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Revisión sobre el factor... 19
destructivo de linfocitos y monocitos es
inhibido [20]. Experimentos con ratones
tratados con G-csf, mostraron protección
contra una dosis letal de lipopolisacáridos
y esta protección fue acompañada por una
disminución de los niveles de TNF -α en el
suero [21], animales con G-csf
sensibilizados con galactosamina fueron
protegidos del daño hepático mediado por
células T [22].
Estos efectos anti-inflamatorios del G-csf
fueron también observados en estudios in
vitro. La estimulación de sangre completa
humana con G-csf in vitro, en un rango de
concentraciones de 10 a 30 ng/ml, atenuó
significativamente la liberación inducida
por lipopolisacáridos de TNF-α, IL-1ß y
IFN-γ [23].
El mecanismo por el cual el G-csf ejerce
influencia en la liberación de citoquinas
linfociticas ha sido solo parcialmente
elucidado. Estudios por citometría de flujo
evidenciaron que el G-csf es capaz de
afectar directamente los monocitos sin la
participación de otros leucocitos y sus
mediadores; el G-csf parece inhibir los
procesos proteolíticos de la pro IL-1β a la
IL-1β madura [24].
Ensayos Biológicos para la
determinación de potencia de las
citoquinas
Los ensayos biológicos están basados en
los efectos biológicos de las citoquinas,
por ejemplo, la proliferación celular, la
actividad citotóxica/citostática, los efectos
cinéticos, la actividad antiviral, la
formación de colonias o la inducción o
secreción de otras moléculas de citoquinas
o no citoquinas [25].
Los bioensayos pueden usar los cultivos
primarios de células obtenidos de animales
o de líneas celulares autónomas o
dependientes de citoquinas. Estos ensayos
son raramente específicos para una
citoquina particular y pueden responder a
un número de citoquinas y a otras
moléculas tales como timocitos, por
ejemplo, ensayos basados en líneas
celulares de leucemia mieloide aguda. En
estos ensayos la especificidad para una
citoquina particular puede ser establecida
por el uso de un anticuerpo neutralizador
monoespecífico; esta aproximación es
crucial para confirmar la presencia de
citoquinas en muchas muestras biológicas.
En algunos casos los ensayos biológicos
pueden subestimar el contenido proteico
de citoquinas de una muestra biológica
debido a la presencia de moléculas
inhibitorias, por ejemplo, proteínas de
unión, receptores solubles, antagonistas
receptores o inhibidores de citoquinas tales
como (TGF-B) [26, 27]. Es también
probable que bioensayos pudieran
sobreestimar el contenido de citoquina de
una muestra debido a las interacciones
sinergísticas entre las citoquinas
individuales en la muestra [28].
Comparación de los bioensayos con los
inmunoensayos y los ensayos de unión al
receptor
Parece ser imposible distinguir, por el uso
de bioensayos, las especies moleculares
diferentes de algunas citoquinas, el
ejemplo clásico de esto son las IL-1 α y ß
las cuales, aunque son muy diferentes
estructuralmente, parecen poseer
propiedades biológicas idénticas, al menos
en células homólogas. En estos casos los
inmunoensayos pueden ser usados para
cuantificar específicamente las diferentes
formas moleculares sobre la base de la
proteína [29, 30]; estos ensayos se utilizan
como una alternativa a los ensayos
biológicos aunque ellos pueden detectar
las moléculas de citoquinas
biológicamente desnaturalizadas, así como
complejos de citoquina-receptor inactivos