AC 2005 Vol-1.pdf - Cecmed - Infomed
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Métodos para la evaluación... 31<br />
MÉTODOS PARA LA EVALU<strong>AC</strong>IÓN DE LA <strong>AC</strong>TIVIDAD BIOLÓGICA DE<br />
PREPAR<strong>AC</strong>IONES COMERCIALES DE ERITROPOYETINA HUMANA RECOMBINANTE<br />
Lic. Natacha Reyes, Dra. Diadelis Remírez<br />
Centro para el Control Estatal de la Calidad de los Medicamentos<br />
Resumen<br />
La obtención y comercialización de la EPO humana<br />
recombinante (rhEPO) con fines clínicos son llevadas<br />
a cabo por muchos centros biotecnológicos en el<br />
mundo. Esta ha sido considerada como unos de los<br />
productos de la Biotecnología que ha revolucionado<br />
esta industria. Los estudios reconocen que el tipo de<br />
línea celular huésped usada para la producción de<br />
rhEPO, las condiciones de cultivo y los procesos de<br />
purificación aplicados pueden todos afectar el perfil<br />
de glicosilación de las preparaciones y por tanto<br />
influenciar en la biopotencia final. Ensayos de<br />
evaluación de la actividad biológica son parte de la<br />
rutina de la liberación de lotes de las glicoproteínas<br />
terapéuticas. En este trabajo se hace una revisión de<br />
los diferentes métodos descritos para la evaluación de<br />
potencia de preparaciones de rhEPO relacionando las<br />
ventajas y desventajas reportadas de la aplicación en<br />
cada caso. Se evidencia un continuo análisis y<br />
mejoramiento de los métodos establecidos hasta el<br />
momento así como la introducción de nuevos<br />
bioensayos para rhEPO.<br />
Palabras claves: eritropoyetina, ensayos de potencia,<br />
glicoproteína terapéutica.<br />
Introducción<br />
La Eritropoyetina (EPO), es el principal<br />
regulador de la eritropoyesis en<br />
mamíferos. Esta constituye una hormona<br />
sialoglicoproteica que contiene 165<br />
aminoácidos que forman una cadena<br />
simple polipeptídica con 2 enlaces<br />
disulfuro intra-cadena (Cys 7-161 y Cys 29-<br />
33 ) y 4 sitios de glicosilación, tres uniones<br />
N (Asn 24 , Asn 38 y Asn 83 ) y una unión O<br />
(Ser 126 ) glicosídicas [1,2].<br />
La masa molecular de la EPO es de 30-34<br />
kDa, de la cual cerca de 18 kDa<br />
corresponden a la cadena péptidica. Por<br />
tanto, aproximadamente el 40% de la<br />
molécula de EPO está formada por<br />
carbohidratos mayormente en la forma de<br />
complejos tipo glicanos [3] los que<br />
desempeñan un rol importante en la<br />
actividad biológica, la cual parece ser<br />
dependiente del número de residuos ácidos<br />
siálicos en la terminación de las cadenas<br />
de azúcar bi, tri y cuaternarias, siendo esta<br />
última forma isomérica predominante en<br />
su estructura. Se ha señalado que la<br />
pérdida de estos residuos resulta en un<br />
rápido aclaramiento de las moléculas de<br />
EPO en el hígado [4 - 7].<br />
La EPO es sintetizada en el hombre<br />
fundamentalmente en el riñón, en las<br />
células endoteliales de la corteza renal y<br />
de la médula externa. Liberada en sangre,<br />
se pone en contacto con su receptor<br />
específico en células precursoras a nivel<br />
del bazo y de la médula ósea,<br />
fundamentalmente eritroides, aunque<br />
también ha sido descrita su acción sobre<br />
los megacariocitos [8-12]. Al interactuar,<br />
inicia una compleja cascada de señales de<br />
transducción, la que puede ser inducida<br />
incluso en ausencia del ligando, en<br />
presencia de una forma mutada del<br />
receptor (por ejemplo reemplazo de<br />
cisteína en el dominio extracelular)<br />
[13,14]. Además, puede actuar como<br />
segundo mensajero e internalizarse.<br />
Diferentes estudios muestran su capacidad<br />
de incrementar notablemente los niveles<br />
de calcio intracelular [15].<br />
En la expansión/maduración de estas<br />
células precursoras in vivo, están<br />
involucrados otros componentes<br />
(citoquinas), tales como IL-13 y GM-CSF<br />
[16,17]. Con el empleo de líneas celulares