AC 2005 Vol-1.pdf - Cecmed - Infomed
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Métodos para la evaluación... 33<br />
No obstante, los trabajos reconocen que el<br />
tipo de línea celular huésped usada para la<br />
producción de rhEPO, las condiciones de<br />
cultivo y los procesos de purificación<br />
aplicados pueden todos afectar el perfil de<br />
glicosilación de las preparaciones y, por<br />
tanto, influenciar en la biopotencia final.<br />
Por consiguiente, es esencial que una<br />
metodología bien caracterizada sea<br />
aplicada para asegurar consistencia lote a<br />
lote entre los diferentes fabricantes con el<br />
fin de garantizar una alta calidad y eficacia<br />
terapéutica [26,27].<br />
A través de este trabajo se hace una<br />
revisión de los diferentes métodos<br />
descritos para la evaluación de potencia de<br />
preparaciones de rhEPO relacionando las<br />
ventajas y desventajas reportadas de la<br />
aplicación en cada caso.<br />
Desarrollo<br />
Las primeras determinaciones de potencia<br />
de rhEPO fueron realizadas en ratas y<br />
ratones normales a través del seguimiento<br />
de la variación del hematocrito, del<br />
volumen de eritrocitos sanguíneos y el<br />
número de reticulocitos [3,25].<br />
El primer método implementado para la<br />
evaluación de actividad de formulaciones<br />
de rhEPO fue desarrollado en ratones<br />
policitémicos [28]. El principio básico del<br />
ensayo es la reducción casi total de la<br />
síntesis endógena de EPO en ratones, a<br />
través de la exposición previa a presión<br />
atmosférica reducida por espacio de 14<br />
días. Tales ratones son entonces sujetos a<br />
la administración de diferentes<br />
concentraciones de rhEPO, estimulándose<br />
así el crecimiento eritroide. La actividad<br />
de la formulación es finalmente evaluada a<br />
través de la determinación de sus efectos<br />
en la estimulación de la incorporación de<br />
59 Fe en los hematíes circulantes. Aunque<br />
este ensayo es normalmente sensible,<br />
preciso y específico, el procedimiento<br />
tiene una serie de desventajas como el uso<br />
de sustancias radioactivas, lo que requiere<br />
condiciones especiales de personal y de<br />
laboratorio para su manipulación; además,<br />
se emplea un alto número de animales y el<br />
esquema de tratamiento es de larga<br />
duración, en el cual el animal es sometido<br />
a alto nivel de estrés.<br />
Posteriormente, se desarrolló el ensayo en<br />
ratones normocitémicos, el cual de forma<br />
general es llevado a cabo en animales<br />
normales con simples [29-31] o múltiples<br />
inyecciones [32-34], y la actividad<br />
biológica es medida por la estimulación de<br />
la producción de reticulocitos [3, 32-34].<br />
Los bioensayos, en particular que<br />
involucran una simple inyección en<br />
ratones normocitémicos, han sido<br />
ampliamente aplicados en estudios de<br />
estandarización y en la evaluación de<br />
potencia de preparaciones farmacéuticas<br />
[29, 31-35]. Sin embargo, aunque estos son<br />
usualmente robustos, algunos necesitan<br />
modificaciones con respecto a mejorar la<br />
variabilidad y exactitud de la respuesta,<br />
parámetros muy importantes a la hora de<br />
determinar la potencia de lotes<br />
comerciales de varias fuentes de rhEPO<br />
[29-30].<br />
Un reporte reciente [36] muestra, al<br />
comparar el empleo de simples y múltiples<br />
inyecciones, que con una simple<br />
administración de rhEPO generalmente se<br />
requieren al menos dos ensayos para<br />
alcanzar los límites aceptables, mientras<br />
que el estudio con múltiples inyecciones<br />
mostró intervalos de confianza más bajos,<br />
mayor precisión y reproducibilidad con un<br />
único ensayo. Es importante señalar que el<br />
protocolo con aplicación de múltiples<br />
inyecciones, como consecuencia de la<br />
estimulación diaria, resulta en un alto<br />
conteo de reticulocitos, con una dosis total<br />
baja de rhEPO por animal.