AC 2005 Vol-1.pdf - Cecmed - Infomed
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128 Trabajo experimental<br />
No obstante, para productos nuevos y<br />
novedosos, la evaluación de<br />
inmunogenicidad no debe ser excluida<br />
hasta tanto se establezca la significación<br />
biológica de los ensayos físico-químicos y<br />
como una medida de la consistencia de<br />
fabricación de este producto. Además, los<br />
ensayos biológicos como éste, si bien no<br />
resultan relevantes para la liberación<br />
propiamente dicha, sí lo son para estudios<br />
de estabilidad, vigilancia<br />
postcomercialización y evaluación del<br />
componente Hib en vacunas combinadas.<br />
Para que tales ensayos puedan ser<br />
utilizados por los laboratorios de la<br />
Autoridad Reguladora de Medicamentos,<br />
se requiere de su previa validación y/o<br />
estandarización a fin de asegurar que estos<br />
métodos analíticos proporcionen<br />
resultados confiables durante los procesos<br />
de evaluación para garantizar calidad,<br />
seguridad y eficacia de los productos<br />
farmacéuticos en general.<br />
Tomando en consideración estos<br />
antecedentes, nuestro trabajo se propuso<br />
como objetivo fundamental estandarizar e<br />
implementar un ensayo de<br />
Inmunogenicidad para vacunas Hib en<br />
nuestras condiciones, particularmente para<br />
evaluar la vacuna Quimi-Hib.<br />
Materiales y Métodos<br />
Muestras<br />
Se utilizaron muestras de vacuna contra<br />
Hib de 2 fabricantes diferentes: Vaxem-<br />
Hib, procedente de Chiron Vaccines<br />
(vacuna de polisacárido, acoplada a<br />
toxoide diftérico mutante CRM197) y<br />
Quimi-Hib, producida por el Centro de<br />
Ingeniería Genética y Biotecnología<br />
(CIGB) y el Centro de Estudios de<br />
Antígenos Sintéticos de la Universidad de<br />
la Habana (LAGS) (vacuna de<br />
polisacárido, obtenido por síntesis<br />
química, conjugado a toxoide tetánico). En<br />
total, se trabajó con 2 lotes de vacuna<br />
Vaxem-Hib y 9 lotes de vacuna Quimi-<br />
Hib.<br />
Patrones y Reactivos<br />
Se utilizó un suero control positivo del<br />
CIGB, con asignación de 20 mg/mL en<br />
unidades arbitrarias.<br />
Los reactivos biológicos para el montaje<br />
del ELISA se adquirieron de fabricantes<br />
reconocidos y certificados (SIGMA y<br />
OXOID). Todos los reactivos químicos<br />
utilizados en los inmunoensayos son de<br />
calidad puro para análisis e igualmente<br />
fueron adquiridos de proveedores<br />
certificados como Merck y Riedel de<br />
Häen.<br />
Descripción del ensayo de<br />
Inmunogenicidad para determinación<br />
de anticuerpos anti-PRP producto de la<br />
inmunización con vacunas Hib en<br />
conejos<br />
Se basa en la capacidad de los animales<br />
(conejos) de levantar anticuerpos<br />
específicos anti - PRP al ser inoculados<br />
con dosis apropiadas de vacuna Hib, y la<br />
determinación de la seroconversión, se<br />
realiza por un ELISA de determinación de<br />
anticuerpos anti-PRP.<br />
Las muestras de vacuna Hib son<br />
inoculadas a razón de 5 conejos F1 por<br />
lote, según el esquema más apropiado para<br />
cada tipo de vacuna. Una vez concluido<br />
dicho esquema, los conejos son<br />
desangrados por vía axilar y los sueros son<br />
obtenidos por centrifugación a 2500 rpm<br />
durante 10 minutos. Los sueros son<br />
conservados a –70 °C hasta su uso.<br />
Dichos sueros, son analizados por ELISA.<br />
Para ello se recubre una placa microelisa<br />
de 96 pocillos NUNC Maxisorp (de fondo<br />
plano), con PRP acoplado a albúmina de<br />
suero humano en PBS (concentración final