AC 2005 Vol-1.pdf - Cecmed - Infomed

Métodos para la evaluación... 35
(Heilmeyer, IV estado), los cuales pueden
contener solo un gránulo simple de
reticulina [45]. La interpretación del
conteo absoluto de reticulocitos se
dificulta además, ya que el conteo total
refleja no solo la proporción de producción
de hematíes, sino también el cambio entre
los diferentes estados del reticulocito.
En el individuo normal (no anémico), el
reticulocito madura tres días en la médula
ósea y se encuentra en la circulación
periférica durante el cuarto día. El
aumento de la eritropoyesis tiende a
acelerar la maduración en la médula y
alargar la duración de la maduración en la
sangre. Los reticulocitos que tienen entre
uno y tres días (reticulocitos de
"transición"), pueden encontrarse en la
sangre periférica y se cuentan como si
fueran reticulocitos de cuatro días. Para
hacer una estimación exacta de la
eritropoyesis, hay que corregir el recuento
por los reticulocitos de "transición" [46].
En años recientes, la citometría de flujo ha
surgido como un método muy eficaz para
el análisis y el conteo de células
poblacionales individuales a través del
tamaño, contenido y marcadores de
superficie celulares. Ciertos colorantes
fluorecentes unidos a RNA/DNA permiten
la distinción de células como los
reticulocitos [47]. Numerosos
fluorocromos han sido empleados
incluyendo pyronin [48] , naranja de
acridina [49] y thioflavin T [50], pero con
limitaciones para su empleo clínico. Con
la introducción del naranja de thiazole en
1986 [51], surgió un fluorocromo
importante para el conteo de rutina de
reticulocitos.
El empleo del kit Retic-Count TM para el
conteo de reticulocitos en sangre periférica
humana ha sido reportado. Retic-Count es
el nombre comercial del 4-
metilbecensulfonato de 1-metil-4[(3-metil-
2 (3H)-benzotiazolidin) metil quinolinio
(Naranja de Tiazol), que es sintetizado por
Becton Dickinson Inmunocitometry
Systems (BDIS) [52], el cual permite
determinar los reticulocitos como un
porcentaje de los eritrocitos totales en
sangre periférica humana. El reactivo se
une al RNA y el DNA, formando un
complejo fluorescente de núcleotidoreactivo
que muestra una banda de
absorción a 475 nm (luz azul) y una banda
de emisión fluorescente a 530 nm (luz
verde), propiedad que permite su uso en
los citómetros de flujo equipados con un
láser a 488 nm, como es el caso de los
citómetros de flujo FACS-Calibur,
FACSort, FACScan y FACStrak. El uso
de Retic-COUNT, se plantea que ofrece
ventajas importantes, como es el conteo de
diez veces más células, mejorando así la
exactitud de la muestra estadística [53]. Un
recuento típico requiere menos de un
minuto al operador y las células que se
cuentan están en suspensión, de manera
que se eliminan los errores de distribución
creados en las preparaciones de extendidos
de sangre. Además, si se encuentra
disponible en el equipo el uso del software
Retic-Count, se ofrecen ventajas
adicionales, ya que posibilita la reducción
de la variabilidad debido al operador
durante el análisis, al colocar marcadores
automáticos, los resultados se calculan y
se imprimen automáticamente y no se
requiere del tubo de control incoloro.
Estudios realizados por nuestro laboratorio
(aún sin concluir), han evidenciado la
posibilidad de aplicación de dicho kit en el
conteo de reticulocitos en ratones tratados
con rhEPO.
Métodos Alternativos
Métodos alternativos para la evaluación de
potencia de preparaciones de rhEPO son
reportados en investigaciones recientes.