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Métodos para la evaluación... 33
No obstante, los trabajos reconocen que el
tipo de línea celular huésped usada para la
producción de rhEPO, las condiciones de
cultivo y los procesos de purificación
aplicados pueden todos afectar el perfil de
glicosilación de las preparaciones y, por
tanto, influenciar en la biopotencia final.
Por consiguiente, es esencial que una
metodología bien caracterizada sea
aplicada para asegurar consistencia lote a
lote entre los diferentes fabricantes con el
fin de garantizar una alta calidad y eficacia
terapéutica [26,27].
A través de este trabajo se hace una
revisión de los diferentes métodos
descritos para la evaluación de potencia de
preparaciones de rhEPO relacionando las
ventajas y desventajas reportadas de la
aplicación en cada caso.
Desarrollo
Las primeras determinaciones de potencia
de rhEPO fueron realizadas en ratas y
ratones normales a través del seguimiento
de la variación del hematocrito, del
volumen de eritrocitos sanguíneos y el
número de reticulocitos [3,25].
El primer método implementado para la
evaluación de actividad de formulaciones
de rhEPO fue desarrollado en ratones
policitémicos [28]. El principio básico del
ensayo es la reducción casi total de la
síntesis endógena de EPO en ratones, a
través de la exposición previa a presión
atmosférica reducida por espacio de 14
días. Tales ratones son entonces sujetos a
la administración de diferentes
concentraciones de rhEPO, estimulándose
así el crecimiento eritroide. La actividad
de la formulación es finalmente evaluada a
través de la determinación de sus efectos
en la estimulación de la incorporación de
59 Fe en los hematíes circulantes. Aunque
este ensayo es normalmente sensible,
preciso y específico, el procedimiento
tiene una serie de desventajas como el uso
de sustancias radioactivas, lo que requiere
condiciones especiales de personal y de
laboratorio para su manipulación; además,
se emplea un alto número de animales y el
esquema de tratamiento es de larga
duración, en el cual el animal es sometido
a alto nivel de estrés.
Posteriormente, se desarrolló el ensayo en
ratones normocitémicos, el cual de forma
general es llevado a cabo en animales
normales con simples [29-31] o múltiples
inyecciones [32-34], y la actividad
biológica es medida por la estimulación de
la producción de reticulocitos [3, 32-34].
Los bioensayos, en particular que
involucran una simple inyección en
ratones normocitémicos, han sido
ampliamente aplicados en estudios de
estandarización y en la evaluación de
potencia de preparaciones farmacéuticas
[29, 31-35]. Sin embargo, aunque estos son
usualmente robustos, algunos necesitan
modificaciones con respecto a mejorar la
variabilidad y exactitud de la respuesta,
parámetros muy importantes a la hora de
determinar la potencia de lotes
comerciales de varias fuentes de rhEPO
[29-30].
Un reporte reciente [36] muestra, al
comparar el empleo de simples y múltiples
inyecciones, que con una simple
administración de rhEPO generalmente se
requieren al menos dos ensayos para
alcanzar los límites aceptables, mientras
que el estudio con múltiples inyecciones
mostró intervalos de confianza más bajos,
mayor precisión y reproducibilidad con un
único ensayo. Es importante señalar que el
protocolo con aplicación de múltiples
inyecciones, como consecuencia de la
estimulación diaria, resulta en un alto
conteo de reticulocitos, con una dosis total
baja de rhEPO por animal.