4_Microbiol09_05_Tap..

Identificación de levaduras
Dra. Cecilia Tapia P.
Programa de Microbiología y
Micología, ICBM.
Facultad de Medicina
Universidad de Chile
2009
Infección fúngica invasora
• Las levaduras son
responsables del 95%
de las IFI en unidades
críticas y 2/3 de en
unidades oncológicas y
de transplante.
• El resto es por hongos
filamentosos:
Aspergillus 2/3
Otros hongos, 7-12%
(Fusarium)
• Micosis:
Candidiasis
Aspergilosis
Por otras levaduras
Fusariosis
Feohifomicosis
Zigomicosis

Evolución de las infecciones por Candida
Hematologica 2006;91:1068-1075
Especies fúngicas involucradas en IFI en pacientes con
enfermedades onco-hematológicas
Mortalidad : 2% (209/11802)
Mortalidad atribuible IFI: 39% (209/538)
Mortalidad atribuible
zygomicosis: 64%
fusariosis: 53%
aspergilosis: 42%
candidemia: 33%

Micosis por levaduras
MICOSIS
AGENTE
Candidiasis
Candida sp.
Criptococosis
Cryptococcus neoformans
Trichosporonosis
Trichosporon sp.
Micosis por Malassezia spp
Malassezia spp.
Son responsables del 95% de las infecciones fúngicas invasoras
Candidiasis
• Son infecciones
producidas por levaduras
del género Candida
• Forman parte de la
microbiota gastrointestinal
y genital).
• Producen infecciones
oportunistas

Candida
• Más de 200 especies
descritas, siendo la más
frecuente.C. albicans.
• Pertenecen al phylum
Ascomycota.
Otras especies : C.
tropicalis, C. krusei, C.
guilliermondii, C.
parapsilosis, C. glabrata.
Cuadros clínicos
• Candidiasis mucocutánea
- Infección superficial de mucosas: oral,
vaginal, esofágica, intestinal
- Invasión superficial de la piel: intértrigo,
erosión interdigital, paroniquia
- Formas mucocutáneas crónicas
• Candidiasis sistémica

Candidiasis oral
Candidiasis oral y SIDA
Algorra del recién nacido
Candidiasis del pañal
Candidiasis esofágica
Intértrigo

Candidiasis interdigital
Candidiasis vulvovaginal
Onicomicosis
Candidiasis
Mucocutánea crónica
Paroniquia

Candidiasis sistémica
• Candida sp. Se asocia en un 80% a
infecciones fúngicas intrahospitalarias.
• Constituye la cuarta causa de
infecciones del torrente sanguíneo (ITS).
• En USA es el agente responsable del 8%
de todas las ITS por catéter.
• Actualmente las especies no-albicans
constituyen un 50% de las infecciones
invasivas por Candida.
• Mortalidad cruda por candidemia: 40-60%
.
Comparación de la frecuencia en porcentaje de especies de Candida
aisladas de sangre, según países.
Especie USA Canadá Japón España Francia Argent Brasil Chile Chile*
C. albicans 56 54 50 53 49 51 43 50 48.8
C. guilliermondii 0,5 3 1.3
C. glabrata 19 15 14 12 14 2 4 4 12.5
C. kefyr 1 1.3
C. krusei 2,5 3 2 1 2 3 1 1 2.5
C. lusitaniae 0 5.0
P. anomala 3 5
C. parapsilosis 9 12 9 21 12 20 20 22 13.8
C. tropicalis 7 9 20 6 10 23 23 15 15.0
Otras especies 6,4 2 3 1 4 7
Chile*, datos 2006; 87 pacientes IFI con levaduras en hemocultivo 80 cepas de Candida
Rodero et al., Rev Argent Microbiol 31: 114-9, 1999; Pfaller et al., Antimicrob Agents Chemother 44: 747-51, 2000; St. Germain et al.,
JCM 39: 949-53, 2001; Silva et al. Rev Cien Salud 6: 51-8, 2002; Silva et al. Med Mycol 42; 333-9, 2004. Dromet et al., 2006

PERFIL GLOBAL DE RESISTENCIA Candida sp
* No olvidemos que cada especie fúngica tiene características particulares que
pueden conferirle resistencia
IMPORTANCIA DEL DIAGNÓSTICO A NIVEL DE ESPECIE
Diagnóstico de laboratorio
• MUESTRAS CLÍNICAS:
TÉCNICAS DIAGNÓSTICAS:
Superficiales
Raspados de piel y fanéreos
Secreciones (heridas, flujo vaginal)
Examen directo
Cultivo (Agar Sabouraud y Agar Sangre,
Agares cromogénicos)
Profundas
Sangre y líquidos estériles
Lavado bronquioalveolar (LBA)
Cuerpos implantables (catéteres,
prótesis)
Identificación: tubo germinativo
asimilación de azúcares
microcultivo
Detección de componentes estructurales y
productos metabólicos (antígenos, enolasa,
arabinitol)
Histología
Colonizacion v/s infección
Biología Molecular

Examen directo
blastoconidios
Pueden Pueden observarse observarse blastoconidias
blastoconidias
yemando yemando y en en algunos algunos casos casos la la
presencia presencia de de pseudohifas.
pseudohifas.
KOH KOH 20% 20% en en muestras muestras clínicas, clínicas,
principalmente principalmente procedentes procedentes de de la la
piel, piel, fanéreos fanéreos y mucosas. mucosas.
Pseudohifas
TINCIÓN DE GRAM
• LEVADURAS: OBSERVACIÓN YEMACIONES, HIFAS Y/O PSEUDOHIFAS
• FILAMENTOSOS: SE TIÑEN MUY MAL, NO DEBE USARSE
Milne L. 1989 Direct Microscopy pg 17-45
Medical Mycology : A Practical Approach. Evans and Richardson

TINCIÓN DE CALCOFLÚOR
• TINCIÓN FLUORESCENTE (sensible, entrenamiento menor)
• SE UNE A LA QUITINA DE LA PARED FÚNGICA
• DE ELECCIÓN PARA HONGOS FILAMENTOSOS
Cultivo
Clamidoconidio
Microcultivo (Agar Maíz)
C. krusei
Colonia cremosa, blanca
y solevantada
C. albicans
CHROMAgar

Tubo germinativo
• Prueba de diagnóstico presuntivo
de C. albicans (C. dubliniensis
también lo produce)
• C. albicans filamenta precozmente
( 2-4 horas) en plasma o suero de
conejo o humano a 37 ºC en
forma de tubo germinativo.
• Presenta falsos (+) y (-).
• Se requiere de pruebas
bioquímicas adicionales.
La
La
filamentación
filamentación
no
no
debe
debe
tener
tener
estrangulaciones
estrangulaciones
Agares cromogénicos
S y E 100%
Permiten Permiten identificar identificar
presuntivamente presuntivamente algunas algunas
especies especies de de Candida, Candida, pero pero
fundamentalmente
identifican identifican C. C. albicans albicans

Microcultivo (agar arroz)
Clamidosporas
IDENTIFICACIÓN DE ESPECIE: LEVADURAS
MÉTODOS TRADICIONALES
MÉTODOS COMERCIALES
• Chromagar Candida
• API ID 32C o 20C AUX
• Auxacolor
• Vitek Yeast Card
• Panel Microscan
• RapID Yeast Plus
• Otros

Identificación bioquímica
Se basa en la asimilación
de azúcares (fermentatación
no tiene mucha utilidad).
• Auxonograma convencional
• Sistemas comerciales:
manuales (Ej. API ID 32C)
automatizados (Ej. Vitek2)
API- Candida
(Biomérieux)
Comprende 51 taxa

Criptococosis
• Producida por una levadura
capsulada: Cryptococcus
neoformans
• P. entrada: respiratoria
• Formas clínicas:
inmunodeprimidos
- Neumonía
- Formas diseminadas
- Infección SNC
• Diagnóstico Directo
Características microbiológicas
• Son levaduras aerobias
(no fermentan)
• Colonia mucosa
• Ureasa (+)
• Color de la colonia
variable (de crema a
ocre), más oscura por
la edad

Diagnóstico de laboratorio
• Examen directo: Tinta china, indian ink (cápsula) (S ~ 75%)
• Cultivo (LBA, hemocultivos, LCR)
• Identificación: pruebas bioquímicas (ureasa),
características de la colonia (mucosa, pigmento ocre)
• Antígeno Cryptococcus (látex): útil para suero y LCR (S 95%
y E 93-100%). Kits: CALAS®, MYCO-Immune®, and IMMY®
• Histopatología (biopsia)
• Antifungigrama: disponible (estandarizado)
Trichosporonosis
• Trichosporon spp. son levaduras ubicuas.
• Forman parte de la microbiota comensal del ser humano a
nivel intestinal y coloniza de manera transitoria la piel y la
vía respiratoria.
• Por muchos años se conoció sólo una especie saprófita
asociada a la piedra blanca, denominada T. beigelli.
• Actualmente, en base al análisis molecular, este taxón ha
sido reemplazado por varias especies y la taxonomía del
género se ha modificado. Además se ha aislado no sólo
de cuadros superficiales sino de cuadros invasores.

Trichosporonosis
• Las especies patógenas clásicamente aisladas en
procesos patológicos son T. cutaneum, T. asahii, T.
asteroides, T. mucoides. T. inkin y T. ovoides, sin
embargo, actualmente se han descrito más de 36
especies, las cuales han sido agrupadas en el orden
Trichosporonales y en los clados Gracile, Porosum,
Cutaneum y Ovoides.
Estudios filogenéticos
Trichosporonosis
• Factores predisponentes:
Malignidades hematológicas, SIDA, pacientes
quemados, tumores sólidos.
• Cuadro clínico:
Micosis cutáneas (Piedra blanca), lesiones
oftálmicas en inmunocompetentes
Micosis sistémicas localizadas o diseminadas

Diagnóstico
Cultivo: piel, uñas, hemocultivos, urocultivos, líquido peritoneal,
aspirados bronquiales, esputo, muestras corneales.
Identificación: características de la colonia (seca), morfología a
la microscopía (artroconidios), pruebas bioquímicas (azúcares).
TRICHOSPORONOSIS
Artroconidios
Colonia

Microcultivo de Trichosporon sp
Colonia de Trichosporon sp.

Trichosporonosis
Antifungigrama: Es necesario solicitarlo. Las distintas especies presentan
distintos perfiles de susceptibilidad a los antifúngicos.
Trichosporonosis
Técnicas moleculares: muy sensibles y específicas. Indicadas para
laboratorios de referencia.

Micosis oportunistas por Malassezia
• Hay 7 especies descritas en base a sus perfiles
moleculares, morfológicos y bioquímicos (M. globosa,
M. obtusa, M. restricta, M. sclooffiae, M furfur, M.
sympodialis, M. pachidermatis.)
Son levaduras lipofílicas en general (excepto M.
pachydermatis que crece en medios de cultivo
habituales).
• Hábitat: levadura lipofílica encontrada en piel de
humanos y animales. La colonización por malassezia
ocurre en el período neonatal. Forma parte de la
microbiota comensal en el 90% de los adultos.
Micosis oportunistas por Malassezia
• Factores predisponentes:
Pacientes cateterizados, que reciben nutrición
parenteral (emulsiones lipídicas).
• Cuadro clínico:
Enfermedad diseminada y sepsis (rush).
Nutrición parenteral (rica en lípidos).

Diagnóstico de Laboratorio
Examen directo (pitriasis versicolor): hifas
cortas angulares con racimos de levaduras
esféricas gemando de pared gruesa “plato de
fideos con albóndigas”.
Cultivo: medio con lípidos (aceite de oliva),
excepto M. pachydermatis.
Identificación bioquímica: reacción de
catalasa, desdoblamiento de la esculina y
capacidad de utilizar tween 20, 40, 60, 80 como
única fuente de lípidos.
Malassezia sp

Rev Méd Chile 2003; 131: 1295-1300
¡Muchas gracias!