Roche Diagnostics - Roche España

Roche Diagnostics informa / Junio 2001
muestras.
En referencia a las muestras, es posible cargar simultáneamente
hasta un máximo de 72. Al tener un diseño que permite la carga
continua, según finalizan las extracciones de cada 24 muestras,
queda liberada la bandeja correspondiente, pudiendo ser
extraída, introduciendo a continuación una nueva bandeja.
Las cubetas de reacción se cargan en el instrumento en bandejas
de 24 unidades con una capacidad máxima de 3 bandejas. Al
igual que ocurre con las aquellas que contienen las muestras,
según van siendo utilizadas pueden extraerse y sustituirse por
otras nuevas. Cada cubeta de reacción incluye una punta de
pipeta con filtro, de forma que cada muestra se procesa con su
propia punta, lo que evita que se produzca cualquier tipo de
arrastre en el pipeteo de las diferentes muestras. La punta de
pipeta con filtro se desecha junto con cada cubeta de reacción.
Los tubos con tapón de rosca, donde se incorpora el ácido
nucleico extraído se cargan en bandejas con 36 tubos y con un
máximo de 144 tubos simultáneamente. Como todas las
bandejas, según finaliza su uso es posible retirarlas y sustituirlas
por otras nuevas.
Una vez cargadas todas las bandejas necesarias y puesto en
marcha el Cobas AmpliPrep, la primera extracción se realiza en
algo menos de una hora, obteniéndose sucesivas extracciones
cada 2 minutos. En definitiva, la extracción de 24 muestras se
realiza en unas dos horas y la de 48, en tres. En una rutina de
trabajo diaria se pueden realizar 144 extracciones en un turno
de trabajo.
No obstante, toda esta capacidad de trabajo automático no
tendría utilidad si no estuviera garantizada la prevención de la
contaminación del trabajo de extracción de los ácidos nucleicos,
riesgo que se incrementa en las técnicas de amplificación de los
mismos. Esta prevención está garantizada gracias a cuatro
características del CAP:
- utilización de una punta de pipeta con filtro para cada muestra.
- mantenimiento de un flujo de aire ascendente mediante
ventiladores dotados de filtros HEPA. Este flujo continuo de
aire logra que los aerosoles que se llegan a producir sean extraídos
por la parte superior del instrumento y nunca puedan
contaminar las muestras a extraer.
- utilización de lamparas de luz ultravioleta, colocadas en el
interior del CAP. La luz ultravioleta permite la destrucción de
cualquier fragmento de ácido nucleico que permanezca en el
interior del instrumento.
- uso de tubos con tapón de rosca para la muestra a extraer
y para el ácido nucleico extraído. Tubo que destapa el
instrumento en el momento del pipeteo y que permanece cerrado
el resto del tiempo.
Otro aspecto crítico en el trabajo de rutina diaria en los
laboratorios de análisis clínicos es el creciente numero de
muestras que se procesan día a día. Toda medida que contribuya
a evitar este tipo de errores es un factor de seguridad en la
emisión del resultado final de la prueba analítica. El CAP
contribuye a esta seguridad, colocando el tubo final con el ácido
nucleico extraído en la misma posición de la misma bandeja de
muestras donde se introdujo la muestra a extraer. De esta
manera, queda identificado con el mismo código de barras, por
lo que la posibilidad de error en la identificación del tubo de
extracción es prácticamente nula.
En continua evolución
La propuesta actual de trabajo diario con los sistemas Cobas
AmpliPrep y Cobas Amplicor aporta la automatización de los
tres pasos que constituyen los análisis mediante PCR en el
laboratorio de diagnóstico clínico. La reducción que supone en
el tiempo de manipulación de las muestras, pasando desde las
6 horas iniciales a solamente 1 hora y media, implica la liberación
del usuario para la realización de otras pruebas de biología
molecular no automatizadas, especialmente útil a la hora de
realizar la introducción de nuevos parámetros que, debido al
reducido número de muestras a procesar, no justifican su
automatización.
La utilización de instrumentos automáticos para todo el proceso
de PCR conduce a la simplificación de las instalaciones necesarias
en los laboratorios de biología molecular. De las iniciales tres
habitaciones necesarias se pasó a dos, seguidamente a dos áreas
de trabajo y, finalmente, la total automatización lleva a una
única instalación convencional, semejante a la necesaria para
un laboratorio de serología o de química clínica.
Evidentemente, la evolución lógica de la automatización
conducirá a la integración de los tres pasos de un análisis
mediante PCR (extracción de la muestra, amplificación y
detección) en un único instrumento que permitirá la realización
de todo el proceso con la única intervención del usuario para
la colocación de los reactivos, las muestras y la programación
de la lista de trabajo. La siguiente acción del usuario será la
validación de los resultados obtenidos.
La evolución de la PCR en el laboratorio de diagnóstico
continuará con la reducción del tiempo total de realización del
análisis, efectuando una lectura después de cada ciclo de
amplificación. Es la llamada PCR a tiempo real o PCR cinética
(técnica TaqMan®)
Desde este punto de vista, la simplificación de los análisis de
PCR parece situar la tecnología TaqMan® como la evolución
lógica de estas técnicas en el laboratorio de diagnóstico clínico.
Bibliografía
1) Saiki RK, Scharf S, Faloona F, Mullis KB, Horn G, Erlich H et al.
Enzymatic amplification of µ-globin genomic sequences and
restriction site analysis of sickle cell anemia. Science 1985; 239:
1350-1354.
2) Mullis KB, Faloona F. Specific synthesis of DNA in vitro via a
polymerasa-catalyzed chain reaction. Methods Enzymol 1987; 155:
335-350.
3) Lassner D, Pustowoit B, Rolfs A. Modern applications of DNA
amplification techniques: problems and new tools. Plenum Pub
Corp, 1997
4) DiDomenico N, Link H, Knobel R, Caratsch T, Weschler W, Loewy
ZG et al. COBAS AMPLICOR: fully automated RNA and DNA
amplification and detection system for routine diagnostic PCR. Clin
Chem 1996; 42: 1915-1923.
5) Jungkind D, Direnzo S, Beavis KG, Silverman NS. Evaluation of
automated COBAS AMPLICOR PCR system for detection of several
infectious agents and its impact on laboratory management. J Clin
Microbiol 1996; 34: 2778-2783.
6) Young FE. DNA probes: fruits of the new biotechnology. JAMA
1987; 229: 2404-2406.
7) Miyachi H, Masukawa A, Ohsima T, Hirose T, Impraim C, Ando
Y. Automated specific capture of hepatitis C virus RNA with probes
and paramagnetic particle separation. J Clin Microbiol 2000; 38:
18-21.
30 El diagnóstico molecular en continua evolución
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