AC 2005 Vol-1.pdf - Cecmed - Infomed

128 Trabajo experimental
No obstante, para productos nuevos y
novedosos, la evaluación de
inmunogenicidad no debe ser excluida
hasta tanto se establezca la significación
biológica de los ensayos físico-químicos y
como una medida de la consistencia de
fabricación de este producto. Además, los
ensayos biológicos como éste, si bien no
resultan relevantes para la liberación
propiamente dicha, sí lo son para estudios
de estabilidad, vigilancia
postcomercialización y evaluación del
componente Hib en vacunas combinadas.
Para que tales ensayos puedan ser
utilizados por los laboratorios de la
Autoridad Reguladora de Medicamentos,
se requiere de su previa validación y/o
estandarización a fin de asegurar que estos
métodos analíticos proporcionen
resultados confiables durante los procesos
de evaluación para garantizar calidad,
seguridad y eficacia de los productos
farmacéuticos en general.
Tomando en consideración estos
antecedentes, nuestro trabajo se propuso
como objetivo fundamental estandarizar e
implementar un ensayo de
Inmunogenicidad para vacunas Hib en
nuestras condiciones, particularmente para
evaluar la vacuna Quimi-Hib.
Materiales y Métodos
Muestras
Se utilizaron muestras de vacuna contra
Hib de 2 fabricantes diferentes: Vaxem-
Hib, procedente de Chiron Vaccines
(vacuna de polisacárido, acoplada a
toxoide diftérico mutante CRM197) y
Quimi-Hib, producida por el Centro de
Ingeniería Genética y Biotecnología
(CIGB) y el Centro de Estudios de
Antígenos Sintéticos de la Universidad de
la Habana (LAGS) (vacuna de
polisacárido, obtenido por síntesis
química, conjugado a toxoide tetánico). En
total, se trabajó con 2 lotes de vacuna
Vaxem-Hib y 9 lotes de vacuna Quimi-
Hib.
Patrones y Reactivos
Se utilizó un suero control positivo del
CIGB, con asignación de 20 mg/mL en
unidades arbitrarias.
Los reactivos biológicos para el montaje
del ELISA se adquirieron de fabricantes
reconocidos y certificados (SIGMA y
OXOID). Todos los reactivos químicos
utilizados en los inmunoensayos son de
calidad puro para análisis e igualmente
fueron adquiridos de proveedores
certificados como Merck y Riedel de
Häen.
Descripción del ensayo de
Inmunogenicidad para determinación
de anticuerpos anti-PRP producto de la
inmunización con vacunas Hib en
conejos
Se basa en la capacidad de los animales
(conejos) de levantar anticuerpos
específicos anti - PRP al ser inoculados
con dosis apropiadas de vacuna Hib, y la
determinación de la seroconversión, se
realiza por un ELISA de determinación de
anticuerpos anti-PRP.
Las muestras de vacuna Hib son
inoculadas a razón de 5 conejos F1 por
lote, según el esquema más apropiado para
cada tipo de vacuna. Una vez concluido
dicho esquema, los conejos son
desangrados por vía axilar y los sueros son
obtenidos por centrifugación a 2500 rpm
durante 10 minutos. Los sueros son
conservados a –70 °C hasta su uso.
Dichos sueros, son analizados por ELISA.
Para ello se recubre una placa microelisa
de 96 pocillos NUNC Maxisorp (de fondo
plano), con PRP acoplado a albúmina de
suero humano en PBS (concentración final