AC 2005 Vol-1.pdf - Cecmed - Infomed

132 Trabajo experimental
rápidos, exactos y lo más sencillos
posibles, que contribuyan al monitoreo de
la consistencia de producción de las
vacunas y al dinamismo de la propia
actividad reguladora. Por otra parte, es de
vital importancia para el CECMED
fortalecer la capacidad analítica de su
Laboratorio de Biológicos, lo cual aparece
reseñado en la Política Farmacéutica
Nacional, en aras de incrementar las
exigencias de calidad para productos de
tanto impacto como las vacunas.
Para el caso específico de la vacuna Hib,
resultaba esencial la evaluación de un
ensayo de inmunogenicidad confiable y
reproducible que pudiese ser utilizado, si
no para la liberación de lotes, al menos
para actividades relativas al monitoreo de
la consistencia de fabricación y la
estabilidad. Para el caso de la vacuna
Quimi – Hib esto adquiere una mayor
connotación tomando en consideración
que se trata de la primera vacuna contra el
Haemophilus influenzae tipo b que se
desarrolla en nuestro país y al hecho
trascendental de ser la primera vacuna
obtenida por vía sintética en el mundo.
En trabajos anteriores, se había
demostrado que, tanto la vacuna Vaxem,
como la Quimi-Hib, respondían en el
modelo ratón, sin embargo, dicha
respuesta resultaba inconsistente [10-11].
En cambio, la respuesta inmunológica que
se producía en el conejo cosntituía un
medidor más confiable de la actividad
biológica de este tipo de vacunas. De
hecho, éste es el ensayo seleccionado por
el fabricante para desde el punto de vista
biológico monitorear consistencia.
Para estandarizar el método, en primer
lugar se demostró que el éste es capaz de
detectar respuestas ante esquemas
diversos. Se esperaba que la vacuna
Vaxem mostrara en el esquema 0, 28 y 42
días (método II), una respuesta superior a
la exhibida bajo el esquema 0, 14 y 21
(típico de vacunas Hib-TT). De hecho esto
fue así para el lote 0731 (ver Tabla 1); sin
embargo, el lote 0831 mostró un
comportamiento similar frente a ambos
esquemas, lo cual suele pasar para lotes
con capacidad inmunogénica elevada. En
cuanto a su especificidad, pudo
demostrarse (Fig. 1), que las muestras que
seroconvierten poseen una absorbancia
que resulta al menos 4 veces superior a la
mostrada por los controles negativos, en
tanto no existieron diferencias
significativas entre el valor de corte
(establecido sobre la media de los
controles negativos) y la media de los
blancos.
El estudio de Robustez realizado, como
parte de la estandarización de este método
en conejos, arrojó que tanto el factor de
dilución como la composición del diluente
de muestra tienen influencia en el
desempeño del método. En el caso del
factor de dilución (ver Tabla 2), se observó
que los sueros debían ser diluidos al
menos 1/50, dilución que fue seleccionada
como óptima partiendo que en la 1/100 se
obtuvo el mismo resultado, y que al
utilizarlos sin diluir, se obtuvieron
respuestas inespecíficas como la del
método I, no representativas de la
respuesta anti-PRP que produjo dicha
muestra. Con respecto a la composición
del diluente, se pudo apreciar en la Tabla
3, que la no presencia de la sal disódica de
EDTA produjo una reducción notable en la
seroconversión.
En cambio, el lote de conjugado y las
diluciones ensayadas (1/5000 y 1/10000)
no tuvieron influencia en el desempeño del
método (ver Tabla 4). De igual forma se
evaluaron diferentes concentraciones de
recubrimiento y si el comportamiento del
recubrimiento utilizado por nosotros
(producido por LAGS), resultaba similar a