förekomst av hepatit
B surface Ag (HBs Ag) i prover av mänskligt serum eller plasma som upptäckts vara reaktivt av
MONOLISA ® HBs Ag ULTRA undersökningstest (koder 72346/72348).
2 - PRINCIP FÖR MONOLISA ® HBS AG ULTRA CONFIRMATORY-TESTET
MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY-testet använder principen för neutralisering genom
överskott av antikroppar till anti-HBs (anti-HBs-utspädning: neutraliseringsreagens) för Ag HBs i
serum- eller plasmaprover.
Det rekommenderas att man testar prover som upptäcks vara positiva av MONOLISA ® HBs Ag
ULTRA-undersökningstest med reagens från MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY-satsen.
Om ett prov är positivt i HBs antigen, kommer anti-HBs-antikroppar i neutraliseringsreagensen att
mätta HBs antigenämnen i provet som inte längre kan binda antikropparna som är fixerade i solid
form. En minskning av den optiska densiteten kommer att ses när man jämför samma prov i vilken
neutraliseringsreagensen byts ut mot ett negativt kontrollutspädningsmedel som inte innehåller anti-
HBs antikroppar. Flera utspädningar av provet kommer att analyseras, efter behov, för att ta med
variationer i HBs Ag-koncentration i beräkningen.
Testet inbegriper följande reaktionella faser:
1) Inkubation av kontroller och prover som är positiva i HBs Ag med neutraliseringsreagens och
konjugering vid förekomst av anti-HBs antikroppar som är fixerade i solid form.
För varje prov tillhandahålls kontroller genom att neutraliseringsreagensen byts ut mot ett negativt
kontrollutspädningsmedel.
Återstoden av proceduren är identisk med protokollet för MONOLISA ® HBs Ag ULTRA-sats :
2) Tvättning och sedan utveckling av enzymaktivitet bunden till solid form genom tillföring av
substrat.
3) Utvecklingsfasen avslutas och sedan läser man av den optiska densiteten på 450/620-700 nm och
tolkar resultaten.
3 - SATSENS INNEHÅLL
ETIKETT REAGENSERNAS EGENSKAPER PRESENTATION
RA Neutraliseringsreagens 1 flaska
Tris NaCl-buffert (pH 8,0) innehåller fårserum och mänskligt
serum negativt för HBs-antigen och för anti-HVC- och
0,7 ml
anti-HIV1/2-antikroppar och kompletterad med
anti-HBs-antikroppar.
Reagens redo att använda
Preservativ : ProClin 300 (0,25 %)
RB Negativt kontrollutspädningsmedel 1 flaska
Tris NaCl-buffert (pH 8,0) innehåller fårserum och
mänskligt serum negativt för HBs-antigen och
0,7 ml
för anti-HVC- och anti-HIV1/2-antikroppar.
Reagens redo för användning
Preservativ : ProClin 300 (0,25 %)
RC Provutspädningsmedel 1 flaska
0,85 % fysiologisk saltlösning. 27 ml
Reagens redo för användning
Preservativ : ProClin 300 (0,1 %)
53

4 - FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER
Kvaliteten på resultaten beror på följande goda laboratorieseder:
• Använd inte utgångna reagenser.
• Blanda eller kombinera inte reagenser från MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY-satser
med olika satsnummer under samma procedur.
• Före användning måste reagenserna stabiliseras i rumstemperatur (18–30°C) i 30 minuter.
• Använd glas som har tvättats och sköljts noggrant i destillerat vatten eller helst engångsmaterial.
• Läs MONOLISA ® HBs Ag ULTRA-satsens förpackningsinlägg.
5 - HÄLSO- OCH SÄKERHETSANVISNINGAR
• Alla reagenser i satsen är avsedda för diagnostisk in vitro-användning.
• Det mänskligt härledda materialet för preparering av reagenserna RA och RB har testats och visat
sig vara negativa för HBs antigen och för anti-HIV1, anti-HIV2 och anti-HVC-antikroppar. Eftersom
ingen metod absolut kan garantera frånvaron av HIV-, HBV- eller HVC-virus eller andra
infektionsämnen, betrakta dessa reagenser, samt patientprover, som potentiella infektioner och
hantera dem med försiktighet.
• För allmänna hälso- och säkerhetsanvisningar, läs MONOLISA ® HBs Ag ULTRA-satsens
förpackningsinlägg.
Vissa reagenser innehåller ProClin 300 (0,04 %, 0,1 % och/eller 0,5 %).
Xi-irritament
R43 : Kan orsaka irritation vid hudkontakt.
S28-37 : Efter kontakt med hud tvättar man direkt med mycket tvål och vatten.
Bär lämpliga skyddskläder.
6 - MATERIAL SOM BEHÖVS MEN INTE MEDFÖLJER
Läs MONOLISA ® HBs Ag ULTRA-satsens förpackningsinlägg.
7 - HÅLLBARHETSTID – STABILITET
• Förvara satsen mellan +2°C och +8°C före användning.
• Efter att förpackningen öppnats kan reagenserna användas fram till utgångsdatumet som finns på
förpackningen om de förvaras mellan +2°C och +8°C.
8 - PROVER
• Läs MONOLISA ® HBs Ag ULTRA-satsens förpackningsinlägg.
• Prover med en mycket hög koncentration HBs Ag kan inte neutraliseras av
neutraliseringsreagensen om de testas i outspädd form.
Läs avsnitt 10 ”BERÄKNING OCH TOLKNING AV RESULTATEN”, underrubriken
”Testvalideringskriterier”.
Obs! Prover med hög HBs Ag-koncentration, med en optisk densitet högre än 3 000 med
MONOLISA ® HBs Ag ULTRA-testet, kan testas direkt vid utspädning till 1/100 i provutspädningen.
9 - TESTPROCEDUR
Fortsätt enligt följande genom att använda reagenserna från MONOLISA ® HBs Ag ULTRA-satsen.
1. Preparera tvättlösningen (R2) och den ombildade konjugeringslösningen (R6+R7): se avsnitt 8
”PREPARARERING AV REAGENSER”, underrubriken ”Reagenser för ombildning” i MONOLISA ®
HBs Ag ULTRA-satsens förpackningsinlägg.
2. Ta bort mikrotiterplattan och antalet erfordrade remsor (reagens R1) från skyddsemballaget.
3. Distribuera i fördjupningarna i följande ordningsföljd :
• Fördjupningarna A1, A2: 100 µl av negativ kontroll (R3) från MONOLISA ® HBs Ag ULTRA-satsen.
• Fördjupningarna B1, B2: 100 µl av positiv kontroll (R4) från MONOLISA ® HBs Ag ULTRA-satsen.
• Fördjupningarna C1, C2, D1, D2: 100 µl av det första provet som skall fastställas.
• Fördjupningarna E1, E2, F1, F2: 100 µl av det andra provet som skall fastställas.
• Fördjupningarna G1, G2, H1, H2: 100 µl av det tredje provet som skall fastställas osv.
Beroende på systemet som används kan man ändra kontrollernas position eller
distributionsordningen.
54

4. Lägg till 20 µl av det negativa kontrollutspädningsmedlet (RB) i fördjupningarna A1, B1, C1, D1, E1,
F1, G1, H1 och 20 µl av neutraliseringsreagensen (RA) i fördjupningarna A2, B2, C2, D2, E2, F2,
G2, H2 osv.
5. Distributera 50 µl av den ombildade konjugeringslösningen (R6+R7) i alla fördjupningarna.
Homogenisera varje blandning med minst 3 aspirationer.
6. Fortsätt med steg 7 och alla följande steg som anges i avsnitt 11 ”PROCEDUR” i MONOLISA ® HBs
Ag ULTRA-satsens förpackningsinlägg.
10 - BERÄKNING OCH TOLKNING AV RESULTATEN
1) Reaktivitetsvärde för kontrollerna och proverna
1. För de positiva kontrollerna (R4) och de negativa kontrollerna (R3) från MONOLISA ® HBs Ag
ULTRA-satsen, beräkna :
OD-kontroller med RB
reaktivitetsvärde = -------------------------------------------------------
[(OD R3 med RB + OD R3 med RA)/2] + 0,050
2. För varje prov, beräkna:
Genomsnittliga OD-prover med RB
reaktivitetsvärde = -------------------------------------------------------
[(OD R3 med RB + OD R3 med RA)/2] + 0,050
2) Inhibitionsprocent
1. Beräkna inhibitionsprocenten för de optiska densiteter som är registrerade för de positiva
kontrollerna (R4) och de negativa kontrollerna (R3) behandlade med neutraliseringsreagens (RA)
och det negativa kontrollutspädningsmedlet (RB).
(OD-kontroller med RB) – (OD-kontroller med RA)
inhibitionsprocent = ---------------------------------------------------------- X 100
(OD-kontroller med RB)
2. Beräkna inhibitionsprocenten för de optiska densiteter som är registrerade för proverna som
behandlats med neutraliseringsreagens (RA) och det negativa kontrollutspädningsmedlet (RB).
(genomsnittliga OD-prover med RB) – (genomsnittliga OD-prover med RA)
inhibitionsprocent = --------------------------------------------------------------------------------- X 100
(genomsnittliga OD-prover med RB)
3) Testvalideringskriterier
1. Värdena för den negativa kontrollen (R3) med tillsats av negativt kontrollutspädningsmedel (RB)
eller neutraliseringsreagens (RA) måste vara mindre eller lika med 0,080 OD-enheter.
För samma negativa kontroll (R3), måste reaktivitetsvärdena vara mindre än 0,8.
För den positiva kontrollen (R4) med tillsats av negativt kontrollutspädningsmedel (RB), måste den
registrerade optiska densiteten vara högre än 0,800.
För samma positiva kontroll (R4), måste inhibitionsprocenten vara högre än, eller lika med, 50 %.
2. För prover med en inhibitionsprocent < 50 % och ett reaktivitetsvärde ≥ 0,8, är det nödvändigt att
ompröva dessa prover utspädda i provlösningen (1/100; 1/10 000; 1/1 000 000 osv., 100 X
utspädning) för att få ett reaktivitetsvärde < 0,8 (prov inte bekräftat i detta fall) eller fastställande av
neutralisering av det testade provet (inhibitionsprocent ≥ 50 %).
4) Tolkning av resultaten
Ett prov kommer att fastställas vara positivt för HBs Ag om reaktivitetsvärdet är högre än, eller lika
med, 0,8 och inhibitionsprocenten är högre än, eller lika med, 50 %.
Provreaktivitetsvärde Inhibitionsprocent Tolkning
≥ 0,8 ≥ 50 % Fastställd
≥ 0,8 < 50 % Inte fastställd, måste spädas ut
< 0,8 Alla resultat Inte reaktiv*
* Inte fastställd för utspädda prover
55

Exempel :
Test OD-värden OD-värden Prov-reaktivitets Inhibitions Tolkning
med RA med RB -värde -procent
Positiv kontroll 0,095 2,025 32,66 95 % Fastställd
(R4)
Negativ kontroll 0,011 0,013 0,21 15 % Inte reaktiv
(R3)
Prov 1 0,009 0,027 0,40 68 % Inte reaktiv
0,007 0,023
Prov 2 2,585 3,906 63,00 34 % Inte fastställd,
2,570 3,880 måste spädas ut
Prov 2 0,049 2,079 33,36 98 % Fastställd
Utsp. 1/100 0,045 2,058
Prov 3 0,132 0,151 2,52 13 % Inte fastställd,
måste spädas ut
0,140 0,161
Prov 3 0,032 0,036 0,55 12 % Inte fastställd
Utsp. 1/100 0,028 0,032
11 - UTFÖRANDEN
Utförandena av MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY-analys tillsammans med MONOLISA ®
HBs Ag ULTRA har bestämts genom testning av prover från kliniska patienter med akut och kronisk
hepatit B-infektion eller med sjukdomar utan samband med hepatit B-infektion, och från
kommersiella prover och serokonversionspaneler.
Dessutom har sensitivitetsgränsen testats med hjälp av den Franska French EFS HB-panelen, och
WHO-standarderna (NIBSC-kod 00/588).
Analytisk sensitivitet
Alla utspädda provkoncentrationer från 0,06 ng/ml till 2,2 ng/ml från EFS HB sensitivietspanel och
alla positiva resultat från WHO NIBSC-panelen bekräftades med MONOLISA ® HBs Ag ULTRA
CONFIRMATORY-analys.
En HBs Ag-koncentration på över 10 mg/ml neutraliserades efter spädning av detta prov.
Sensitivitet
Sensitivitetsstudier har utförts på 337 positiva prover från uppföljning av kroniskt eller akut HBVinfekterade
personer. Alla positiva prover bekräftades med MONOLISA ® HBs Ag ULTRA
CONFIRMATORY-analys.
Totalt 15 väldokumenterade kommersiella HBV serokonversionspaneler (45 prover) studerades
också. Alla positiva prover neutraliserades.
Specificitet och korsreaktivitet
En intern panel på 16 falska positiva prover med MONOLISA ® HBs Ag ULTRA testades med
MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY-analys och bekräftades inte.
Analysen av 102 patienter som visade olika patologier eller tillstånd ej kopplade till hepatit B
(havande kvinnor, reumatoid faktor, antinukleära antikroppar, anti-mus Ig eller andra virala eller
bakteriella infektioner) testades med MONOLISA ® Ag HBs ULTRA CONFIRMATORY och bekräftades
som negativa.
Dessutom testades 37 positiva prover med HBs Ag samt positiva prover med olika markörer (prover
med reumatoida faktorer, antinukleära antikroppsprover, anti-mus Ig eller virala infektions-prover)
med MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY-analys; alla dessa prover bekräftades som
positiva för HBs Ag.
23 HBs Ag positiva prover från co-infektionspanelen PCA201 BBI (med HBV, HIV, HCV och/eller
HTLV) bekräftades alla med MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY-analys, rena eller efter
spädning.
56

Analysens reproducerbarhet
Reproducerbarheten för MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY-analysen har bestämts
genom analys av 4 prover : 1 negativt prov (prov 1), 2 HBs Ag positiva prover (prov 2 och 3) och 1
högt HBs Ag positivt prov (prov 4).
Reproducerbarheten inom analysen har utvärderats genom testning av dessa 4 prover 30 gånger i
samma körning.
Reproducerbarheten mellan analyser har utvärderats genom testning av dessa 4 prover i duplikat
under 20 dagar med 2 oberoende körningar varje dag.
Resultat visas i följande tabeller:
Tabell 1 : Reproducerbarhet inom analysen
n = 30 prov 1 prov 2 prov 3 prov 4
(kvot 0,37) (kvot = 1,32) (kvot = 3,39) (kvot = 18,39)
Medelvärde för 4 85,37 94,89 98,38
inhibitions-procent
Standard-avvikelse 12,6 1,59 0,66 0,21
(SD)
CV (%) Ej tillämpligt 1,86 % 0,69 % 0,22 %
(variations-koefficient)
Tabell 2 : Reproducerbarhet mellan analyser
n = 40 prov 1 prov 2 prov 3 prov 4
(kvot 0,37) (kvot = 1,32) (kvot = 3,39) (kvot = 18,39)
Medelvärde för 3,74 81,46 92,76 98,08
inhibitions-procent
Standard-avvikelse 15,84 7,07 3,43 0,75
(SD)
CV (%) Ej tillämpligt 8,68 % 3,70 % 0,76 %
(variations-koefficient)
De resultat som erhölls under dessa reproducerbarhetsstudier motsvarade de förväntade.
12 - TESTETS BEGRÄNSNINGAR
MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY-testet är strikt begränsat till fastställande av
förekomst av hepatit B surface antigen (HBs Ag) i mänskligt serum eller plasma.
Prover som upprepade gånger uppmäts vara svagt positiva (värde mindre än 2) med MONOLISA ®
HBs Ag ULTRA-testet och som fastställs vara icke-reaktiva för ett outspätt test med MONOLISA ®
HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY-testet (reaktivitetsvärde mindre än 0,8) måste tolkas med
försiktighet. Det rekommenderas att man testar om dessa patienter med en annan metod eller med
ett andra prov senare.
13 - LITTERATUR
Se det franska förpackningsinlägget.
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MONOLISA ® HBs Ag ULTRA 72408
CONFIRMATORY
25 test
TEST TIL BEKRÆFTELSE AF HBsAg I HUMANT SERUM ELLER
PLASMA
IVD
Producentens kvalitetskontrol
Alle producerede og kommercialiserede reagenser er underlagt et komplet kvalitetssystem
lige fra modtagelsen af råmaterialet til den endelige kommercialisering af produktet.
Hvert parti sendes til kvalitetskontrol og frigives kun til markedet, hvis det opfylder de
fastsatte godkendelseskriterier.
Dokumentationen i forbindelse med produktion og kontrol af hvert parti opbevares i
virksomheden.
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INDHOLD
1 - FORMÅL
2 - PRINCIP FOR MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY TEST
3 - SÆTTETS SAMMENSÆTNING
4 - FORHOLDSREGLER
5 - SUNDHEDS- OG SIKKERHEDSMÆSSIGE FORHOLDSREGLER
6 - PÅKRÆVET MATERIALE, DER IKKE MEDFØLGER
7 - HOLDBARHED – STABILITET
8 - PRØVER
9 - ANALYSEPROCEDURE
10 - BEREGNING OG FORTOLKNING AF RESULTATER
11 - YDEEVNE
12 - TESTENS BEGRÆNSNINGER
13 - LITTERATURHENVISNINGER
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1. FORMÅL
MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY-testen anvendes til at bekræfte tilstedeværelsen af
hepatitis B-overfladeantigen (HBsAg) i prøver af humant serum eller plasma, der blev fundet reaktive
i MONOLISA ® HBs Ag ULTRA-screeningstesten (kode 72346/72348).
2 - PRINCIP FOR MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY TEST
MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY-testen anvender princippet om neutralisering ved
overskud af antistoffer mod anti-HBs (anti-HBs-fortynder: neutraliseringsreagens) af det HBsAg, der
findes i plasma- eller serumprøver.
Det anbefales at teste de prøver, der gentagne gange er fundet positive i MONOLISA ® HBs Ag
ULTRA-screeningstesten, med reagenserne fra MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORYsættet.
Hvis en prøve er positiv for HBs-antigen, mætter anti-HBs-antistofferne i
neutraliseringsreagenset HBs-antigendeterminanterne i prøven, som ikke længere kan binde sig til
det antistof, der er bundet til den faste fase. Der kan observeres et fald i optisk densitet, når der
foretages sammenligning med en tilsvarende prøve, hvor neutraliseringsreagenset er blevet erstattet
med en negativ kontrolfortynder uden anti-HBs-antistoffer. Der analyseres flere fortyndinger af
prøven efter behov for at tage højde for variationerne i HBsAg-koncentration.
Testen omfatter følgende faser i reaktionen:
1) Inkubation af kontroller og prøver, der er positive for HBsAg, med neutraliseringsreagenset og
konjugatet ved tilstedeværelse af anti-HBs-antistoffer bundet til den faste fase.
For hver prøve oprettes der kontrolbrønde ved at erstatte neutraliseringsreagenset med den
negative kontrolfortynder.
Resten af proceduren er den samme som protokollen for MONOLISA ® HBs Ag ULTRA-sættet .
2) Vask og derefter udvikling af den enzymaktivitet, der er bundet til den faste fase, via tilsætning af
substrat.
3) Standsning af udviklingstrinnet, derefter aflæsning af optiske densiteter ved 450/620–700 nm og
til sidst fortolkning af resultaterne.
3 - SÆTTETS SAMMENSÆTNING
ETIKET REAGENSTYPE PRÆSENTATION
RA Neutraliseringsreagens 1 flaske
Tris NaCl-buffer (pH 8,0) indeholdende fåreserum
og humant serum, negativ for HBs-antigen samt
0,7 ml
for anti-HVC- og anti-HIV1/2-antistoffer og suppleret
med anti-HBs-antistoffer.
Brugsklart reagens.
Konserveringsmiddel : ProClin 300 (0,25 %)
RB Negativ kontrolfortynder 1 flaske
Tris NaCl-buffer (pH 8,0) indeholdende fåreserum
og humant serum, negativ for HBs-antigen samt
0,7 ml
for anti-HVC- og anti-HIV1/2-antistoffer.
Brugsklart reagens.
Konserveringsmiddel : ProClin 300 (0,25 %)
RC Prøvefortynder 1 flaske
0,85 % fysiologisk saltvandsopløsning.
Brugsklart reagens.
27 ml
Konserveringsmiddel : ProClin 300 (0,1 %)
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4 - FORHOLDSREGLER
Kvaliteten af resultaterne afhænger af følgende regler for god laboratoriepraksis:
• Brug ikke reagenser efter udløbsdatoen.
• Undlad at blande eller kombinere reagenser fra MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORYsættet
med forskellige partinumre i den samme procedure.
• Vent 30 minutter, før reagenserne tages i brug, så de kan stabilisere sig ved stuetemperatur
(18-30°C).
• Benyt engangsmateriale, eller hvis dette ikke er muligt, udstyr af glas, som er vasket grundigt og
skyllet med destilleret vand.
• Se indlægssedlen til MONOLISA ® HBs Ag ULTRA-sættet.
5 - SUNDHEDS- OG SIKKERHEDSMÆSSIGE FORHOLDSREGLER
• Alle reagenser i sættet er beregnet til in vitro-diagnosticering.
• De materialer af human oprindelse, der er anvendt til tilberedningen af reagens RA og RB, er blevet
testet og fundet negative for HBs-antigen samt for anti-HIV1-, anti-HIV2- og anti-HVC-antistoffer.
Da ingen metode kan give fuld garanti for fravær af HIV-, HBV- eller HVC-virus eller andre
smitsomme stoffer, skal disse reagenser samt patientprøverne betragtes som potentielt
smittefarlige og håndteres med forsigtighed.
• Angående generelle sundheds- og sikkerhedsmæssige forholdsregler henvises til indlægssedlen til
MONOLISA ® HBs Ag ULTRA-sættet.
Nogle reagenser indeholder ProClin 300 (0,04 %, 0,1 % og/eller 0,5 %)
Xi Lokalirriterende
R43 : Kan give overfølsomhed ved kontakt med huden
S28-37 : Kommer stof på huden, vaskes straks med store mængder sæbe og vand.
Brug særligt arbejdstøj.
6 - PÅKRÆVET MATERIALE, DER IKKE MEDFØLGER
Se indlægssedlen til MONOLISA ® HBs Ag ULTRA-sættet.
7 - HOLDBARHED – STABILITET
• Opbevar sættet ved +2 til +8°C indtil brug.
• Efter åbning kan alle reagenserne anvendes frem til udløbsdatoen på æsken, under forudsætning
af at de opbevares ved +2°C til +8°C.
8 - PRØVER
• Se indlægssedlen til MONOLISA ® HBs Ag ULTRA-sættet.
• Prøver med meget høj koncentration af HBs-antigen kan ikke neutraliseres med
neutraliseringsreagenset, hvis de testes i ufortyndet form.
Se afsnit 10, ”BEREGNING OG FORTOLKNING AF RESULTATER,” underafsnittet ”Betingelser for
validering af testen.”
Bemærk: Prøver med høj HBs Ag-koncentration, som har en optisk densitet, der er større end 3000
med MONOLISA ® HBs Ag ULTRA-testen, kan testes direkte, hvis de fortyndes til 1/100 i
prøvefortynderen.
9 - ANALYSEPROCEDURE
Gør følgende med reagenserne fra MONOLISA ® HBs Ag ULTRA-sættet.
1. Forbered vaskeopløsningen (R2) og den rekonstituerede konjugatopløsning (R6+R7) : Se afsnit 8
”FORBEREDELSE AF REAGENSER,” underafsnittet ”Reagenser til rekonstituering” i
indlægssedlen til MONOLISA ® HBs Ag ULTRA-sættet.
2. Tag mikropladerammen og det påkrævede antal strimler (reagens R1) ud af beskyttelsesposen.
3. Fordel reagenserne i brøndene i nedenstående rækkefølge:
• Brønd A1, A2 : 100 µl negativ kontrol (R3) fra MONOLISA ® HBs Ag ULTRA-sættet.
• Brønd B1, B2 : 100 µl positiv kontrol (R4) fra MONOLISA ® HBs Ag ULTRA-sættet.
• Brønd C1, C2, D1, D2 : 100 µl af den første prøve, der skal bekræftes.
• Brønd E1, E2, F1, F2 : 100 µl af den anden prøve, der skal bekræftes.
62

• Brønd G1, G2, H1, H2 : 100 µl af den tredje prøve, der skal bekræftes osv.
Afhængig af det anvendte system er det muligt at ændre placering af kontrollerne eller
distribueringsrækkefølgen.
4. Tilsæt 20 µl negativ kontrolfortynder (RB) til brønd A1, B1, C1, D1, E1, F1, G1, H1 og 20 µl
neutraliseringsreagens (RA) til brønd A2, B2, C2, D2, E2, F2, G2, H2 osv.
5. Fordel 50 µl rekonstitueret konjugatopløsning (R6+R7) i alle brøndene. Homogenisér hver blanding
med mindst 3 opsugninger.
6. Følg trin 7 og alle efterfølgende trin i afsnit 11 “PROCEDURE” i indlægssedlen til MONOLISA ® HBs
Ag ULTRA-sættet.
10 - BEREGNING OG FORTOLKNING AF RESULTATER
1) Reaktivitetsforhold for kontroller og prøver
1. For de positive kontroller (R4) og de negative kontroller (R3) fra MONOLISA ® HBs Ag ULTRA-sættet
beregnes :
OD for kontroller med RB
reaktivitetsforhold = ----------------------------------------------------------------
[(OD for R3 med RB + OD for R3 med RA)/2] + 0,050
2. For hver prøve beregnes :
Gennemsnitlig OD for prøver med RB
reaktivitetsforhold = ----------------------------------------------------------------
[(OD for R3 med RB + OD for R3 med RA)/2] + 0,050
2) Hæmningsprocent
1. Beregn hæmningsprocenterne for de optiske densiteter, som blev registreret for de positive
kontroller (R4) og de negative kontroller (R3), der blev behandlet med neutraliseringsreagens (RA),
og den negative kontrolfortynder (RB).
(OD for kontroller med RB) - (OD for kontroller med RA)
hæmningsprocent = ----------------------------------------------------------------- X 100
(OD for kontroller med RB)
2. Beregn hæmningsprocenterne for de optiske densiteter, som blev registreret for de prøver, der blev
behandlet med neutraliseringsreagens (RA), og den negative kontrolfortynder (RB).
(gennemsnitlig OD for prøver med RB) - (gennemsnitlig OD for prøver med RA)
hæmningsprocent = ------------------------------------------------------------------------------------------ X 100
(gennemsnitlig OD for prøver med RB)
3) Betingelser for validering af testen
1. Værdierne for den negative kontrol (R3) tilsat negativ kontrolfortynder (RB) eller
neutraliseringsreagens (RA) skal være mindre end eller lig med 0,080 OD-enheder.
For denne samme negative kontrol (R3) skal reaktivitetsforholdet være mindre end 0,8.
For den positive kontrol (R4) tilsat negativ kontrolfortynder (RB) skal den registrerede optiske
densitet være større end 0,800.
For denne samme positive kontrol (R4) skal hæmningsprocenten være større end eller lig med
50 %.
2. Prøver med en hæmningsprocent < 50 % og med et reaktivitetsforhold ≥ 0,8 skal testes igen
fortyndet med prøvefortynder (1/100, 1/10.000, 1/1.000.000 osv., 100 X fortynding) for at få et
reaktivitetsforhold < 0,8 (prøven er i så fald ikke bekræftet) eller en bekræftelse af neutraliseringen
i den testede prøve (hæmningsprocent ≥ 50 %).
63

4) Fortolkning af resultater
En prøve er bekræftet positiv for HBsAg, hvis reaktivitetsforholdet er større end eller lig med 0,8, og
hæmningsprocenten er større end eller lig med 50 %.
Prøvens reaktivitetsforhold Hæmningsprocent Fortolkning
≥ 0,8 ≥ 50 % Bekræftet
≥ 0,8 < 50 % Ikke bekræftet, skal fortyndes
< 0,8 Vilkårligt resultat Ikke reaktiv*
* Ikke bekræftet for fortyndede prøver
Eksempler :
Test OD-værdier OD-værdier Prøvens Hæmningsprocent Fortolkning
med RA med RB reaktivitets
forhold
Positiv kontrol 0,095 2,025 32,66 95 % Bekræftet
(R4)
Negativ kontrol 0,011 0,013 0,21 15 % Ikke reaktiv
(R3)
Prøve 1 0,009 0,027 0,40 68 % Ikke reaktiv
0,007 0,023
Prøve 2 2,585 3,906 63,00 34 % Ikke bekræftet,
2,570 3,880 skal fortyndes
Prøve 2 0,049 2,079 33,36 98 % Bekræftet
Fortynd. 1/100 0,045 2,058
Prøve 3 0,132 0,151 2,52 13 % Ikke bekræftet,
0,140 0,161 skal fortyndes
Prøve 3 0,032 0,036 0,55 12 % Ikke bekræftet
Fortynd. 1/100 0,028 0,032
11 - YDEEVNE
Ydeevnen for MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY-testen i forbindelse med MONOLISA ®
HBs Ag ULTRA er fastlagt ved at teste prøver fra kliniske patienter med akut og kronisk hepatitis B-
infektion eller med sygdomme, der ikke har relation til hepatitis B-infektion, og fra kommercielle
prøver og serokonverteringspaneler.
Desuden er sensitivitetsgrænsen testet vha. det franske EFS HB-panel og WHO-standarderne
(NIBSC-kode 00/588).
Analytisk sensitivitet
Alle fortyndede prøvekoncentrationer fra 0,06 ng/ml til 2,2 ng/ml fra EFS HB-sensitivitetspanelet og
alle positive resultater fra WHO NIBSC-panelet blev bekræftet med MONOLISA ® HBs Ag ULTRA
CONFIRMATORY-testen.
En HBsAg-koncentration, der var højere end 10 mg/ml, blev neutraliseret efter fortynding af denne
prøve.
Sensitivitet
Der er udført sensitivitetsundersøgelser på 337 positive prøver fra opfølgning af kroniske eller akutte
HBV-inficerede. Alle de positive prøver blev bekræftet med MONOLISA ® HBs Ag ULTRA
CONFIRMATORY-testen.
I alt 15 grundigt dokumenterede kommercielle HBV-serokonverteringspaneler (45 prøver) blev også
undersøgt. Alle de positive prøver blev neutraliseret.
Specificitet og krydsreaktivitet
Et internt panel på 16 falsk positive prøver med MONOLISA ® HBs Ag ULTRA blev testet med
MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY-testen og blev ikke bekræftet.
64

Analysen af 102 patienter, der viste forskellige patologier eller status, der ikke var forbundet med
hepatitis B (gravide kvinder, reumatoid faktor, antinukleare antistoffer, anti-muse-Ig eller andre virale
eller bakterielle infektioner), blev testet med MONOLISA ® Ag HBs ULTRA CONFIRMATORY og
bekræftet negativ.
Desuden blev 37 prøver, der var positive med HBsAg og også positive med forskellige markører
(prøver med reumatoid faktor, antinukleare antistoffer, anti-muse-Ig eller virale infektioner), testet med
MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY-testen. Alle disse prøver blev bekræftet positive for
HBsAg.
23 HBsAg-positive prøver fra koinfektionspanelet PCA201 BBI (med HBV, HIV, HCV og/eller HTLV)
blev alle bekræftet med MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY-testen, rene eller efter
fortynding.
Reproducérbarhed af testen
Reproducérbarheden af MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY-testen er fastlagt vha.
analysen af 4 prøver: 1 negativ prøve (prøve 1), 2 HBsAg-positive prøver (prøve 2 og 3) og 1 høj
HBsAg-positiv prøve (prøve 4).
Reproducérbarheden inden for testen er evalueret ved at teste disse 4 prøver 30 gange i den samme
kørsel.
Reproducérbarheden mellem test er evalueret ved at dobbeltteste disse 4 prøver i løbet af 20 dage
på 2 selvstændige kørsler hver dag.
Resultaterne vises i følgende tabeller:
Tabel 1 : Reproducérbarhed inden for test
n = 30 prøve 1 prøve 2 prøve 3 prøve 4
(ratio 0,37) (ratio = 1,32) (ratio = 3,39) (ratio = 18,39)
gennemsnit af 4 85,37 94,89 98,38
hæmningsprocent
standardafvigelse 12,6 1,59 0,66 0,21
(SD)
KV (%) IR 1,86 % 0,69 % 0,22 %
Tabel 2 : Reproducérbarhed mellem test
n = 40 prøve 1 prøve 2 prøve 3 prøve 4
(ratio 0,37) (ratio = 1,32) (ratio = 3,39) (ratio = 18,39)
gennemsnit af 3,74 81,46 92,76 98,08
hæmningsprocent
standardafvigelse 15,84 7,07 3,43 0,75
(SD)
KV (%) IR 8,68 % 3,70 % 0,76 %
De resultater, der blev opnået under disse reproducérbarhedsundersøgelser, var i overensstemmelse
med de forventede resultater.
12 - TESTENS BEGRÆNSNINGER
MONOLISA ® HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY-testen er strengt begrænset til bekræftelse af
tilstedeværelsen af hepatitis B-overfladeantigen (HBsAg) i humant serum eller plasma.
Prøver, som gentagne gange testes svagt positive (forhold mindre end 2) med MONOLISA ® HBs Ag
ULTRA-testen, og som bestemmes ikke-reaktive ved en ufortyndet prøve med MONOLISA ® HBs Ag
ULTRA CONFIRMATORY-testen (reaktivitetsforhold mindre end 0,8), skal fortolkes med forsigtighed.
Det anbefales, at disse patienter testes igen med en anden metode eller med en anden prøve udtaget
senere.
13 - LITTERATURHENVISNINGER
Se den franske indlægsseddel.
65

67 67

• CE marking (European directive 98/79/CE on in vitro diagnostic medical devices)
0
• Marquage CE (Directive européenne 98/79/CE relative aux dispositifs médicaux de diagnostic
in vitro)
• Marcodo CE (Directiva europea 98/79/CE sobre productos sanitarios para diagnóstico in vitro)
• EG Markierung (Europäische Richtlinie 98/79/EG über In vitro-Diagnostika)
• Marchiatura CE (Direttiva europea 98/79/CE relativa ai dispositivi medico-diagnostici in vitro)
• Marcação CE (Directiva europeia 98/79/CE relativa aos dispositivos médicos de diagnóstico
in vitro)
• CE-märkning (Europa direktiv 98/79/EG om medicintekniska produkter lör in vitro-diagnostik)
• CE-mærkningen (Europa direktiv 98/79/EF om medicinsk udstyr til in vitro-diagnostik)
IVD
• For in vitro diagnostic use
• Pour diagnostic in vitro
• Para diagnóstico in vitro
• In vitro-Diagnostikum
• Per uso diagnostico in vitro
• Para uso em diagnóstico in vitro
• In vitro diagnostik
• In vitro diagnose
• Manufacturer
• Fabricant
• Fabricante
• Hersteller
• Produttore
• Fabricante
• Tillverkad av
• Fremstillet af
REF
• Catalogue number
• Référence catalogue
• Número de catálogo
• Bestellnummer
• Numero di catalogo
• Número de catálogo
• Katalognummer
• Katalognummer
EC REP • Authorised Representative
• Représentant agréé
• Representante autorizado
• Bevollmächtigter
• Distributore autorizzato
• Representante Autorizado
• Auktoriserad representant
• Autoriseret repræsentant
LOT
• Batch code
• Code du lot
• Código de lote
• Chargen-Bezeichnung
• Codice del lotto
• C6digo do Iote
• Batch nr.
• Batchkoden
• Storage temperature limitation
• Limites de températures de stockage
• Temperatura limite
• Lagerungstemperatur
• Limiti di temperatura di conservazione
• Limites de temperatura de armazenamento
• Temperaturbegränsning
• Temperaturbegrænsning
i
• Expiry date YYYY/MM/DD
• Date de péremption AAAA/MM/JJ
• Estable hasta AAAA/MM/DD
• Vervvendbar bis JJJJ/MM/TT
• Da utilizzare prima del AAAA/MM/GG
• Data de expiração AAAA/MM/DD
• Utgångsdatum År/Månad/Dag
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• Consulter Ie mode d'emploi
• Consulte Ia instrucción para el uso
• Siehe Gebruchsanweisung
• Consultare Ie istruzioni per uso
• Consulte o folheto Informativo
• Se instruktionsanvisning vid användning
• Se instruktion før brug
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