AC 2005 Vol-1.pdf - Cecmed - Infomed

151 Trabajo experimental
Conteo total de microorganismos viables
aerobios por el método de placa vertida
La muestra para el frasco que contenía 120
mL fue homogeneizada por agitación. Con
una pipeta estéril se tomó 1 mL de cada
frasco a analizar y se depositó en 4 placas
petri estériles. Se añadió aproximadamente
de 15-20 mL de medio Agar para conteo
(APC) y medio Agar Cetrimide, fundido a
45 °C, en cada placa, se rotaron las
mismas en ambos sentidos y se dejaron
solidificar. Se invirtieron y se incubaron
de 30-35°C por 48 h las placas de APC y
de Agar Cetrimide. Posteriormente se
contaron las Unidades Formadoras de
Colonia por mililitro (UFC/mL) en cada
placa y se calculó el valor medio y se
multiplicó por el factor de dilución
expresándose los resultados en UFC/mL.
Conteo total de microorganismos aerobios
por el Método de filtración por membrana
El equipo de filtración lavado y enjuagado
con abundante agua destilada esterilizado
a 121°C por 20 minutos.
El proceso se realizó de la siguiente forma:
Una vez que la muestra de 500 mL fue
agitada, se añadieron 100 mL en el
embudo del equipo de filtración y se filtró
al vacío. Una vez terminada la filtración se
tomaron las membranas de 0.45 µm con
pinzas estériles y se depositaron en la
superficie de las placas con medio APC y
medio Agar Cetrimide. Se invirtieron y se
incubaron a 30-35 °C por 24 h las placas
de APC y Agar Cetrimide. Se contaron las
UFC presentes en la membrana y se
expresaron los resultados en UFC/mL.
Determinación de microorganismos
Para la preparación de estos medios de
cultivos, se siguieron las instrucciones del
fabricante (Catálogo de Medios de
Cultivos. Biocen, 2004-2005). Una vez
esterilizados y enfriados a 45 0 C, se
distribuyeron en placas petri estériles y se
dejaron solidificar.
- Agar Triptona Soya.
- Agar MacConkey.
- Agar Cetrimide.
- Agar ss.
Las colonias obtenidas en el método por
placa vertida y filtración por membrana se
aislaron a medio de aislamiento Agar
Triptona Soya por estría. Las placas fueron
incubadas de 30-35 0 C por 48 h.
Transcurrido este tiempo, se tomó una
asada de las colonias obtenidas en el
conteo y se sembró en medios
diferenciales por estría (Agar MacConkey,
Agar ss y Agar Cetrimide) por duplicado.
Se invirtieron y se incubaron a 30-35 °C
por 24 h.
Resultados y Discusión
En las Tablas 3 y 4, se muestran los
resultados del conteo de viables por el
método de placa vertida en los dos puntos
de muestreo.
En la misma, se puede apreciar que la
toma de muestra para el caso del punto de
salida del agua se tomó en tres frascos
estériles, los frascos fueron enumerados
según se fue almacenando el agua y así se
analizaron; el frasco 1 se analizó el primer
día; el frasco 2 el segundo día y el tercer
frasco el tercer día con vistas a comprobar
el nivel de contaminación. Resulta
apreciable que los frascos del primero,
segundo y tercer día, mostraban una baja
carga microbiana, lo cual pensamos
pudiera deberse a que cuando el agua es
obtenida del destilador sale con una
temperatura que impide que los
microorganismos proliferen.
Para el caso del Botellón, se observa que
la carga microbiana aumenta
considerablemente fuera de los límites, si