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Métodos para la evaluación... 31
MÉTODOS PARA LA EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD BIOLÓGICA DE
PREPARACIONES COMERCIALES DE ERITROPOYETINA HUMANA RECOMBINANTE
Lic. Natacha Reyes, Dra. Diadelis Remírez
Centro para el Control Estatal de la Calidad de los Medicamentos
Resumen
La obtención y comercialización de la EPO humana
recombinante (rhEPO) con fines clínicos son llevadas
a cabo por muchos centros biotecnológicos en el
mundo. Esta ha sido considerada como unos de los
productos de la Biotecnología que ha revolucionado
esta industria. Los estudios reconocen que el tipo de
línea celular huésped usada para la producción de
rhEPO, las condiciones de cultivo y los procesos de
purificación aplicados pueden todos afectar el perfil
de glicosilación de las preparaciones y por tanto
influenciar en la biopotencia final. Ensayos de
evaluación de la actividad biológica son parte de la
rutina de la liberación de lotes de las glicoproteínas
terapéuticas. En este trabajo se hace una revisión de
los diferentes métodos descritos para la evaluación de
potencia de preparaciones de rhEPO relacionando las
ventajas y desventajas reportadas de la aplicación en
cada caso. Se evidencia un continuo análisis y
mejoramiento de los métodos establecidos hasta el
momento así como la introducción de nuevos
bioensayos para rhEPO.
Palabras claves: eritropoyetina, ensayos de potencia,
glicoproteína terapéutica.
Introducción
La Eritropoyetina (EPO), es el principal
regulador de la eritropoyesis en
mamíferos. Esta constituye una hormona
sialoglicoproteica que contiene 165
aminoácidos que forman una cadena
simple polipeptídica con 2 enlaces
disulfuro intra-cadena (Cys 7-161 y Cys 29-
33 ) y 4 sitios de glicosilación, tres uniones
N (Asn 24 , Asn 38 y Asn 83 ) y una unión O
(Ser 126 ) glicosídicas [1,2].
La masa molecular de la EPO es de 30-34
kDa, de la cual cerca de 18 kDa
corresponden a la cadena péptidica. Por
tanto, aproximadamente el 40% de la
molécula de EPO está formada por
carbohidratos mayormente en la forma de
complejos tipo glicanos [3] los que
desempeñan un rol importante en la
actividad biológica, la cual parece ser
dependiente del número de residuos ácidos
siálicos en la terminación de las cadenas
de azúcar bi, tri y cuaternarias, siendo esta
última forma isomérica predominante en
su estructura. Se ha señalado que la
pérdida de estos residuos resulta en un
rápido aclaramiento de las moléculas de
EPO en el hígado [4 - 7].
La EPO es sintetizada en el hombre
fundamentalmente en el riñón, en las
células endoteliales de la corteza renal y
de la médula externa. Liberada en sangre,
se pone en contacto con su receptor
específico en células precursoras a nivel
del bazo y de la médula ósea,
fundamentalmente eritroides, aunque
también ha sido descrita su acción sobre
los megacariocitos [8-12]. Al interactuar,
inicia una compleja cascada de señales de
transducción, la que puede ser inducida
incluso en ausencia del ligando, en
presencia de una forma mutada del
receptor (por ejemplo reemplazo de
cisteína en el dominio extracelular)
[13,14]. Además, puede actuar como
segundo mensajero e internalizarse.
Diferentes estudios muestran su capacidad
de incrementar notablemente los niveles
de calcio intracelular [15].
En la expansión/maduración de estas
células precursoras in vivo, están
involucrados otros componentes
(citoquinas), tales como IL-13 y GM-CSF
[16,17]. Con el empleo de líneas celulares