Roche Diagnostics - Roche España

Roche
Diagnostics
informa
ISO 9000:2000
Una visión de la calidad
para el siglo XXI 4
junio 2001
Encefalopatía Espongiforme
Bovina 8
COBAS INTEGRA 800
Totalmente seguro,
absolutamente flexible
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Valoración del analizador
hematológico XE 21OO en la
determinación de eritroblastos en
sangre periférica 20
Objetivos de la calidad analítica
del laboratorio clínico 33
Roche Diagnostics S.L.
Lab Diagnostics
Copérnico, 60
08006 Barcelona
Tel. 93 201 44 11
Receptor soluble de la
transferrina.
Valoración del método
totalmente automatizado.
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Tina-quant ® a sTfR

Roche
Diagnostics
informa
ISO 9000:2000.
Una visión de la calidad
para el siglo XXI.
Encefalopatía Espongiforme
Bovina
COBAS INTEGRA 800.
Totalmente seguro,
absolutamente flexible.
El receptor soluble de la transferrina.
Valoración del método totalmente
automatizado Tina-quant ® a sTfR.
Valoración del analizador hematológico XE
21OO en la determinación de eritroblastos
en sangre periférica.
El diagnóstico molecular en continua
evolución.
4
8
12
14
20
27
La sensación predominante en nuestra sociedad es de satisfacción con el progreso
científico y tecnológico. En general, estamos contentos con el poder de la ciencia, con
nuestra velocidad de avance y con el grado de control que tenemos sobre todo ello.
Desde que Van Slyke, mediada la década de los sesenta, sentó las bases de la bioquímica
moderna, hemos avanzado considerablemente en la comprensión de los mecanismos
básicos de la genética y la biología, del metabolismo intermediario y de la comunicación
celular.
Hace relativamente pocos años nos conformábamos, o nos habíamos de conformar,
con la determinación más o menos indirecta de los compuestos férricos circulantes en
la sangre. Hoy hemos conseguido indagar en la estructura íntima de los procesos de
expresión celular y podemos detenernos en el estudio de los sistemas de membrana
encargados de la expresión y funcionalidad de moléculas transportadoras como la
transferrina. A finales de los años ochenta las técnicas de biología molecular eran
complicadas, exigían un alto grado de experiencia por parte del personal implicado y
sus resultados, en ocasiones, eran poco fiables. Nada parecía indicar que fueran de
utilidad práctica para el diagnóstico clínico. Actualmente somos capaces de detectar
y calcular concentraciones de ácidos nucleicos con procedimientos totalmente
automatizados. En otras áreas de conocimiento relacionadas con las ciencias del
laboratorio la distancia aparente aún es mayor: comenzamos contando células sanguíneas
en cámaras de recuento para pasar a la utilización de sistemas de citometría de flujo.
No obstante, a pesar de las ayudas tecnológicas, el laboratorio clínico no es una fábrica
de números y, además de lo anteriormente expuesto, dentro de sus funciones se
encuentra la gestión de la calidad analítica, la planificación y organización de los
recursos humanos, la elaboración de protocolos diagnósticos y el compromiso ante el
resto de la comunidad sanitaria de mejora continua de los productos y servicios que
proporciona.
Evidentemente, el progreso no sólo trae nuevas soluciones, sino también nuevos
problemas. Cuando resolvamos las cuestiones derivadas de la biología molecular del
cáncer aparecerán nuevas vacas locas, pero nadie querrá volver al pasado. Esta pluralidad
de soluciones y problemas, junto con la celeridad en la revisión de conceptos y valores,
nos obliga a vivir en la provisionalidad pero, con ello, hemos aprendido más en estos
últimos cincuenta años que en toda la historia de la humanidad.
Objetivos de la calidad analítica del
laboratorio clínico.
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EDITA: Roche Diagnostics S. L. Copérnico, 60 08006 Barcelona Tel. 932 014 411 Fax 932 019 192 DIRECTORA: Maite Panadero
COMITE DE REDACCION: Luis de Cabo, Roser Mas, Artur Palet, José Luis Salvador, Juan Fernando Díaz e.mail: rd.informa@roche.com
REALIZACION: Miguel Luis Maier Depósito Legal: B-4684-1980
Roche Diagnostics SL no se hace responsable de las opiniones vertidas en los reportajes, artículos e informaciones firmadas contenidas en esta publicación.
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Roche Diagnostics informa / Junio 2001
Una visión de la calidad para el siglo XXI
Coincidiendo con el inicio del siglo XXI, las personas que nos
dedicamos a la gestión de la calidad disponemos de una nueva
herramienta que intenta recoger los avances que se han
producido en éste campo en los últimos años y desde una
óptica distinta, la experiencia existente en la implantación de
las normas de la serie 9000.
Las normas de ésta serie probablemente son las más populares
de entre los centenares de normas ISO existentes, habiéndose
utilizado para la gestión de la calidad en muchos sectores de
la actividad económica. Su aplicación inicial se produjo en la
industria, donde existía desde hace mucho una cultura de
control de calidad muy arraigada. Con el tiempo, las actividades
del sector servicios, tanto en el ámbito público como en el
privado, han ido incorporando los esquemas de gestión de la
calidad, con lo que la serie de normas ISO 9000 ha mostrado
también su utilidad en éste ámbito.
Las normas ISO en general se revisan periódicamente para
tener en cuenta los desarrollos tecnológicos y las modificaciones
del entorno de cada campo específico que pretenden
estandarizar. En concreto, la serie de normas ISO 9000 fue
originariamente publicada en 1987 y tuvo su primera revisión
en el año 1994. En ésta revisión se ajustaron tan solo pequeñas
inconsistencias internas pero no se produjo ninguna
modificación de importancia.
Es la revisión del año 2000 la que presenta una norma
sustancialmente modificada. Considera la experiencia adquirida
durante los años de implantación de las revisiones anteriores
y sobre todo incorpora de manera mas adecuada todos los
aspectos de servicio que encajaban de manera un poco forzada
en la norma original.
En primer lugar, el aspecto que destaca de manera clara en la
revisión 2000 es una nueva visión de la calidad. Desde un
planteamiento de prevención de no conformidades que
encontrábamos en la versión de 1994, pasamos a una
orientación conceptual a la satisfacción del cliente.
Es éste aspecto de la calidad, definida por el usuario final del
producto o servicio, lo que conduce a una visión más de
gestión estratégica de las compañías. La orientación anterior
a la prevención de las no conformidades, normalmente llevaba
a un planteamiento que muchas veces se ha calificado de
burocrático, con toda la connotación negativa que tiene ese
término.
Muy probablemente, hay que buscar en la exigencia de
procedimientos documentados que encontramos en la versión
anterior de la norma el origen de la fama de burocrático que
se había ganado el sistema de gestión de la calidad de muchas
compañías.
En éste sentido, en la nueva norma solamente se exigen seis
procedimientos documentados frente a la veintena que se
contemplaban en la antigua versión. La menor exigencia de
documentación beneficia a las grandes organizaciones, pero
sobretodo, facilita la labor a aquellas más pequeñas que
disponen de una infraestructura más ajustada.
Un segundo punto que cabe destacar es que la nueva norma
pretende visualizar las actividades de la organización como
diferentes procesos relacionados entre sí. Partiendo de los
clientes que definen los requisitos del producto o servicio, los
distintos procesos dentro de la organización deben garantizar
que al final se consiga satisfacer las expectativas definidas por
los clientes al inicio. En éste sentido, también los procesos
incluyen de manera fundamental a los proveedores de
productos y servicios de la organización. Esta colaboración
lleva a compartir el objetivo de calidad final a lo largo de toda
la cadena, tal como se da desde hace algún tiempo de manera
muy clara en el sector del automóvil. La industria en éste
sector, utilizando una adaptación de las normas ISO 9000, ha
integrado en sus cadenas de producción a los proveedores de
manera decidida en su compromiso adquirido con los clientes
de proporcionar un producto final de calidad.
El conjunto cliente-empresa-proveedores así definido y los
conceptos de objetivos compartidos, encajan muy bien con la
concepción actual de las organizaciones donde las estructuras
departamentales tradicionales se van sustituyendo por
responsables de procesos actuando de manera flexible en sus
relaciones con responsables de otros procesos.
En este contexto, las personas de la organización son claves,
ya que la estructura de la organización que mejor responde a
una orientación a los procesos precisa de un alto grado de
trabajo en equipo y de una elevada descentralización de la
toma de decisiones.
Teniendo en cuenta lo anterior, el concepto de recursos que,
en la norma original y en su revisión de 1994, eran
C. Freixas. Roche Diagnostics. Barcelona.
fundamentalmente materiales y técnicos, en la revisión del
2000 se amplía de manera considerable para prestar mucha
mayor atención a las personas y los medios que la organización
pone a su alcance para desarrollar su trabajo.
Como tercera característica destacable encontramos el
requerimiento que la norma hace de un mejora continua del
sistema de gestión de la calidad. Este requerimiento es la
consecuencia inmediata de una definición de la calidad que
considera que los clientes son los que evalúan todo el proceso.
La superación de las expectativas de los mismos es lo que debe
conducir las acciones de las compañías.
De manera consustancial con la evolución del pensamiento
humano, el inconformismo ha generado siempre nuevas
soluciones a viejos problemas. Esto se ha hecho más evidente
en los últimos años, donde la innovación en productos y
servicios ha tenido un crecimiento exponencial debido, sobre
todo, a la influencia de las tecnologías de la información. Por
estas circunstancias, el crecimiento de las expectativas de los
clientes de las distintas organizaciones que les proveen de
productos y servicios obliga a una mejora continua que
permita superar de nuevo esas expectativas crecientes. En éste
sentido la nueva revisión ofrece una herramienta muy útil
para orientar a las compañías hacia la Calidad Total.
Finalmente, la compatibilidad de la nueva serie de normas
con la ISO 14001 de gestión medioambiental, representará
una economía de esfuerzos para aquellas organizaciones que
se orienten a certificar también ese aspecto de la gestión.
Constatadas las oportunidades que la nueva revisión de las
normas ofrece para la gestión de una empresa intensiva en
servicio, hay que mencionar algunas lecturas interesantes que
proporcionan información sobre los conceptos de cadena de
valor y satisfacción de clientes que pueden complementar una
aproximación óptima a la calidad en éste nuevo milenio.
Heskett, Sasser y Schelsinger en su libro The service Profit
Chain (1) describen de manera muy efectiva los distintos
aspectos que deben tenerse en cuenta en la definición del
proceso de prestación de servicio. Las ideas que están
relacionadas con el valor percibido por el cliente se expresan
muy claramente, destacando los conceptos sobre procesos
diseñados a medida del usuario del servicio como un factor
que favorece la percepción de la calidad. Llama también la
atención el sorprendente título de unos de los capítulos: “Hacer
las cosas bien a la segunda”, que contrasta con la máxima de
la calidad que siempre ha sido evitar los errores, o lo que es
lo mismo, hacer las cosas bien a la primera. Una lectura atenta
del mencionado capítulo muestra inmediatamente que se trata
de entender cuan efectivo puede ser todo el proceso de
seguimiento de reclamaciones en la recuperación de la
satisfacción de clientes. En el concepto tradicional de ISO se
consideraba solamente la recogida de reclamaciones y quejas
de clientes y su tratamiento posterior. Del libro de Hesket et
al. se pueden obtener muy buenos ejemplos que permiten ir
mas allá y aprovechar las reclamaciones de los clientes para
proporcionar una experiencia agradable, en base a la correcta
atención de las quejas expresadas. La clave de todo ese proceso
es dar respuesta honesta e inmediata ante cualquier
reclamación.
Cabe destacar el análisis que los autores realizan de la relación
que existe entre la satisfacción de los clientes y la de los
empleados. Mediante ejemplos muy claros consiguen demostrar
la relación mutuamente beneficiosa que se establece entre
empresas y clientes por medio de las personas que están en
contacto con los mismos. Destacan como la satisfacción de
los clientes contribuye a la de los empleados y viceversa,
generándose el círculo virtuoso que Luis Mª Huete detalla en
su libro Servicios & Beneficios (2). La lectura de Servicios &
Beneficios nos muestra como los aspectos intangibles de la
relación empresa cliente finalmente contribuyen a la mejor
percepción de la calidad de servicio. Claramente las personas
son el eslabón que relaciona empresa y clientes. Una gestión
adecuada de los recursos humanos de las organizaciones es
una herramienta segura de mejora de ese círculo virtuoso.
Adicionalmente cabe destacar, como Huete plantea, la necesidad
de evitar la rigidez que los procedimientos escritos comportan
a la hora de prestar servicio. Establecer marcos de actuación
y dar margen de maniobra a los empleados resulta la mejor
receta en la persecución de una percepción de la calidad. De
nuevo la revisión 2000 de la norma ISO 9000 está en línea ya
que, en vez de procedimientos muy detallados, solicita
diagramas de flujo donde los detalles quedan abiertos a la
interpretación de las personas que deben realizar las actividades.
Está bien estandarizar lo que debe hacerse, pero debe permitirse
un correcto grado de flexibilidad en el cómo.
Finalmente, Berry en su libro Discovering the soul of service
(3) presenta de manera concluyente como la calidad de servicio
se construye sobre los valores humanos y no con un conjunto
de sistemas y procesos que no consideran a las personas que
los deben implantar. En el libro de Berry se pueden encontrar
también referencias a otros aspectos que contribuyen a la
percepción de calidad, entre los que destacan: las relaciones
basadas en la confianza, mantener el nivel de decisión lo mas
cerca posible del cliente y sobre todo un claro enfoque
estratégico a la calidad del servicio.
La principal lección que podemos aprender de los múltiples
ejemplos de empresas que se pueden encontrar en los tres
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Roche Diagnostics informa / Junio 2001
libros mencionados es clara: Las personas son el recurso clave
en percepción de la calidad del servicio que tienen los clientes.
En consecuencia, es labor de las organizaciones cuyo valor
añadido principal es el servicio cuidar de las personas que las
constituyen.
Con todo lo anteriormente mencionado y tras esta visión
general de las novedades de la revisión del año 2000 de la
norma ISO 9000, que no excusa una detallada lectura de la
norma por las personas que deban tomar decisiones sobre su
implantación, cabe preguntarse por los efectos que puede tener
sobre el sector del diagnóstico in vitro.
La confluencia de los intereses del laboratorio clínico con los
de la industria del diagnóstico in vitro queda más patente si
cabe en el espíritu de la nueva norma. Así, vemos como la
consideración del cliente como una parte decisiva en la
definición de la calidad y la incorporación de los proveedores
de manera más intensa a las cadenas de producción o de
prestación del servicio, establece un vínculo de colaboración,
más claro si cabe, entre los laboratorios clínicos y sus
proveedores.
Desde hace algún tiempo, se constata un creciente interés del
laboratorio clínico por la serie de normas ISO 9000 y de
manera bastante generalizada por la ISO 9002. Con ello queda
patente la utilidad de la nueva revisión del 2000 ya que el
laboratorio clínico, al optar por la ISO 9002, se sitúa de manera
tácita como prestador de servicio en el contexto de la atención
sanitaria.
Tabla I. Principales beneficios de la serie de Normas ISO 9000:2000.
Calidad definida por el cliente, en contraposición a un
concepto de prevención de las no conformidades.
Menor documentación exigida.
Mejor adaptación a las organizaciones de cualquier
tamaño y sector (Producción y prestación de servicios).
Orientación a procesos. Colaboración dentro de la
cadena proveedores-organización.
humanos como materiales dedicados a la prestación de un
determinado servicio y, en otros, cambios sustanciales de
procesos internos de la compañía. Adicionalmente se han
empezado a definir nuevos servicios con objeto de profundizar
la colaboración con los clientes en los campos de organización
de laboratorios, sistemas de información, etc.
Viendo estas acciones en el contexto del presente artículo sobre
la revisión 2000 de las normas ISO 9000, se puede constatar
que desde antes de la publicación de la mencionada revisión,
Roche Diagnostics había empezado a poner en práctica algunos
de los aspectos mencionados en la nueva norma. En
consecuencia, nuestro objetivo más inmediato es obtener la
certificación de nuestro sistema de gestión de la calidad según
la revisión 2000 de las normas ISO 9000. Con ello, Roche
Diagnostics quiere hacer patente ante sus clientes el
compromiso de mejora continua y satisfacción con los
productos y servicios que proporciona.
Este artículo pretende dar un paso mas en la dirección de
colaboración entre Roche Diagnostics y los laboratorios
clínicos en el campo de la calidad, al aportar una interpretación
de la nueva revisión de la norma en el contexto del diagnóstico
in vitro. En los últimos dos años Roche Diagnostics ha estado
presente en varias iniciativas que sobre gestión de la calidad
se han llevado a cabo en España involucrando organismos de
certificación, laboratorios clínicos e industria y continua con
la máxima disposición de prestar su colaboración en el futuro.
La similitud entre el Laboratorio clínico y sus proveedores
Modelo de gestión integrada de los recursos de la
compañía, especialmente de los que afectan a las
personas de las organizaciones. La calidad deja de ser
un fin en si misma para ser un medio de satisfacción de
los clientes.
Facilita los procesos de mejora continua. Orientación
a la Calidad Total.
Compatible con las normas de gestión medioambiental.
LA AMPLIFICACIÓN
COMO PRINCIPIO
LA SEGURIDAD
COMO RESULTADO
Tal como se resume en la tabla I la mayoría de los beneficios
que aporta la nueva revisión de la norma encajan perfectamente
en la cadena de la atención sanitaria en la que los laboratorios
clínicos y la industria del diagnóstico in vitro aparecen como
eslabones íntimamente relacionados.
En los últimos años, Roche Diagnostics ha pretendido orientar
la relación con sus clientes hacia la colaboración para beneficio
mutuo. Para ello, ha puesto en marcha la medición sistemática
de la satisfacción de los clientes con los productos y servicios
de Roche Diagnostics. Los resultados de las encuestas han sido
fundamentales para definir las correspondientes acciones de
mejora. En algunos casos, las acciones puestas en marcha han
significado un incremento sustancial de los recursos tanto
está fundamentalmente en la necesidad de que sus respectivos
clientes perciban un excelente servicio. Como consecuencia,
muy probablemente, las recetas que valen para unos pueden
valer para los otros y la revisión de ISO 9000 del año 2000
puede ser el vehículo.
Bibliografía
1. James L. Heskett, W.Earl Sasser, Jr., Leonard A. Schlesinger.
The service Profit Chain. The Free Press , New York 1997.
2. Luís María Huete, Servicios y Beneficios; Ediciones Deusto,
Bilbao 1997.
3. Leonard L. Berry, Discovering the soul of service; The Free
Press, New York, 1999.
AMPLICOR PCR. SIN DUDA.
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ISO 9000:2000. Una visión de la calidad para el siglo XXI

Roche
Encefalopatía
Diagnostics informa / Junio 2001
Espongiforme
Bovina
La
historia más reciente comenzó en el Reino Unido en 1986
cuando el Laboratorio Central Veterinario recibió una serie
de muestras de ganado vacuno que mostraba alteraciones
motoras y de conducta. El aspecto microscópico de cortes
del cerebro revelaba una degeneración neuronal característica,
con vacuolas que daban el aspecto de “esponja”. A la nueva
enfermedad se le llamó Encefalopatía Espongiforme Bovina
(EEB) y se conoce vulgarmente con el nombre de “enfermedad
de las vacas locas”. Sin embargo no era la primera anomalía
de este tipo que se conocía. La primera descripción de un
cuadro similar se hizo en el siglo XVIII con la “tembladera”
del carnero (scrapie). Wilesmith, veterinario de los Servicios
Estatales Británicos, estableció la vinculación entre el scrapie
y la EEB. Los piensos fabricados con harinas procedentes de
ovinos infectados podrían ser la causa de la transmisión de
la enfermedad al ganado vacuno. Estas harinas fueron
prohibidas en 1988. En 1995 se identificó en 3 personas una
patolgía muy parecida a otra alteración de origen genético,
la enfermedad de Creutzfeldt-Jacob (CJD), pero con
características ligeramente distintas. Los pacientes eran más
jóvenes, la sintomatología era algo diferente, así como el
patrón del encefalograma. Hoy en día se conocen diversas
encefalopatías espongiformes transmisibles humanas: el kuru,
descrito en 1957, CJD, la enfermedad de Gerstmann-Sträussler-
Scheinker y el insomnio familiar fatal. Se baraja la posibilidad
de que otras enfermedades, como la gliosis subcortical
progresiva familiar, algunas demencias talámicas y la miositis
con cuerpos de inclusión, tengan un origen similar.
ETIOPATOGENIA DE LA EEB
Sobre el agente causal de la EEB conocemos los siguientes datos:
• Es muy resistente al calor (soporta 120 ºC durante 20 minutos,
por lo que se mantiene activo en los procesos culinarios).
• Es muy resistente a las radiaciones.
• Es resistente a los ultrasonidos.
• Es resistente a los desinfectantes convencionales como alcohol,
fenol, etc.
• Es resistente a los enzimas proteolíticos, lo cual le permite
atravesar inalterado el tubo digestivo.
• Es resistente a las nucleasas. Esto apuntaría a la no implicación
de ácidos nucleicos en la enfermedad.
HIPÓTESIS DEL PRIÓN.
Fue formulada por Stanley Prusiner en 1982 y por ella recibió
el Nóbel de Medicina en 1997, partiendo de una teoría de los
años 60. Este autor acuñó el término “Prión” para referirse a una
“proteína infecciosa”.
Proteínas del tipo de los priones se presentan de forma natural
en la membrana de las células de los mamíferos, pero sin las
características antes mencionadas (son sensibles al calor, a los
enzimas proteolíticos y a los agentes desinfectantes).
Esta proteína se abrevia PrPc, está codificada por un gen
denominado PrPn, tiene una estructura primaria de 250
aminoácidos y una estructura secundaria rica en -hélices.
En los animales con EEB se presenta una proteína alterada, PrPsc,
que es resistente a los agentes ya citados. La diferencia entre
ambas no reside tanto en su estructura primaria como en su
estructura secundaria, dónde predominan las -láminas, que
son las que confieren a esta proteína anómala su resistencia y la
capacidad de acumularse, polimerizar y producir depósitos que
son los que finalmente conducen a la muerte célular (figura 1).
Según esta teoría la proteína anómala sería capaz de inducir la
Figura 1: representación esquemática de la estructura de los priones.
(a) Prión normal. (PrP c ) -hélices; (b) Prión anómalo. PrP sc -láminas.
transformación del prión normal tanto in-vivo como in-vitro,
induciéndole un cambio conformacional de -hélice en -lámina.
Las proteínas recién transformadas actuarían sucesivamente
sobre otras normales, aumentando exponencialmente su número
y favoreciendo así la polimerización, el acúmulo y la muerte
celular. En la figura 2 puede observarse el aspecto microscópico
de distintas preparaciones de tejido nervioso en las que se
observan las vacuolas y los depósitos proteicos así originados.
HIPÓTESIS DEL VIRUS
Otros investigadores postulan
que la EEB puede estar
producida por algún tipo de
virus, resistente a la
combinación de factores tales
como la temperatura, proteasas
y nucleasas.
Los argumentos que esgrimen
los defensores de la hipótesis
del prión pueden ser
discutibles, pero el caso es que
no se ha observado ninguna
partícula vírica reconocible en
los animales infectados y no se
conoce ningún virus que sea
resistente simultáneamente a
tantas condiciones extremas.
La ausencia de la respuesta
inmune específica, que siempre
va asociada a las enfermedades
en las que intervienen agentes
infecciosos va en contra de la
hipótesis del virus.
ASPECTOS CLÍNICOS
LA EEB se presenta después de
un largo periodo de incubación
que se estima entre 3 y 6 años,
por lo tanto afecta a animales
adultos, de ambos sexos, y
preferentemente en
explotaciones de ganado
lechero. El curso clínico es
progresivo con una duración
de 1 ó 2 meses y el desenlace
siempre es fatal (tabla I).
La sintomatología puede
agruparse en tres categorías:
1. Cambios de
comportamiento.
Figura 2: Histopatología de un
cerebro afectado por priones. El
original proviene de:
http://neurobiowww.uia.ac.be/neurobio/CJD/p
hoto/index.html
Nerviosismo, respuesta exagerada a estímulos auditivos y táctiles,
coceo, comportamiento agresivo.
Estos signos han dado lugar a la utilización de la expresión
“enfermedad de las vacas locas”.
2. Cambios psicomotores.
Temblores, ataxia, anomalías posturales, caídas al suelo.
3. Signos generales.
Pérdida de peso, disminución de la producción lactea y prurito.
8
Biochips, genómica y polimorfismos
9

Roche Diagnostics informa / Junio 2001
Tabla I: Sintomatología de la encefalopatía espongiforme.
Fase
psíquica
Fase
Orgánica
Ovejas Vacas Hombre
Cambios de
comportamiento
Picor
Nerviosismo
Respuesta
exagerada a
estímulos
Cambios de
conducta
Modificación de
la personalidad
Ataxia Incoordinación Dolores intensos
en extremidades
Pérdida de peso
Temblores y
convulsiones
Caídas,
anomalías
posturales
Baja
producción
de leche
Postración
Demencia
PROPAGACIÓN DE LA ENFERMEDAD
En un principio se relacionó la aparición de esta enfermedad
con la combinación de dos desafortunadas coincidencias: el
mayor uso de tejido nervioso de origen ovino para la fabricación
de harinas cárnicas para la alimentación animal y la modificación
tecnológica introducida en el Reino Unido a principio de los 80
en el procesado de desechos y subproductos para este fin.
Actualmente se cree que ninguno de estos factores ha sido
decisivo.
La hipótesis actual asume la posibilidad de una enfermedad más
antigua pero inadvertida o de una mutación que no trascendió
hasta que tuvo lugar la fatal coincidencia de que los animales
afectados (escasos en número y posiblemente vinculados a la
misma familia) entraran en la cadena industrial de reciclado de
subproductos cárnicos, causando la amplificación y propagación
de la enfermedad.
Sin embargo todavía quedan algunos puntos oscuros en cuanto
a la difusión de la enfermedad como, por ejemplo, el hecho de
que en granjas dónde todos los animales recibían idéntica
alimentación, sólo un animal desarrollara la enfermedad.
SITUACIÓN DE LA ENFERMEDAD EN EUROPA.
Aunque en el Reino Unido se han detectado 180.000 animales
enfermos y en el resto de Europa unos 1.500, sólo se han
diagnosticado 93 casos en humanos de la nueva variante de la
enfermedad de Creutzfeldt-Jacob, 89 en el Reino Unido, 3 en
Francia y 1 en Irlanda. Este es un dato muy alentador ya que
parece indicar que la transmisión a la especie humana no es muy
eficaz. La causa puede estrivar que la transmisión sólo se produce
en circunstancias muy concretas, en las que los tejidos altamente
infectivos entran en la cadena alimentaria humana. Por esta
razón es muy importante conocer cuáles son estos tejidos. Sólo
unas pocas partes del animal son materiales específicos de riesgo
( MER): el cerebro, los ojos, las amígdalas, el timo, el bazo, la
médula espinal y el intestino de los bovinos afectados. Según
los datos aportados por las investigaciones realizadas hasta la
fecha con ratones transgénicos, la posibilidad de que otros
tejidos supongan algún riesgo es muy remota. Con estos
animales se ha comprobado que ni el músculo ni la leche
tienen poder infectivo.
Actualmente las investigaciones se dirigen hacia el
conocimiento de las circunstancias particulares que han
permitido que sólo unos pocos humanos hayan adquirido la
enfermedad y la mayoría no. Se están investigando diferentes
variables como los hábitos alimentarios o la predisposición
genética.
El hecho de ser transmisible al hombre, aunque sea débilmente,
justifica la adopción de medidas para impedir la entrada de
los materiales específicos de riesgo en la cadena de alimentación
animal y humana.
SITUACIÓN EN ESPAÑA
En España se han detectado hasta el 28 de Febrero 32 animales
afectados, mayoritariamente en Galicia y Castilla-León.
Puede encontrarse información detallada y actualizada de la
localización de los casos en la dirección que la Administración
General del Estado ha puesto a disposición para el seguimiento
de la enfermedad: http://www.eeb.es
La variante clásica de CJD, de origen genético, tiene una
incidencia de 0,5 a 1 por millón de habitantes y año. Así en
España deberían registrarse entre 35 y 40 casos anuales de CJD.
DIAGNÓSTICO DE LA EEB
El diagnóstico se basa en tres aspectos fundamentales:
1. Valoración clínica de las alteraciones nerviosas.
2. Estudio histopatológico e inmunohistoquímico. Es
característica la vacuolización, la muerte neuronal, la
astrocitosis y en algunos casos la formación de placas amiloides.
Mediante inmunohistoquímica pueden teñirse específicamente
los acúmulos de PrPsc.
3. Técnica de Inmunoblot. En esta técnica se basa la prueba
Prionics-Check®, que es la utilizada en la mayoría de países
europeos. Consiste básicamente de la detección de priones
anómalos en un homogeneizado de tejido nervioso animal.
Previamente éste se ha de someter a un tratamiento con enzimas
proteolíticos que eliminan selectivamente la variante normal
del prión. A continuación se separan los componentes proteicos
en un gel de acrilamida y se electrotransfieren a una membrana
de nitrocelulosa (Western-blot), dónde se detectan mediante
anticuerpos monoclonales específicos (figura 3).
Esta prueba permite la detección de la enfermedad incluso en
animales que no presentan signos clínicos ni lesiones.
Roche Diagnostics y Prionics firmaron un acuerdo de
colaboración el pasado mes de Enero tanto para la fabricación
como para la distribución internacional del equipo de reactivos
Prionics-Check®, así como para el desarrollo de reactivos para
el diagnostico de la enfermedad in vivo, que facilitará la
detección precoz de la enfermedad.
PREVENCIÓN DE LA EEB
La experiencia británica ha permitido a los demás países afrontar
el tema en una situación ventajosa.
Peso molecular
en kilo dalton
46 kDa
30 kDa
21 kDa
Digestión
enzimática con
FRACCIÓN
SOLUBLE
CEREBRO DE
VACA
NORMAL
FRACCIÓN
INSOLUBLE
CEREBRO DE
VACA AFECTADA
CON BSE
FRACCIÓN
SOLUBLE
FRACCIÓN
INSOLUBLE
_ _
proteinasa K + _ + _
Figura 3. Aspecto de un immunoblot en el que se identifica el prión
(30 kd) como la fracción insoluble y resisitente a la proteinasa.
Las medidas que ya han sido probadas y aprobadas para el control
de la EEB pueden agruparse en 4 grandes categorías:
a) La supresión de los materiales específicos de riesgo (MER) de
la cadena alimentaria.
b) La supresión de las harinas de carne en la alimentación de
animales de abasto.
c) La detección de proteínas animales en piensos para evitar
fraudes.
d) La realización de pruebas analíticas diagnósticas.
El Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación prevé disponer
de unas 500.000 pruebas Prionics-Check® y las comunidades
autónomas están preparando laboratorios para realizar análisis
a todos los animales mayores de 24 meses antes de que entren
en la cadena alimentaria, así como a todos los animales muertos
en la explotación, los sometidos a sacrificios de urgencia y a
todos aquellos bovinos sacrificados y con sintomatología nerviosa.
Ante cualquier duda el diagnóstico debe remitirse al Centro
Nacional de Referencia en la Facultad de Veterinaria de Zaragoza.
Medidas de control
En el año 1996, tras la comprobación de la posible transmisión
de la enfermedad al hombre, se adoptaron cuatro medidas
principales:
1. Prohibición de las harinas de carne y hueso para la alimentación
de rumiantes. Con esta medida se pretende que prión anómalo
no pase a los animales.
2. Eliminación de los MER de la cadena alimentaria para evitar
el contagio tanto a humanos como a animales.
3. Exigir y asegurar los requisitos técnicos para eliminar el agente
causal en las llamadas rendering plans mediante la aplicación
de valores de presión temperatura y tiempo, que garanticen la
destrucción del prión.
4. Implantación de un programa pasivo de vigilancia.
En el año 2000 se añadieron las siguientes disposiciones:
1. Ampliación de los MER, con la inclusión de los intestinos de
los animales de cualquier edad y la columna vertebral.
2. Eliminación de todos los animales muertos en la explotación
de la cadena de alimentación animal o humana.
3. Programa de vigilancia activa. Escrutinio de la enfermedad
en todas las poblaciones de riesgo.
4. Medidas de intervención en el mercado. Adquisición de la
carne de animales de más de 30 meses sin analizar y retirada de
la cadena de consumo.
Estas medidas han sido coordinadas y consensuadas por todas
las comunidades autónomas responsables de su ejecución. El
Plan Coordinado de Actuación incluye, además, una campaña
de información y promoción al consumo, así como el fomento
de la investigación científica de la EEB.
BIBLIOGRAFÍA RECOMENDADA
1. Collee J, Bradley R. BSE A decade on. Lancet 1997; 349: 636-
721.
2. Collinge J, Sidle KCL, Maeds J, Ironside J, Hill AF. Molecular
analysis of prion strain variation and the aetiology of "new
variant" CJD. Nature 1996; 383: 685-690.
3. European Commission. Transmisible spongiform
encephalopathies. Protocols for the laboratory diagnosis and
confirmation of bovine spongiform encephalopathy and scrapie.
A report from the Scientific Veterinary Committee. EC, Brussels,
September 1994.
4. Kimberlin RH. Encefalopatía bovina espongiforme. Rev Sci
Tech Off Int Epiz 1992;11: 441-489.
5. Schreuder BEC. Animal spongiform encephalopathies – An
update. Part. II. Bovine spongiform encephalopathy (BSE). Vet
Quart 1994; 16: 182-192.
6. Taylor KC. The control of bovine spongiform encephalopathy
in Great Britain. Vet Rec 1991; 129: 522-526.
7. Wilesmith JW, Wells GAH, Cranwell MP, Ryan JBM. Bovine
spongiform encephalopathy: Epidemiological studies. Vet Rec
1988; 123:638-644.
8. Wilesmith JW, Ryan JBM, Atkinson MJ. Bovine spongiform
encephalopathy: epidemiological studies on the origin. Vet Rec
1991; 128: 199-203.
9. Prusiner SB. Novel proteinaceous infectious particles cause
scrapie. Science 1982; 216: 136_44.
10. Estadisticas del Ministerio de Agricultura, Pesca y
Alimentación. http://www.eeb.es.
10 Encefalopatía Espongiforme Bovina
11

Roche Diagnostics informa / Junio 2001
COBAS INTEGRA 800
Totalmente seguro,
absolutamente flexible
N. Cavaco
Departamento de Marketing. Roche Diagnostics. Barcelona
Siempre con el objetivo de adaptarse mejor a las necesidades de los
clientes, Roche Diagnostics, sigue mejorando continuamente sus productos,
para que puedan aportar las soluciones que realmente necesitan. Así,
con la entrada en el nuevo milenio, Roche Diagnostics, presenta un
nuevo producto de la familia COBAS, destinado al laboratorio clínico.
Cobas Integra 800 incluye las ventajas de la línea Cobas e Hitachi,
además es el analizador automático de Roche Diagnostics que incluye
los últimos desarollos tecnológicos en lo que se refiere a la seguridad
Enzimas y sustratos (35)
Iones (4)
Proteínas específicas (21)*
Drogas de abuso (14)
Fármacos (21)
*En desarrollo 5 nuevas magnitudes.
Figura 1. Pruebas disponibles en
el analizador Cobas Integra 800.
en el pipeteo de la muestra. Roche Diagnostics propone a los laboratorios medianos una solución global
(figura 1), con Cobas Integra 800, Elecsys 2010 y el software para el control del flujo de muestras a tiempo
real PSM que le aporta siguientes ventajas: 1. Consolidación: Amplio menú de magnitudes (>160 pruebas
disponibles). Diversos principios analíticos: Espectrometría de absorción molecular, Potenciometría directa
e indirecta, turbidimetría con chequeo automático de la zona de exceso de antígeno (prozona),
inmunoturbidimetría competitiva (kims), fluoroinmunoanálisis de polarización, y electroquimioluminiscencia.
Consolidación
Cobas Integra 800 usa los casetes exclusivos de la línea Integra,
con un abanico amplio de pruebas (figura 1), entre las que nos
gustaría destacar las siguientes determinaciones:
• Amonio y lactato líquido con una calibración por lote
• Litio por potenciometría directa
• HbA1c con el proceso de hemólisis totalmente automático
• Receptor sérico de la Transferrina
• Proteína C reactiva (látex) ultrasensible y con un amplio intervalo
de medida.
Igual que los otros miembros de la familia, Cobas Integra 800,
éste puede trabajar a la vez con distintos tipos de muestra: suero,
plasma, orina, líquido cefalorraquídeo, sangre total. Para ello
puede utilizar simultáneamente distintos tipos de aplicaciones
con calibraciones diferentes.
Tecnología y seguridad
Además de diferentes principios de medida:
• Espectrometría de absorción molecular
• Potenciometría directa e indirecta
• Turbidimetría con chequeo automático de la zona de exceso de
antígeno (prozona)
• Inmunoturbidimetría competitiva (kims)
• Fluoroinmunoanálisis de polarización
Cobas Integra 800 presenta un avance tecnológico importante
en la seguridad del pipeteo de muestra:
• Pippeting Integrity Check (PIC) (figura 2) es el sistema de control
total en la manipulación de la muestra.
Figura 2. Pippeting
Integrity Check (PIC).
Sistema exclusivo
de pipeteo que
garantiza la toma
correcta de la
muestra.
Flujo continuo de muestras
Con este nuevo desarrollo Roche Diagnostics ha incrementado
la flexibilidad del analizador Cobas Integra. Para una mejor
adaptación a las necesidades de los usuarios, en lo que se refiere
a la manipulación de los tubos de las muestras. Este equipo está
diseñado para poder trabajar a la vez con dos tipos de soporte
de muestra:
a) 5RD RACK UNIVERSAL – Portamuestras de 5 posiciones
que es común en toda la plataforma Hitachi; Elecsys
b) 15RD RACK – Portamuestras de 15 posiciones que es común
a todos los sistemas de COBAS – COBAS CORE II Y COBAS
INTEGRA 400.
Con esta innovación Roche Diagnostics ofrece la posibilidad al
usuario de intercambiar muestras entre cualquiera de sus equipos,
sin necesidad de manipular los tubos, o de incrementar la
complejidad de la extracción; Con un mismo tubo se puede
procesar hasta 160 pruebas distintas (98 magnitudes –113
aplicaciones- entre química clínica e inmunoanálisis homogéneos
y 47 inmunoanálisis heterogéneos).
En este modelo se incrementa la eficacia del laboratorio, porque
se posibilita el control a tiempo real de todo el proceso analítico.
Roche Diagnostics aporta con el conjunto COBAS INTEGRA
800, ELECSYS 2010 Rack el software PSM:
• Flujo continuo de muestras sin hojas de trabajo.
• Clasificación y ruta personalizada de cada muestra.
• Trazabilidad a tiempo real de cada muestra.
• Permite trabajar con criterios de priorización de muestras según
necesidades de los servícios peticionarios.
Siguiendo nuestro lema “Comprometidos con la solución”,
ofrecemos a los laboratorios medianos:
• Tecnología, Seguridad y autonomía (flujo contínuo)
• Concepto de Organización de Laboratorios basada en el SOPORTE
UNIVERSAL DE MUESTRA (RACK LAB), y creación
personalizada de áreas de trabajo.
• Solución global para el laboratorio basada en los siguientes
componentes:
– COBAS INTEGRA 800
– Elecsys 2010 rack
– PSM (organizador del flujo continuo de muestras a tiempo real)
2. Seguridad: Sistema exclusivo de pipeteo totalmente seguro: Pippeting Integrity Check (PIC). Reactivos
listos para uso. Calibraciones estables. Mantenimientos automáticos sin presencia de usuario.
3. Flujo continuo de muestras: Soporte Universal de muestras. Clasificación
y control del flujo de muestras en proceso continuo a tiempo real. Sin
listas de trabajo, sin preclasificación de muestras.
Esensis
Diagnostics laboratory
organisation
Incluye tres chequeos automáticos en distintos pasos del proceso
de recogida de la muestra:
1º Paso: Detección del nivel de muestra en el tubo primario, o
pocillo de micromuestra.
2º Paso: Control de dispensación de muestra en la cubeta con
reacción, vía un detector específico. Esta característica es exclusiva
del sistema Cobas Integra 800.
3º Paso: Detección de coágulo en la aguja de pipeteo por diferencia
de presión.
12 13

Roche Diagnostics informa / Junio 2001
Receptor soluble de la
transferrina.
Valoración del método
totalmente automatizado.
A. F. Remacha, M. P. Sardà. Servicio de Hematología. Hospital de la Santa Creu i Sant Pau. Barcelona.
Tina-quant ® a sTfR
La investigación que se viene desarrollando en los últimos años sobre el
metabolismo del hierro (Fe) hace que debamos revisar continuamente muchos
de nuestros conocimientos acerca del mismo. En especial, el descubrimiento
de nuevas proteínas implicadas, de sus mecanismos reguladores y de la relación
entre Fe y respuesta inmunológica son aspectos a considerar (1,2). La patología
del Fe es, sin duda alguna, la de mayor prevalencia en los seres humanos pues
incluye la enfermedad adquirida más frecuente, la ferropenia y una de las
anomalías hereditarias más frecuentes, la hemocromatosis hereditaria (3,4).
Uno de los aspectos más estudiados en los últimos años ha sido el papel de la
forma soluble del receptor de la transferrina (sTfR) en el estudio de las anomalías
del metabolismo férrico (5). Sin embargo, la falta de una metodología que
permitiese su determinación de una forma rápida, automatizada y fiable impedía
que su estudio estuviese más extendido. La aparición de metodologías fiables
automatizadas, sin duda, permitirá una mucho más rápida difusión de su uso
clínico. En este trabajo primero se comentarán someramente los aspectos
fisiológicos esenciales del metabolismo férrico en que participa esta proteína
férrica con el fin de poder entender su utilidad clínica e interpretar adecuadamente
los resultados del metabolismo férrico. Posteriormente se presentarán los datos
obtenidos en la valoración clínica de una metodología totalmente automatizada
para la investigación del sTfR en el suero.
Aspectos de la fisiología del Fe relacionados con el sTfR.
El Fe en el ser humano se encuentra en una concentración de
45 a 55 mg/kg de peso, el 60-70% en forma de Hb, el 10% en
otras hemoproteínas (mioglobina, citocromos, etc.) y el resto
(20-30%), en los depósitos unido a la ferritina (Ft). Sólo un
1,1 % (3 mg) del Fe se une a la transferrina (Tf), sin embargo,
este pool dinámico es esencial (1,4).
El Fe transportado por la Tf se une al sTfR de la superficie celular,
todos (Fe, Tf y sTfR) juntos son internalizados formando una
vesícula citoplasmática (el siderosoma). Los cambios de pH
provocan la liberación del Fe y su posterior salida del siderosoma;
una vez en el citoplasma celular el Fe se incorpora a las proteínas
que usan este metal o bien a la ferritina (Ft), donde se almacena.
Cada día hay una pequeña pérdida de Fe que debe ser compensada
por la ingesta (1,4).
La vía transferrina-receptor de la transferrina.
La transferrina (Tf) circulante se encuentra saturada en un 30%
por Fe, encontrándose en el plasma todas las posibilidades, desde
la apoTf a la unida a dos átomos de Fe (4). El receptor de la
Transferrina (sTfR) es una proteína de 95 Kd y 760 aminoácidos
que se encuentra anclada en la superficie de la mayoría de las
células, especialmente en los eritroblastos. Se encuentra formando
homodímeros (180 kd) que se
unen a la Tf (unión 2:2). La
afinidad depende del número
de átomos de Fe que transporta
la Tf, siendo más afín por la que
transporta dos Fe3+ y menos
por la apo-Tf (1,2,6).
El sTfR posee un dominio
transmembrana de 5 kd (28
aminoácidos) que continua con
un dominio intracitoplasmático
C-terminal de 61 aminoácidos.
El dominio extracelular posee
671 aminoácidos. Éste sufre una
escisión enzimática y se libera
al plasma. Esta forma proteica
circulante de 80 Kd es la que
podemos medir.
El gen del sTfR está situado en
el cromosoma 3, cercano al gen
de la Tf, posee en la región
terminal 3´elementos IRE (iron-responsive elements), sensibles
a la concentración de Fe, que regulan la síntesis postranscripcional
de esta proteína (1,4,6).
La proteína de almacenamiento del Fe: la ferritina (Ft).
La Ft que se observa en los tejidos es un multímero de 450 Kd
capaz de almacenar hasta 4000 moléculas de Fe3+ y está formada
por 24 monómeros (subunidades). El multímero de Ft lo forman
la Ft H o cadena pesada, de ella depende la actividad ferrioxidasa,
y la Ft L o cadena ligera, en la que se halla la función de
almacenamiento del Fe. Ambas son esenciales para formar la
molécula de Ft (6).
Los genes de ambas isoformas Ft son similares y poseen una
única región proximal IRE en posición 5´, que es regulada por
los cambios del Fe al igual que el sTfR y otras proteínas (6,7).
Las nuevas moléculas del metabolismo férrico.
La proteína HFE es la proteína cuya mutación causa la
hemocromatosis hereditaria (7,8). El HFE, una proteína HLAlike,
se une al STFR (9) provocando la disminución de la afinidad
del STFR por la Tf-Fe3+, con ello se atenúa la absorción de Fe
a nivel intestinal. El Nramp2 (natural resistence-associated
macrophage protein-2) pertenece a una familia de proteínas
especializadas en el transporte de metales bivalentes. El Nramp2
se encarga del transporte del Fe desde la luz intestinal al interior
del enterocito en el ápex de las vellosidades intestinales. En el
eritroblasto, el Nramp2 extrae el Fe de los siderosomas hacia el
citoplasma (10). El receptor de la transferrina tipo 2 (TFR2) es
una de las últimas proteínas incorporadas. Se localiza en 7q22
y posee un 66% de homología con el TfR pero carece de regiones
IRE, por lo que no es regulado por el Fe intracelular. También
es capaz de unir Tf, pero con menor afinidad que el TfR. Su
función en el metabolismo férrico es poco conocida, aunque
Figura 1. Regulación de las proteínas férricas.
puede ser importante, pues su falta provoca una forma de
hemocromatosis. Se expresa sobre todo en los eritroblastos y en
el hígado (11).
Existen otras proteínas implicadas en el metabolismo férrico,
cuya revisión no será contemplada en este trabajo (1,3,4).
Regulación de las proteínas relacionadas con el Fe. Se realiza a
nivel de la traducción (paso de mRNA a proteína) mediante los
elementos sensibles al Fe (IRE, iron-responsive elements) y, por
lo tanto, depende directamente del contenido de Fe intracelular
(figura 1).
14 El inhibidor del factor tisular y su repercusión en la hemostasia
15

Roche Diagnostics informa / Junio 2001
La secuencias IRE se sitúan en la regiones no traducidas (UTR)
5´ó 3´. Tanto en la Ft H como en la Ft L existe una región IRE
en situación 5´UTR. En el STFR, el Nramp2 y otras proteínas se
han encontrado 5 regiones UTR en posición 3´. La falta de Fe
intracelular provoca que unas proteínas intracelulares, las
proteínas que se unen al de Fe (IBP, iron-binding proteins)., se
unan a las regiones IRE. En el caso de su unión a una región
IRE situada en posición 5´ se impide la progresión de la traducción
del mRNA a proteína (por eso la Ft disminuye en la ferropenia).
En cambio con la unión de las IBP a regiones IRE situadas en 3´
se evita la degradación del mRNA y aumenta la producción de
proteína (por ello en la ferropenia se eleva el sTfR) (1,3,12).
Existen otras vías de regulación, mediada por las citoquinas que
están a su vez implicadas en la respuesta de fase aguda. Estas
citoquinas modulan por una vía independiente del Fe la
producción de Ft, lo que provoca un incremento de la síntesis
de Ft en caso de inflamación (6,12).
La forma soluble del sTfR.
Como se ha explicado anteriormente, se produce por escisión
del receptor celular (CD71) (13). Esta forma circulante, cuya
función fisiológica específica es desconocida, se puede medir
mediante diferentes métodos inmunoquímicos (5).
Su estudio ha demostrado ser útil para valorar el metabolismo
férrico y la masa eritroblástica de la médula ósea, ya que la
mayoría del sTfR se encuentra en la superficie de esas células.
Estas dos circunstancias marcan sus ventajas e inconvenientes
(tabla I).
Tabla I. Diferencias entre el receptor de la transferrina y la ferritina.
Mecanismos de
regulación.
Papel en el
metabolismo
férrico
Utilidad
clínica.
sTfR
Valoración clínica del sTfR sérica.
Ferritina.
Secuencias IRE en 5´ • Secuencias IRE en 3´.
• Secuencias de respuesta a
citoquinas inflamatorias.
Captación del complejo
transferrina-hierro,
regulado por la proteína
HFE.
• Estudio de la ferropenia
en presencia de rasgos
inflamatorios.
• Valoración cuantitativa
de la eritropoyesis
medular.
• Almacenamiento y
liberación del Fe.
• Dos isoformas Ft H y L.
Estudio de los depósitos
férricos.
• Estado ferrodeficitario.
• Atesoramiento férrico.
El sTfR se eleva en caso de ferropenia, cuando existe una
hiperplasia eritroblástica (anemias hemolíticas) o en caso de
determinadas proliferaciones celulares (leucemia linfática
crónica). En cambio, disminuye cuando existe una hipoplasia
eritroide (eritroblastopenia, anemia aplásica) o el en caso de
infiltraciones que desplazan la serie eritroblástica (leucemias
agudas) (14-16).
Teniendo en cuanta estos aspectos, el sTfR debe valorarse en los
dos contextos anteriores y siempre de forma concomitante con
otras pruebas, dando lugar a unos patrones de gran valor
etiopatogénico (14).
a) Con relación al metabolismo férrico, el sTfR debe estudiarse
junto a otros parámetros (tabla II). Sin embargo, donde tiene
Tabla II. Diagnóstico diferencial de las anemias microcíticas.
Hb, hemoglobina; VCM, volumen corpuscular medio; IND. Índice;
SID/CAP/SAT, sideremia/capacidad total de transporte de hierro/índice
de saturación; Ft/sTfR, ferritina sérica/receptor de la transferrina; D,
disminuido; N. Normal; A, alto.
Hb
VCM
Indices
SID/CAP/SAT
Ft
sTfR
Estudio de
hemoglobinas
Anemia
ferropénica
D
D
Positivo
D/A/D
D
A
N
Talasemia
minor
N-D
D
Negativo
N/N/N
N-A
N-A
Alteradas
Anemia
inflamatoria
D
N
Positivo
D/D/N-D
A
N
N
gran interés es en el diagnóstico diferencial entre anemia
ferropénica y anemia de tipo crónico o inflamatorio. En la
anemia ferropénica sin rasgos inflamatorios la ferritina sérica
disminuye y el sTfR aumenta. En la anemia inflamatoria la Ft
aumenta por un mecanismo dependiente de citoquinas; por el
contrario, el sTfR varía sólo como reflejo de la masa eritroblástica.
El problema surge cuando existe una anemia ferropénica con
rasgos inflamatorios, donde típicamente se encuentra una Ft con
valores intermedios. Este problema se ha intentado solventar
estableciendo diferentes dinteles de Ft en caso de inflamación.
El sTfR no se verá apenas afectado por los rasgos inflamatorios
y por lo tanto sólo se elevará en caso de ferropenia (5,15,16).
Varios autores han demostrado que para una correcta valoración
del sTfR es necesario establecer el valor diagnóstico del mismo
(14-16). Esto se ha hecho mediante curvas ROC o estudios de
regresión, así se puede calcular la sensibilidad y especificidad
para cada concentración de sTfR. Estos estudios se basan en la
comparación de los valores de sTfR en casos con anemia
ferropénica y anemia inflamatoria. Si se utiliza el cociente sTfR
/Ft todavía mejora su poder diagnóstico; sin embargo, el cálculo
de este índice es más engorroso.
b) El sTfR en el estudio de la masa eritroblástica medular. Su
utilidad en este campo ha sido mucho menos estudiada.
Para la correcta valoración del sTfR y la identificación de
diferentes patrones eritropoyéticos debe estudiarse junto con el
hemograma, los reticulocitos y sus fracciones de maduración y
con la eritropoyetina sérica. Así se han identificado varios
patrones eritropoyéticos (tabla III)(14).
Tabla III. Diferentes patrones de eritropoyesis. Epo: eritropoyetina. Ratio
O/P, razón entre los valores observados y los previstos para el grado de
anemia (se obtienen por regresión). IM, índice de maduración (cociente
entre reticulocitos de baja fluorescencia y de la suma de los de intermedia
y alta). N, normal. D, disminuido. A, elevado.
Normal
Proliferativo
• Hemólisis
• Eritropoyesis ineficaz
Hipoproliferativo
Déficit de EPO
Hb
N
D
D
D
D
Valoración del sTfR mediante una metodología automatizada.
Se comparó el método Tina-quant® - Receptor soluble de la
transferrina (Roche Diagnostics, Mannheim, Alemania) que se
efectúa en un Hitachi 911 con un método de ELISA (IDEA sTfR
IEMA. Orion Diagnostics, Espoo, Finlandia). El método
automatizado efectúa la determinación directamente en tubo
primario, sin precisar ninguna manipulación previa de la muestra,
excepto la centrifugación. Además, las curvas de calibración
pueden utilizarse durante varias semanas, obteniéndose los
primeros resultados aproximadamente a los 10 minutos de
colocada la muestra. En la comparación de ambas metodologías
se utilizó un estudio de regresión lineal simple y el método no
paramétrico de Passing-Bablok (17).
En segundo lugar se estableció el intervalo de referencia del sTfR
en un grupo de personas con hemograma y metabolismo férrico
dentro de los límites de referencia.
Por último, como parte de un estudio clínico, se compararon los
valores de sTfR sérico en un grupo de personas con anemia
ferropénica sin rasgos inflamatorios (Hb< 120 g/l, Fe < 9 mol/l,
capacidad total de transporte de hierro > 69 mol/l, ferritina
sérica < 15 mg/l y VSG< 20 mm) con otro que presentaba
anemias inflamatorias (Hb< 120 g/l, Fe < 9 mol/l, capacidad
total de transporte de hierro < 40 mol/l, ferritina sérica > 100
g/l y VSG> 50 mm). Ambos grupos presentaban unos
niveles de Hb similares.
construyeron curvas ROC y se realizó un análisis de
regresión logística (Y=1, presencia de anemia
ferropénica, Y=0 presencia de anemia inflamatoria). El
punto de corte se calculó mediante la regresión logística
en el punto en el cual Y= 0,5.
Por último se determinaron los niveles de sTfR en un
grupo de pacientes con diferentes hemopatías,
incluyendo leucemias agudas, síndromes
mielodisplásicos, aplasias medulares, anemias
hemolíticas, etc.
Resultados y discusión.
sTfR
Ratio O/P
Comparación de metodologías. Se contrastaron los
N
N
N
D
D
EPO
Ratio O/P
N
N
N
N-A
D
Reticulocitos
absolutos/IM
N/N
A/A
N-D/A
D/D
D/N
resultados obtenidos en 69 muestras con diferentes etiologías y
valores, que abarcaban un amplio espectro desde valores bajos
hasta valores elevados.
Los valores obtenidos con Tina-quant® fueron 7,058,1 mg/l
(máximo 44,7 y mínimo 1,1 mg/l) y con IDEA 5,26,5 mg/l
(máximo 35 y mínimo 0,2 mg/l). Al comparar los valores
obtenidos con ambas metodologías se observaron diferencias
significativas (t de Student para muestras apareadas; diferencia
= 1,81 mg/l, intervalo de confianza del 95 % = 1,23 - 2,39 mg/l,
p= 3.3 x 10-8).
Sin embargo, existía una correlación entre ambas metodologías
r = 0,97 (p=6,7 x 10-18) (figura2). Mediante un estudio de
regresión de Passing-Bablok se observaron diferencias
significativas en la pendiente y el punto de corte en el eje de
ordenadas IDEA = 0,874 (95% IC = 0,794-0,960) Tina-quant® ,
- 0,732 (IC 95% = -1,069, -0,425).
Figura 2. Comparación entre dos métodos para medir sTfR.
Estos estudios demuestran que los valores obtenidos con Tinaquant®
son superiores a los obtenidos con IDEA, por lo tanto
se procedió a calcular el intervalo de referencia en una población
sana y después a demostrar su valor clínico en diferentes tipos
de anemias y otras patologías.
Población de referencia. Se obtuvieron los valores de sTfR en
121 personas sanas (55 hombres y 66 mujeres), el sTfR era de
Tabla IV. Características de los pacientes con anemia ferropénica o inflamatoria.
VSG: velocidad de sedimentación globular. Valores como media y desviación estándar.
N
Hb g/l
VCM fl
Ferritina sérica µg/l
STfR mg/l
VSG mm
Anemia
ferropénica
47
94 ± 15
72 ± 8
4 ± 3
11,3 ± 5,8
17 ± 5
Anemia
inflamatoria
71
94 ± 12
88 ± 5
434 ± 424
3,2 ± 1, 6
92 ± 25
Grupo de
referencia
121
142 ± 10
89 ± 4
74 ± 56
3,07 ± 0,7
10 ± 5
Anemia
mixta
19
90 ± 27
77 ± 5
169 ± 254
8,2 ± 4
72 ± 38
16 Tina-quant ® a sTfR. Receptor soluble de la transferrina. Valoración del método totalmente automatizado.
17

Roche Diagnostics informa / Junio 2001
3,070,7 mg/l, el 95% central de la distribución de valores
estaba comprendido entre 1,87 y 4,9 mg/l (tabla IV). No
existía diferencia entre los niveles observados en hombres
y mujeres (3,060,7 y 3,070,65 mg/l, respectivamente. p=0,94).
Los valores de sTfR no seguían una distribución normal (test
de Kolmogorov-Smirnov con corrección de Lilliefors,
p=0,012) (figuras 3 y 4).
Figura 3. Distribución de los valores de sTfR en el grupo de referencia.
Figura 4. Histograma de distribución del sTfR en una población sana.
Valor del sTfR en el diagnóstico Valor del sTfR en el diagnóstico
diferencial de las anemias. En primer lugar hay que establecer
su utilidad diagnóstica en la diferenciación entre anemias
ferropénicas e inflamatorias, así como el punto de corte de sTfR
entre los dos tipos de anemia. Además, el sTfR ha de valorarse
siempre en conjunto con otros parámetros del hemograma y del
metabolismo férrico; el sTfR solo no tiene demasiado valor (18)
(tabla IV).
Por este motivo se evaluaron 47 casos con anemia ferropénica
típica (AF) frente a 71 con anemia de tipo inflamatorio (AI),
todos cumplían los criterios anteriormente expuestos. Los valores
de sTfR eran diferentes entre los dos grupos (AF; 11,30,7 mg/l
frente a AI, 3,171,6 mg/l, p

Roche Diagnostics informa / Junio 2001
Valoración del analizador
hematológico XE 21OO en la
determinación de eritroblastos en
sangre periférica
C. Cárcamo 1 ; A. Arribas 1 ; M. I. de Frutos 1 ; F. de Frutos 1 ;
F. Omeñaca 2 ; A. Mª Viloria 1 .
1 Servicio de Hematología Analítica,
2 Servicio de Neonatología. Hospital La Paz. Madrid.
En este estudio hemos evaluado el
comportamiento del analizador hematológico
XE2100 en la determinación de eritroblastos
(NRBC) en sangre periférica en una población
de niños pertenecientes al Servicio de
Neonatología de nuestro hospital.
El objetivo era la comparación de las magnitudes
"recuento de leucocitos (WBC)" y "recuento de
eritroblastos/100 leucocitos (NRBC/100 WBC)"
en el analizador Sysmex XE2100 frente a los
resultados de las mismas magnitudes obtenidos
en otro analizador suficientemente evaluado como
es el Cell-Dyn 4000 (Abbott). Ambos analizadores
hematológicos sustraen automáticamente el
recuento de los NRBC del número total de
leucocitos, por lo cual son teóricamente
comparables. Asimismo se comparó el recuento
de eritroblastos del XE2100 con la observación
al microscopio óptico.
Materiales y Métodos
Pacientes
Se procesaron 107 muestras de sangre periférica, 89 de neonatos
y 18 de lactantes que pertenecían a 65 niños diferentes, ya que
en el 56% de los casos las muestras fueron remitidas al laboratorio
en más de una ocasión (entre 2 y 10 días) durante la realización
del estudio.
De los 65 niños estudiados, 43 eran prematuros y 22 nacieron
a término y sólo dos no tenían ninguna patología asociada,
habiendo nacido a término y con un peso superior a 2500 g
(3,1%). Los 63 niños restantes padecían una o más patologías,
distribuyéndose éstas de la forma siguiente:
Patologías del aparato respiratorio (49,2%):
Enfermedad de la membrana hialina (EMH) (20,6%); distress
respiratorio (9,5%); pausas de apnea (6,3%); neumonía en el
pulmón derecho (1,6%); pulmón seco (1,6%); neumopatía
intersticial (1,6%); asfixia por rotura uterina (1,6%); atresia
pulmonar (1,6%); crisis de cianosis (1,6%); displasia
broncopulmonar (1,6%); hipoplasia pulmonar (1,6%).
Patologías del aparato cardiovascular y hematológicas
(49,2%):
Tetralogía de Fallot (1,6%); ductus arterioso (4,8%); cardiopatía
congénita (1,6%); ventriculomegalia leve (1,6%); hipertensión
arterial (4,8%); hipovolemia (3,2%); trombosis aórtica (4,8%);
plétora (11,0%); hemofilia A (1,6%); transfusión (1,6%);
coagulopatía (1,6%); anemia (11,0%).
Patologías del sistema nervioso (25,5%):
Hemorragia subependimaria (3,2%); hemorragia cerebral (1,6%);
hidrocefalia (3,2%); encefalopatía (3,2%); hemorragia
intraventricular II (12,7%); agenesia del cuerpo calloso (1,6%).
Patologías del aparato digestivo (4,8%):
Enterocolitis necrotizante I-II (1,6%); melenas (1,6%); reflujo
gastroesofágico (1,6%).
Patologías del aparato urinario (4,8%):
Insuficiencia renal (1,6%); ureterohidronefrosis bilateral (1,6%);
tubulopatía (1,6%).
Infecciones (36,5%):
Sepsis nosocomial (1,6%); shock séptico (1,6%); infección
urinaria por enterococo (1,6%); infección por citomegalovirus
(CMV) (1,6%); infección por virus respiratorio sincitial (VRS)
(3,2%); candidiasis (1,6%); sepsis por estafilococo coagulasa
negativo (3,2%); meningitis (1,6%); sospecha de meningitis
(1,6%); riesgo de infección (11%); madre portadora de
estreptococo (6,3%); madre con hepatitis C (1,6%).
Alteraciones metabólicas (25,4%):
Hiperbilirrubinemia (4,8%); hipocalcemia (9,5%); acidosis
(7,9%); hipoglucemia (3,2%).
Miscelánea (46,2%):
Madre diabética (3,2%); traumatismo obstétrico (1,6%);
osteopenia del prematuro (1,6%); crisis de hipotonía (3,2%);
labio leporino completo bilateral (1,6%); ictericia (35%).
En cuanto a bajo peso y prematuridad, los 65 niños resultaron
ser: 42 prematuros con peso al nacer inferior a 2500 g; 3 nacidos
a término con peso al nacer inferior a 2500 g; 1 prematuro con
peso al nacer superior a 2500 g y 19 nacidos a término con un
peso al nacer superior a 2500 g.
Métodos
Análisis de los eritroblastos en el Sysmex XE2100
En un canal específico, los hematíes se lisan con el reactivo
diluyente Stromatolyser-NR que libera el núcleo de los NRBC
y con el reactivo colorante Stromatolyser-NR (polimetino) se
tiñen de forma específica los ácidos nucléicos de los leucocitos
y de los NRBC. Después la muestra se analiza por citometría de
flujo con láser semiconductor, registrando en el diagrama de
dispersión NRBC las señales de fluorescencia lateral emitida y
de dispersión frontal. La diferenciación entre los eritroblastos y
los leucocitos se hace por tamaño y por fluorescencia emitida
A partir de estos datos se realiza el recuento de los NRBC. Además,
el Sysmex XE2100 realiza la corrección automática del recuento
de leucocitos, restando los NRBC de los leucocitos totales.
Análisis de los eritroblastos en el Cell-Dyn 4000
El reactivo de los leucocitos lisa las células rojas (incluidos los
NRBC) y los núcleos de los eritroblastos se tiñen con ioduro de
propidio, luego la muestra pasa a través de una célula de flujo
óptico. Los datos de los NRBC se analizan en el canal de dispersión
frontal de la luz, dispersión lateral de luz polarizada y fluorescencia
roja. Utilizando estos 3 discriminadores los NRBC son separados
de los WBC y contados como una población celular específica,
independiente de la población de los leucocitos.
El examen al microscopio óptico de los eritroblastos se llevó a
cabo por 2 observadores expertos contando 200 células cada
uno, según recomendaciones del ICSH (International Committee
of Standardization in Haemathology).
Las ecuaciones de regresión de las magnitudes estudiadas se
calcularon mediante la regresión no paramétrica de Passing-
Bablok (1), calculándose aparte el coeficiente de correlación.
Resultados
Respecto a los recuentos de eritroblastos por cada 100 leucocitos
(NRBC/100 WBC), concentración de eritroblastos (NRBC
/10 3 mL) y concentración de leucocitos (WBC/10 -9 L) se utilizó
20
21

Roche Diagnostics informa / Junio 2001
700
20
800
100
NRBCSY
600
500
400
300
200
100
0
ERYTROSYS
18
16
14
12
10
8
6
4
2
0
NRBCSY
700
600
500
400
300
200
100
0
NRBCMYC-NRBCSY
80
60
40
20
0
-20
-40
+1,96 SD
29,0
Media
2,5
-1,96 SD
-24,0
0 100 200 300 400 500 600 700
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20
0 100 200 300 400 500 600 700 800
0 100 200 300 400 500 600 700 800
NRBCCD
ERYTROCD
NRBMYC
Valor medio de NRBMYC y NRBCSY
Figura 1. Regresión de Passing & Bablok para el total de muestras
analizadas; siendo NRBCSY el recuento de eritroblastos/100 leucocitos
analizado por el Sysmex XE2100 y NRBCCD el mismo parámetro analizado
por el Cell-Dyn 4000.
Figura 2. Regresión de Passing & Bablok para el valor absoluto de
eritroblastos x 10 3 µL para todas las muestras analizadas, siendo ERYTROSYS
el valor obtenido en el Sysmex XE2100 y ERYTROCD el mismo parámetro
obtenido en analizador de referencia.
Figura 5. Regresión de Passing & Bablok para el total de muestras
analizadas; siendo NRBCSY el recuento de eritroblastos/100 leucocitos
analizado por el Sysmex XE2100 y NRBCMYC el mismo parámetro obtenido
al microscopio óptico.
Figura 6. Representación de Altman para todas las muestras analizadas;
en donde NRBCSY es el recuento de eritroblastos/100 leucocitos y
NRBCMYC el valor hallado en la observación al microscopio óptico.
Tabla 1
NRBCCD-NRBCSY
20
10
0
-10
-20
-30
-40
-50
-60
-70
-80
+1,96 SD
17,8
Media
-1,6
-1,96 SD
-20,9
0 100 200 300 400 500 600 700
Valor medio de NRBCCD y NRBCSY
Figura 3. Representación de Altman para todas las muestras analizadas; siendo
NRBCSY el recuento de eritroblastos/100 leucocitos analizado por el Sysmex
XE2100 y NRBCCD el mismo parámetro analizado por el Cell-Dyn 4000.
la siguiente ecuación: XE2100 = a + b Cell-Dyn.
En las figuras 1 y 2 aparecen las gráficas de regresión de Passing-
Bablok, mientras que en las figuras 3 y 4 aparecen las
representaciones de Altman (2).
Debido a que la linealidad del recuento de NRBC en el cell-Dyn
4000 es hasta 275 NRBC/100 WBC (3) y que D’Onofrio (4) sólo
comprobó la linealidad para el XE2100 hasta 81,9 NRBC/100 WBC
(no disponía de muestras de mayor concentración), realizamos
también los cálculos poniendo las acotaciones de NRBC/100 WBC
< 81,9; NRBC/100 WBC < 200 y NRBC/100 WBC < 275,
ERYTROCD-ERYTROSYS
1,6
1,4
1,2
1,0
0,8
0,6
0,4
0,2
-0,0
-0,2
-0,4
-0,6
+1,96 SD
0,54
Media
0,07
-1,96 SD
-0,39
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20
Valor medio de ERYTROCD y ERYTROSYS
Figura 4. Representación de Altman para todas las muestras analizadas;
en donde ERYTROSYS es el valor absoluto de eritroblastos x 10 3 µL en el
Sysmex XE2100 y ERYTROCD el mismo parámetro en el otro analizador.
obteniéndose los resultados que aparecen en la tabla 1.
En relación a la comparación con la observación al microscopio
óptico (MO), la fórmula empleada fue: XE2100 = c + d MO.
La recta de regresión de Passing-Bablok y la representación de
Altman aparecen en las figuras 5 y 6, respectivamente.
Los resultados se recogen en la tabla 2.
En cuanto a la sensibilidad (S), especificidad (E), valor predictivo
positivo (VPP) y valor predictivo negativo (VPN) para la magnitud
NRBC del XE 2100 se obtuvo: S = 92,86%; E = 69,44; VPP =
85,53% y VPN = 83,33%.
Tabla 2
Magnitud a (IC 95%) b (IC 95%) r 2 n
NRBC/100 WBC 0,00 (0,00-0,00) 0,98 (0,86-1,06) 0,997 106
NRBC/10 3 µL 0,00 (0,00-0,00) 0,86 (0,76-0,95) 0,994 106
NRBC/100 WBC < 81,9 0,00 (0,00-0,00) 0,89 (0,75-0,99) 0,946 101
NRBC/100 WBC < 200 0,00 (0,00-0,00) 0,91 (0,80-1,02) 0,976 103
NRBC/100 WBC < 275 0,00 (0,00-0,00) 0,96 (0,85-1,05) 0,990 105
WBC 0,18 (-0,86-1,81) 0,89 (0,74-0,98) 0,955 106
Magnitud c (IC 95%) d (IC 95%) r 2 n
NRBC/100 WBC 0,00 (0,00-0,00) 0,90 (0,80-1,00) 0,993 107
NRBC/100 WBC < 81,9 0,00 (0,00-0,00) 0,95 (0,74-1,10) 0,936 102
NRBC/100 WBC < 200 0,00 (0,00-0,00) 0,98 (0,80-1,05) 0,987 104
Discusión
El número de eritroblastos circulante muestra un descenso
progresivo a medida que aumenta la edad gestacional. Los niños
sanos nacidos a término muestran una media de
aproximadamente 7 NRBC/100WBC (5), mientras que los niños
nacidos prematura-mente muestran recuentos moderadamente
aumentados de NRBC, encontrándose los valores más altos en
los niños "pequeños" para su edad gestacional (6). Otras causas
de NRBC normalmente altos incluyen determinadas patologías
del recién nacido como daño neurológico, niños de madre
diabética, hipoxia intrauterina, etc. (7-9), encontrándose los
recuentos de NRBC más elevados en los neonatos con
enfermedad hemolítica del recién nacido.
En nuestro estudio obtuvimos valores de NRBC/100WBC en
12 muestras de sangre periférica; las características de los niños
se recogen en la tabla 3.
En cuanto a la valoración del Sysmex XE2100, se obtuvo una
excelente correlación en los recuentos de NRBC/100WBC, tanto
para todas las muestras analizadas como para las acotaciones
referidas, por lo que concluimos que el límite de linealidad que
informa D'Onofrio debe ser mayor, basándonos en nuestra
experiencia y en el estudio realizado por Walters (10) quien
informa un límite superior de 40.000 NRBC/mL. Los valores
22 Valoración del analizador hematológico XE 2100 en la determinación de eritroblastos en sangre periférica
23

Roche Diagnostics informa / Junio 2001
Tabla 3
Paciente* Peso al Edad gestacional Edad Diagnóstico NRBC/100WBC
nacer (g) (semanas) (días) (MO)**
S.M. 900 30 5 EMH; Inestabilidad hemodinámica; 782
Hemorragia intraventricular II
C.M. 1000 33+6 0 Hemorragia intraventricular II; Plétora 340
S.M. 900 30 6 EMH; Inestabilidad hemodinámica; 287
Hemorragia intraventricular II
C.M. 1000 33+6 1 Hemorragia intraventricular II; Plétora 196
A.M. 1080 31 1 Crecimiento intrauterino Retardado;
Riesgo de infección; Plétora; Ictericia;
Inestabilidad hemodinámica 174
S.M. 900 30 9 EMH; Inestabilidad hemodinámica; 86
Hemorragia intraventricular II
C.M. 1600 27 0 Distress respiratorio; EMH; 21
Inestabilidad hemodinámica
M.E. 850 27 1 EMH; Hipocalcemia; Ictericia 12
M.E. 850 27 4 EMH; Hipocalcemia; Ictericia 9
M.V. 1200 31 22 EMH; Hemorragia intraventricular II 8,5
Traumatismo obstétrico
C.M. 1600 27 4 Distress respiratorio; EMH; 8,5
Inestabilidad hemodinamica
S.M. 900 30 21 EMH; Inestabilidad hemodinámica; 7,5
Hemorragia intraventricular II
*Iniciales de los nombres de los pacientes
**Microscopía óptica
MODULAR ANALYTICS < E >
Inmunoanálisis Heterogéneos
De absoluta confianza
son totalmente transferibles entre los dos aparatos. Asimismo
se obtuvieron unos excelentes resultados en la comparación con
el microscopio óptico. Los resultados también fueron buenos
para las medias de concentración de eritroblastos y leucocitos.
Por tanto podemos concluir que el analizador hematológico
Sysmex XE2100 facilita en gran medida el trabajo en el
laboratorio clínico a la hora de evaluar eritroblastos en sangre
periférica por su sensibilidad y especificidad elevadas y por
proporcionar de modo independiente el recuento de eritroblastos
y el de los leucocitos, evitando las correcciones manuales.
Referencias
1) Passing H, Bablok W. A new biochemical procedure for testing
the equality of measurements from two different analytical methods,
Application of linear regression procedures for method comparison
studies in Clinical Chemistry. J Clin Chem Clin Biochem 1983;
21:709.
2) Bland JM, Altman DG. Statistical methods for assessing
agreement between two methods of clinical measurement. The
Lancet 1986; 307.
3) Kim YR, Yee M, Metha S, et al. Simultaneous differentation and
quantitation of erythroblasts and white blood cells on a high
throughput clinical haematology analyser. Clin Lab Haemat 1998;
20: 21.
4) Zini G, Mistretta G, Crollari S, Laurenti L, Pelliccioni N, Mascagna
G, D’Onofrio G. Poster presentado en el Congreso ISLH de Kobe
(Japón) 1999.
5) Oski FA, Nairman JL. En Hematological Problems in the Newborn.
Filadelfia. W B Saunders Co, 3ª edición, 1982; pg:14.
6) Philip AGS, Tito AM. Increased nucleated red blood cell counts
in small for gestational age infants with very low birth weight. Am
J Dis Child 1989; 143: 164.
7) Phelan JP, Ahn MO, Kurst LM, and Martin GI. Nucleated red
blood cells: A marker for fetal asphyxia. Am J Obst, Gynaecol 1995;
173: 1380.
8) Green DW, Mimoumi F. Nucleated erytrocytes in healthy infants
and in infants of diabetic mothers. J Pediat 1990; 116: 129.
9) Soothill PW, Nicolaidos KH, Campbell S. Prenatal asphyxia,
hyperlactaemia, hipoglycaemia and erytroblastosis in growthretarded
foetuses. Br Med J 1987; 294: 1051.
10) Walter J, Garrity P. Performance Evaluation of the Sysmex
XE2100 Hematology Analyzer. Lab Hemathol 2000; 6:83.
24 Valoración del analizador hematológico XE 2100 en la determinación de eritroblastos en sangre periférica
25

URISYS 2400
innovación también en urianálisis
El diagnóstico molecular
en continua evolución
José Mª Sanz Uriarte
Roche Diagnostics. Departamento de Servicios Centrales.
Barcelona
La simplificación de los métodos de
diagnóstico basados en la reacción en
cadena mediada por la polimerasa (PCR)
ha generalizado su uso en los laboratorios
Última generación de analizadores Hitachi de tiras reactivas
Procesado de muestras mediante rack estándar de 5 posiciones
Carga continua o en series de hasta 75 muestras
Homogeneización y dispensado de la muestra por pipeteo
Una sola calibración mensual
Capacidad de memoria para 1500 resultados
Carga y reposición de reactivos por cassette compacto de 400 tiras
de análisis clínicos. Esta nueva situación ha
conducido al desarrollo de instrumentos
automáticos que estandarizan y simplifican
la amplificación y detección de los ácidos
nucleicos. Finalmente esto también se ha
logrado con la preparación de las muestras,
con lo que se ha completado la
automatización de todo el proceso.
A principio de los años noventa se comenzó a trabajar
rutinariamente en los laboratorios de diagnóstico clínico con
técnicas de diagnóstico molecular y, poco a poco, fue haciéndose
más frecuente la realización de estos análisis mediante la reacción
en cadena mediada por la polimerasa (PCR) (1, 2).
Esta técnica permitió un más fácil acceso a la realización de
pruebas de diagnóstico molecular debido a la facilidad de su
puesta en marcha en cualquier laboratorio de análisis clínicos.
Con el incremento del número de análisis realizados mediante
PCR se pudo comprobar la necesidad de la estandarización de
las pruebas, así como la necesidad de su automatización.
La estandarización fue necesaria porque la realización de un
27

Roche Diagnostics informa / Junio 2001
análisis mediante PCR en el laboratorio de diagnóstico no supone
únicamente la realización del proceso de amplificación, sino que
debemos realizar la preparación de la muestra, la amplificación
y la detección de las secuencias amplificadas. Estos tres procesos
van encadenados y, por lo tanto, es necesario que los tres se
realicen correctamente para que, al final del análisis, obtengamos
un resultado correcto. De nada nos servirá un proceso de
amplificación optimizado si no va acompañado de un proceso
de detección que aporte una sensibilidad adecuada. Lo mismo
podremos decir de la utilización de un procedimiento de
preparación de la muestra que aporte un alto índice de
recuperación de las moléculas del ácido nucleico buscado como
condición imprescindible para que el resto de procesos implicados
en la PCR transcurran satisfactoriamente (3).
Con este objetivo, en 1992, Roche Molecular Systems (RMS)
comenzó a comercializar reactivos para la realización de los
análisis mediante PCR en el diagnóstico de rutina. Los equipos
de reactivos Amplicor® incluyen todos los componentes necesarios
para la realización de los tres procesos de la técnica, ya que
se demostró que aspectos como el pH de los tampones o el
formato de los diferentes viales repercutían en la calidad final de
los resultados.
El primer paso de la automatización de la PCR fue el diseño de
termocicladores que permitieron la realización de todos los ciclos
en un único bloque térmico, sin tener que mover los tubos de
amplificación entre diferentes incubadores. Pero al introducirse
en la rutina diaria las necesidades de automatización aumentaron,
por lo que en 1995 RMS puso a disposición de los laboratorios
el analizador Cobas Amplicor®. Este sistema permitió la
automatización de los procesos de amplificación y detección, con
lo que se logró un incremento en la precisión y exactitud de los
resultados. Asimismo, la automatización con el Cobas Amplicor
aportó una sustancial mejora en cuanto a la necesidad de
intervención manual que la PCR tenía hasta ese momento, ya
que permitió que la amplificación y la detección sólo necesitasen
la presencia del operador durante 40 minutos, frente a las 2 horas
y 40 minutos en los procedimientos no automatizados (4, 5).
El siguiente paso ha sido encontrar la solución para la preparación
de la muestra. Este primer proceso de la PCR tiene básicamente
dos objetivos: extraer el ácido nucleico y purificarlo, aislándolo
de las proteínas y los iones metálicos. Ahora bien, si de lo que
tratamos es de automatizarlo, deberemos añadir otros objetivos
como la flexibilidad, la capacidad de trabajar con diferentes
pruebas simultáneamente, la posibilidad de añadir nuevas muestras
de manera continuada o la reducción del tiempo de intervención
manual.
La solución aportada al respecto por RMS en el año 2000 es el
sistema Cobas AmpliPrep® (CAP). Este instrumento permite
realizar la extracción del ácido nucleico a partir de la muestra de
una forma específica, de modo que el operador sólo tiene que
cargar las muestras, los reactivos, programar la lista de trabajo y
dar la orden de comienzo. A partir de este momento el usuario
queda liberado de cualquier tarea relacionada con la extracción
y sólo deberá intervenir cuando ésta haya finalizado.
Figura 1. Mezcla de reacción. (QS: Estándar de cuantificación).
Cubeta de reacción a 60 ºC
HCV
Muestra + QS
Sonda HCV
Lisis
Cubeta de reacción
a 37ºC
Estreptavidina
captura la sonda
Micropartícula
magnética
Técnica utilizada en la extracción
El CAP utiliza un tubo de muestra de 2 mL que debe contener
entre 250 µL y 1.100 µL de suero o plasma. Esta muestra la
dispensa en la cubeta de reacción junto con el estándar de
cuantificación (QS), el tampón de lisis y la sonda de captura
específica para cada ácido nucleico a extraer. Esta mezcla de
reacción se incuba a 60 ºC durante 15 minutos. A lo largo de
este tiempo se produce la lisis de la cápside viral y por lo tanto
la liberación del ácido nucleico del virus (figura 1).
A continuación, el brazo de transferencia del CAP coloca la
cubeta de reacción en el incubador a 37 ºC. El descenso de
temperatura induce la hibridación entre el ácido nucleico liberado
y la sonda específica de captura, biotilinada. Esta sonda está
diseñada con la misma secuencia que uno de los cebadores, que
se encargará de realizar la amplificación del fragmento del ácido
nucleico, con lo que se garantiza que solamente el ácido nucleico
buscado sea pipeteado posteriormente en el tubo de amplificación.
Así se garantiza la máxima especificidad en el proceso (6).
Una vez alcanzados los 37 ºC, el CAP pipetea una dilución de
micropartículas magnéticas que llevan fijadas las moléculas de
estreptavidina. La cubeta de reacción se incuba a 37 ºC para que
se produzca la unión de la estreptavidina con la biotina de la
sonda de captura. Al final de esta segunda incubación se habrán
formado los complejos “micropartícula magnética –
estreptavidina – biotina – sonda de captura – ácido nucleico”
(figura 2).
Formado este complejo y por lo tanto extraído el ácido nucleico,
Sonda
biotinilada
HCV o
QS RNA
Figura 2. Captura de la
sonda mediante la
micropartícula magnética.
(QS: Estándar de
cuantificación).
llega el momento de aislarlo y purificarlo. Para ello la cubeta de
reacción se coloca en la posición de lavado, donde se conectan
unos imanes que fijarán las partículas magnéticas y, con ellas el
complejo formado, a la pared de la cubeta de reacción. El Cobas
AmpliPrep aspira líquido de la cubeta y dispensa la solución de
lavado, tras lo cual aspira todo el líquido dejando la cubeta seca
y con los complejos unidos a las micropartículas magnéticas en
el fondo del tubo.
El último paso que realiza el CAP es la colocación de la cubeta
de reacción en la posición de resuspensión y el pipeteo del
diluyente de muestra en la misma, con lo que queda finalizado
el proceso (7). De este modo, al cabo de una hora, el CAP ha
realizado la extracción del ácido nucleico y lo deposita en un
volumen de 250 µl de diluyente.
Características de funcionamiento
El CAP esta diseñado para realizar, simultáneamente, cuatro
diferentes técnicas de extracción de ácidos nucleicos sin
intervención del usuario. Los diferentes reactivos necesarios para
estas extracciones están agrupados en tres casetes diferentes:
- Multireagent: contiene, en tres diferentes viales, la solución de
estándar de cuantificación, las sondas específicas y el diluyente
de muestra.
- Lysis: contiene el tampón de lisis.
- Bead: contiene la mezcla de micropartículas magnéticas.
Es posible cargar, simultáneamente, reactivos para más de 300
28
El diagnóstico molecular en continua evolución
29

Roche Diagnostics informa / Junio 2001
muestras.
En referencia a las muestras, es posible cargar simultáneamente
hasta un máximo de 72. Al tener un diseño que permite la carga
continua, según finalizan las extracciones de cada 24 muestras,
queda liberada la bandeja correspondiente, pudiendo ser
extraída, introduciendo a continuación una nueva bandeja.
Las cubetas de reacción se cargan en el instrumento en bandejas
de 24 unidades con una capacidad máxima de 3 bandejas. Al
igual que ocurre con las aquellas que contienen las muestras,
según van siendo utilizadas pueden extraerse y sustituirse por
otras nuevas. Cada cubeta de reacción incluye una punta de
pipeta con filtro, de forma que cada muestra se procesa con su
propia punta, lo que evita que se produzca cualquier tipo de
arrastre en el pipeteo de las diferentes muestras. La punta de
pipeta con filtro se desecha junto con cada cubeta de reacción.
Los tubos con tapón de rosca, donde se incorpora el ácido
nucleico extraído se cargan en bandejas con 36 tubos y con un
máximo de 144 tubos simultáneamente. Como todas las
bandejas, según finaliza su uso es posible retirarlas y sustituirlas
por otras nuevas.
Una vez cargadas todas las bandejas necesarias y puesto en
marcha el Cobas AmpliPrep, la primera extracción se realiza en
algo menos de una hora, obteniéndose sucesivas extracciones
cada 2 minutos. En definitiva, la extracción de 24 muestras se
realiza en unas dos horas y la de 48, en tres. En una rutina de
trabajo diaria se pueden realizar 144 extracciones en un turno
de trabajo.
No obstante, toda esta capacidad de trabajo automático no
tendría utilidad si no estuviera garantizada la prevención de la
contaminación del trabajo de extracción de los ácidos nucleicos,
riesgo que se incrementa en las técnicas de amplificación de los
mismos. Esta prevención está garantizada gracias a cuatro
características del CAP:
- utilización de una punta de pipeta con filtro para cada muestra.
- mantenimiento de un flujo de aire ascendente mediante
ventiladores dotados de filtros HEPA. Este flujo continuo de
aire logra que los aerosoles que se llegan a producir sean extraídos
por la parte superior del instrumento y nunca puedan
contaminar las muestras a extraer.
- utilización de lamparas de luz ultravioleta, colocadas en el
interior del CAP. La luz ultravioleta permite la destrucción de
cualquier fragmento de ácido nucleico que permanezca en el
interior del instrumento.
- uso de tubos con tapón de rosca para la muestra a extraer
y para el ácido nucleico extraído. Tubo que destapa el
instrumento en el momento del pipeteo y que permanece cerrado
el resto del tiempo.
Otro aspecto crítico en el trabajo de rutina diaria en los
laboratorios de análisis clínicos es el creciente numero de
muestras que se procesan día a día. Toda medida que contribuya
a evitar este tipo de errores es un factor de seguridad en la
emisión del resultado final de la prueba analítica. El CAP
contribuye a esta seguridad, colocando el tubo final con el ácido
nucleico extraído en la misma posición de la misma bandeja de
muestras donde se introdujo la muestra a extraer. De esta
manera, queda identificado con el mismo código de barras, por
lo que la posibilidad de error en la identificación del tubo de
extracción es prácticamente nula.
En continua evolución
La propuesta actual de trabajo diario con los sistemas Cobas
AmpliPrep y Cobas Amplicor aporta la automatización de los
tres pasos que constituyen los análisis mediante PCR en el
laboratorio de diagnóstico clínico. La reducción que supone en
el tiempo de manipulación de las muestras, pasando desde las
6 horas iniciales a solamente 1 hora y media, implica la liberación
del usuario para la realización de otras pruebas de biología
molecular no automatizadas, especialmente útil a la hora de
realizar la introducción de nuevos parámetros que, debido al
reducido número de muestras a procesar, no justifican su
automatización.
La utilización de instrumentos automáticos para todo el proceso
de PCR conduce a la simplificación de las instalaciones necesarias
en los laboratorios de biología molecular. De las iniciales tres
habitaciones necesarias se pasó a dos, seguidamente a dos áreas
de trabajo y, finalmente, la total automatización lleva a una
única instalación convencional, semejante a la necesaria para
un laboratorio de serología o de química clínica.
Evidentemente, la evolución lógica de la automatización
conducirá a la integración de los tres pasos de un análisis
mediante PCR (extracción de la muestra, amplificación y
detección) en un único instrumento que permitirá la realización
de todo el proceso con la única intervención del usuario para
la colocación de los reactivos, las muestras y la programación
de la lista de trabajo. La siguiente acción del usuario será la
validación de los resultados obtenidos.
La evolución de la PCR en el laboratorio de diagnóstico
continuará con la reducción del tiempo total de realización del
análisis, efectuando una lectura después de cada ciclo de
amplificación. Es la llamada PCR a tiempo real o PCR cinética
(técnica TaqMan®)
Desde este punto de vista, la simplificación de los análisis de
PCR parece situar la tecnología TaqMan® como la evolución
lógica de estas técnicas en el laboratorio de diagnóstico clínico.
Bibliografía
1) Saiki RK, Scharf S, Faloona F, Mullis KB, Horn G, Erlich H et al.
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restriction site analysis of sickle cell anemia. Science 1985; 239:
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and paramagnetic particle separation. J Clin Microbiol 2000; 38:
18-21.
30 El diagnóstico molecular en continua evolución
31

Comprometidos
con la solución
Objetivos de la calidad
La gestión planificada de toda actividad profesional requiere
definir unos objetivos de actuación. Estos objetivos se suelen
expresar en términos descriptivos, plasmando de forma escrita
los deseos que se pretenden alcanzar. En el campo del laboratorio
clínico y, concretamente, con relación a la actividad analítica
del mismo, el objetivo fundamental a conseguir debería ser el
satisfacer los requisitos del médico clínico, en su papel de
interpretador del informe producido por el laboratorio.
En la Conferencia internacional de consenso sobre estrategias
para establecer especificaciones globales de la calidad analítica
en el laboratorio clínico, se debatieron diversas alternativas en
las que se consideraron, además de factores metrológicos, factores
pre y posanalíticos que influyen en la calidad analítica (1). Se
aceptó utilizar un modelo jerárquico que ordena los objetivos
en relación inversa a la aplicación clínica de los datos del
laboratorio (Tabla I).
Tabla I: Listado jerárquico de prácticas para determinar las
especificaciones de la calidad analítica, basadas en la satisfacción
de las necesidades médicas.
1. Efecto de las prestaciones analíticas en la toma de
decisiones clínicas específicas: estudio de los resultados
clínicos
C. Ricós.
Laboratoris Clínics Vall d’Hebron, Barcelona.
2. Efecto de las prestaciones analíticas en la toma de
decisiones clínicas
2.1 Decisiones clínicas generales: variación biológica
• Aproximación de Gowans para el error sistemático (5)
• Aproximación de Cotlove para la imprecisión (4)
2.2 Encuesta de opinión a clínicos
3. Recomendaciones de grupos profesionales
4. Especificaciones de la calidad basadas en evaluación
externa de la calidad (también denominadas pruebas de
aptitud)
Soluciones personalizadas para la
organización del laboratorio clínico.
Servicio integral de asesoría, implantación
y procesos de mejora continuada.
4.1 Establecidas por ley (CLIA en USA) (20)
4.2 Establecidas sobre la base de límites fijos o según
el “estado del arte”
5. Evaluación externa de la calidad
6. Publicaciones
Para cumplir los objetivos propuestos, se deben transformar
éstos en especificaciones concretas para diversos indicadores de
la prestación del laboratorio clínico. Los indicadores analíticos
más frecuentemente utilizados son: la imprecisión, el error
33

Roche Diagnostics informa / Junio 2001
sistemático y el error total (ver el apartado de definiciones).
Ejemplos de indicadores extraanalíticos son: número de muestras
inadecuadas, número de peticiones mal cumplimentadas, tiempos
de respuesta, etc.
En una situación ideal en que fuera perfectamente conocida la
patología concreta que sufre el paciente y que estuvieran bien
delimitados los requisitos de la calidad para el tratamiento
protocolizado, la satisfacción de dichos requisitos sería el objetivo
analítico a cumplir por parte del laboratorio. Sin embargo, esta
es una situación que se presenta en muy escasas ocasiones; se
han descrito especificaciones para la imprecisión de las
determinaciones de HbA1C en el seguimiento de enfermos
diabéticos (2), especificaciones para el error sistemático de las
determinaciones de colesterol en el cribado de la población con
riesgo a padecer enfermedades coronarias (3).
La mayor parte de las solicitudes de análisis clínicos se aplican
para conocer el diagnóstico de una enfermedad en un paciente,
para el cribado de un grupo poblacional, para realizar el
seguimiento de un enfermo (evolución, efecto del tratamiento,
de la dieta, etc.) o para realizar chequeos periódicos del estado
de salud.
En los dos primeros casos, se suelen realizar análisis aislados y
se comparan los resultados con los valores de referencia o bien
con un valor discriminante. Si las determinaciones del laboratorio
están sesgadas se obtendrán resultados por encima (o debajo)
de los límites de referencia o del valor discriminante, produciendo
información incorrecta sobre el estado de salud del paciente.
En el seguimiento de pacientes y en los chequeos periódicos se
realizan análisis seriados. Si la variabilidad de las determinaciones
analíticas es más grande que la variabilidad fisiológica de las
muestras humanas, se producirán resultados seriados dispares
que podrán inducir a falsas interpretaciones de cambio en el
estado de salud del paciente.
Así pues, es lógico deducir que para las aplicaciones clínicas de
diagnóstico y cribado el laboratorio debe mantener acotado su
error sistemático, mientras que para el seguimiento y chequeo
debe reducir su imprecisión.
Especificaciones de la calidad analítica
Anteriormente se ha mencionado que una vez definidos los
objetivos, se han de transformar en especificaciones mensurables
para los indicadores de la actividad del servicio.
En el área del laboratorio clínico se demostró en 1971 que si se
mantiene la imprecisión analítica por debajo de la mitad de la
variación biológica intraindividual, la variabilidad debida al azar
que puede sufrir el resultado de una muestra queda acotado al
11,8% (4). En el año 1988 se demostró que si se mantiene el
error sistemático por debajo de la cuarta parte de la variación
biológica intra más interindividual, sólo un 4% y un 1% de
los resultados pertenecientes a un grupo poblacional quedarán
fuera de los límites de referencia superior e inferior,
respectivamente (5).
En la última década diversos grupos de trabajo han formulado
especificaciones de la calidad basadas en la variación biológica
para aceptar la imprecisión y el error sistemático en la evaluación
de sistemas analíticos para el diagnóstico biológico (6), para los
indicadores del control interno de la calidad (7) y para aceptar
el error total de las determinaciones sometidas a evaluación
externa de la calidad (8). Con el fin de alcanzar los requisitos de
satisfacción médica para las determinaciones de magnitudes con
muy poca (y, en el otro extremo muy alta) variación biológica,
se han propuesto especificaciones mínimas, deseables y óptimas
para la prestación del laboratorio clínico (9).
La Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología
Molecular (SEQC) sugirió las especificaciones de la calidad
analítica que facilitan la consecución de resultados transferibles
entre diversos laboratorios (10) y, recientemente, ha recomendado
las especificaciones deseables mínimas y óptimas para que
laboratorios clínicos con distintos niveles de recursos satisfagan
los requisitos médicos generales (diagnóstico, cribado y
seguimiento de pacientes) (11).
Componentes de la variación biológica
Aunque la variabilidad de los constituyentes de los fluidos
humanos es debida a numerosos factores, tales como ritmo
biológico, ejercicio físico, condiciones de ayuno o dieta del
paciente, estado emocional, respuesta al clima, funcionalidad
renal y hepática, crecimiento y envejecimiento, se entiende por
variación biológica la fluctuación de la concentración de los
constituyente de los fluidos humanos alrededor de su punto de
equilibrio homeostático.
Desde los años 1970 se han realizado numerosos trabajos con el
propósito de estimar los componentes intra e interindividual de
la variación biológica. Se recogieron cuatro recopilaciones (12-
15) que promediaron los resultados publicados por todos los
autores. Posteriormente se elaboró una base de datos donde se
consideraron los pros y contras de la información publicada,
con el fin de aportar criterios para seleccionar los artículos con
gran fiabilidad (tratamiento estadístico adecuado), estratificar
resultados en caso necesario (hormonas sexuales) o segregar
valores improcedentes (colesterol y triglicéridos en condiciones
de no ayuno). El resultado fue un listado de valores de variación
biológica intra e interindividual para 252 magnitudes biológicas
determinadas en diferentes fluidos humanos (16). De este listado
se derivan las especificaciones deseables, mínimas y óptimas
recientemente recomendadas por la SEQC, como se ha
mencionado anteriormente.
Otros criterios que se pueden usar para definir las especificaciones
de la calidad analítica, descritos en la tabla I, son los determinados
por grupos profesionales y los descritos por organizadores de
programas de evaluación externa de la calidad.
En el primer caso sólo se conoce el trabajo del grupo de expertos
americano sobre el colesterol (National Cholesterol Educaton
Program, NCEP), que estableció un 3% como límites admisibles
para la imprecisión y también para el error sistemático en las
determinaciones de la concentración de dicho constituyente (17).
Los organizadores de programas de evaluación externa de la
calidad informan a sus participantes sobre las prestaciones
obtenidas con diversos métodos analíticos y, algunos de ellos,
publican estos datos en revistas accesibles para los profesionales
del laboratorio clínico (18).
Consecuencias prácticas de la definición de
objetivos de la calidad analítica
La aplicación de las especificaciones de la calidad analítica en la
práctica diaria se materializa en dos actividades concretas (19):
• La selección de las reglas de control interno de la calidad del
proceso analítico. En general, cuanto más próximos estén los
indicadores de la imprecisión y del error sistemático con respecto
a las especificaciones de la calidad, más rigurosa deberá ser la
regla de control (márgenes de seguridad estrechos y mayor
número de determinaciones control por serie analítica).
• La evaluación de las prestaciones analíticas del laboratorio. La
inspección periódica de los resultados del control interno permite
conocer la imprecisión y el error sistemático de los procedimientos
analíticos del laboratorio. La inspección de los resultados del
control externo indica el error total. Si el laboratorio es capaz
de mantener sus indicadores de la calidad analítica por debajo
de las especificaciones, ha cumplido sus objetivos.
DEFINICIONES (21)
Error sistemático (“bias”): diferencia entre la media de un
número infinito de mediciones de una magnitud, realizada bajo
condiciones de repetibilidad, y el valor verdadero.
Error total (inexactitud): discrepancia entre el resultado de una
medición y el valor verdadero de la magnitud biológica medida.
Imprecisión: dispersión de resultados de medidas independientes
obtenidas bajo condiciones especificadas. Se expresa
habitualmente mediante la desviación estándar o el coeficiente
de variación de los resultados control.
Indicador de la calidad: características mensurables de la
actividad.
34 Objetivos de la calidad analítica del laboratorio clínico
35

Roche Diagnostics informa / Junio 2001
Bibliografía
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prestación sobre los protocolos médicos. En: Estrategias para
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International Electrotechnical Commission (IEC), International
Fedetation of Clinical Chemsitry (IFCC), International Organization
for Standardization (ISO), International Union of Pure and Pllied
Chemistry (IUPAC), International Union of Pure and Pllied Physics
( IUPAP), International Organizaton of Legal Metrology (OIML).
International Vocabulary of basixc and general terms in metrology.
ISO, Geneva 1993.
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Servicio de Análisis Clínicos Hospital Mútua de Terrassa. Terrassa.
J.L. Bedini Chesa
Servicio de Bioquímica Clínica. Hospital Clínico y Provincial. Barcelona.
F. Canalias Reverter
Departamento de Bioquímica y Biología Molecular. Universidad Autónoma de Barcelona.
Alfa-Biomed S.A. Barcelona.
M. Calvet Navarro
Laboratorio Clínico. Hospital de Vilafranca. Vilafranca del Penedès.
J.M. Castellví Boada
Laboratorio Clínico. Consorcio Anoia. Igualada.
M. Ferré Masferrer
Servicio de Bioquímica Clínica. Ciudad Sanitaria y Universitaria de Bellvitge.
L'Hospitalet de Llobregat.
X. Fuentes Arderiu
Servicio de Bioquímica Clínica. Ciudad Sanitaria y Universitaria de Bellvitge
L'Hospitalet de Llobregat. Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, División
IV. Universidad de Barcelona.
F.J. Gella Tomás
Departamento de Bioquímica y Biología Molecular.Universidad Autónoma de Barcelona.
BioSystems, S.A. Barcelona
S. Gràcia García
Departamento de Salud Pública. Universidad de Barcelona.
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El laboratorio clínico en España y en la J. Miró Balagué
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