Identificación de hongos

Identificación n de Hongos
Cultivo
Identificación n de Especies
Levaduras
Filamentosos
Prof. Dr. Victor Silva V.
(T.M., MSc., PhD.)
victor.silva@umayor.cl
Facultad de Medicina - Universidad Mayor
Santiago - Chile. 1

Diagnóstico
Médico
Toma de Muestra
Clínica
Microbiología
Anatomopatología
Examen Microscópico Directo
Cultivo
Inmunodiagnóstico
Fresco
Aislamiento
Identificación
Antígenos
Frotis
Básicos
Fisiología
Anticuerpos
Selectivos
Micromorfología
Diferenciales
Bioquímica
Informe Preliminar
Convencional
Comercial
Informe Final
2

Siembra y Cultivo
• Medios de Cultivo (en tubos o placas)
– Básico: Agar Sabouraud-Glucosa (ASG)
– Ricos; Hemocultivos
– Selectivo: ASG + cloranfenicol (CAF) y ASG + CAF + cicloheximida.
– Diferencial; agares cromogénicos
• Siembra
– Sembrar varios tubos (mayor probabilidad de aislar hongos).
– Muestras secas, debe inocularse en 6 a 8 puntos de siembra.
– Secreciones, debe ser inoculada en gran parte de la superficie.
– Líquidos, debe bañar ar toda la superficie del medio.
• Excepto cultivos cuantitativos; ej. Orina.
• Incubación n a 25 y 37°C C en muestras de IFI.
– Filamentosos crecen mejor a 25°C C con observación n diaria o bi-semanal
– Levaduras a 37ºC C con observación n diaria. Crecimiento rápido. r
3

Hongos de interés clínico
No cultivables
(Pneumocystis carinii
Pneumocystis jirovecii)
Rhinosporidium spp*
Células gemantes
Cultivables
Hifas o Micelio
Colonias blancas o rosadas
(levaduras)
Colonias negras
(levaduras “negras”)
Micelio no septado
Micelio septado
Agentes de
Zigomicosis
Rhizopus, Mucor, Absidia
4

Cultivo de Levaduras
5

Colonia cremosa,
lisa y blanca
• Candida spp o Sacharomyces spp
Colonia mucosa,
lisa y blanca a crema
• Cryptococcus spp
Colonia cremosa,
rugosa y blanca
• Trichosporon spp
Colonia cremosa a
serosa, lipofílica • Malassezia spp 6

Cultivos en agar Cromogénico
S; 95%. E; 95%
C. tropicalis
C. glabrata C. albicans
• CHROM agar Candida
• Candida ID
• Albicans ID 2
• Candiselect
• Chromalbicans
• Cromogen albicans
C. krusei
7

Colonia cremosa,
lisa y blanca
• Tubo Germinal
• Asimilación n de azúcares (13 a 15)
• Microcultivo
Colonia mucosa,
lisa y blanca a crema
• Visualización n de cápsulac
• Asimilación n de azúcares (7 a 9)
• Fuentes de nitrógeno
• Ureasa
Colonia cremosa,
rugosa y blanca
• Crecimiento en cicloheximida
• Termorresistencia
• Asimilación n de azúcares (7 a 9)
• Urasa
• Microcultivo
8

Colonia de textura cremosa, superficie lisa y color blanca
Candida spp.
9

Colonia de textura cremosa, superficie lisa y color blanca
• Tubo Germinal
• Microcultivo
– Forma de la levadura
– Presencia y forma de la
pseudohifa
– Presencia de clamidoconidios
• Asimilación n de azúcares (13 a 15)
o
• Sistemas Comerciales
10

Tubo Germinal; prolongación n de paredes paralelas, fina y sin constricción
37ºC C por
2 a 3 hrs
Falso positivo
Falso positivo
11

25ºC C por
2 a 3 díasd
12

Auxanograma;
Asimilación n de azúcares
25ºC C por 24
a 48 hrs
19

Sistemas Bioquímicos Comerciales
• Auxacolor
• Candifast (baja sensibilidad)
• Fungichrom I
• Galerías API
– Candida
– 20 C
– 32 C
• Vitex 2 (YBC)
• YT Microplate
S; 95%. E; 95% 20

API
ID 32 C
30ºC C por
24 a 48 hrs
Auxacolor
API Candida
35ºC C por 24 a 48 hrs
Fungichrom I
30ºC C por
24 a 48 hrs
21

Identificación n Enzimática
• MicroScan
– Rapid Yeast Identification Panel
4 horas incubación
• RapID Yeast Plus System
• Fungiscreen
• Bacticar Candida
• Murex C. albicans
• RapID albicans
S; 95%. E; 95%
22

Colonia mucosa, lisa y blanca a crema
• Visualización n de cápsulac
• Asimilación n de azúcares (7 a 9)
• Fuentes de nitrógeno
• Ureasa
Cryptococcus spp.
23

• 34 especies
– C. neoformans
– C. gatti
– C. grubii
– C. albidus
– C. laurentii
• Exámenes
– Cápsula
– Asimilación n de
azúcares
– Utilización
n de
fuentes KNO 3
– Ureasa
Microscópico
del cultivo
Ureasa
Cápsula
(tinta China)
37°C por 8 hrs
24

Colonia cremosa, rugosa y blanca
Trichosporon spp.
• Crecimiento en cicloheximida
• Termorresistencia
• Asimilación n de azúcares (7 a 9)
• Urasa
• Microcultivo
25

• Exámenes
– Bioquímica
– Microcultivo
– T. asahii
– T. coremiiforme
– T. cutaneum
– T. dermatis
– T. dohaense
– T. faecale
– T. inkin
– T. japonicum
– T. mucoides
– T. ovoides
Asimilación n de azúcares
25ºC por
24 hrs
Ureasa
37°C por 24 hrs
Microcultivo
25ºC por
2 a 3 días
26

Características en Filamentosos
• Cultivo – Colonia (tiempo de cultivo)
– Textura
• Membranosa, vellosa, pulverulenta, granular, algodonosa.
– Superficie
• Rasante, plana, convexa, umbilicada, plegada.
– Bordes
• Delimitado, radiado
– Color de la colonia
– Pigmento
• Ausente o presente, restrictivo o difunde en el medio.
La textura está en directa relación con la cantidad de conidios
27

Cultivo de Hongos Filamentosos
28

Identificación n de Filamentosos
Colonia
Fructificación n filamentosos
Microcultivo
29

• Externa
Células Reproductivas Asexuales
– Célula pie
– Conidióforo
– Métula o vesícula
– Fiálides o anélides
– Conidios
• Interna
– Célula pie
– Esporangioforo
– Columela
– Esporangio
– Esporangioesporas

Zigomicetes
Colonia algodonosa blanquecina que se
transforma en gris oscuro al madurar.
Colonia algodonosa blanca-gris
grisácea
de crecimiento rápido. r

Caracteres para identificación
esporangiola
meroesporangio
estolones
suspensor
zigosporos
rizoides
clamidosporos

Nodal
Internodal

Llave de clasificación n de los géneros g
de
dermatofitos
1 a- Macroconidio de pared rugosa.
1 b- Macroconidio de pared lisa.
2 a- Macroconidio de pared gruesa.
2 b- Macroconidio de pared delgada.
3 a- Microconidio ausente y macroconidio
presente.
3 b- Microconidio y macroconidio
generalmente presentes.
Micorsporum
2
Keratinomyces
3
Epidermophyton
Trichophyton
De Hoog & Guarro, Atlas of Clinical Fungi, 1996.
35

Características de Dermatofitos
Colonia
Fructificación filamentosos
36

Agar Lactrimel
T. mentagrophytes
1.- Describa la colonia
2.- Microscopicamente
qué estructuras
identificamos?
37

T. mentagrophytes
Agar Sabouraud
glucosa
Agar Sabouraud
+ antibioticos
Agar Lactrimel
38

T. rubrum
Agar Sabouraud
glucosa
Agar Sabouraud
peptona
39

M. canis
Agar Sabouraud
glucosa
Agar Sabouraud
peptona
40

• Todas las infecciones fúngicas f
en las que se observa
en sus tejidos:
– hifas hialinas septadas, con ramificación n pudiendo
presentar ocasionalmente hifas septadas toruloides.
• Géneros más m s frecuentes
– Acremonium
– Chrysosporium
– Scopulariopsis
– Penicillium
Hialohifomicosis
- Aspergillus
- Fusarium
- Paecilomyces
- Scedosporium
(J. Med. Vet. Mycol. 30:1-10, 10, 1992)

Características Micromorfológicas
de Aspergillus spp

Principales Especies
Sección
Colonia
A. fumigatus Verde azulada
a gris
A. flavus Amarillo
verdoso
A. niger Negra
A terreus
Canela a café
Micromorfología
Vesículas subesférica, fialides
uniseriada y conidios columnar.
Vesículas pequeñas
as-achatadas achatadas y
grandes-redondas, redondas, fialides uni o
biseriadas y conidios columnar
y radiados.
Vesículas grandes y redondas,
fialides biseriada, conidios
radiados
Vesículas subesféricas, fialides
biseriadas y conidios columnar.

Morfología a macroscópica y microscópica de Aspergillus fumigatus

Morfología a macroscópica y microscópica de Aspergillus flavus

Morfología a macroscópica y microscópica de Aspergillus niger

Morfología a macroscópica y microscópica de Aspergillus terreus

ASPECTO MACROSCÓPICO
S. apiospermum
Cresce rapidamente em ágar-Sabouraud, formando colônias
flocosas, cinza-escuras a marron-cinza

ASPECTO MICROSCÓPICO (Forma imperfeita)
Scedosporium apiospermum
Anélides delgados y largos com un conidio en forma de ovalo (similar r a espermio)

ASPECTO MICROSCÓPICO
Scedosporium prolificans
Anélides dilatados em la base y el ápice: masa de conidios en forma de ovalo

• Cultivo
ALTERNARIA
– Agar Sabouraud-glucosado con CAF.
– Crecen entre 25 a 30ºC.
– A los 5 a 10 días, colonia algodonosa.
– Color café oscuro a verde oliva oscuro
con una franja blanca en torno de la colonia.
– Pigmentos negro.
• Micromorfología
– Conidióforos septados, simples o ramificados y con pigmento
oscuro.
– Presenta macroconidios piriformes, oscuros, de pared lisa o rugosa,
pueden estar solos, pero generalmente se disponen en cadenas. Tinen
septos horizontales y algunas especies longitudinales.

• Cultivo
CURVULARIA
– Agar Sabouraud-glucosado con antibióticos.
– Crecen entre 25 a 30ºC, de crecimiento rápido.
– A los 5 días, colonia aterciopelada.
– Color café oscuro o negro a verde oliva oscuro.
– Reverso de la colonia es café o negro.
• Micromorfología
– Conidióforos septados, simples o ramificados, con pigmento oscuro
y geniculados.
– Presenta macroconidios, oscuros, pueden estar solos o en cadena.
Tinen septos horizontales, produciendo 3 a 5 células. Generalmente
la 3ra célula del macroconidio crece desproporcionalmente curvando
el macroconidio.