Tempo de Trombina - Medcorp

BC Thrombin Reagent
Intended Use
Reagent for the quantitative determination of the thrombin time in citrated human plasma.
Summary and Explanation
The determination of the thrombin time using BC Thrombin Reagent is suitable:
1. for monitoring fibrinolysis therapy 1,2 ,
2. for screening for disorders of fibrin formation and in cases of suspected severe
fibrinogen deficiency states 1,2 ,
3. for differentiating between a heparin-induced prolongation of the thrombin time
and fibrin formation disorders 1,2 .
Prolonged thrombin times are measured both in patients with disorders of fibrin polymerization
as well as during heparin treatment. Differentiation between these patient types
can be achieved using Batroxobin Reagent (Dade Behring Marburg GmbH, Code No.
OUOV).
Principle of the Method
Thrombin converts the fibrinogen in the plasma sample into fibrin, thus producing a
fibrin clot. The time taken for the fibrin clot to form is measured.
Reagents
Materials provided
BC Thrombin Reagent, Testkit, Code No. OWNA with
10 x for 5 mL BC Thrombin Reagent
1 x 50 mL Buffer Solution
Composition
BC Thrombin Reagent lyophilized: bovine thrombin, bovine albumin
Buffer Solution for BC Thrombin Reagent: HEPES (25 mmol/l), pH 7.4
Preservatives: 5-chloro-2-methyl-isothiazole-3-one (6 mg/l) and
2-methyl-isothiazole-3-one (2 mg/l)
Warnings and Precautions
For in vitro diagnostic use.
Preparation of the Reagent
Reconstitute the contents of a vial of BC Thrombin Reagent in the labelled quantity of
buffer solution. After reconstitution, as well as for every further use, the reagent solution
must be warmed to +37 °C and maintained at this temperature for 15 minutes
(not necessary if the BCS ® is used).
Mix carefully once more before using.
Storage and Stability
Stored unopened at +2 to +8 °C, the BC Thrombin Reagent can be used up to the
expiration date given on the label.
Stability after reconstitution:
at + 37 °C 8 hours
at + 15 °C 48 hours
at + 2 to +8 °C 7 days
at -20 °C 1 month
The reconstituted reagent can be frozen once in the original vial. The buffer solution is
stable for 12 weeks at +2 to +25 °C once opened.
Different coagulation analyzers have individual stability data.
Instruments
BC Thrombin Reagent can be used in a great number of coagulation analyzers.
Observe the operating instructions issued by the analyzer’s manufacturer!
Materials required but not provided
Control Plasma N, Code No. ORKE
Dade ® Ci-Trol ® Level 1, Bestell-Nr. 291070*
Coagulation analyzer (see Chapter titled ”Limitations of the Procedure”)
Pipettes
Plastic test tubes
Distilled water
* not available in the US
Specimens
To obtain the plasma, carefully mix 1 part sodium citrate solution (0.11 mol/l) with 9
parts venous blood, avoiding the formation of foam. Centrifuge immediately at no less
than 1,500 x g for at least 10 minutes. Remove supernatant plasma and store at +15
to +25 °C until the test.
Stability of the sample at +15 to +25 °C: 4 hours.
Measure heparin-containing plasma samples within 2 hours.
In the US please refer to the NCCLS Document H21-A2, entitled "Collection, Transport
and Processing of Blood Specimens for Coagulation Testing and Performance of Coagulation
Assays".
Do not freeze the samples!
Procedure
Manual:
Pipette into a test tube prewarmed to +37 °C:
Citrated plasma 100 µL
BC Thrombin Reagent (+37 °C) 250 µL
On adding the reagent, determine the coagulation time (e.g. time for the initial
absorbance to increase by 0.06)
Automatic:
Special instructions for coagulation analyzers may be obtained from Dade Behring by
request.
Internal Quality Control
Normal range: Control Plasma N
Dade ® Ci-Trol ® Level 1
Pathological range: Use a normal plasma adjusted to an appropriate concentration
(e.g., 0.2 IU/mL) with the same form of heparin that is to
be assayed in the sample to be tested. Multiple determinations
should be run to establish a confidence interval.
A control should be measured at least every 8 hours on each testing day. Test
control plasma in the same manner as patient samples.
For a normal range control, the analytical value obtained must be within the assigned
range given for the control in the lot-dependent table of values.
For a pathological range control, the value obtained should be within the confidence
interval established by the laboratory.
If the measured control value lies outside the confidence level previously established,
then the coagulation analyzer and the reagents should be examined.
Results
The results are given in seconds.
Limitations of the Procedure
There are appropriate coagulation analyzers for which Dade Behring provides operating
instructions. The utilization of BC Thrombin Reagent in other coagulation analyzers
must be validated by the testing laboratory. In doing so, performance data other
than that provided may be obtained.
Carry-over of traces of thrombin may interfere with subsequent coagulation analyses.
Therefore only single-use plastic materials should be used.
Expected Values
In a study of 39 citrated plasma samples from healthy adults using BC Thrombin Reagent
on the BCT**, the calculated 95th percentile was determined to be < 21 seconds.
Systematic deviations from this range may be due to the instrument used. If necessary,
the laboratory may have to establish its own reference interval.
Specific Performance Characteristics
Precision
Over a five day period, precision studies (one run per day in replicates of eight) were
performed by assaying normal and pathological control plasmas. For normal control plasmas
(n = 40), the within-run precision ranged from 2.2 to 2.6%, while the total precision
ranged from 3.8 to 4.7%. For a pathological control plasma (n = 24), the within-run precision
was 6.2%, while the total precision was 7.4%.
Method Comparison
A method comparison study was performed with the BC Thrombin Reagent and
another commercially available assay. A total of 67 patient plasma samples (20 from
normal blood donors, 27 from patients undergoing heparin therapy, and 20 from patients
with increased fibrin degradation products) were tested by both methods. Regression
analysis determined a correlation coefficient of 0.93, a y-intercept of -5.55
seconds and a slope of 1.48.
Bibliography
1. Sirridge, M.S. Laboratory evaluation of hemostasis. 2nd Ed. Philadelphia: Lea &
Febiger; 1974: 148
2. Biggs, R. Human blood coagulation, haemostasis and thrombosis. 2nd Ed. Oxford:
Blackwell Scientific Publications; 1976: 722
Dade and Ci-Trol are registered trademarks of Dade Behring, Inc. in the USA, Germany
and other countries.
BCS is a registered trademark of Dade Behring Marburg GmbH in the USA, in Germany
and other countries.
** BCT is a registered trademark of Dade Behring Marburg GmbH in Germany and
other countries.
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
www.dadebehring.com
USA Distributor:
Dade Behring Inc.
Newark, DE 19714 U.S.A.
OWNA G11 E0540 (1111) H 1 Edition September 2003

BC-Thrombin-Reagenz
Anwendungsbereich
Reagenz zur quantitativen Bestimmung der Thrombinzeit in humanem Citratplasma.
Diagnostische Bedeutung
Die Bestimmung der Thrombinzeit mit BC-Thrombin-Reagenz ist geeignet:
1. zur Überwachung der Fibrinolyse-Therapie 1,2 ,
2. als Suchtest auf Störungen der Fibrinbildung bzw. bei Verdacht auf schwere Fibrinogenmangelzustände
1,2 ,
3. zur Unterscheidung zwischen einer heparinbedingten Verlängerung der Thrombinzeit
und Fibrinbildungsstörungen 1,2 .
Sowohl bei Störungen der Fibrinpolymerisation als auch bei Vorliegen von Heparin
wird eine verlängerte Thrombinzeit gemessen. Eine Differenzierung kann mit Hilfe
des Batroxobin-Reagenzes (Dade Behring Marburg GmbH, Bestell-Nr. OUOV) erfolgen.
Prinzip der Methode
Thrombin wandelt das in der Plasmaprobe enthaltene Fibrinogen in Fibrin um,
wodurch ein Gerinnsel entsteht. Es wird die Zeit bis zur Gerinnselbildung gemessen.
Reagenzien
Inhalt der Handelspackung
BC-Thrombin-Reagenz, Testkit, Bestell-Nr. OWNA mit
10 x für 5 ml BC-Thrombin-Reagenz
1 x 50 ml Pufferlösung
Zusammensetzung
BC-Thrombin-Reagenz lyophilisiert: Thrombin vom Rind, Albumin vom Rind
Pufferlösung für BC-Thrombin-Reagenz: HEPES (25 mmol/l), pH 7,4
Konservierungsmittel: 5-Chlor-2-methyl-isothiazol-3-on (6 mg/l) und
2-Methyl-isothiazol-3-on (2 mg/l)
Warnungen und Vorsichtsmaßnahmen
Nur zur in vitro diagnostischen Anwendung.
Vorbereitung der Reagenzien
Inhalt einer Abfüllung BC-Thrombin-Reagenz mit der auf dem Etikett angegebenen
Menge Pufferlösung einlösen. Nach dem Einlösen und vor jedem weiteren Gebrauch
ist die Reagenzlösung auf +37 °C zu erwärmen und 15 min lang bei dieser Temperatur
zu halten (kann bei Verwendung am BCS ® entfallen). Vor Gebrauch noch einmal
vorsichtig mischen.
Haltbarkeit und Lagerungsbedingungen
BC-Thrombin-Reagenz ist, ungeöffnet bei +2 bis +8 °C gelagert, bis zu dem auf dem
Etikett angegebenen Datum verwendbar.
Stabilität nach Rekonstitution:
bei +37 °C 8 Stunden
bei +15 °C 48 Stunden
bei +2 bis +8 °C 7 Tage
bei -20 °C 1 Monat
Das gelöste Reagenz kann einmal in der Originalflasche eingefroren werden.
Die Stabilität der Pufferlösung nach dem erstmaligen Öffnen beträgt bei +2 bis +25 °C
12 Wochen.
Die verschiedenen Gerinnungsmeßgeräte haben individuelle Stabilitätsdaten.
Geräte
BC-Thrombin-Reagenz kann mit einer Vielzahl von Gerinnungsmeßgeräten verwendet
werden.
Bedienungsanleitung des Geräteherstellers beachten!
Zusätzlich benötigte Materialien
Kontroll-Plasma N, Bestell-Nr. ORKE
Dade ® Ci-Trol ® Level 1, Bestell-Nr. 291070*
Gerinnungsmeßgerät (siehe Kapitel "Einschränkungen der Testdurchführung")
Pipetten
Plastikröhrchen
destilliertes Wasser
* nicht in den USA erhältlich
Untersuchungsmaterial
Zur Plasmagewinnung 1 Teil Natriumcitrat-Lösung (0,11 mol/l) mit 9 Teilen Venenblut
sorgfältig unter Vermeidung von Schaumbildung mischen. Sofort mindestens 10 min
bei mindestens 1.500 x g zentrifugieren, überstehendes Plasma abhebern und bis
zum Test bei +15 bis +25 °C aufbewahren.
Stabilität der Probe bei +15 bis +25 °C: 4 Stunden.
Heparinhaltige Plasmen innerhalb von 2 Stunden messen.
In den USA bitte auf das NCCLS Dokument H21-A2 mit dem Titel "Collection, Transport
and Processing of Blood Specimens for Coagulation Testing and Performance of Coagulation
Assays" beziehen.
Proben nicht einfrieren!
Testdurchführung
Manuell:
In ein auf +37 °C vorgewärmtes Teströhrchen pipettieren:
Citratplasma 100 µl
BC-Thrombin-Reagenz (+37 °C) 250 µl
Mit Zugabe des Reagenzes Gerinnungszeit (z. B. Zeit für die Zunahme der
Anfangsextinktion um 0,06) bestimmen
Automatisch:
Spezielle Vorschriften für Gerinnungsmeßgeräte sind von Dade Behring auf Anfrage
erhältlich.
Interne Qualitätskontrolle
Normalbereich: Kontroll-Plasma N
Dade ® Ci-Trol ® Level 1
Pathologischer Bereich: Es ist ein Normalplasma, das mit einer geeigneten Konzentration
(z.B. 0,2 IU/ml) des zu messenden Heparins
aufgestockt wurde, einzusetzen. Zur Festlegung eines
Vertrauensbereichs sind mehrere Bestimmungen durchzuführen.
Mindestens alle 8 Stunden an jedem Testtag sollten Kontrollen gemessen werden.
Kontroll-Plasmen sind wie Patientenproben einzusetzen.
Der Meßwert für die Normalkontrolle muß im Sollbereich liegen, der in der chargenabhängigen
Wertetabelle der Kontrolle angegeben ist.
Der Wert für die pathologische Kontrolle sollte innerhalb des im Labor ermittelten
Vertrauensbereiches liegen.
Liegt der gemessene Kontrollwert außerhalb des vorher festgelegten Vertrauensbereiches,
sollten Gerinnungsmeßgerät und Reagenzien überprüft werden.
Auswertung
Das Meßergebnis wird in Sekunden angegeben.
Einschränkungen der Testdurchführung
Es sind Gerinnungsmeßgeräte geeignet, für die Dade Behring Anwendungsvorschriften
bereitstellt. Die Verwendung von BC-Thrombin-Reagenz an anderen Gerinnungsmeßgeräten
muß vom Untersuchungslabor validiert werden. Dabei können
andere als die angegebenen Leistungsdaten erhalten werden.
Eine Verschleppung von Spuren von Thrombin kann nachfolgende Gerinnungsanalysen
stören. Daher nur Einmal-Plastikmaterial verwenden.
Erwartete Werte
In einer Studie an 39 Citratplasmen gesunder Erwachsener wurde mit BC-Thrombin-
Reagenz am BCT** eine 95. Perzentile von < 21 Sekunden berechnet.
Systematische Abweichungen von diesem Bereich können gerätebedingt sein. Gegebenenfalls
muß ein eigener Referenzbereich durch das Labor erstellt werden.
Leistungsmerkmale des Tests
Präzision
Eine Präzisionsstudie wurde über fünf Tage an normalen und pathologischen Plasmen
durchgeführt (8-fach-Bestimmungen pro Lauf). Für normale Kontroll-Plasmen (n
= 40) lag die Präzision in der Serie zwischen 2,2 und 2,6 %, die gesamte Präzision
zwischen 3,8 und 4,7 %. Für ein pathologisches Plasma (n = 24) betrug die Präzision
in der Serie 6,2 %, die gesamte Präzision 7,4 %.
Methodenvergleich
Ein Methodenvergleich wurde mit BC-Thrombin-Reagenz und einer anderen kommerziellen
Thrombinzeit-Bestimmung durchgeführt. Insgesamt 67 Plasmen (20 von
normalen Blutspendern, 27 von Patienten unter Heparin-Therapie und 20 von Patienten
mit erhöhten Fibrinspaltprodukten) wurden mit beiden Methoden untersucht. Eine
Regressionsanalyse ergab einen Korrelationskoeffizienten von 0,93, einen y-Achsenabschnitt
von -5,55 Sekunden und eine Steigung von 1,48.
Literatur
siehe Seite 1.
Dade und Ci-Trol sind eingetragene Marken der Dade Behring Inc. in den USA,
Deutschland und anderen Ländern.
BCS ist eine eingetragene Marke der Dade Behring Marburg GmbH in den USA,
Deutschland und anderen Ländern.
** BCT ist eine eingetragene Marke der Dade Behring Marburg GmbH in Deutschland
und anderen Ländern.
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
www.dadebehring.com
OWNA G11 E0540 (1111) H 2 Ausgabe September 2003

BC Réactif Thrombine
Domaine d’utilisation
Réactif pour la détermination quantitative du temps de thrombine dans le plasma
citraté humain.
Intérêt diagnostique
La détermination du temps de thrombine à l’aide du BC Réactif Thrombine est indiquée
:
1. pour la surveillance des traitements fibrinolytiques 1,2 ,
2. comme test de dépistage des troubles de la formation de fibrine ou en cas de
suspicion de déficit grave en fibrinogène 1,2 ,
3. pour différencier entre un allongement du temps de fibrine dû à l’héparine et des
troubles de la formation de fibrine 1,2 .
Le temps de thrombine est trouvé allongé aussi bien en cas de troubles de polymérisation de la
fibrine qu’en présence d’héparine. La différenciation peut se faire en utilisant le Réactif Batroxobine
(Dade Behring Marburg GmbH, code OUOV).
Principe de la méthode
La thrombine transforme le fibrinogène contenu dans l’échantillon plasmatique en
fibrine, entraînant la formation d’un caillot. Le temps jusqu’à la formation du caillot est
mesuré.
Réactifs
Conditionnement
BC Réactif Thrombine, coffret, code OWNA, contenant
10 x pour 5 ml de BC Réactif Thrombine
1 x 50 ml de Solution tampon
Composition
BC Réactif Thrombine, lyophilisé : thrombine et albumine bovines
Solution tampon pour BC Réactif Thrombine : Hépès (25 mmol/l), pH 7,4
Conservateurs : 5-chloro-2-méthyl-4-isothiazol-3-one (6 mg/l) et
2-méthyl-4-isothiazol-3-one (2 mg/l)
Mise en garde et précaution d’emploi
Réservé à un usage de diagnostic in vitro.
Préparation des réactifs
Reconstituer le contenu d’un flacon de BC Réactif Thrombine avec le volume de
Solution tampon indiqué sur l’étiquette. Une fois reconstitué et avant toute utilisation,
porter le réactif à +37 °C et le laisser 15 minutes à cette température (étape qui peut
être négligée sur le BCS ® ). Agiter de nouveau avec précaution avant emploi.
Stabilité et conditions de conservation
Conservé à +2/+8 °C avant l’ouverture du flacon, le BC Réactif Thrombine peut être
utilisé jusqu’à la date de péremption indiquée sur l’étiquette.
Stabilité après reconstitution :
à +37 °C 8 heures
à +15 °C 48 heures
à +2/+8 °C 7 jours
à -20 °C 1 mois
Le réactif reconstitué peut être congelé une fois dans son flacon d’origine.
La stabilité de la Solution tampon conservée à +2/+25 °C après ouverture du flacon
est de 12 semaines.
Chaque appareil de coagulation a des données de stabilité spécifiques.
Appareils de coagulation
Le BC Réactif Thrombine peut être utilisé sur un grand nombre d’appareils de coagulation.
Respecter les instructions du manuel d’utilisation du fabricant de l’appareil !
Autres réactifs et matériel nécessaires
Plasma de contrôle N, code ORKE
Dade ® Ci-Trol ® Niveau 1, code 291070*
Appareil de coagulation (cf. paragraphe « Limites de réalisation du test »)
Pipettes
Tubes en plastique
Eau distillée
* non disponible aux USA
Echantillons à tester
Pour obtenir les échantillons plasmatiques, mélanger 1 volume de solution de citrate
de sodium (0,11 mol/l) avec 9 volumes de sang veineux en évitant la formation de
mousse. Centrifuger immédiatement au moins 10 minutes à au moins 1 500 x g,
prélever le plasma surnageant, et le conserver à +15/+25 °C jusqu’au moment du
test.
Stabilité de l’échantillon à +15/+25 °C : 4 heures.
Tester les plasmas contenant de l’héparine dans les 2 heures.
Aux USA, se reporter au document NCCLS H21-A2 « Collection, Transport and Processing
of Blood Specimens for Coagulation Testing and Performance of Coagulation
Assays ».
Réalisation du test
Méthode manuelle :
Distribuer dans un tube à essai préchauffé à +37 °C :
Plasma citraté 100 µl
BC Réactif Thrombine (+37 °C) 250 µl
A partir de la distribution du Réactif mesurer le temps de coagulation (par ex. temps
écoulé pour une augmentation de densité optique de 0,06).
Méthode automatique :
Des adaptations spécifiques aux différents appareils de coagulation sont envoyées
sur demande par Dade Behring.
Contrôle de qualité interne
Domaine normal : Plasma de contrôle N
Dade ® Ci-Trol ® Niveau 1
Domaine thérapeutique : utiliser un plasma normal enrichi avec la concentration appropriée
(par ex. 0,2 UI/ml) de l’héparine à mesurer. Pour
déterminer un domaine de confiance, effectuer plusieurs
dosages.
Introduire des contrôles au moins toutes les 8 heures sur une journée de travail.
Traiter les contrôles comme des échantillons de patients.
La valeur mesurée pour le contrôle normal doit être trouvée à l’intérieur du domaine
théorique indiqué dans le tableau des valeurs du contrôle spécifique à chaque lot.
La valeur mesurée pour le contrôle pathologique doit être trouvée à l’intérieur du
domaine de confiance déterminé par le laboratoire.
Si les valeurs obtenues sortent des domaines de confiance correspondants, procéder
au contrôle des réactifs et de l’appareil de coagulation utilisés.
Exploitation
Les résultats sont exprimés en secondes.
Limites de réalisation du test
Dade Behring met à la disposition des laboratoires des protocoles d’adaptation pour
tous les appareils de coagulation appropriés pour la réalisation du test. Si un laboratoire
veut utiliser le BC Réactif Thrombine sur un autre appareil de coagulation, il
devra le valider préalablement. Des valeurs différentes de celles indiquées comme
caractéristiques du test peuvent alors être obtenues.
Un transfert de traces de thrombine peut perturber les analyses de coagulation ultérieures.
Aussi ne doit-on utiliser que du matériel en plastique à usage unique.
Valeurs attendues
Une étude portant sur 39 plasmas citratés de sujets sains a été effectuée avec le BC
Réactif Thrombine sur le BCT**. Le 95ème percentile a été trouvé < 21 secondes.
Des déviations systématiques par rapport à ce domaine peuvent être dues à
l’appareil utilisé. Eventuellement, le laboratoire devra déterminer son propre domaine
de référence.
Caractéristiques du test
Précision
Une étude de précision a été effectuée sur 5 jours avec des plasmas normaux et
pathologiques (8 dosages par série). Avec les plasmas de contrôle normaux (n = 40),
la précision a été trouvée entre 2,2 et 2,6% pour la répétabilité, et entre 3,8 et 4,7%
pour la précision globale. Avec les plasmas pathologiques (n = 24), la précision a été
trouvée à 6,2% pour la répétabilité, et à 7,4% pour la précision globale.
Comparaison avec une autre méthode
Une étude comparative a été effectuée entre le BC Réactif Thrombine et un autre test
de temps de thrombine du commerce. Au total, 67 plasmas ont été testés avec les
deux méthodes (20 provenant de donneurs de sang normaux, 27 de patients sous
héparinothérapie et 20 de patients avec des produits de dégradation de la fibrine
augmentés). Une analyse de régression a donné un coefficient de corrélation de
0,93, une intersection de l’axe des y à - 5,55 secondes, et une pente de 1,48.
Littérature
Cf. page 1.
Dade et Ci-Trol sont des marques déposées de Dade Behring Inc. aux USA, en Allemagne
et dans d’autres pays.
BCS est une marque déposée de Dade Behring Marburg GmbH aux USA, en Allemagne
et dans d’autres pays.
** BCT est une marque déposée de Dade Behring Marburg GmbH en Allemagne et
dans d’autres pays.
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
www.dadebehring.com
OWNA G11 E0540 (1111) H 3 Edition Septembre 2003

BC Reagente Trombina
Settore d’impiego
Reagente per la determinazione quantitativa del tempo di trombina nel plasma umano
citratato.
Significato diagnostico
La determinazione del tempo di trombina con il BC Reagente Trombina è adatta per:
1. il monitoraggio della terapia fibrinolitica 1,2 ;
2. lo screening dei disturbi della fibrinogenesi o di sospetta carenza di fibrinogeno 1,2 ;
3. la differenziazione tra un prolungamento del tempo di trombina dovuto all’eparina
ed altri disturbi della fibrinogenesi 1,2 .
Sia nei disturbi della polimerizzazione della fibrina, sia in presenza di eparina, si osserva
un tempo di trombina più lungo. Una differenziazione tra questi tipi di paziente
si può avere con l’aiuto del Reagente Batroxobina (Dade Behring Marburg GmbH,
codice OUOV).
Principio del metodo
La trombina trasforma in fibrina il fibrinogeno contenuto nel campione di plasma, per
cui si forma il coagulo. Si determina quindi il tempo di formazione del coagulo.
Reagenti
Contenuto della confezione
BC Reagente Trombina, kit, codice OWNA con
10 x 5 mL BC Reagente Trombina
1 x 50 mL Soluzione tampone
Composizione
BC Reagente Trombina, liofilizzato: trombina bovina, albumina bovina.
Soluzione tampone per BC Reagente Trombina: HEPES (25 mmol/L), pH 7,4.
Conservanti: 5-cloro-2-metil-isotiazolo-3-one (6 mg/L)
2-metil-isotiazolo-3-one (2 mg/L).
Avvertenze e precauzioni
1. Solo per uso diagnostico in vitro.
Preparazione dei reagenti
Ricostituire il contenuto di un flacone di BC Reagente Trombina con il quantitativo di
soluzione tampone indicato sull’etichetta. Dopo ricostituzione e prima di qualsiasi
uso, riscaldare la soluzione di reagente a +37 °C e mantenerla a questa temperatura
per 15 minuti (non necessario se usata sul BCS ® ). Mescolare accuratamente ancora
una volta prima dell’uso.
Conservazione e stabilità
Il BC Reagente Trombina sigillato, conservato a +2/+8 °C, può essere utilizzato fino
alla data di scadenza indicata sull’etichetta.
Stabilità dopo ricostituzione :
a +37 °C 8 ore
a +15 °C 48 ore
a +2/+8 °C 7 giorni
a -20 °C 1 mese
Il reagente ricostituito può essere congelato, nella confezione originale, una sola
volta. La stabilità della soluzione tampone, dopo l’apertura, è di 12 settimane se conservata
a +2/+25 °C.
I vari analizzatori per coagulazione hanno dati di stabilità individuali.
Apparecchiature
Il BC Reagente Trombina può essere utilizzato con vari analizzatori per coagulazione.
Attenersi alle modalità d’uso indicate dal produttore dello strumento.
Altro materiale necessario
Plasma di controllo N, codice ORKE
Dade ® Ci-Trol ® , Livello 1, codice 291070*
Analizzatore per coagulazione (v. capitolo "Limitazioni della esecuzione del test").
Pipette
Provette in plastica
Acqua distillata
* non disponibile negli USA
Campioni in esame
Per la preparazione del plasma, mescolare accuratamente 1 parte della soluzione di
citrato di sodio (0,11 mol/L) con 9 parti di sangue venoso, evitando la formazione di
schiuma. Centrifugare subito per almeno 10 min. a non meno di 1.500 x g.
Rimuovere il plasma sopranatante e conservarlo a +15/+25 °C fino al momento del
test.
Stabilità del campione +15/+25 °C: 4 ore.
Misurare il campione di plasma contenenti eparina entro 2 ore.
Negli USA fare riferimento al documento NCCLS H-21-A2 dal titolo: "Collection,
Transport and Processing of Blood Specimens for Coagulation Testing and Performance
of Coagulation Assay"
Non congelare i campioni!
Esecuzione del test
Manuale:
Pipettare in una provetta preriscaldata a +37 °C:
Plasma citratato 100 µL
BC Reagente Trombina (+37 °C) 250 µL
All’aggiunta del reagente, determinare il tempo di formazione del coagulo (per es.
tempo di incremento dell’estinzione iniziale di 0,06).
Automatico:
Presso la Dade Behring sono disponibili, su richiesta, speciali istruzioni per analizzatori
per coagulazione.
Controllo di qualità interno
Intervallo normale: Plasma di controllo N
Dade ® Ci-Trol ® Livello 1
Intervallo patologico: Utilizzare un plasma normale tarato ad un’opportuna concentrazione
(per es.: 0,2 UI/mL) con lo stesso tipo di eparina da
testare nel campione in esame. E’ opportuno eseguire numerose
determinazioni per stabilire un intervallo di riferimento.
I controlli dovrebbero essere misurati almeno 8 ore 8 durante il ciclo analitico. I plasmi
di controllo vanno utilizzati nello stesso modo dei campioni.
Per il controllo nell’intervallo normale, il valore ottenuto deve trovarsi entro l’intervallo
teorico riportato nella tabella dei valori lotto-dipendente.
Per il controllo nell’intervallo patologico, il valore ottenuto dovrebbe trovarsi entro
l’intervallo di accettabilità stabilito dal laboratorio.
Se il valore misurato del controllo si trova al di fuori dell’intervallo di accettabilità precedentemente
determinato, l’analizzatore per coagulazione ed i reagenti devono essere
esaminati
Risultati
Il risultato viene espresso in secondi.
Limitazioni della procedura
Sono adatti analizzatori per coagulazione per i quali la Dade Behring fornisce le istruzioni
d’uso. L’utilizzo del BC Reagente Trombina, su altri analizzatori per coagulazione,
deve essere validato dal laboratorio che esegue il test. In questo caso si possono
avere dati sulla performace diversi da quelli indicati. Un trascinamento di tracce di
fibrina può interferire sulla successiva analisi coagulativa. Pertanto utilizzare materiale
in plastica monouso.
Valori attesi
In uno studio di 39 campioni di plasma citratato di adulti sani, testati con il BC
Reagente Trombina sul BCT**, il 95° percentile calcolato è stato < 21 secondi.
Deviazioni sistematiche dall’intervallo indicato possono dipendere dagli strumenti in
uso. E’ opportuno che ogni laboratorio stabilisca un proprio intervallo di riferimento.
Caratteristiche specifiche del test
Precisione
Durante un periodo di cinque giorni, sono stati eseguiti studi di precisione (un test al
giorno replicato otto volte), analizzando plasmi di controllo normali e patologici. Con
plasmi di controllo normali (n = 40), la precisione intra-serie era compresa tra 2,2 e
2,6%, mentre la precisione totale era compresa tra 3,8 e 4,7%. Con plasmi di controllo
patologici (n = 24), la precisione intra-serie era del 6,2%, mentre la precisione
totale era del 7,4%.
Confronto tra metodi
Uno studio di confronto tra metodi è stato eseguito con il BC Reagente Trombina ed
un altro metodo disponibile in commercio. Un totale di 67 campioni di plasmi di paziente
(20 da donatori di sangue normali, 27 da pazienti sottoposti a terapia eparinica e
20 pazienti con prodotti di degradazione della fibrina aumentati) sono stati testati con
entrambi i metodi. L’analisi di regressione ha dato un coefficiente di correlazione di
0,93, un’intercetta sull’asse Y di -5,55 secondi ed una pendenza di 1,48.
Bibliografia
Vedi Pagina 1.
Dade e Ci-Trol sono marchi registrati della Dade Behring Marburg GmbH Inc. negli
USA, in Germania e negli altri Paesi.
BCS è un marchio registrato della Dade Behring Marburg GmbH negli USA, in Germania
e negli altri Paesi.
** BCT è un marchio registrato della Dade Behring Marburg GmbH in Germania e
negli altri Paesi.
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
www.dadebehring.com
OWNA G11 E0540 (1111) H 4 Edizione Settembre 2003

Reactivo BC de trombina
Campos de aplicación
Reactivo para la determinación cuantitativa del tiempo de trombina en plasmas humanos
citratados.
Significado diagnóstico
La determinación del tiempo de trombina con el Reactivo BC de trombina es apropiada:
1. para el control la terapéutica fibrinolítica 1,2 ,
2. como test de búsqueda de anomalías en la formación de la fibrina o cuando existe
la sospecha de estados graves de deficiencia de fibrinógeno 1,2 ,
3. para distinguir entre una prolongación del tiempo de trombina debido a la heparina
y trastornos en la formación de la fibrina 1,2 .
Un tiempo de trombina prolongado se encuentra tanto en las anomalías de la polimerización
de la fibrina como ante la presencia de heparina. Una diferenciación se puede
llevar a cabo con la ayuda del reactivo Batroxobina (Dade Behring Marburg
GmbH, N° de pedido OUOV).
Principio del método
La trombina transforma el fibrinógeno existente en la muestra de plasma en fibrina,
originando así la formación de un coágulo. Se mide el tiempo necesario para la formación
de éste.
Reactivos
Contenido del envase comercial
Reactivo BC de Trombina, testkit, N° de pedido OWNA con
10 x para 5 ml de Reactivo BC de trombina
1 x 50 ml de Solución tampón
Composición
Reactivo BC de trombina, liofilizado: trombina bovina, albúmina bovina.
Solución tampón para el Reactivo BC de trombina: HEPES (25 mmol/l), pH 7,4
Agente de conservación: 5-cloro-2-metil-isotialzol-3-ona (6 mg/l) y
2-metil-isotiazol-3-ona (2 mg/l)
Advertencias y medidas de seguridad
Sólo para ser utilizado en diagnósticos in vitro.
Preparación de reactivos
Disolver el contenido de un frasco de Reactivo BC de trombina con la cantidad de
solución tampón indicada en la etiqueta. Después de disolver y cada vez que se
vuelva a usar la solución del reactivo, calentarla a +37 °C y mantenerla a esta temperatura
durante 15 min. (puede no ser necesario al usar el BCS ® ). Mezclar cuidadosamente
una vez más antes de usar.
Estabilidad y almacenaje
El Reactivo BC de trombina aún cerrado y conservado a una temperatura entre +2 y
+8 °C puede ser utilizado hasta la fecha de vencimiento dada en la etiqueta.
Estabilidad después de la reconstitución:
a +37 °C
8 horas
a +15 °C
48 horas
entre +2 y +8 °C 7 días
a -20 °C
1 mes
El reactivo disuelto puede ser congelado una vez en su envase original.
La estabilidad de la solución tampón, una vez abierta y conservada entre +2 y +25 °C,
es de 12 semanas.
Los diferentes aparatos de medida de la coagulación tienen datos individuales de
estabilidad.
Aparatos
El Reactivo BC de trombina se puede utilizar con un gran número de aparatos de
medida de la coagulación.
Observe el manual de operaciones del fabricante del aparato!.
Material adicional necesario
Plasma control N, N° de pedido ORKE
Dade ® Ci-Trol ® Nivel 1, N° de pedido 291070*
Aparato de medida de la coagulación (Ver "Limitaciones del procedimiento")
Pipetas
Tubos de ensayo
Agua destilada
* no se consigue en USA
¡No congelar las muestras!
Procedimiento
Manual:
En un tubo de ensayo precalentado a +37 °C pipetear:
Plasma citratado 100 µl
Reactivo BC de trombina (+37 °C) 250 µl
Al agregar el reactivo determinar el tiempo de coagulación (por ej. tiempo en que la
extinción inicial aumenta en 0,06)
Automático:
Instrucciones especiales para los aparatos de medida de la coagulación se pueden
obtener preguntando a Dade Behring.
Control de calidad interno
Rango normal: Plasma control N
Dade ® Ci-Trol ® Nivel 1
Rango patológico: Se emplea un plasma normal al cual se le ha agregado una concentración
apropiada de la heparina que se va a medir (por ej.,
0,2 UI/ml). Para fijar un rango de confianza se deben realizar
varias determinaciones.
Los controles se deben medir por lo menos cada 8 horas en un día de trabajo. Los
plasmas de control deben ser tratados como las muestras de pacientes.
Los valores medidos para el control normal deben estar dentro del rango límite, el
cual viene dado en la Tabla de valores del control, dependiente del lote.
El valor para el control patológico debe encontrarse dentro del rango de confianza
determinado por el laboratorio.
Si el valor del control medido se encuentra por fuera del rango de confianza antes
establecido, se deben comprobar el aparato de medida de la coagulación y los reactivos.
Valoración
El resultado de la medida se da en segundos.
Limitaciones del procedimiento
Existen aparatos de medida de la coagulación apropiados para los cuales Dade
Behring tiene listas las instrucciones de uso. El uso del Reactivo BC de trombina en
otros aparatos debe ser validado por el laboratorio de investigación. En este caso, se
pueden obtener valores diferentes a los dados para las características.
Un transporte de trazas de trombina puede alterar los siguientes análisis de la coagulación.
De ser posible, use material plástico desechable.
Valores esperados
En el estudio de 39 plasmas citratados de adultos sanos se calculó con el Reactivo
BC de trombina en el BCT** un 95. percentile < 21 segundos.
Las desviaciones sistemáticas de este rango pueden ser dependientes del aparato.
En caso dado, el laboratorio deberá establecer su propio rango de referencia.
Características del test
Precisión
Se realizó un estudio de precisión durante cinco días con plasmas normales y patológicos
(determinaciones óctuplas pro marcha). Para plasmas de control normales (n =
40) la precisión de la serie se encontró entre 2,2 y 2,6% y la precisión total entre 3,8
y 4,7%. Para un plasma patológico (n = 24) la precisión en la serie fue de 6,2% y la
precisión total de 7,4%.
Comparación de métodos
Se compararon el Reactivo BC de trombina y otro método comercial de determinación
del tiempo de trombina. En total se investigaron con los dos métodos 67 plasmas
(20 de donantes normales, 27 de pacientes bajo terapéutica con heparina y 20
de pacientes con productos de degradación de la fibrina elevados). En un análisis de
regresión se obtuvo un coeficiente de correlación de 0,93, un corte del eje-y de -5,55
segundos y una pendiente de 1,48.
Literatura
Ver página 1
Dade y Ci-Trol son marcas de fábrica registradas de Dade Behring Inc. en USA,
Alemania y otros países.
BCS es una marca de fábrica registrada de Dade Behring Marburg GmbH en USA,
Alemania y otros países.
** BCT es una marca de fábrica registrada de Dade Behring Marburg GmbH en
Alemania y otros países.
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
www.dadebehring.com
Material a investigar
Mezclar 1 parte de solución de citrato de sodio (0,11 mol/l) con 9 partes de sangre
venosa, evitando la formación de espuma. Centrifugar inmediatamente después,
durante 10 min. a aprox. 1500 x g. Recoger el plasma sobrenadante y conservarlo
entre +15 y +25 °C hasta la realización del test.
Estabilidad de la muestra entre +15 y +25 °C: 4 horas.
Las muestras que contengan heparina deberán ser medidas en un plazo de 2 horas.
En USA por favor referirse a los documentos NCCLS H21-A2 con el título "Collection,
Transport and Processing of Blood Specimens for Coagulation Testing and Performance
of Coagulation Assays".
OWNA G11 E0540 (1111) H 5 Edición Septiembre 2003

BC Reagente de trombina
Campo de aplicação
Reagente para a determinação quantitativa do tempo de trombina no plasma humano
citratado.
Significado diagnóstico
A determinação do tempo de trombina com o BC Reagente de trombina é adequada
para
1. monitorização da terapia fibrinolítica 1, 2 ;
2. como rastreio das perturbações da formação da fibrina ou em caso de suspeita de
estados graves de deficiência de fibrinogénio 1, 2 ;
3. diferenciação entre o prolongamento do tempo de trombina induzido pela heparina
e as perturbações de formação da fibrina 1, 2 .
O prolongamento do tempo de trombina é medido tanto nas perturbações de polimerização
da fibrina, como em presença da trombina. A diferenciação consegue-se
usando o reagente de batroxobina (Dade Behring Marburg GmbH, ref. OUOV).
Princípio metodológico
A trombina converte o fibrinogénio contido na amostra em fibrina, através do qual se
produz o coágulo. É medido o tempo que decorre até à formação do coágulo.
Reagentes
Conteúdo da embalagem comercial
BC Reagente de trombina, kit de teste, ref. OWNA com
10 x para 5 ml de BC Reagente de trombina
1 x 50 ml de solução tampão
Composição
BC Reagente de trombina liofilizado: Trombina bovina e albumina bovina
Solução tampão para o BC Reagente de trombina: HEPES (25 mmol/l), pH 7,4
Conservante: 5-cloro-2-metil-4-isotiazol-3-on (6 mg/l)
2-metil-4-isotiazol-3-on (2 mg/l).
Advertências e medidas de precaução
Só para uso diagnóstico in vitro.
Preparação dos reagentes
Dissolver o conteúdo de um frasco de BC Reagente de trombina com a quantidade
de solução tampão indicada no rótulo. Antes de dissolver e de cada uso, a solução do
reagente deverá ser aquecida a +37 °C e mantida a essa temperatura durante 15
minutos (pode ser suprimido no sistema BCS ® ). Antes de usar, misturar uma vez
mais cuidadosamente.
Estabilidade e condições de conservação
Não aberto, o BC Reagente de trombina pode ser conservado entre +2 e +8 °C e
utilizado até à data indicada no rótulo.
Estabilidade após reconstituição:
a +37 °C 8 horas
a +15 °C 48 horas
a +2 e +8 °C 7 dias
a -20 °C 1 mês
O reagente dissolvido pode ser congelado uma vez no frasco original.
A estabilidade da solução tampão após abertura é de 12 semanas à temperatura de
+2 a + 25 °C.
Os coagulómetros diferentes possuem características de estabilidade individuais.
Instrumentos
O BC Reagente de trombina pode ser utilizado numa multiplicidade de coagulómetros.
Observar o manual de utilização do fabricante do aparelho!
Outros materiais necessários
Plasma de controlo N, ref. ORKE
Dade ® Ci-Trol ® Level 1, ref. 291070*
Coagulómetro (veja o capítulo "Limites de execução do teste")
Pipetas
Tubinhos de plástico
Água destilada
* não está à venda nos EUA
Material de análise
Para a obtenção do plasma, misturar cuidadosamente 1 parte de solução de citrato
de sódio (0,11 mol/l) com 9 partes de sangue venoso, evitando a formação de espuma.
Centrifugar imediatamente a 1500 x g, durante 10 min. no mínimo, remover o
plasma sobrenadante e conservar entre +15 e +25 °C até à execução do teste.
Estabilidade da amostra entre +15 e +25 °C: 4 horas. Medir os plasmas com teor de
heparina num intervalo de 2 horas.
Nos EUA, por favor reportar-se ao documento NCCLS H21-A2 com o título “Collection,
Transport and Processing of Blood Specimens for Coagulation Testing and Performance
of Coagulation Assays”.
Não congelar as amostras!
OWNA G11 E0540 (1111) H 6 Edição Setembro 2003
Execução do teste
Manual:
Pipetar para um tubinho de ensaio pré-aquecido a +37 °C:
Plasma citratado 100 µl
BC Reagente de trombina 200 µl
Com a adição do reagente, determinar o tempo de coagulação (p.ex., para o aumento
da absorvância inicial de 0,06).
Automática:
A pedido, a Dade Behring disponibiliza instruções especiais para coagulómetros.
Controlo de qualidade interno
Intervalo normal: Plasma de controlo N
Dade ® Ci-Trol ® Level 1
Intervalo patológico: Deverá ser utilizado um plasma normal ao qual foi adicionada a
concentração adequada (p. ex. 0,2 IU/ml) da heparina a medir.
Para a determinação do intervalo de referência, deverão ser
executadas várias determinações.
O controlo deverá ser medido em cada dia de teste, todas as 8 horas, no mínimo. Os
plasmas de controlo deverão ser tratados como a amostras do paciente.
O valor medido para o controlo normal deverá situar-se no intervalo nominal indicado
na tabela de valores do controlo dependentes dos lotes.
O valor do intervalo patológico deverá situar-se no intervalo de confiança determinado
no laboratório.
Se o valor de controlo medido se situar fora do intervalo de confiança definido anteriormente,
é necessário verificar o coagulómetro e os reagentes.
Avaliação
O resultado medido é indicado em segundos.
Limites de execução do teste
São adequados coagulómetros para os quais a Dade Behring disponibiliza instruções
de utilização. A utilização do BC Reagente de trombina noutros coagulómetros
tem de ser validada pelo laboratório da análise. Neste caso, podem obter-se
outras características de performance que não as indicadas.
A protelação dos vestígios de trombina pode interferir nas análises de coagulação
seguintes. Por isso, utilizar unicamente material de plástico descartável.
Valores expectáveis
Num estudo de 39 plasmas citratados de adultos saudáveis usando o BC Reagente
de trombina no sistema BCT**, foi calculado um 95.º percentil < 21 segundos.
Os desvios sistemáticos destes intervalos podem ser induzidos pelo aparelho. Se for
necessário, o laboratório deverá estabelecer um intervalo de referência próprio.
Características de performance do teste
Precisão
Foi realizado um estudo de precisão com plasmas normais e plasmas patológicos,
durante cinco dias (determinações óctuplas por série). Para os plasmas de controlo
normais (n = 40) a precisão na série situou-se entre 2,2 e 2,6% e a precisão total
entre 3,8 e 4,7%. Para o plasma patológico (n = 24) a precisão na série foi de 6,2%
e a precisão total de 7,4%.
Comparação de métodos
Foi efectuada uma comparação do BC Reagente de trombina com um outro reagente
comercial para determinação do tempo de trombina. Com os dois métodos foi
examinado um total de 67 plasmas (20 de dadores de sangue normais, 27 de pacientes
sujeitos a terapia heparínica e 20 de pacientes com um aumento de produtos de
degradação da fibrina). A análise de regressão forneceu um coeficiente de correlação
de 0,93, uma intersecção axial y de -5,55 segundos e uma inclinação de 1,48.
Bibliografia
Veja a página 1.
Dade e Ci-Trol são marcas registadas da Dade Behring Inc. nos EUA, Alemanha e
noutros países.
BCS é uma marca registada da Dade Behring Marburg GmbH nos EUA, Alemanha e
noutros países.
** BCT é uma marca registada da Dade Behring Marburg GmbH na Alemanha e
noutros países.
IVD
LOT
EXP
CCYY-MM-DD
REF
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
www.dadebehring.com
Symbols Key / Symbolschlüssel / Explication des Symboles /
Interpretazione simboli / Clave de los Símbolos / Chave dos Símbolos
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In Vitro Diagnostic Medical Device / In Vitro Diagnosticum / Dispositif Médical
Diagnostic In Vitro / Dispositivo Medico per Diagnostica In Vitro / Producto sanitario
para Diagnóstico In Vitro
Lot Number / Chargenbezeichnung / Numéro de Lot / Numero di Lotto / Número de
Lote
Expiration Date / Verfalldatum / Date de Péremtion / data di scadenza / Fecha de
vencimiento / termo da validade
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di conservazione / Temperatura de almacenamiento / Temperatura de armazenagem
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