Efectividad agronómica de biofertilizantes en el cultivo del tomate ...

INSTITTTI'O SUPERIOR DE CIENCIAS AGROPECUARIAS DE LA HABANA
"FRUCTUOSO RODRIGUEZ PÉREZ"
Titulo: Efectividad agronómica de biofertilizantes en el
cultivo del tomate (Lycopersicon esculentum, Mill)
TESIS PRESENTADA EN OPCION AL TITULO
ACADÉMICO DE MASTER EN CIENCIAS
AGRICOLAS
Autora : Ing. Elein Terry Alfonso
Tutor: Dr. Nicolás Medina Basso
1998

RESUMEN
Se desarrollaron tres experimentos de campo, con los objetivos de estudiar
la efectividad agronómica de biofertilizantes en el cultivo del tomate, con
vistas a disminuir los costos de producción así como minimizar la
contaminación ambiental . Los trabajos se desarrollaron en el Instituto
Nacional de Ciencias Agrícolas sobre un suelo Ferralítico Rojo compactado,
durante la época temprana de agosto - septiembre de 1995 y 1996. Se
analiza la efectividad de Azospirillum sp y las MA Glomus manihotis en la
calidad de las posturas de tomate , demostrado a través del vigor
alcanzado por las mismas; de igual forma, se evaluó su influencia sobre el
rendimiento agrícola y sus componentes así como la calidad interna de los
frutos y la eficiencia agronómica del sistema . Se obtuvo una buena calidad
de las posturas en aquellos tratamientos que fueron inoculados siendo la
inoculación mixta de Azospirillum sp y Glomus manihotis combinada con
90 Kg/ha de nitrógeno, la que resultó ser el tratamiento de mayor eficiencia
agronómica además de lograrse rendimientos satisfactorios con una
reducción del 30% del fertilizante nitrogenado.

1. INTROD UCCION.
El tomate (Lycopersicon esculentum, Mi11), es considerado en Cuba como
la hortaliza más codiciada debido a su alto nivel de consumo y sus
múltiples usos (Casanova, 199I), ocupando el 50% de las áreas
destinadas a la producción hortícola. Este cultivo requiere altos niveles de
fertilización mineral que, para las condiciones de Cuba alcanzan valores de
150-200 kgN/ha, 60-140 kg P205/ha, 100-225 kg K20/ha de acuerdo al tipo
de suelo (Albina Maestrey, 1986).
La fertilización química es la forma más ampliamente conocida y empleada,
además de representar una manera i pida de reponer el nitrógeno perdido ;
sin embargo, su costo es cada vez más elevado e inalcanzable para el
productor y aunado a lo anterior está el riesgo ecológico que causan por
contaminación del suelo y el agua debido a un manejo inadecuado.
En función de lo anterior, tuna de las formas de resolver este problema es
mediante el uso de biofertilizantes, vía microorganismos que habitan la
rizos/era del suelo en estrecha relación con la planta (Vergara 1990). De
igual forma , Martínez (1994) recomienda que la moderna agricultura
intensiva de los países subdesarrollados ,
debe tender a combinar la
utilización de reducidas cantidades de fertilizantes químicos con
biofertilizantes de origen microbiano debido a que los procesos
microbiológicos tienen la ventaja de ser tecnologías limpias" no
contaminantes del medio ambiente.
Los microorganismos existentes en el suelo no son solo capaces de fijar el
nitrógeno atmosférico, de aumentar la capacidad extractiva de nutrientes
por parte del sistema radical de las plantas y de solubilizar fósforo
insoluble en el suelo, sino que también son productores de sustancias
promotoras o inhibidoras del crecimiento vegetal y tienen en general un
1

sin número de funciones en el suelo,
la producción agropecuaria.
de gran interés teórico y práctico para
Desde la década del 40 se han venido utilizando bacterias aisladas de la
rizosfera de diferentes cultivos como inoculantes microbianos ; este trabajo
se ha desarrollado de forma gradual y ascendente con microorganismos
rizosféricos, comprobándose que, con la biofertilización ,
estos son capaces
de influir positivamente sobre la germinación de las semillas y,
posteriormente , en el desarrollo de las raíces e incrementar el rendimiento
de las cosechas en plantas de interés agrícola así como de la fertilidad de
los suelos (AnaN. Hemández , 1996)..,
Dentro de este mundo microbiano , juegan un importante papel como
biofertilizantes, bacterias del género Azotobacter sp y Azospirillum sp
pertenecientes al grupo de bacterias promotoras del crecimiento vegetal
(PGPR) así como diferentes especies de hongos micorrizógenos
arbusculares (MA).
Se le atribuye a las bacterias la capacidad de fijar nitrógeno atmosférico y
ser encontradas en asociación con las raíces de diferentes cultivos (Berge,
et al ,
1990),`al mismo tiempo que promueven un estímulo del crecimiento
vegetal ; de igual forma, la utilización de los hongos MA como biofertilizante
permite un uso más eficiente de la fertilización al poder disminuir las dosis
a aplicar.
Internacionalmente, son pocos los estudios realizados sobre el uso de
biofertilizantes en el cultivo del tomate; en Cuba se cuenta con pocas
referencias sobre trabajos similares ,
por lo que, teniendo en cuenta los
aspectos analizados, se tuvo en cuenta en esta tesis algunas
investigaciones que dan respuestas al tema tratado; por tal motivo, en el
presente trabajo se planteanon los siguientes objetivos:
2

1 - Conocer el efecto de la inoculación de diferentes microorganismos
rizosféricos sobre el crecimiento y producción del cultivo del tomate.
2 - Evaluar en que grado puede ser disminuido el consumo de fertilizarte
nitrogenado con el empleo de diferentes tipos de microorganismos
biofertilizantes , que permitan disminuir los costos de producción y
minimizar las afectaciones al ambiente.

2. REVISION BIBLIOGRAFICA.
2.1. IMPORTANCIA ECONÓMICA Y APORTES NUTRICIONALES DEL TOMATE
El consumo percápita de hortalizas en América Latina y el Caribe es, con
pocas excepciones, reducido comparado con el de los países
desarrollados. Recientemente, se ha reenfatizado la necesidad de un
mayor consumo de hortalizas y frutas como fuentes de vitaminas,
minerales y fibras en la dieta humana (María E. Domin (1996).
El tomate puede contribuir a una mejor nutrición humana , segun una
publicación de la Liga de Educación Internacional de la Alimentación,
citada por Villareal (1982), se estimó que el tomate suple casi tantas
calorías por hectárea como el arroz y una cantidad mayor de proteínas; en
un estudio realizado en Hawai sobre 16 cultivos hortícolas, el tomate ocupó
octavo lugar entre los más altos en proteínas y vitamina C, noveno en hierro
y decimotercero en vitamina A.
En ese mismo sentido, Nuez (1995) citó un estudio realizado por Stevens
(1974) sobre las principales frutas y hortalizas de Estados Unidos; el
tomate ocupa el lugar 16 en cuanto a concentración relativa de un grupo de
10 vitaminas y minerales. No obstante, su popularidad, demostrada por un
alto nivel de consumo, convierte a este cultivo en una de las principales
fuentes de vitaminas y minerales en muchos países.
9

Valor nutritivo medio del tomate por 100 gramos de producto comestible
según Grubben (1970) citado por Nuez (1995).
Residuos 6,0%
Materia Seca 6,2 %
Energía
20, 0 kcal
Proteínas 1,2 g I
Fibra 0.7g
Ca
Fe
Caroteno
Tiamina
Riboflavina
Niacina
Vitamina C
7,0 mg
0,6 mg
0,5 mg
0, 06 mg
0, 04 mg
0,6 mg
23, 00 mg
Valor nutritivo medio (VA" 2,39
VNM por 100g de materia seca 38,5
El tomate se ha convertido en una de las hortalizas más populares y
extensamente sembrada en el mundo ,
de ahí que en la actualidad este
cultivo ha adquirido gran importancia económica. La contribución de
América Latina y el Caribe respecto a la producción de tomate al mercado
global es pequeña (19% del total comercializado) y el volumen aportado en
1989 alcanzó a 464 mil toneladas, siendo prácticamente aportado por
México (Menezes dos Santos, 1992)..
Por su parte FAO (1995) citado por Olimpia Gómez y Casanova (1996),Y
señala que el tomate constituye más del 30% de la producción hortícola
5

mundial, con una superficie de siembra de casi tres millones de hectáreas,
una producción de 78 millones de toneladas y un rendimiento promedio de
27 toneladas por hectárea. Sólo el 10% de esta cifra se produce en América
Latina y el Caribe.,
Las regiones de climas templados siembran las 3/4 partes de la superf icie
mundial de tomate y producen el 90% del total mundial; la mayoría de los
países de clima templado tienen condiciones apropiadas para el cultivo, y
sus agricultores emplean prácticas modernas, especialmente diseñadas
para esta hortaliza; estos países tienen rendimientos que sobrepasan las
30 t/ha como media nacional (María E. Dominí, 1996).
Nuez (1995), piantea la siguiente producción mundial de tomate, según la
media anual en miles de toneladas, tomado de los anuarios FAO de
producción 1979-1993.
1969-71
1979-81
1991-93
Total Mundial
34703
53787
72744
Países Desarrollados 15848 19982 25659
Países de planificación centralizada 9238 16717 17343
Países en desarrollo 9617 17008 29742
En Cuba constituye la principal hortaliza, tanto por el área que ocupa como
por su producción; del área total de hortalizas, el tomate comprende el
50%, y anualmente se siembran más de 30 000 hectáreas. A nivel nacional
se han comercializado en los últimos años más de 200 000 toneladas con
nivel máximo de 31 1800 toneladas. Se cultiva en todas las provincias del
país, siendo las principales productoras La Habana, Pinar del Río y Villa
Clara, siendo los rendimientos de 10 t/ha al año (FAO, 1989),Yla producción
se destina al consumo en estado fresco para la población y a la industria,
donde son elaborados diferentes subproductos como puré, salsas, jugos,
encurtidas y otros (Consuelo Huerres y Caraballo, 1991).
6

2.2. MANEJO AGROTECNICO DEL CULTIVO.
El cultivo del tomate puede clasificarse según la forma en que se siembren
las plantas, en espacios abiertos o bajo protección; si a las plantas se les
colocan puntales o crecen libremente, o si la siembra se hace
trasplantando plántidas o por medio de la siembra directa de semillas. La
mayor parte del tomate en el mundo proviene de plántulas trasplantadas,
sembradas en campos abiertos o sin puntales (Villareal, 1982).
Generalmente el tomate se siembra en campos abiertos; este método,
llamado cultivo expuesto, es muy usado en las huertas caseras por los
pequeñas productores comerciales y por los agricultores en gran escala;
las prácticas de cultivo varían desde primitivas hasta altamente
sofisticadas.
El tomate es generalmente sembrado por medio de plántulas, las cuales
son preparadas durante 25 a 60 días, período en que se controlan
cuidadosamente las condiciones
de crecimiento y desarrollo para la
supervivencia del mayorporcentaje posible de plántulas trasplantadas.
Las semillas se siembran siguiendo un ritmo preciso, a unos 2 cm de
profundidad dentro del suelo. Cuando las plantas tienen dos o tres hojas
verdaderas se ralean mecánicamente dejando un espacio de 15 a 25 cm
entre una planta y otra o grupos de 2 a 4 plantas con un espaciamiento de
20 a 30 cm entre grupos.
El sistema más común es el de almácigos en el campo, en canteros de un
metro de ancho elevados 20 6 25 cm del suelo ; cada metro de cantero
produce cerca de 300 trasplantes ; y se recomienda sembrar las semillas
en surcos de 1 cm de profundidad, espaciados 10 cm entre hileras
(MINAGRl, 1990).
El mejor momento para trasplantar plántulas; que han sido debidamente
cultivadas y aclimatadas, es de 21 a 30 días después de su emergencia.
7

Lo ideal es que el agua y los fertilizantes se encuentren en la .zona radical
de las plantas recién trasplantadas.
Menezes dos Santos (1992), plantea que el trasplante debe ser realizado
cuando las mudas presentan de cuatro a cinco hojas definitivas y entre los
25 a 30 días después de la siembra. La operación debe ser efectuada en
las horas más frescas dei día y con suelo húmedo para evitar un estrés
hídrico muy pronunciado. -
Las plantaciones de tomate deben ser instaladas en áreas donde no se
haya cultivado Solanáceas por mucho tiempo, debido al riesgo de ataque
por hongos y bacterias del suelo, comunes a especies de esta familia
(FAO,1992) El área de cultivo debe presentar una buena exposición al sol y
no debe estar sujeta a vientos fuertes, o situados en lugares que posibiliten
la acumulación de frío o exceso de humedad; se debe preferir suelos con
texturas livianas y estructura suelta, de fácil drenaje y topografía plana o
con pequeñas pendientes. Se deben utilizar suelos de pH entre 5 y 7
aunque admite cierta tolerancia en los valores máximos Nonneck, I989).4
Las labores preparatorias del terreno deben facilitar una buena infiltración
del agua y una buena aereación, que permita un desarrollo radicular
adecuado en extensión y profundidad Nuez, I995) La densidad de
plantación dependerá del desarrollo vegetativo, el cual estará influido principalmente
por el cultivar elgido, sus características de crecimiento (determinado o
indeterminado ), tipo y fertilidad del suelo, disposición y tipo de riego, así
como por la climatología del ciclo elegido.
El sistema de plantación depende de la interrelacion entre el tamaño del
área cultivada, tipo de equipo disponible y el destino de la producción
(industria o mercado fresco). La sombra con cultivos es utilizada para
modificar el microclima y el balance de la energía en la superficie del
suelo; la sombra implica. reflexión y absorción del exceso de la radiación
solar (Stigter, 1988). María de los A. Pino et al, (1994) presentaron

esultados en dos asociaciones de cultivos con vista a la disminución de la
intensidad de la radiación solar y de la temperatura del suelo , en siembras
de tomate fuera del período óptimo, donde se encontraron los mejores
arreglos espaciales, que permitieron un mejor control de las condiciones
ambientales y un óptimo aprovechamiento de la superficie agrícola; dicha
asociación fue tomate-maíz.
Por otra parte, el cultivo protegido tiene muchas formas, desde simple
cobertura contra la lluvia a control completo de los factores ambientales. El
cultivo protegido permite la producción de tomate, en países templados y
durante el invierno , debido a que el crecimiento y desarrollo de las plantas
puede controlarse en forma precisa mediante la regulación de la humedad
y fertilidad del suelo , la luz, la temperatura, la humedad relativa y la
concentración de anhídrido carbónico.
La utilización
de técnicas de cultivo sin suelo, para la obtención de
vegetales frescos en cualquier época del atto ,
está ampliamente difundida
en nuestro país, donde todas las provincias cuentan con al menos una
instalación para el cultivo en condiciones de hidroponía (María E. Drominl;
1996).
El tomate está considerado como un cultivo con alta demanda de
fertilización mineral , la cuál se encuentra en el orden de 120-200 kg de
N/ha, 140-160 kg de P20s/ha y 100-225 kg de K20/ha, de acuerdo al tipo
de suelo y al rendimiento esperado (Albina Maestrey, 1986).
Según lo establecido en el Instructivo Técnico (MI NAGRI, 1984), para los
suelos Ferralíticos Rojos se recomienda la dosis de fertilizante siguiente:
N- 150 kg/ha, P205- 75 kg/ha, K2O- 125 kg/ha; y se establece aplicar todo
el fósforo y el potasio con un tercio del nitrógeno en el trasplante y los 2/3
de nitrógeno restante a los 25-30 días. Además, en el dictamen realizado
por Cuba (MINAGRI, 1991) se planteó completar la fertilización con
9

aplicaciones de Azotobacter a una dosis de 25 l/ha en el semillero al día
siguiente de la siembra o hasta dos días después de ésta.
El manejo del riego es una de las prácticas culturales más importantes
para el cultivo ; tanto el exceso como la falta de riego son perjudiciales
para las plantas del tomate. Una irrigación adecuada consiste en definir
objetivamente la forma y el momento en que se va a regar; estas dos
acciones están íntimamente relacionadas con un complejo de
características de cada propiedad rural y depende del tipo de suelo, clima,
exigencia de la variedad cultivada y del tipo de equipamiento utilizado
(lacho, 1995). Los riegos iniciales deben ser leves y frecuentes, de modo
de humedecer apenas los primeros 10 cm del suelo, y deben ser más
espaciados a medida que la planta crece y profundiza sus raíces ; el
período de mayor exigencia se extiende del inicio de la floración hasta la
maduración de las primeros frutos (Bonet,1981)'Recientemente, Dell Amico
et al (1991), adoptaron una metodología de riego por aspersión para el
cultivo del tomate para la época de invierno, con la cual se reduce la norma
de riego y se obtienen rendimientos superiores. Esta consiste en suspender
el riego una vez establecido el cultivo ya que esto propicia una mayor
de su sistema radical y se estimula la floración.
La obtención de variedades tolerantes a las condiciones de estrés bióticos
ha hecho posible que se estudien diferentes técnicas que permiten la
producción de tomate bajo determinadas condiciones
10

2.3. NECESIDAD DE NUTRIENTES POR EL CUL TI VO.
Las plantas . al igual que todos los restantes seres vivos , precisan una
nutrición adecuada para poder asegurar un perfecto desarrollo. El follaje
toma el carbono de la atmósfera y las raíces extraen el agua y los
nutrientes del suelo . Ambas partes de la planta interactúan para hacer
posible el crecimiento.
Cuando los nutrientes son adecuados , el crecimiento de hojas y tallos
(parle aérea) es relativamente mayor que el crecimiento de las raíces; en
cambio, cuando los nutrientes son insuficientes , las plantas producen más
raíces y menos follaje , siendo este de menor calidad. Las plantas tienen
que lograr un equilibrio entre la absorción de los nutrientes y el uso que
hacen de ellos (CIAT, 1993).x Todos los elementos que necesita la planta,
macroelementos y micmelementos se encuentran en casi todos los suelos,
aunque en ciertos casos algunos elementos se encuentran en poca cantidad
o en estado no asimilable por las raíces de las plantas . Fiar otra parte, las
plantas están extrayendo constantemente grandes cantidades de esos
minerales , principalmente : calcio, fósforo, nitrógeno , potasio, magnesio y
azufre
Rodriquez (1982); `plantea que el tomate en cultivo normal extrae del suelo
cantidades de elementos nutrientes que son modestas en relación a otras
especies . Así, para una producción de 40 toneladas extrae 120 kg de
nitrógeno , 25 kg de fósforo y 150 kg de potasio por hectárea.
El cultivo del tomate durante los 30 primeros días, consume poco
fertilizante y acumula apenas del 13 al 15% del total del nitrógeno, fósforo
y potasio. A partir de este momento se extraen del suelo mayores
cantidades de sustancias nutritivas, debido a que en esta etapa se elabora
más materia orgánica, a la vez que se absorve una acumulación brusca de
nutrtentes desde los días 30 al 70. En la etapa de maduración de los frutos
las plantas pueden consumir cantidades apreciables de nitrógeno y
11

potasio, pero muy pequeñas de fósforo (Albina Maestrey, 1986), esta autora
establece que el rango de extracción total de nutrientes por la biomasa del
tomate en suelos Fenalíticos Rojos es de 2,3-3,9 kg de N; 0,28-0,42 kg de
P20s y 3,0-4,9 kg de K2O por tonelada de producción.
Sin embargo, Consuelo Huerres y Cara bailo (199I) plantean que para una
cosecha de 50 toneladas, la planta extrae las cantidades de nutrientes que
aparecen a continuación (Kg.ha -1 )
Fruto
Nitrógeno 82.5
Tallo
51.2
Total
133.7
Fósforo 47.0 3.7 50.7
Potasio 216. 0. 40.6 256.6
En cultivos forzados, bajo protección y explotación intensiva, las
extracciones aumentan por encima de lo que representaría la
proporcionalidad debido a que se absorben cantidades superiores a las necesidades
El tomate es exigente en cuanto a niveles de nutrición mineral apropiados
debido principalmente al gran volumen de frutos producidos por unidad de
superficie. La cantidad de nutrientes encontrados en los frutos cosechados
es relativamente superior cuando se compara con otras hortalizas (FAO,
1992).
Papadopoulus (1991) señala que el tomate absorbe los principales
nutrientes en los siguientes relaciones: nitrógeno 370 kg/ha; fósforo 50
kg/ha; potasio 680 kg/ha; magnesio 290 kg/ha y calcio 45 kg/ha.
12

2.3.1. IMPORTANCIA DE LOS MACROELEMENTOS EN EL
DESARROLLO DEL TOMATE.
2.3.1.1. NITROGENO
Los compuestos nitrogenados representan del 40 al 50% de la materia seca
del protoplasma celular de aquí que para todas las funciones relacionadas
con el crecimiento se requiere de el nitrógeno en cantidades relativamente
grandes pana formar compuestos importantes para las plantas, corno
clorofila, aminoácidos, amidas y alcaloides, por lo que se considera el
primero de los elementos esenciales (Wallace,1970, citado por Tisdale y
Nelson 1991).
Serrano (1990) plantea que el nitrógeno actúa sobre el desanullo vegetativo
(crecimiento) ; forma parte de los compuestos orgánicos ; es un componente
esencial de la molécula de clorofila actuando fundamental mente en la
formación de este pigmento, retrasa la maduración de los frutos y estos,
con exceso de nitrógeno, tienen menos azúcar.
La fuente final del nitrógeno utilizado por las plantas es el gas inerte N2,
que constituye aproximadamente el 78% de la atmósfera terrestre. Sin
embargo, esta forma elemental no es utilizable por las plantas superiores.
Los caminos principales por los que el nitrógeno es convertido en formas
utilizables son los siguientes (Tisdale y Nelson, 1991)
• Fijación biológica por Rizobia y otros microorganismos que viven
simbióticamente en las ratees de las leguminosas y otras plantas
determinadas no leguminosas.
• Fijación biológica por microorganismos que viven libremente en el suelo,
y quizás por organismos que son endófitos de plantas tropicales.
• Fijaciión química como alguno de los óxidos de nitrógeno, por las
descargas eléctricas atmosféricas.
13

• Fijación química como amoníaco, NO3 o CN 2
2- , por alguno de varios
procesos industriales para la fabricación de los fertilizantes
nitrogenados sintéticos.
Las formas más comúnmente asimiladas por las plantas son los iones
nitrato NO3) y el amonio (NH4 ). La urea (NH 2 CONH 2 ) puede ser también
absorbida por las plantas, aunque es improbable que esto ocurra en
grandes cantidades, ya que este compuesto se hidroliza a nitrógeno
amoniacal en la mayoría de los suelos.
Indiferentemente de la forma de nitrógeno absorbido por las plantas, éste
es transformado en el interior de las plantas a las formas de -N=, -N-, o -
NH 2 . Este nitrógeno reducido es elaborado a compuestos más complejos y
finalmente transformado en proteínas. El nitrógeno es un constituyente
esencial de toda la materia viviente conocida hoy día (Ortega, 1998).
De Geus (1967), citado por Djassi (1994), reporta que desde el punto de
vista nutricional, el tomate no tiene marcada preferencia por el ion nitrato o
amonio, por lo que pueden utilizarse indistintamente. Contrariamente a este
autor, Carpena y Zomoza (1983), consideran que debe tenerse en cuenta
que el tipo de ion influye en la interacción catiónica durante la asimilación.
La forma de nitrógeno suministrada a las plantas, ejerce un efecto
pronunciado sobre la utilización y absorción de otros iones . Las altas
concentraciones de amonio producen una disminución de la absorción de
calcio y magnesio, pero las plantas que recibieron un 60% de nitrato y un
40% de amonio en su nutrición, mostraron un crecimiento similar que las
que recibieron todo el nitrógeno en forma nítrica.
El suministro de nitrógeno se relaciona con la utilización de los
carbohidratos; cuando las cantidades de nitrógeno son insuficientes, estos
se depositan en las células vegetativas causando un adelgazamiento de
las mismas. Cuando el nitrógeno está en cantidades adecuadas y las
14

condiciones son favorables para el crecimiento , se forman protefnas a partir
de los carbohidratos (Tisdale y Nelson, 1991).
Las plantas son generalmente capaces de utilizar cualquiera de las dos
formas tonicas de nitrógeno. En cultivos en arena o en soluciones
nutritivas, algunas especies de plantas logran buenos crecimientos con la
forma amoniacal, mientras que otras especies lo hacen mejor con el nitrato.
Con la excepción de algunos cultivos, la mayoría de las plantas de
importancia agrícola crecen en suelos bien drenados y absorben la mayoría
del nitrógeno en forma de nitrato.
Según Papadopoulus (1991) este nutriente contribuye más a los
componentes vegetativos (hojas y tallos) de las plantas que a los
componentes reproductivos (frutos). Altos índices de nitrógeno inducen un
crecimiento vegetativo, vigoroso con el detrimento de la producción de
frutos . Sin embargo , bajo condiciones de calor y luminosidad, elevados
niveles de nitrógeno pueden ser incrementados para permitir que la planta
continúe creciendo y realice el máximo de producción potencial de frutos.
Un exceso de nitrógeno se evidencia por tallos fuertes y gruesos, hojas
encrespadas en la base de la planta, grandes racimos y flores así como
pobre endurecimiento de los frutos.
Adaus (1973), citado por Consuelo Huerres y Caraballo (I991r señalan la
influencia negativa de la deficiencia del nitrógeno sobre la floración y
fructificación del tomate, los incrementos de la masa de las plantas y la
longitud de los diferentes órganos, así como el número de racimos florales,
de flores por racimo, de frutos por planta y la masa promedio de estos
últimos. Por su parte Albina Maestrey (1986), plantea que las plantas
deficientes de nitrógeno producen brotes enanos, delgados y rígidos; sus
hojas son pequeñas y erguidas, de color verde pálido con pigmentación
amarilla o púrpura y las hojas más viejas caen temprano.
15

Aliev (1980), por ejemplo, afirma que el exceso de este elemento en el
tomate, provoca menor tamaño y pobre coloración de los frutos; por otra
parte, alcanzan un desarrollo vegetativo exuberante pero menos
órganos generativos , encontrandose también que actas dosis tienden a
dsminuir los sólidos totales en los jugos.
Orphanos y Papadopoulus (I980) no encontraron efectos negativos por la
aplicación de nitrógeno amoniacas , lo cual atribuyen a una rápida
nitrificación en el suelo.
2.3.1.2. FOSFORO
Este elemento está íntimamente ligado a muchos procesos vitales del
crecimiento de las plantas, es un componente de los ácidos nucleicos,
interviene en muchas de las reacciones bioquímicas relacionadas con el
metabolismo de los carbohidratos , grasas y proteínas en la que los
compuestos fosforilados actúan como intermediarios donando o aceptando
energía en reacciones especificas. Es de gran importancia para la
germinación de las semillas, el metabolismo de las piántu!as y el
desarrollo de las raíces (Wallace , 1970 citado por Tisdale y Nelson 1991).
Aunque el fósforo es usado en cantidades más pequeñas que el nitrógeno y
el potasio, su presencia es necesitada continuamente . Inicialmente, el
fósforo es importante para el crecimiento de las raíces especialmente bajo
condiciones de frío, pero este también tiene un profundo efecto tanto en el
crecimiento vegetativo como en el endurecimiento del fruto . Los síntomas
de deficiencia incluye un color púrpura de las venas y el tallo , así como
pobre desarrollo de los racimos (Papadopoulus,1991).
16

Las plantas de tomate deficientes de fósforo producen brotes raquíticos,
con hojas pequeñas de color glauco que se tiñen fuertemente de morado
opaco y foliolos curvados hacia atrás sufriendo una caída prematura de las
hojas más viejas (Besforc 1979 citado por Djassi (I994j Específicamente
en el tomate, una deficiencia de fósforo atrasa el momento del trasplante,
así como retarda la diferenciación de las yemas florales, resultando en una
disminución del número de frutos por planta.
El papel del fósforo en la fructificación ha sido planteado por numerosos
autores. El elemento ayuda a la mejor regulación entre los órganos
vegetativos y generativos y es importante para la obtención de
rendimientos tempranos o precoces (Hipp, 1979 citado por hacho I995).
Peña (1991) plantea que un déficit de fósforo entre los 15 y 25 días
posteriores a la germinación, puede llegar a retrasar la recolección en dos o
tres semanas. Un síntoma característico es la presencia de una coloración
violeta, debido a la antocianina, que generalmente ocupa el ápice y los
bordes de las hojas hasta cubrirlas completamente si la deficiencia
persiste.
Para un rápido desarrollo radical , una adecuada utilización del agria y
otros nutrientes, es esencial que la planta cuente con altos niveles de
fósforo disponible alrededor de la zona radical.
2.3.1.3. POTASIO
A diferencia de otros elementos,
el potasio no entra en la composición de
ninguno de los constituyentes fundamentales de las plantas relacionados
con el metabolismo, tales como las proteínas ,
carbohidratos ; sin embargo,
la clorofla, los lípidos y los
dicho elemento está presente en todos los
órganos vegetales en proporciones bastante elevadas.
17

El potasio es un elemento esencial para un buen desarrollo del cultivo del
tomate, y su extracción puede alcanzar hasta 112 kilos por hectárea. Este
elemento tiene importancia preponderante en la firmeza y la calidad
organoléptica del fruto e interfiere en la uniformidad de la maduración
(Smild,1968 citado por Albina Maestrey 1986).
Este elemento se encuentra en el suelo en tres formas: no intercambiable o
fijo, intercambiable y soluble. Aunque el contenido total en el suelo es
relativamente elevado, la mayor parte es no intercambiable y por ello no
puede ser aprovechado directamente por la planta (Devlin 1970, citado por
Jacho, 1995).
Peña (1991) señala que es esencial en ciertas reacciones enzimáticas,
activador de uniones pépticas, influye sobre el intercambio de nitrógeno y
especialmente en la síntesis de proteínas, actúa sobre el intercambio de
carbohidratos y específicamente, en la formación , descomposición y
desplazamiento del almidón. Regula la actividad de los otros elementos
nutritivos minerales, neutraliza los ácidos orgánicos que desempeñan un
importante papel fisiológico en las plantas y regula el régimen hídrico de
estas; además se le considera como el responsable de la estructura del
armazón del tejido vegetal.
Según Raginova (1981) , el potasio tiene un efecto favorable sobre el
contenido de azúcares y sustancias secas en los frutos. Así mismo, Ruiz
(1991)plantea que debido a que la absorción de potasio se realiza
principalmente en las últimas semanas y que debe mantenerse en
equilibrio adecuado de nitrógeno. Se aconseja, en muchos casos, fraccionar
la aportación de este elemento de modo similar a como se hace con el
nitrógeno, sobre todo en los cultivos intensivos.
La escasez de este elemento , provoca que los frutos maduren con dificultad
y desigualmente, quedando pequeños . Pueden presentar manchas
18

amarillas diseminadas por su superficie, el sabor es menos agradable, en
particular, por la disminución de azúcares (Consuelo Huerres y Caraballo
1991). Sin embargo, un exceso de potasio en el suelo eleva la salinidad y,
como consecuencia de ello, aumenta la presión osmótica de la solución del
suelo y se restringe la entrada de agua a la planta.
2.4. FERTILIZACION MINERAL
Las plantas, en su ambiente natural, viven casi sin excepción en asociación
con el suelo; una asociación conocida es la relación suelo-planta. El suelo
le provee cuatro necesidades básicas a las plantas: agua, nutrientes,
oxígeno y soporte. Con el adelanto de la ciencia y la tecnología, el hombre
ha cubierto estas necesidades en una forma artificial (Aapadopoulus, I991).A
Aunque solo un 1 % del peso total de las plantas es aportado por nutrientes
inorgánicos, la aplicación de fertilizantes es importante puesto que influyen
grandemente en el crecimiento y desarrollo de los cultivos , así como en la
cantidad y calidad de los frutos.
Varias son las razones por las que es necesario aportar elementos
fertilizantes al suelo (Serrano, 1990)
• Los principales elementos fertilizantes constantemente están siendo
gastados por las plantas,
lavados por las aguas de lluvia y riego, y en
algunos casos , desprendidos a la atmósfera.
• Un mismo suelo puede ser potencialmente rico en algunos elementos
fertilizantes y en cambio ser muy pobre o carecer totalmente de otros.
• Aunque un suelo sea potencialmente rico en algunos elementos
fertilizantes, por la composición de la roca madre, éstos pueden estar
totalmente fuera del alcance del complejo arcillo - húmico y, por tanto,
de las raíces de los vegetales, debido a que ellos
forman parte de
combinaciones químicas poco solubles que se descomponen con mucha
lentitud a otros compuestos más solubles.
19

• La necesidad de extracción de elementos fertilizantes no es la misma en
todo momento en la vida de la planta;
según el estadio vegetativo
necesita más o menos de cada uno de ellos.
En la denominada Agricultura Sostenible, uno de los factores claves lo
constituye el mantenimiento de la fertilidad del suelo; el buen manejo de
esta controla la nutrición de las plantas, lo que determina el crecimiento, el
rendimiento de cosecha y la susceptibilidad a enfermedades. En
consecuencia, una fertilización adecuada devuelve al suelo los nutrientes
extraídos por las cosechas y de esta manera, evita su deterioro y mantiene
altos rendimientos (Gerrero,1993).
Siguiendo esta misma idea, Nuñez (1995) plantea que en el marco de la
Agricultura Sostenible, la fertilización se concibe como la aplicación
racional de fertilizantes dentro del respeto al medio ambiente. La posible
contaminación en el sistema suelo-planta con la aplicación de fertilizantes
puede deberse a los metales pesados que contengan los materiales
fertilizantes o bien a una inadecuada dosificación.
Por un lado, es necesario utilizar recursos naturales, como la fijación
biológica de nitrógeno., el aprovechamiento de residuos de cosechas. etc. y
por otra parte, se debe hacer la dosificación de fertilizantes orgánicos y
minerales que completen los recursos naturales, en base a un adecuado
diagnóstico de suelos , plantas y aguas de riego.
En Cuba, la fertilización nitrogenada del tomate se ha realizado en base a
la textura de los suelos. Resultados experimentales obtenidos en suelos
Ferralíticos Rojos, con contenidos medios y altos de P 2 O 5 y K 2 O se han
tomado como elemento básico para determinar las dosis de fertilizantes a
aplicar, estableciéndose la aplicación de 150 kg/ha de N; 75 kg/ha de P20 5
y 100 kg/ha de K 2 O.
20

De forma general , en el tomate se aplican 0.50-1. 86 t/ha de la formulación
8-7.5-12 y 0.07-0.47 t/ha de 33-0-0 que proporcionan al suelo 125-144
kg/ha de N, 42- 142 kg/ha de P205 y 72-232 kg/ha de K20 (Consuelo
Huerres y Caraballo , 1991).
En cuanto al fraccionamiento y momentos de aplicación, se ha tratado de
ajustarlo al máximo a los resultados experimentales obtenidos en suelos
rgps , donde se plantea aplicar el fósforo y potasio en siembra con 1/3 de
nitrógeno y los 2/3 de nitrógeno restantes se aplicarán a los 35-40 días
posteriores.
Debe señalarse que el fósforo y el potasio pueden aplicarse algunas
semanas antes de realizar la siembra. Por el contrario, si el nitrógeno se
añade al suelo demasiado pronto pueden producirse pérdidas por lavado y
volatilización (Montañez, 1986) siendo ésta una razón para que los
productores realicen una aplicación dividida del elemento, en busca de su
mejor aprovechamiento.
Por su parte MINAGRI (1990) recomienda para el cultivo del tomate, aplicar
el total de la fórmula completa antes de la siembra (de fondo) a la dosis
recomendada y una segunda fertilización que será nitrogenada de 2-3 t/cab
a los 25-30 días antes de la floración.
El modo de aplicación de los fertilizantes depende del sistema de
plantación y el tipo de cultivar.
Menezes dos Santos (1992) plantea que
para el tomate industrial se recomienda colocar el 30-40% del nitrógeno,
100% del fósforo y 50-60% del potasio, al momento de la plantación. El
nitrógeno y potasio remanentes pueden ser fraccionados en dos
aplicaciones de cobertura, la primera de 20-25 días después de la
emergencia y la segunda 15 a 20 días después de la primera; en caso de
siembra directa,
el abono debe ser aplicado simultáneamente con la
siembra . En cultivos para mercado fresco se recomienda, indistintamente
21

del nivel de fósforo y potasio del suelo , aplicar 50 kg/ha de nitrógeno, 10
kg/ha de boro y 10 kg/ha de sulfato de zinc.
Las recomendaciones de fertilización en el cultivo dei tomate son variables,
y dependen de las condiciones locales especifcas.
2.5. BIOFERTILIZANTES. IMPORTANCIA AGRONOMICA
En la actualidad constituye un grave problema la contaminación ambiental
provocada en cierta medida por el uso indiscriminada de los fertilizantes
químicos; es por ello que se ha recurrido a fuentes alternativas de
fertilización biológica, donde juegan un importante papel los hongos
micorrizógenos arbusculares (HMA), así como las rizobacterias
estimuladoras crecimiento vegetal (PGPR).
Hamdi (1985); establece que los biofertilizantes se basan en preparados
que contienen organismos viables y se utilizan en la inoculación de
semillas o en aplicaciones directas al suelo, con vistas a mejorar su
fertilidad así como para acelerar el crecimiento de los cultivos como
resultado del incremento de la densidad poblacional microbiana y por
consiguiente de la actividad microbiológica en las proximidades del
sistema radical.
Recientemente , Martínez (1994) planteó que los biofertilizantes incluían a
todos los recursos biológicos que ayuden o estimulen el desarrollo de los
cultivos agrícolas mediante transformaciones de elementos o compuestos
que se encuentran en formas no aprovechables, de manera que se
conviertan en formas que puedan ser utilizadas mediante la acción de los
microorganismos o de asociaciones microorganismos-plantas.
22

Según Subramanien y Ranjaronjan (1987), citado por Ana Chiluvane (1994),
los biofertilizantes juegan un papel importante en la Agricultura debido a la
capacidad de fijación de nitrógeno que poseen ciertas bacterias, además de
que mejoran la aireación del suelo y aumentan la masa orgánica de este.
También excretan sustancias al medio circundante de donde son tomadas
por la raicillas absorbentes de las plantas, produciéndose en estas un
aumento del crecimiento, así como la síntesis de sustancias fungistáticas
que al inhibir el crecimiento de los hongos fitopatógenos del suelo,
promueven indirectamente el desarrollo de las plantas.
Por otro lado, los problemas ecológicos y económicos del mundo, actual,
han revitalizado la idea del reciclaje eficiente de los desechos orgánicos en
la agricultura,
tomando auge el uso de los biofertilizantes y de los abonos
verdes , de forma tal, que se reduzca al mínimo prescindible el uso de
fertilizantes químicos como vía de nutrición de las plantas (Eolia
Treto , 1993).
Afortunadamente, la recuperación y mantenimiento de la fertilidad de los
suelos no necesariamente es sinónimo de permanentes y costosas
incorporaciones de fertilizantes sintéticos. Las ciencias agronómicas
disponen de otras alternativas que hacen a los fertilizantes químicos
menos imprescindibles (FAO,1993).
Es así como Martínez (1994) plantea adoptar una estrategia de suministro
de nutrientes a las plantas mediante una combinación de fertilizantes
químicos con abonos orgánicos y biofertilizantes, poniendo énfasis en estos
últirnos por su bajo costo . También manifiesta que la productividad agrícola
en estas últimas cuatro décadas ha ido acompañada del consumo de
formas no renovables de energía, las cuales se han convertido en el
principal factor limitante para la elevación futura de la productividad
agrícola.
23

En el presente, la situación se ha ido definiendo en tomo a algunos de
estos biopreparados, en la medida en que su utilización en diferentes tipos
de suelos y cultivos permite considerarlos como poseedores de un
relativamente alto nivel de calidad, siendo su principal ventaja el hecho de
ser aplicables a cualquier modelo agrícola de altos o bajos insumos (Ana N.
Hemández, 1996).
2.6. RIZOBACTERIAS ESTIMULADORAS DEL CRECIMIENTO
VEGETAL (PGPR) Y SU IMPORTANCIA EN LA NUTRICION DE
LAS PLANTAS.
Se define como 'rizobacterias ", a todas las bacterias que poseen la aptitud
de colonizar las raíces de las plantas de forma muy intensa (Schroth y
Hancok, 198I).
Estas poblaciones microbianas juegan un papel muy importante en el
desarrollo de las plantas, siendo capaces de colonizar las raíces de forma
externa y, en algunos casos, internamente (Klopper y Beauchamp 1992); el
interés sobre estas se ha basado en tres aspectos básicos: influencia en la
nutrición de las plantas, protección de la raíz del ataque de patógenos
procedentes del suelo y producción de sustancias reguladoras del
crecimiento vegetal , tales como ácido indolacético , giberelinas , citoquininas
y otros (Lynch,1981).
Hasta la fecha, se han acumulado gran número de reportes acerca de
microorganismos que aislados de diversos ecosistemas naturales, son
capaces de excretar sustancias reguladoras del crecimiento vegetal. Estas
sustancias orgánicas en pequeñas concentraciones influyen sobre el
metabolismo de las plantas superiores conllevando a variaciones en su
24

crecimiento y desarrollo; entre ellas las más conocidas son las
fitohormonas que son sustancias de elevada actividad biológica (Cobas,
1990).
Según las observaciones de numerosos científicos de todo el mundo, el
incremento de los rendimientos del siglo XX en los países desarrollados,
está basado en la obtención de nuevas variedades mediante la Ingeniería
genética y el uso de bioestimuladores , entre los que se encuentran los de
origen microbiano (Martínez, 1994).
Existen países donde la fijación biológica del nitrógeno se explota en gran
escala, como es el caso de Australia, donde por concepto de fijación por las
leguminosas se incorporan al suelo 12800 000 toneladas de nitrógeno al
año, por fijación de microorganismos asociativos
y de vida libre se
incorpora 1000 000 toneladas de nitrógeno al año y por fertilizarte
nitrogenado apenas se incorpora 100 000 toneladas de nitrógeno al año.
Estados Unidos por su parte incorpora al suelo 8600 000 t N/año con la
fijación de microorganismos asociativos y
de vida libre y finalmente
mediante la aplicación de fertilizante nitrogenado incorpora 4900 000 t
N/año. En la India, país subdesarrollado el aporte total de nitrógeno es
muy bajo, donde 1200 000 t N/año son incorporadas por vía química, 900
000 t N/año por fijación de leguminosas y 700 000 t N/año por la fijación
con microorganismos asociativos y de vida libre (CIAT, 1993);estos datos
ponen de manifiesto las grandes posibilidades que existen de explotar
adecuadamente los procesos biológicos en función de una mejor nutrición
vegetal.
25

1
2.6.1. GENERO AZOSPIRILLUM Sp.
Bashan y Levanony (1990), en relación al descubrimiento de esta bacteria,
plantearon que las primeras especies fueron aisladas por Beijerinck en
1925, de un suelo arenoso pobre en nitrógeno y fue originalmente llamado
Spirillum lipoferum .
algas marinas en Indonesia .
Esta bacteria fue aislada posteriormente en suelo y de
No fue hasta 1976, cuando Day y Dobereiner
observaron actividad nitrogenasa en raíces de Digitaria decumbens, que se
comenzó el estudio del género Spirillum.
Según Hamdi (1985), Vergara (1990) y Christiansen (1991), este género es
descrito en la literatura como una bacteria aeróbica cuya temperatura
óptima para el crecimiento dependiente del nitrógeno es alta, entre 32 y
40 o C, análogo a los organismos de los ambientes tropicales ; por ejemplo
Derxia (1975), citado por Hamdi (1985), observó que a menos de 24 0 C el
crecimiento era lento y nulo por debája de 18 o C a 24 o C la nitrogenasa se
inactiva y apenas había crecimiento.
Las bacterias pertenecientes al género Azospirillum sp parecen ser muy
promisorias como inoculantes para las plantas; ellas tienen un número de
características interesantes que las hace adaptables para establecerse
ellas mismas en el extremadamente complejo medio competitivo de la
rizosfera (Franciska Wael kens,1989). Ésta autora plantea además, que las
cepas de Azospirillum sp son muy versátiles en su utilización de fuentes
de carbono y nitrógeno ; ellas crecen perfectamente en ácidos orgánicos
tales como malato y succinato, los cuales están presentes en los exudados
de las raíces . Como fuente de nitrógeno, ellas pueden usar amonio o nitrato
y en condiciones micmaeróbicas pueden ser capaces de fijar nitrógeno
atmosférico.
Según Berge, Fagea, Mulard y Balandreau (1990), particular atención ha
tenido el género Azospirillum sp, el cual puede fijar nitrógeno y son
26

encontradas viviendo en asociación con las raíces de algunas gramíneas y
cereales.
Los efectos reportados por la inoculación de este microorganismo parecen
ser dependientes del tipo de planta hospedera, de la cepa de Azospirillum
sp usada y de las condiciones del medio ambiente (Okon, 1982, citado por
Christiancen 1990), este autor le llamó a la toma de nitratos, fosfatos y
potasio por las plantas, como "efecto esponja de una inoculación de
Azospirillum sp"
Este microorganismo produce una asociación bacteria-maíz capaz de
estimular la producción de sustancias estimuladoras del crecimiento,
incrementándose el número de pelos radicales y generando con ello una
mayor superficie radical y mejor disponibilidad del agua y los nutrientes,
debido a que las raíces pueden explorar un volumen mayor de suelo
(Pozzom, Giorgetti, Martinez y Aschar, I993)."
La colonización de las raíces es el factor clave en el éxito de la interacción
de las plantas con Azospirillum sp. Las especies de este género son
conocidas por colonizar las superficies de las raíces de algunas especies
de plantas
(Bashan yLevanony,
1989), así como la corteza interior de las
mismas. Generalmente, las células de Azospirillum sp pueden ser
encontradas en cualquier lugar a lo largo de los sistemas de raíces
inoculadas, pero ellas son concentradas principalmente en la zona de
elongación y en los pelos radicales.
Por otra parte, Bashan y Levanony (1990) plantean que los efectos más
marcados son cambios morfológicos en el sistema radical. Estos cambios
están directamente relacionados con las concentraciones
del inoculo
(niveles más altos que el óptimo pueden inhibir el efecto, mientras dosis
bajas de bacterias pueden no afectar). La colonización de las raíces puede
ser interna o externa. ;
en la colonización externa la bacteria forma
agregados pequeños y en la colonización interna las células de
Azospirillum sp pueden colonizar las raíces penetrando dentro de los
27

espacios intercelulares , aunque pueden colonizar enteramente el sistema
radical. La colonización eficiente por las células de Azospirillum sp,
después de la inoculación, es esencial para obtener una respuesta de las
plantas a lapresencia de la bacteria (Bashan y Mitiku 1991).
Estudios realizados por estos autores en raíces de tomate, demostraron
que la población de bacterias estaba concentrada en la zona de elongación
y de pelos radicales ; la principal distribución en raíces de tomate fue
localizada sobre la base de los pelos radicales.
Por su parte Hadas y Okon (1987) en estudios sobre la morfología de las
raíces de maíz, trigo y sorgo, así como de dicotiledóneas como el tomate,
demostraron un efecto muy marcado de la inoculación con Azospirúlum sp.
En todos los casos, las plantas inoculadas mostraron claramente un mayor
crecimiento y amplio desarrollo radical lo cual fue atribuido a las hormonas
suministradas por la bacteria.
Muchas cepas de Azospirillum sp producen hormonas en medio líquido. La
principal hormona producida es el ácido indol-3-acético (IAA) (Fallik et
al, 1989).
Otras hormonas detectadas fueron : ácido indol-3-butirico (IBA),
indol-3-etanol, indol 3-metanol ; algunas giberelinas,
ácido abscisico (ABA)
y citoquininas.
La producción de hormonas es el principal mecanismo por el cual
Azospirillum sp promueve el crecimiento de las plantas.
Las poblaciones de este microorganismo han sido medidas entre 1-10% de
la población total de rizobacterias. En plantas de crecimiento en suelo, las
poblaciones de esta bacteria son relativamente pequeñas; la mayor
población fue encontrada en cereales de verano en Brasil (10 6 -10 8
ufc/g). Usualmente las poblaciones de Azospirillum sp son muy pequeñas ;
en trigo se han encontrado poblaciones de 10 3 -10 6 ufc/g (Urquiaga y
Dobereiner.1989).
28

El efecto de la inoculación de Azospirillum sp sobre el rendimiento total,
aumenta generalmente con el crecimiento de las plantas y está en un
rango de 10-30%. Incrementos en el rendimiento debido a la inoculación,
fueron reportados en un 75% usando variedades de trigo de verano y solo
en un 50% usando trigo
de primavera. Das variables básicas que
contribuyen a la respuesta del rendimiento a la inoculación son los
cultivares, los cuales muestran respuesta diferente a la inoculación, así
como el nivel de fertilización nitrogenada (Bashan y Levanony 1990); por lo
tanto,
la inoculación de Azospirillum sp fue considerada un sustituto
parcial de la fertilización nitrogenada.
Otros resultados como la inoculación de siete cultivos diferentes con
Azospirillum brasilense resultó en un incremento en el rendimiento de las
plantas, así como cambios en la fisiología de plantas de tomate, berenjena,
pimiento y algodón; la media de incremento del rendimiento estuvo entre 18
y 16% en cada cultivo respectivamente. El nivel de colonización fue similar
en las cuatro especies por ejemplo ; el tamaño de la población de las raíces
fue de 5x105 ufc/g de masafresca de las raíces (Bashan y Levanony 1989)
Se ha obtenido que a nivel mundial la biofertilización con Azospirillum sp
en las gramíneas como trigo, arroz, cebada y pastos, produce incrementos
en los rendimientos de hasta un 25%, lo que permite la disminución de la
dosis de fertilizante mineral (Bashan y Levanony, 1990).
En Cuba se comenzaron los estudios de Azospirillum sp desde 1985, en
grumíneas como caña de azúcar y arroz.
En el cultivo del arroz se ha
logrado con la práctica de la biofertüización con este microorganismo en
condiciones de campo, una reducción de hasta un 50% de la dosis de
fertilizante mineral (Eolia Treto, 1993).
Medina (1994), trabajando en tomate señala que Azospirillum sp,
suplementado con pequeñas cantidades de fertilizante nitrogenado, permite
alcanzar rendimientos tan elevados como los alcanzados con dosis
29

Muchos microorganismos son capaces de producir sustancias bióticas que
estimulan el desarrollo de las bacterias fijadoras de nitrógeno ; así, se ha
encontrado que algunas algas crecen en asociación con bacterias del
género Azotobacter sp, contribuyendo a que éstas fijen más dinitrógeno
(Ortega, 1998).
En este sentido , se han realizado trabajos en algunos países como Brasil,
India y la Comunidad de Estados I dependientes (CEI). En la India se han
obtenido incrementos en los rendimientos de trigo, arroz, cebolla . tomate y
col, al igual que en la CEI se obtuvieron buenos resultados en las
hortalizas. Sin embargo , en Brasil las respuestas han sido variadas, ya
que en algunos casos se han logrado mejoras en los niveles de nitrógeno
del suelo; mientras que en otros no han existido respuestas debido quizás
a la fertilización nitrogenada empleada (Martínez, 1986 citado por .Tacho
1995).
En Cuba, el Instituto de Investigaciones Fundamentales en Agricultura
Tropical (INIFAT) ha realizado diferentes estudios principalmente en la
dirección de la producción de sustancias estimuladoras del crecimiento
empleando nuevos medios de cultivo, con resultados satisfactorios en
tomate , cebolla, ajo, aje pepino y remolacha. En el caso especifico del
tomate, se han logrado incrementos en la germinación entre 31 y 46%, en el
diámetro de los frutos entre 3 y 13%, en los rendimientos entre 36 y 62% y
en el peso entre 3 y 27% (Martínez, Dibut , González y Martín, 1992).
Según Marta Hernández, Pereira y Tong (1994), en la mayoría de los suelos
de Cuba estas bacterias se encuentran en poblaciones que ascienden solo
a 1000- 10 000 por gramo de suelo ; en este número , la acción beneficiosa
de las bacterias no se manifiesta, por lo que es necesario aumentar
artificialmente las poblaciones de dichos suelos , buscando alcanzar
poblaciones hasta de 100 000 000 por gramo de suelo.
31

completas establecidas en las normas técnicas,
lo que demuestra la
efectividad de dicho microorganismo como biofertilizante en este cultivo.
2.6.2 GENERO AZOTOBACTERsp.
Azotobacter chroococcum es una bacteria ampliamente difundida en los
más diversos suelos .
Fue descubierta y aislada en el año 1901 por
Bef jerink ; más tarde, se aislaron también otras especies de este género
pero la especie A. chroococcum es entre todas la más difundida en la
naturaleza y la más activa en relación con la capacidad de asimilación de
nitrógeno atmosférico (Pequeño Pérez, 1966, citado por Jacho 1995).
En general se ha encontrado que existe en diferentes regiones del planeta,
tanto tropicales y subtropicales como templadas , aunque en las últimas la
frecuencia de aparición es menor (Dobereiner, 1968, citado por
Bethlenfalvay y Linderman 1992).
El género Azotobacter sp presenta una doble función,
ya que es capaz de
fijar el dinitrógeno atmosférico como microorganismo de vida libre y,
además,
producir sustancias estimuladoras del crecimiento, entre ellas
auxinas, giberelinas, citoquininas , aminoácidos y vitaminas . La capacidad
de fijación varia considerablemente en dependencia de ciertos factores,
como la fuente de carbono y nitrógeno que empleen,
así como de algunos
microelementos; otros factores físicos pueden tener influencia sobre ellas,
como son: pH, aireación y temperatura del suelo (Lewis, 1997).
Este mismo autor plantea ,
que la propagación de las bacterias de este
género está estrechamente relacionada con la presencia en el medio de
suficientes cantidades de fósforo y potasio, y es mayor el efecto en el caso
del fósforo,
los cultivos .
cuya escasez o ausencia puede hasta inhibir el desarrollo de
Este elemento estimula el metabolismo del carbono, la
multiplicación y la fijación del dinitrógeno.
30

De acuerdo con los resultados obtenidos en las investigaciones realizadas
en Cuba, con la aplicación de técnicas isotópicas usando N 15 , estas
bacterias tienen una mayor actividad biológica que cepas aisladas en
suelos de climas templados. Por otra parte, las cepas cubanas producen
mayor cantidad y variedad de sustancias biológicamente activas que las
encontradas para cepas de suelos templados; así producen 6 citoquininas
(hormonas vegetales) en relación a solo 4 que se señalan en la literatura;
producen además una gama de 14 aminoácidos,
mientras que en otros
países se informan solo 8; también producen otras hormonas vegetales de
los tipos auxinas, giberelinas, así como vitaminas y otras sustancias
activas que aún no se han identificado (Martínez, 1994).
El conjundo de estas sustancias permite que cada una de ellas actúen en el
momento que la planta lo requiere y así algunos estimulan el desarrollo de
las raices , otras el de la planta total , otros producen más flores o reducen
el aborto floral, otras permiten que el fruto se forme antes y madure en
menor tiempo . liados estos efectos permiten un desarrollo más precoz de
plantas más vigorosas y el incremento de los rendimientos.
Trabajos realizados por Pulido y Peralta (1996) con el uso de
biofertilizantes para la producción de posturas de tomate, comprobaron la
factibilidad del uso de los mismos en esta etapa de desarrollo del cultivo,
obteniéndose que con la adición de Azotobacter sp se puede disminuir en
un 33, 7% el fertilizante nitrogenado y las combinaciones de estos
productos con los portadores químicos, acortó el período de semillero entre
7 y 10 días.
Dibut, Seoane, Villasana y Martinez (1996) plantean que la altura de las
plantas es uno de los parámetros fenológicos donde más se detecta el
efecto de las bacterias , lográndose una superioridad en el tamaño de las
plantas bacterizadas en relación con las plantas controles.
32

Otros estudios preliminares han mostrado la acción beneficiosa de estos
microorganismos en los pastos y otros cultivos desarrollados en Cuba, por
lo que es necesario continuar en la pmfundzación y conocimiento de dicho
género.
2. 6.3.MICORRIZAS ARBUSCULARES (MA).
El estudio de las micor rizas vesículo arbusculares ha demostrado que el
efecto
de la infección de las raíces de las plantas trae resultados
satisfactorios en el crecimiento y nutrición de las mismas. Mosse (1973),v
afirma que un gran número de plantas forman asociaciones simbióticas con
un grupo de hongos en el suelo, lo que penetran en las raíces y forman
arbusculos y vesículas en la corteza, a los cuales denominó micorrizas
vesículo arbusculares.
Trudicionalmente,(Allen, 1992) los hongos micorrizógenos se han agrupado
sobre la base de la anatomía de las raíces que colonizan en:
a) Ectomicorrizas: se caracterizan por la penetración intercelular del
micelio fúngico en la corteza radical.
b) Ectendomicorrizas: son generalmente ectomicorrizas con
penetración intracelular.
c) Endomicorrizas: se caracterizan por la penetración ínter e
intracelular pero sin formación de manto ni modificaciones
morfológicas evidentes en la raíces.
Cumplen con estas condiciones los tipos de micorrrzas vesículo
arbusculares que son los de más amplia distribución de todos los
microorganismos biofertiliaantes, tanto geográfica como forísticamente
Las micorrizas vesículo arbusculares (MVA), constituyen la simbiosis
micorrizíca más extendida sobre el planeta, tanto por el número de posibles
33

hospederos, como por su distribución geográfica, Es el hongo que más
predomina en las raíces y suelos de cultivos agrícolas ; recientemente han
sido reclasificadas por Morton y Benny (1990) como micorrizas
arbusculares (MA) del orden Glomales . Ellas son un grupo importante de
microorganismos del suelo que contribuyen sustancialmente a la
productividad y longevidad del ecosistema (Gabor. 1992).
También se dan a. conocer otros beneficios a las plantas incluyendo la
producción de sustancias estimuladoras del crecimiento y alteración de
otros constituyentes químicos en las plantas, aumento de la tasa de
fotosíntesis, ajuste osmótico bajo estrés de humedad, incremento de la
fijación de dinitrógeno por bacterias nitrofijadoras simbióticas o
asociativas , incremento de la resistencia a plagas y tolerancia al estrés
ambiental (ASA, 1992).
Smith y Bowen (1988) afirman que las hijas de las MVA se encuentran más
extendidas en el suelo, lo que posibilita que las raíces de las plantas sean
de mayor longitud , favoreciendo así la absorción de nutrientes inmóviles.
Vasudevan (I993f agregas que al extenderse el micelio terminal, las hafas
exploran el suelo, facilitando la absorción del ion fosfato y lo transportan a
las raíces para . ser usados por las plantas.
Barea (1988) expone el papel de las MVA como generadoras de
propiedades positivas para las plantas como: estimulación del crecimiento
vegetal, absorción de nutrientes como P, N. Zn. Cu. y S. resistencia a la
sequía, así como incremento de la tasa de respiración y fotosíntesis. Los
hongos MVAjuegan un papel crucial enfacilitar las funciones de la planta y
los microorganismos por actuar como mediador del intercambio de
nutnientes entre ellos, así existe una cadena cerrada en la relación causaefecto
en el rol de los hongos MVA
34

El desarrollo de una micorriza vesfculo arbuscular típica se produce de la
siguiente manera: una hifa que recorre el suelo, procedente de una espora o
de otro propágulo, se pone en contacto con una raicilla y forma una
estructura conocida como "apresorio" sobre las células epidérmicas de la
región posterior a la meristemática que raras veces o nunca se infecta. Este
apresorio constituye una estructura del hongo, con paredes engrosadas y
crecimiento irregular; a partir de este cuerpo, se produce una hifa que
penetra la epidermis de la raíz, colonizando paulatinamente la zona cortical
y pasando a las capas más interna de la corteza sin llegar a atravesar la
endodermis ni penetraren la estela o meristemo radical (Fernández, 1996).
Otras estructuras , que dan nombre a esta simbiosis, se forman
posteriormente a la formación de los arbúscuios , ellas son las "vesículas"
formadas por el hinchamiento de una hifa, generalmente terminal y son
básicamente órganos de almacenamiento del hongo. No todas las especies
de hongos miconizógenos VA forman vesículas , por lo que se denominan
simplemente micornzas arbusculares . Por otra parte , algunas vesículas de
algunas especies , fundamentalmente del género Glomus pueden llegar a
engrosar sus paredes y convertirse en esporas; tardo estas como las
vesículas que escapan de la raíz por desprendimientos de las capas más
externas de la epidermis , pueden constituir propágulos infectivos
(Sieverding, I991).
Para el normal desarrollo del establecimiento del proceso de la simbiosis,
existen factores que influyen en la aceptación de la misma. Siqueira (1986)
considera tres factores componentes del sistema: hongo-planta-ambiente;
también es necesario tener en cuenta los factores agmquúmicos tales como:
fertilización, insecticidas, fungicidas y herbicidas.
Guerrero (1996), refiriéndose a las MVA, agrega que el proceso de infección
se ve afectado por el nivel de nutrientes del suelo, donde en los de
moderada o baja fertilidad la infección se ve favorecida, en tanto que para
35

suelos de alta fertilidad y ricos en fósforo y nitrógeno, el establecimiento
del hongo es retrasado . Este autorjustifica que la colonización, en suelos
con bajos contenidos de fósforo está correlacionada con aumentos de
exudados en la rizos/era , lo que estimula la germinación y crecimiento del
simbionte . Suelos que presentan alta fertilidad pueden perfectamente ser
manejables a la micorrización . Existen MVA que presentan tolerancia a la
fertilización fosfórica ; por lo tanto, es necesario el aislamiento de estos
tipos de micomzas para suelos que presentan esas características (Silvia y
Schenck , I983).
La utilización de las micorrizas como biofertilizantes (Walker,
Safir y
Stephenson I990)no implica que se pueda dejar de fertilizar,
sino que la
fertilización se haga más eficiente y puede disminuirse la dosis a aplicar
desde comúnmente 50-80% y en ocaciones hasta 100%. Se plantea que de
las cantidades de fertilizantes aplicadas , sólo se aprovecha un 20%,
mientras que normalmente el resto se fija o se lava sin remedio,
mientras
que con la utilización de las micorrizas ,
puede ser recuperado por las
plantas un porcentaje mucho mayor.
Mientras que un pelo radical puede poner a disposición de una raicilla los
nutnentes y el agua que se encuentran hasta 2 mm de la epidermis, las
hifas del micelio extrarnátrico de la micorrizas VA pueden hacerlo hasta 80
mm, lo que representa para la misma raicilla, la posibilidad de explorar un
volumen de suelo hasta 40 veces mayor (Hetrick , I991).
La temperatura es considerada por Siqueira (1986) como un factor que
afecta el funcionamiento de la simbiosis; el autor refiere que esta fue
estudiada por Smith y Bowen (1979), quiénes afirman que las micorrizas
vesículo arbusculares pueden adaptarse a diferentes temperaturas en el
suelo, agregando que existe un amplio rango de temperaturas para las
MVA, puesto que lograron germinaciones de Gigaspora a temperaturas de
34°C; y temperaturas de 20°C para especies de Glomus .
36

La humedad y el pH son planteados como parte del ambiente que afecta la
simbiosis de las micorrizas arbusculares ; estas son favorecidas cuando el
suelo se encuentra por encima de la capacidad de campo (Marina Sánchez,
1991); las condiciones de humedad que prevalecen en el período lluvioso
favorece la infección de las miconizas vesiculo arbusculares
aunque
también, ellas presentan gran tolerancia a la sequía . En cuanto al pH, éste
es un factor determinante en la germinación y desarrollo de las MVA de
diferentes especies.
Según Linderman (1992) un j análisis de la rizosfera del suelo con MVA
(Glomus fasciculatum ) y plantas de tomate (Lycopersicon esculentum Mill)
no micorrizadas, demostró que las mayores poblaciones de bacterias y
actinomicetos ocurrió en la micornzosfera ,
inoculado.
comparado con el control no
Thompson (1991) citado porNancy Collins y Pfleger (1992), establecen que
las micorrizas deben ser consideradas en el diseño de sistemas agrícolas
sostenibles . Sin embargo , estas no deben ser consideradas solamente
como sustitutos biológicos de fertilizantes en suelos infértiies; ellas
también deben ser reconocidas como componentes inseparables de
agroecosistemas donde pueden tener efecto tanto positivo como negativo en
el funcionamiento de las plantas.
2.7. ACCION COMBINADA DE LOS MICROORGAMSMOS.
Algunas especies de bacterias como Azotobacter, Beilerinckia, Clostndium,
Pseudomonas u Azospirill u.m; han sido estudiadas en su interacción con
micorrizas vesículo arbusculares (MVA).
Azospirill um sp en combinación
con hongos MVA, producen un incremento significativo del crecimiento de
algunos cultivos , pero el mecanismo responsable es controvertido , pues los
incrementos algunas veces ocurren sin la evidencia de incrementos en la
37

fijación de nitrógeno o aumentos del contenido de nitrógeno en las plantas
(Bethlenfalvay y Linderman, 1992),
Uno de los beneficios que se le atribuye a las MVA es el de aumentar la
actividad de otros microorganismos como Azopspirillum, Azotobacter y las
bacterias solubilizadoras de fósforo (Sánchez de Prager, 1991)`Tilak, Singh
y Subba-Rao (1982) citado por Djassi (1994) llevaron a cabo experimentos
en macetas en los cultivos de maíz y sorgo, inoculando las semillas con
una mezcla de Azotobacter chroococcum y Azospirillum brasilensis,
incrementándose la producción de masa seca para ambos cultivos,
mientras la inoculación con cada bacteria por separado no afectó
signifccatívamente los rendimientos.
Trabajos realizados por Barea y Bonis (1985), mostraron que las plantas
micornzadas e inoculadas con Azospirillum sp estimularon su desarrollo,
siendo la inoculación efectiva en la mejora del crecimiento de la planta de
ryegrass, así como permitió un crecimiento y toma de nutrientes similar que
la lograda con la fertilización mineral. La coinoculación del maíz con
Azospiriltum sp y Glomus sp, produjo plantas de tamaño y de contenido de
nitrógeno similar así como un alto contenido de fósforo.
Experimentos realizados por Yahalom, Kapuinik y Okon (1984) con
inoculación dual de Azospirillum brasilense u Azotobacter chroococcum,
causaron incrementos sobre los controles no inoculados en las raíces,
follaje y masa seca de la panícula y el contenido de nitrógeno total de la
Setaria itálica .
De esta misma forma, Pacovsky (1985) citado por Linderman
(1992)`en experimentos con plantas de sorgo inoculadas con micorrizas
(MVA) y una cepa de Azospirillum brasilense o ambos endófitos juntos, en
una misma solución nutriente carente de nitrógeno y fósforo, observó
incrementos en la masa seca de la planta y el contenido de nitrógeno de
plantas infectadas dual mente .
La presencia de Azospirillum brasilense en
la rizosfera, incrementó la colonización de MVA y la biomasa , mientras la
38

entrada de nitrógeno debido a Azospirillum sp disminuyó, debido
posiblemente a la competencia por los carbohidratos.
Por su parte Subba-Rao y Tiak (1985) citados por ASA (1992), encontraron
que la toma de fósforo de millo perla en un suelo estéril y deficiente de
fósforo, fue mejorada por la inoculación de la semilla con Azospirillum
brasilense o la inoculación del suelo con micorriza ves (culo arbuscular
(Acaulospora sp; Gigaspora margarita: Glomus fasciculatum) . Estos
microorganismos funcionaron sinergísticamente cuando se añadieron
simultáneamente : Azospirillum brasilense + Gigaspora margarita u
Azospirillum brasilense + Glomus fasciculatum , incrementándose
significativamente el contenido de materia seca de los vástagos, la
biomasa de las raíces y la toma de fósforo, en comparación con los
controles no inoculados.
La inoculación con Glomus fasciculatum con una bacteria solublizadora de
fósforo, permitió una utilización mayor del fósforo de la roca fosfórica en
alfalfa (Medica o sativa) que cuando estos microorganismos se inocularon
independientemente (Piccini y Azcon, 1987); así mismo, en Centrosema
pubescens, informaron que el crecimiento y nutrición de esta leguminosa
fue mejorada considerablemente por la inoculación con Glomus
fasciculatum, conjuntamente con hongos o bacterias solubilizadoras de la
roca fosfórica.
Azospirillum brasilense ha sido reportada como estimuladora de la
colonización de las raíces por MVA así como del crecimiento de las plantas
de maíz (Zea mags L), según Bar+ea y Bonis (1985) Estudios realizados por
Pacovsky y Palier (1988) con sorgo (Sorghum bicolor (L)Moench), sobre el
crecimiento de las plantas con baja disponibilidad de nitrógeno y fósforo e
inoculaciones con Glomus fasciculatum, Azospirillum brasilense o ambas,
resultó en una mejoría en el crecimiento con cada organismo por separado
comparado con los controles no inoculados; pero el crecimiento fue aún
39

mayor con la combinación de los dos simbiontes. La adición de
Azospirillum brasflense a la MVA resultó en una colonización superior de
MVA.
Así, al inocular el sorgo con Azospirillum brasilense y Glomus
fasciculatum, Wani (1990) encontró un incremento significativo en el
rendimiento del grano y forraje en comparación con el tratamiento sin
inocular,
ya que se obtuvieron 2,6 vs 1,9t de grano/ha y 5,6 vs 4,2t de
masa seca/ha respectivamente.
Efectos sinergísticos de la coinocrdación de Azospirillum sp y hongos
micorrizógenos VA resultaron en un incremento significativo en el
crecimiento y contenido de fósforo en las plantas; esta inoculación mixta
permitió sustituir completamente la aplicación de fertilizante nitrogenado y
fosfórico así como mejora la infección de las plantas por la micorriza
(Bashan y Levanony, I990).
Según ASA (I992), muchos estudios en la literatura reportan las relaciones
entre los hongos MVA y algunas rxzobacterias específicas;
la relación espacial entre las hifas de las MVA en el suelo y estas
bacterias no ha sido bien establecida aunque es conocido que los
agregados del suelo formados alrededor de la hffa de las MVA presentan
una elevada actividad microbiana; esto sugiere que algunos de los
beneficios sobre el crecimiento de las plantas atribuidos a los hongos MVA
real mente pertenecen a la combinación con las bacterias asociativas.
40

3. MATERIALES Y METODOS.
3.1. Condiciones Experimentales Generales.
El presente trabado se desarrolló en áreas experimentales del Instituto
Nacional de Ciencias Agrícolas, situado en San ,bsé de las Lajas, provincia
La Habana, a los 231 de latitud norte y los 82 0 12' de longitud oeste y a 138
metros sobre el nivel del mar. El suelo utilizado fue clasificado por el
Instituto de Suelos (Academia de Ciencias de Cuba, 1989)como Ferralitico
Rojo compactado, sobre caliza profundo, con una fertilidad de media a alta
mostrándose algunas de sus características químicas en la Tabla 1.
Tabla 1 . Características químicas del suelo.
Profundidad pH M.O P205
mqq / 100g de suelo
(cm) H20
I (%) (ppm)
K+ Ca 2+ Mg 2 +
0-20 6.4 2.11 234 0.52 9.93 1.80
La
variedad de tomate empleada fue la INCA-17 recomendada para
apertura y cierne de campaña según Marta Alvarez (1996), aracterizada por
un crecimiento determinado abierto, de ciclo corto (90-100 días), con un
rendimiento potencial de 20 t/ha.
En todos los experimentos las atenciones culturales referentes a riegos,
escardes, atenciones fitosanitarias, etc, se realizaron según los
Instructivos Técnicos del cultivo (MINAGRI 1988). La fertilización fosfórica y
potásica no se realizó puesto que los contenidos de estos nutrientes en el
suelo eran adecuados para el desarrollo del cultivo.
Los biofertilizantes (Azotobacter chroococcum y Azospirillum sp) se
aplicaron 24 horas después de la siembra,
en medio líquido contando con
41

un titulo de 10 8 ufc/ml de medio de cultivo, a una dosis de 25 l.ha -1 ; la
micorriza (Glomus manihotis) se aplicó por recubrimiento de las semillas, a
una dosis de 100 g/kg de semilla, contando el inóculo con una infección del
80%. La fuente nitrogenada empleada fue la urea de acuerdo a las dosis
en estudio.
Los análisis estadísticos realizados fueron Análisis de Varianza de
clasificación simple y de clasificación doble según las condiciones . En
ambos casos, al encontrarse diferencias significativas, se aplicó la Drócima
de Rangos Múltiples de Duncan.
3.2. METODOS EXPERIMENTALES.
Para dar cumplimiento a los objetivos propuestos, se llevaron a cabo los
experimentos siguientes:
3.2.I. Experimento 1.
"Estudio de la efectividad de Azospirillum brasilense
en plántulas de tomate."
Con el objetivo de evaluar preliminarmente la efectividad de Azospirillum
brasilense (cepa UAP-154) en la calidad de las posturas de tomate, en la
campaba tardía (Febrem-Marzo)de 1995 se desarmiló un trabajo en
macetas plásticas conformadas con 1 kg de suelo, a las cuales se le
añadió fertilizante nitrogenado según dosis a aplicar ; cada maceta
contenía 2 plantas y se emplearon 10 macetas por tratamiento; el diseño
utilizado fue completamente aleatorizado con cinco tratamientos y diez
repeticiones.
42

T1. Testigo absoluto
T2. Inoculación con Azotobacter chroococcum , aplicación de 30 kgN.ha-I
T3. Inoculación con Azospirillum brasilense (UA.P-154), sin fertilizar
T4. Inoculación con Azospirillum brasilense (UAP--154), aplicación de 30 kg
N.ha
T5. Inoculación con Azospirillum brasilense (UAP-154), aplicación de 45 kg
N.ha
Para conocer la efectividad de la inoculación de Azospirillum sp a través de
las poblaciones presentes en la rizosfera del tomate,
a los 30 días de
germinadas las semillas, se tomó una muestra (5 plantas por tratamiento)
para determinar la población de nitroMdores en un medio NFB. Además,
se utilizó la técnica de diluciones, determinándose el número más probable
(MIP) según la tabla de Mc Grady.
Para caracterizar el crecimiento de las posturas, a los 25 días se evaluaron
los siguientes aspectos:
• Altura de las plantas: se midió con una regla graduada en cm desde el
cuello de la planta hasta el ápice.
• Diámetro del tallo : se determinó con un pie de rey en cm, a 1 cm de la
base del tallo.
• Longitud de la raíz.- se midió con una regla graduada en cm desde el
cuello de la raíz hasta el ,final de la raíz principal.
• Masafresca: Después que las plantas fueron extraídas del semillero, se
separó la parte foliar y radical de estas, pesándose ambas en balanza
digital en gramos.
• Masa seca: Una vez tomados los pesos frescos, las muestras se
colocaron en estufa a la temperatura de 80 o C hasta eliminar toda
el agua contenida en ellas ; posteriormente se determinó la masa seca a
través del pesaje realizado en balanza digital.
43

3.2.2. Experimento 2
"Efecto de Azospirillum Lipoferum combinado con
diferentes dosis de fertilizante nitrogenado".
Este experimento se realizó en la época temprana (Agosto-Octubre) de 1995
sobre el mismo suelo anteriormente mencionado. La fase de semillero se
realizó en canteros de Im de ancho y 20 m de largo, elevado a 25 cm del
suelo; cada tratamiento ocupó un área de 2 m 2 , para un total de siete
tratamientos dependientes de una dosis determinada de fertilización
nitrogenada.
La etapa de trasplante se realizó en parcelas de 22,5 m 2 , utilizándose un
marco de plantación de 1,40 x 0,30 m. Se utilizó un diseño completamente
aleatorízadato en lafase de semillero, así como un diseño de Bloques al azar
para la fase de campo, con 8 tratamientos y 4 réplicas.
Los tratamientos se muestran en la Tabla 2.
A los 30 días de edad de las plántulas y previo al trasplante, se tomaron
muestras de 10 plantas por tratamiento, a las cuales se le evaluaron los
mismos parámetros de vigor referidos en el experimento 1. Una vez llegada
la fase de cosecha del cultivo, se determinó:
• Rendimiento por superficie (t.ha 1)
• Número de racimos por planta
• Número de flores por planta
• Número de frutos por planta
• Masa promedio de los frutos (g)
44

Tabla 2. Tratandentos (según dosis de nitrógeno):
SEMILLERO TRANSPLANTE 30 DIAS DEL TRANSPLANTE TOTAL Kg N/ha
1. 0 0 0 0
2. PGPR( 1) + 0 0 0 0
3. PGPR( 1) + 20 kg 30 kg N/ ha 50 kg N/ ha 100
N/ha
4. PGPR (1) + 30 kg
N/ ha
30 kg NI ha 30 kg N/ ha 90
5. PGPR ( 1) + 45 kg 40 kg N/ ha 0 85
N/ha
6. PGPR ( 1) + 20 kg 20 Kg N/ ha 70 110
N/ha
7. 30 kg N/ ha 45 kg N/ ha 45 kg N/ ha 120
8. PGPR (2) + 30 kg 45 kg N/ ha 45 kg N/ ha 120
N/ ha
PGPR /I): Rizobacteria estimuladora del crecimiento vegetal:
Azospirillum lipoferurn .
PGPR (2): Rizobacteria estimuladora del crecimiento vegetal:
Azotobacter chroococcum (Norma Técnica).
45

3.2.3. Experimento 3.
"Efectividad agronómica de las PGPR y las MA, sobre el
crecimiento y rendimiento del tomate ".
Este experimento se desarrolló durante la campaña temprana (Agosto-
Octubre) de 1996, en las mismas áreas del experimento 2. Se tuvo en
cuenta un total de siete tratamientos donde se combinaron los
microorganismos como inóculos simples en relación con diferentes dosis
nitrogenadas, así como se realizaron coinoculaciones (bacteria-hongo),
estudiándose el efecto sobre el crecimiento y desarrollo del cultivo en
estudio.
La fase de semillero contó con un área de 2 m2 y la fase de trasplante se
trabajó en un área de cálculo de 35 m2, sembrado en un marco de 1,40 x
0,30 m. Se utilizó un diseño completamente aleatorizado en la fase de
semillero así como un diseño de Bloques al azar para la fase de campo con
7 tratamientos y 4 réplicas. Los tratamientos se muestran a continuación:
T1. Control (Sin inoculación y sin fertilizante)
T2. Inoculación con Azospirillum brasilense (UAP-154), sin fertilizante
mineral
T3. Inoculación con Glomus manihotis , sin fertilizante mineral
T4. inoculación con Azospirillum brasilense (UAP-154), aplicación de 90 kg
N.ha- 1
T5. inoculación Glomus manihotis, aplicación de 90 kgN.ha- 1
T6. Inoculación con Azospirillum brasilense (UAP-154) + Glomus manihotís,
aplicación 90 kg N. ha- 1
T7. Inoculación con Azotobacter chroococcum, aplicación de 150 kg N.ha- 1
(Norma Técnica).
46

A los 10 y 20 días de la siembra, a una muestra de 10 plantas por
tratamientos se le evaluó el vigor, teniendo en cuenta los mismos
parámetros descritos en el experimento 1. Se determinó la infección
micorrízica así como la densidad visual, según la técnica de tinción
establecida por Phillip y Hayman (1970).
Una vez finalizado el ciclo biológico del cultivo, se procedió a determinar el
rendimiento agrícola y sus componentes brindado por cada tratamiento en
estudio (de forma similar al experimento 2).
En este experimento se tuvo en cuenta además la influencia de los
tratamientos en la calidad interna de los frutos , a través de métodos
convencionales de laboratorio , determinándose , la acidez (%), los sólidos
solubles totales (0,6 de Brix) y el porcentaje de materia seca.
5. Análisis de la eficiencia agronómica
Se realizaron cálculos con vista a conocer la eficiencia agronómica (EA) de
los biofertilizantes; para ello, la siguiente expresión fue empleada.
kg de frutos
EA = ----------------------------------------------- x 100
kg de elemento aplicado
6. Análisis económico.
Las valoraciones económicas se hicieron sobre la base de las producciones
obtenidas en el experimento # 3, con el objetivo de determinar la
factibilidad económica de los biofe tilizantes y dosis de nitrógeno en el
cultivo .
Para ello se tomaron como datos primarios, el precio de la tonelada
47

de tomate ($286. 00) así como el costo de producción de una hectárea de
tomate ($2500. 00), tomado de la Carta Tecnológica confeccionada por el
MINAGR1 en 1990.
Los precios de los biofertilizantes empleados, fueron brindados por el
Instituto Nacional de Ciencias Agrícolas, así como , los precios del
fertilizante (urea) fueron tomados de la Resolución 140 del Comité Estatal
de Precios (Cuba 1996).
A partir de estas informaciones , se calcularon los siguientes indicadores:
• Costo de producción
• Valor de la producción: Resultado del rendimiento por el precio de una
tonelada de frutos.
• Ganancia: Resultado de la diferencia entre el valor de la producción y el
costo.
• Rentabilidad (%): Expresado como al ganancia entre el costo
• Costo por peso producido: Se determinó por el cociente de los costos y el
valor de la producción.
48

4.RESULTADOS Y DISCUSION.
4.1. Experimento 1 . "Estudio de la efectividad de
Azospirillum brasilense en plántulas de tomate."
4.1.1. Evaluación de la población de nitro, fijadores totales
en la rizosfera del tomate.
La población eficiente de las células de Azospirillum sp después de la
inoculación es esencial para obtener una respuesta de las plantas a la
presencia de la bacteria, por lo que, al emplearse un microorganismo como
biofertilizante, es necesario primeramente, conocer si la cepa seleccionada
con este objetivo es capaz o no de asociarse a las raíces del cultivo que
será inoculado.
De esta forma, en la Tabla 3 se muestra el comportamiento de las
poblaciones totales de Azospirillum sp asociadas a la zona rizosférica de
plantas de tomate a los 30 días de germinada.
Tabla 3. Comportamiento de la población de nitrofijadores
totales en el sistema radical del tomate.
1
3
4
5
0.8 x 10 5
1.4 x 10 4
6
2.5 x 10
6
1.3 x 10
49

Se obtuvo un nivel de población que oscila entre 10 4 -10 6 ufc/ml de medio
de cultivo, corroborandose el resultado obtenido por Bashan y Levanony
(1990) trabajando en cultivos no cereales como tomate, pimiento y algodón,
donde las poblaciones de bacterias estuvieron en el rango de 10 5 y 10 7
ufc/ml de medio de cultivo.
Las mayores concentraciones de bacterias se obtuvieron en los
tratamientos 4 y 5 (2,5 x 10,5 y 1.3 x 106 ufc/ml respectivamente), lo que
indica que, para obtener una eficiente población de esta bacteria en el
sistema radical del tomate, dosis de nitrógeno de 30 ó 45 kg de nitrógeno
por hectárea pueden ser de igual forma utilizadas, siendo económica y
ecológicamente viable la utilización de la dosis de 30 kgN/ha.
Metting (1993) plantea que los microorganismos no se distribuyen de forma
homogénea sobre la superficie de la raíz, sino que generalmente se
concentran en microambientes de máxima segregación de exudados,
aspecto este que se corrobora en los resultados, dado por las altas
poblaciones presentes en la rizosfera del cultivo en estudio.
4.1.2. Efecto sobre la altura y diámetro del tallo de las
plántulas así como en la longitud del sistema radical.
Entre las hormonas producidas por Azospirillum sp, las auxinas juegan un
importante papel, dado que su efecto fisiológico está relacionado con el
alargamiento y la división celular, pudiendo ejercer su influencia sobre la
estimulación observada en la altura de las plantas; asir en la Figura 1 se
aprecian los resultados referentes a este parámetro a los 30 días de
germinadas las semillas, observándose diferencias significativas entre los
distintos tratamientos, alcanzándose los mayores valores en los
50

tratamientos 2 y 4, los que no difieren entre si, lográndose un incremento
alrededor del 50% con respecto al testigo no inoculado.
La ausencia de diferencias entre ambos tratamientos, demuestra que
Azospirillum brasilense (UAP-154) tiene características muy similares a
Azotobacter chraococcum,
bacteria a la cuál se le confiere la habilidad de
acelerar el crecimiento de las plantas, según Martínez Viera (1994) en
igual sentido, el género Azospirillum sp es considerado dentro del gnepo de
"bacterias nzosféncas que promueven el crecimiento de las plantas" a
través de un proceso hormonal según De Tmch (I993). k Resultados
similares fueron obtenidos por Yahalom, Kapulnik y Okon (1984) en
experimentos realizados en Setaria itálica con inoculaciones de
Azospirillum brasilense y Azotobacter chroococcum, no encontrando
diferencias significativas entre ambos microorganismos.
Fernández (1995) pone de manifesto que
a un mayor crecimiento del
vegetal , corresponde una mayor actividad enzimática . Por otra parte, como
se muestra en los resultados, dosis de nitrógeno superiores a 30 kg/ha
crean un efecto depresivo sobre la altura de las plántulas, corroborándose
así lo planteado por Bashan y Levanony (1991) donde excesos de nitrógeno
puede provocar que Azospirillum sp actúe como inhibidor del crecimiento.
El diámetro del tallo es una de las características que se define como
parámetro de vigor importante en el cultivo del tomate . En la Figura 2 se
muestra el comportamiento del mismo , apreciándose la existencia de
diferencias significativas entre los distintos tratamientos estudiados,
correspondiendo los mayores valores a los tratamientos 2 y 4, donde se
obtuvo un incremento de 42% con respecto al tratamiento control absoluto,
resultado que se encuentra en estrecha relación con la altura,
relacionándose los mismos con los obtenidos por Bashan, Ream, Levanony
y Sodi (1989) trabajando con inoculaciones de Azospirillum brasilense Cd
51

en tomate,
donde el diámetro del tallo de las plantas inoculadas fue
superior a las no inoculadas.
En estudios realizados de inoculación bacteriana, se ha observado una
relación directa entre estos microorganismos y el incremento del sistema
radical de las plantas , aspecto que se ve reflejada en la Figura 3 la cual
muestra el efecto de la bacteria sobre la longitud de las raíces, difiriendo
en este aspecto los tratamientos entre sí exceptuándose el 2 y 4 donde se
logró un incremento de alrededor del 27% con relación al control no
inoculado (1) y al tratamiento 3, donde se inoculó en ausencia del portador
nitrogenado inicial.
Según Pozzon , Giorgetti , Martinez y Aschar (1993), Azospirillum sp produce
una asociación bacteria-raíz capaz de excitar la producción de sustancias
estimuladoras del crecimiento vegetal, incrementando el número de pelos
radicales así como su longitud, generando con ello una mayor superficie
radical y mayor disponibilidad del agua y nutrientes,
dado que las raíces
pueden explorar un mayor volumen de suelo ,
corroborándose este aspecto
con los trabajos de Bashan y Levanony (1991)en cultivos no cereales como
tomate, pimiento y algodón,
donde esta rizobacteria contribuyó a la
elongación de las raíces.
Los valores inferiores reportados en los tratamientos 1 y 3, reafirman la
necesidad del pulso inicial de un portador nitrogenado que le permita al
microorganismo establecerse de forma efectiva en el sistema radical de las
plantas; al respecto , Hubell (1985) reportó que Azospirillum sp es incapaz
de sobrevivir en el suelo en ausencia de un portador nitrogenado que le
permita a la bacteria adaptarse al medio, puesto que en el momento de la
inoculación no existe una fuente de carbono de la cuál se pueda nutrir el
microorganismo y este le es propiciado por los exudados radicales de las
plantas.
52

4.1.3. Efecto de la inoculación bacteriana sobre la
biomasa foliar y radical.
En lo referente a este aspecto, los resultados obtenidos coinciden con lo
obtenido por Waní (1990), refriendo que la inoculación con rizobacterias
ayuda a incrementar la biomasa foliar y radical de las plantas. En las
Figuras 3 y 4, se hace referencia al comportamiento de las masas frescas y
secas foliar y radical; existiendo en todos los casos un resultado favorable
hacia los tratamientos 2, 4 y 5 a diferencia de los restantes, los cuales
fueron superados en aproximadamente el 43%, 71%, 44% y 5506,
respectivamente/ para cada parámetro evaluado.
Contribuciones al aumento de la biomasa de las plantas son atribuidas a
Azospirillum sp, la cual, a través de la enzima nitrato-reductasa (Ana L
Fernández y Ileana Peláez, 1990),puede estimular la asimilación de los
nitratos, los que son aportados a partir de los fertilizantes nitrogenados o
están presentes en el suelo. Estos resultados coincide con los publicados
por Subbiah (1990) al estudiar la interacción de Azospirillum brasilense y
el nitrógeno en el cultivo del tomate, encontrando que la biomasa es
superior en los tratamientos inoculados; de igual modo, Hadus y Okon
(1987) encontraron un incremento del 56% de la masa seca del sistema
radical en posturas de tomate.
De forma general, los efectos producidos pueden deberse a la producción
de reguladores del crecimiento por parte de la bacteria, sustancias que
generalmente actúan en equilibrio con su concentración; en efecto, la mayor
o menor absorción por la planta de reguladores de origen mierobiano, en
adición a la concentración endógena de estos en la misma, tiende a
provocar tanto la estimulación como la inhibición de tejidos y órganos en el
vegetal, sobre todo si se conoce la estrecha relación que existe entre la
población microbiana estimuladora en la rizosfera y los efectos provocados
53

por la producción de reguladores del crecimiento (Ashad y Frankerberger,
1993).
4.2. Experimento 2 . "Efectos de Azospirillum lipoferum
combinado con diferentes dosis de fertilizante
nitrogenado ".
4.2.1. Efecto sobre diferentes parámetros de vigor de las
plantas.
En estudios realizados por Nieto y Frankerberger (1990) se ha comprobado
que los microorganismos productores de fitohormonas son capaces de
alterar la síntesis
de ARN y proteínas en las plantas, causando
incrementos en la fisiología de las mismas los cuales pueden afectar o no
el rendimiento agrícola; esto se relaciona con los resultados obtenidos en
nuestra investigación, al obtenerse un incremento en los diferentes
parámetros de vigor estudiados : altura de las plántalas, longitud del
sistema radical, diámetro del tallo, así como la masa fresca y seca de las
plántalas, los cuales se muestran en las Riguras 5, 6 y 7 , donde se
observan diferencias significativas entre los tratamientos analizados.
Referente a la altura alcanzada por las posturas, se aprecia que los
mayores valores se obtuvieron en los tratamientos 4 y 8 los cuales cuentan
en el momento de la siembra, con iguales dosis de fertilización nitrogenada
(30 kg N. ha -1 ), alcanzándose un incremento respecto a los tratamientos 3, 5
y 6, referentes a dosis de nitrógeno de 35, 45 y 20 kg N.ha- 1
respectivamente, así como del tratamiento 7 que no contaba con inoculación
bacteriana.
54

Este resultado está asociado a las dosis de nitrógeno empleadas en
combinación con la bacteria, sobre lo cuál Vergara (1990) señala que los
fertilizantes nitrogenados, aplicados tanto en exceso como defecto, pueden
disminuir la capacidad de colonización del microorganismo en el sistema
radical de la planta o de lo contrario, eliminar la respuesta de la misma a
la inoculación.
La influencia de la inoculación en el desarrollo y funciones de la raíz es
probablemente uno de los factores de mayores beneficios para el cultivo,
pudiendo jugar un papel fundamental en este efecto la producción de
sustancias promotoras del crecimiento por las cepas inoculadas, o por las
raíces como una reacción a la colonización bacteriana.
En cuanto a la longitud de las raíces,
se aprecia similar comportamiento,
destacándose nuevamente los tratamientos 4 y 8, los que alcanzan 14.62 y
15.22 cm de largo, respectivamente , con incrementos sobre los restantes
tratamientos en aproximadamente el 24% . El estímulo provocado sobre las
raíces , sugieren un posible incremento de los rendimientos dado por el
aumento en la toma normal de iones y agua, según Bashan y Levanony
(I990 Además, es conocido que la longitud de las raíces de una planta
depende de factores genéticos y de factores ambientales , en particular la
disponibilidad de agua y nutrientes, siendo mayor dicho crecimiento a
medida que disminuye la mencionada disponibilidad (Habib, 1986).
Al observar los resultados correspondientes al diámetro del tallo (Figura
6), se aprecia que fueron obtenidas posturas de muy buen grosor en los
tratamientos 4 y 8, con valores que oscilan alrededor de 0.48 cm lo que se
considera óptimo para el trasplante según el Instructivo técnico del cultivo
(MINAGRI, 1990).
55

Ileana Peláez y Ana Fernández (1992), plantearon que siempre que la
inoculación con Azospirillum sp es exitosa, se detectan aumentos en la
biomasa del vegetal, tal y como ocurre en los resultados mostrados en la
Figura 7, donde se continua manteniendo la misma secuencia anterior,
siendo los tratamientos 4 y 8 los que sobresalen como los de mejores
resultados, comprobándose que donde el nitrógeno fue el factor limitante
(Tratamiento l y 2), todos los parámetros de vigor medidos fueran
inferiores, resultado que corrobora el obtenido por Berge, Fagea, Mulard y
Balandreau (1990); trabajando con inoculaciones de Azospirillum sp en el
cultivo del maíz con y diferentes dosis de fertilizante nitrogenado.
El tratamiento según Norma Técnica (8) confirmó el efecto bioestimulante de
Azotobacter chroococcum inoculado en diferentes especies vegetales, según
Martínez Viera (I994),donde la inoculación de esta bacteria prodigo efectos
positivos en el crecimiento de estos cultivos.
En los resultados se aprecia que existe una mayor potencialidad dei
sistema planta-rizobacteria para expresar su asociación, pues imperan las
condiciones favorables para ello que, junto al manejo agronómico provocan
aún desde edades tempranas un mejor estado fisiológico y, por tanto,
mayor vigor de las plantas.
4.2.2. Influencia sobre el rendimiento agrícola y sus
componentes.
La promoción del crecimiento vegetal se puede ver reflejada en un aumento
del desarrollo y la productividad de las plantas ,
tal como se manifiesta en
la Tabla 4, donde se muestran los resultados correspondientes al
rendimiento agrícola y algunos de sus componentes entre los que se
encuentran el número de racimos por planta ,
número de flores por planta,
el número de finitos por planta y la masa promedio de los frutos.
56

Como se observa, los tratamientos 4 y 8 alcanzaron los máximos valores
para cada uno de los parámetros evaluados, presentando diferencias
significativas con los restantes tratamientos, de lo que se deduce que la
obtención de plántulas vigorosas durante la fase de semillero, permite
lograr pl antas con muy buen desarrollo reproductivo.
El hecho de que se produzcan mayor cantidad de frutos y racimos por
planta, asegura un alto porcentaje de fructificación; María E. Domini (I996),-
trabajando en siembras tempranas. encontnó que para esta época existe
una estrecha correlación entre el rendimiento y el número de frutos por
planta, seguido del número de frutos por racimo y el número de llores por
planta, lo que indica que incrementos de estos caracteres determinarán
aumentos en el rendimiento.
Tabla 4. Efecto de las dosis de nitrógeno y aplicación de
biofertilizantes sobre el rendimiento agrícola y sus
componentes
1(0 Kg N/ ha) 1 15.55 c 2.93 c 4.10 c 10.13c 1 62.30 c
2 PGPR + 0
N/ha
)
3 PGPR (1) +
100 Kg N/ ha)
16.73 c 3.43 c 4,20 c 10.20c 62.25 c
20.09 b 4.53 b 6.20 b 12.50b 65.60 b
4 PGPR (1) +
90kg N/ ha)
24.79 a 5.85 a 7.12 a 14.53a 65.32 b
5 PGPR (1) +
85 Kg N/ ha)
20.65 b 4.50 b 6.18 b 12.33b 73.86 a
57

6 PGPR (1) +
110 Kg N/ ha) 18.29 c 3.25 c 4.43 c 10.35c 63,05 c
7 120 Kg N/ha
sin inocular
20.03 b 4.55 b 6.23 b 12.20b 72.49 a
8 PGPR (2) + 120
Kg N/ ha
23.87 a 5.64 a 7.10 a 14.50a 65.86 b
ESx 0.22 *** 0.13 0.19 0.20 0.79
Medias con letras comunes no difieren significativamente p

donde se aprecia que a medida que se elevan las dosis de nitrógeno se
observa una tendencia a la disminución de los rendimientos agrícolas.
Se comprobó también que la reducción del 30% del fertilizante nitrogenado
no provoca efectos deletéreos sobre el rendimiento y sus componentes, por
lo quel queda corroborado el efecto estimulador de la bacteria Azospirillum
lipoferum, lo que coincide con los resultados obtenidos por S`ubbiah (1990)
trabajando en tomate, quién logró una disminución del 50% del fertil izante
nitrogenado El efecto beneficioso de este microorganismo en gran medida
no se debe al nitrógeno fijado, cuya cantidad puede ser exigua,
sino a las
sustancias fisiológicamente activas que son excretadas al medio
circundante (la rizosfera), de donde son tomadas por las raicillas
absorbentes de las plantas, produciendo en estas un aumento del
crecimiento y por consiguiente del rendimiento al ser absorbidas en
determinadas concentraciones.
Este planteamiento ,
puede ser corroborado al observarse los resultados
obtenidos en el tratamiento 7 donde no se realizó la inoculación de la
bacteria y, a pesar de tener una dosis de nitrógeno adecuada para el
cultivo (120 kglha), difiere de los restantes tratamientos donde se inoculó
la rizobacteria ,
por lo que puede afirmarse que el resultado alcanzado fue
debido a las hormonas producidas por estas bacterias ; las que provocan un
estímulo positivo en el crecimiento y desarrollo de las plantas.
De igual forma, Medina (1994) trabajando en tomate señala que
Azospirillum sp suplementado con pequeñas cantidades de fertilizante
nitrogenado , permite alcanzar rendimientos tan elevados como los
alcanzados con dosis completas de este fertilizante, lo que demuestra la
efectividad de dicho microorganismo como biofertilizante en este cultivo.
59

Al analizar los tratamientos 3, 5 y 7 cuyos resultados fueron inferiores,
estos pueden considerarse satisfactorios,
dado que los rendimientos
obtenidos y el resto de los parámetros analizados se encuentran en
concordancia con el potencial de esta variedad para la época en la cual se
realizó el estudio, según los resultados presentados por Marta E. Dominf
(1996); esta diferencia pudo deberse a la no exitosa combinación del
fertilizante mineral (nitrógeno) con el microorganismo, debido a que una de
las variables básicas que contribuyen en la respuesta del rendimiento a la
inoculación, es el nivel de fertilización nitrogenada que se emplee.
No obstante, en todos los casos hubo respuesta a la inoculación
independientemente de los niveles de fertilización empleada; de acuerdo a
lo planteado por Bashan y Mitiku (1991) a colonización eficiente por las
células de Azospirillum sp después de la inoculación, puede provocar un
cambio significativo en varios parámetros del crecimiento, los que pueden o
no afectar los rendimientos del cultivo.
4.3. Experimento 3 . "Efectividad agronómica de las PGPR y
MA sobre el crecimiento y el rendimiento del tomate".
4.3.1. Comportamiento de los microorganismos sobre el
vigor de las posturas.
En las Figuras 8 hasta la 12, se presentan los resultados obtenidos en
cuanto al efecto de los microorganismos sobre el vigor de las posturas de
tomate a los 10 y 20 días de germinadas las semillas.
En todos los casos , se obtuvieron diferencias significativas entre los
tratamientos en los dos momentos de realizado el estudio , y sólo no se
encontraron diferencias entre los tratamientos para el parámetro longitud
60

del sistema radical a los 10 días de germinada la semilla, lo que pudo
deberse a la no existencia aún del reconocimiento planta-microorganismos.
De forma general , para todos los parámetros de vigor se destacó el
tratamiento 6, donde se realizó la coinoculación de ambos microorganismos
(bacteria-hongo), alcanzando a los 20 días tata altura de 20. 52 cm (Figura.
8), un diámetro del tallo de 0.45 cm (Figura 9), una longitud del sistema
radical de 15.2 cm (TVgura 10), así como una masa fresca y seca de la
planta de 6.42 y 1.02 g, respectivamente (Figuras 11 y 12), por lo que la
doble inoculación produjo incrementos en todos los parámetros analizados.
Cuando una planta se encuentra inoculada, esto influye en gran medida en
la velocidad de absorción de agua y nutrientes por las raíces y este efecto
se hace más marcado en la medida en que existe una mayor especificidad
planta-microorganismo , evidenciándose en la masa fresca del vegetal y en
su estado nutricional, toda vez que el microorganismo permite una mayor
asimilación de las fuentes minerales.
Considerando que las raíces de esta dicotiledónea inoculadas con
Azospirillum sp y con un hongo miconizógeno arbuscular, donde ambos
endófitos ocupan la misma área coríical , entonces se presentarán
interacciones directas entre los tres simbiontes , lo que podría resultar en
un aumento del crecimiento de las plántulas especialmente en sus
primeros estadios , siempre que sea adecuada la concentración de los
microorganismos en el sistema radical de las plantas.
Como se aprecia en los resultados presentados,
ya a los 20 días de
germinadas las semillas, las plántulas cuentan con características
óptimas para su trasplante, dado esto por un proceso acelerado de
crecimiento , lo que permite realizar el mismo en este momento y no a los 28
ó 30 días según recomienda el Instructivo Técnico (MINAGRI, 1984),
ganándose entre 8 y 10 días en esta fase , con las consecuentes ventajas
económicas que se derivan..
61

4.3.2. Evaluación de la población de las MA en las raíces.
Al realizar el muestreo para conocer el porcentaje de infección de las raíces
por el hongo, así como evaluar su densidad visual (Tabla 5), se encontró
una infestación positiva del microorganismo en el sistema radical del
tomate, lo que puede ser apreciado en las diferencias alcanzadas con
relación al tratamiento testigo absoluto (Tratamiento 1), donde se evaluó la
microflora nativa del suelo, siendo la infección mayor en los tratamientos
donde se realizó la inoculación artificial, lo que corrobora el planteamiento
de que este cultivo presenta una alta dependencia micorrizógena, según
Fernández (1996).
Por otra parte, la colonización micorrí ica se vio incrementada con la
coinoculación combinada con la fertilización nitrogenada, dada que la
densidad visual está en el orden de 5.93 lo que indica que existe una
mayor colonización en el interior de las raices.
Tabla 5. Comportamiento de las MA en las raíces de tomate
TRATAMIENTO
3
% DE INFECCION
33
DENSIDAD VISUAL
2.02
5 35 2.54
1
6
39 5.93
Estos hongos , tal y como la literatura lo reporta , juegan su papel en un
mejor y más rápido crecimiento de las plantas, debido principalmente a
una mepr nutrición de las mismas ,
absorción de nutrientes y traslocarlos a la planta ,
siendo capaces de incrementar la
debido a que las raíces
tienen una mayor área de exploración a través de la extensión de las Fofas
del hongo en el suelo (González y Ferrera, 1994).
62

El marcado efecto estimulador sobre el vigor de las plántulas parece estar
relacionado con la actividad de síntesis de sustancias fisiológicamente
activas, dada por las elevadas poblaciones de la bacteria asociadas a
plantas inoculadas en relación a las plantas testigos. Los incrementos
producidos sugieren una asociación planta-microorganismo efectiva y
basada en un intercambio provechoso entre exudados radicales y el
conjunto de sustancias activas producidas por la bacteria.
4.3.3. Evaluación del rendimiento y sus componentes.
En la Tabla 6 se muestran los resultados correspondientes al rendimiento
agrícola (t.ha), el número de racimos por planta, número de flores por
planta, el número de frutos por planta y la masa promedio de los frutos,
correspondiendo la mejor respuesta al Tratamiento 6,el cual difiere de los
restantes evaluados, lo que en estrecha relación con el resultado obtenido
durante la fase de semillero y demuestra que ambos microorganismos
actúan sinergísticamente cuando se añaden
de forma simultánea,
resultado que concuerda con Azcon y Acampo (1981) quienes encontraron
respuesta a la infección hongo - bacteria, así como un estímulo sobre el
crecimiento y desarrollo de diferentes cultivos; por su parte, También
Subba-Rao y Tilak (1985) al trabajar la combinación de ambos
microorganismos encontraron incrementos del rendimiento en cebada.
Al respecto, Tilak, y Singh
(1984) citados por Djassi (1994), plantean que
Azospirillum sp es un estimulador de la colonización radical por las MVA,
así como del crecimiento de las plantas, traduciéndose este efecto en un
incremento de los rendimientos. En este sentido, Tilak y Subba Rao (1987) -
dieron a conocer que existe una asociación espacial donde la bacteria
puede utilizar fósforo y carbono del hongo, así como el hongo puede
transportar el nitrógeno fijado por las bacterias a las plantas; además,
Azospirillum brasilense ha sido aislado del cortex radical (endorizosfera),
63

abriendo la posibilidad de una interacción directa entre los hongos MVA y
Azospirillum sp dentro de la planta.
Tabla 6.
Efecto de los biofert liaantes en el rendimiento
agrícola y sus componentes.
1 13.32 e 1 3.79 e 5.12 e 9.30 e 1 75.44 a
2 13.44 e 4.25e 5.16 d 9.25 e 75.15a
3 18.15 d 5.40 d 7.38 c 11.80 d 70.98 b
4 22.44 b 7.17 b 8.23 b 13.52 c 70.20 c
5 20.24 c 6.12 c 8.06 b 13.25 c 69.51 c
6 25.71a 8.21a 9.17a 15.52a 51.13d
7 23.26 b 7.29 b 8.37 b 14.21 b 53.91 d
ESx 0.20*** 0.12*** 0.16*** 0.18*** 0.75***
Mechas con letras comunes no difieren significativamente p

Efectos deletéreos sobre el rendimiento agrícola y sus componentes, fueron
producidos en aquellos tratamientos donde el nitrógeno fue el factor
limitarte (Tratamientos 1 y 2), lo que demuestra y corrobora la alta
dependencia del cultivo por este macroelemento esencial.
Por otra parte,
la producción de frutos depende de la floración, y niveles
insuficientes de nitrógeno hacen que disminuya el número de flores o, como
señala Atherton (1986), las flores pueden detener su desarrollo y envejecer
prematuramente antes de su apertura: así mismo, Fisher (I981) encontró
que bajos niveles del elemento no solo provocaron un retraso en la apertura
de las flores sino que ,
en ciertas condiciones, aumentaron el porcentaje de
abortos florales, aspectos que se ven claramente reflejados en los
tratamientos antes mencionados.
La coinoculación con ambos
microorganismos y la adición de 90 kg de
nitrógeno por hectárea permitió incrementos del rendimiento de un 30% con
respecto al control según las Normas Técnicas ,
siendo conocido que las
micorrizas incrementan el rendimiento de los cultivos y reducen el consumo
de fertilizantes minerales,
dado esto por la presencia de las hffas
extrarudicales cuyo pequerio tamaño les permite entrar en los poros más
diminutos del suelo ,
y poder accedre a los nutrientes del mismo según
plantearon Bethlenfalvay y Linderman (1992).
A su vez, está demostrado y corroborado el efecto positivo de Azospirillum
sp en el cultivo del tomate, coincidiendo los resultados alcanzados con los
obtenidos por Gómez et al (1995) trabajando en este cultivo, logrando
buenos rendimientos y ahorro de fertilizantes con la inoculación dual de
Glomus manihotis y Azospirillum brasilense (Sp-7),
la técnica de recubrimiento de semillas.
ambos inoculados por
65

4.3.4. Influencia sobre la calidad interna de los frutos
La Tabla 7 muestra los resultados de los análisis bmmatológicos
realizados a los frutos, concerniente a la acidez (%),
solubles totales %) y la materia seca (%).
el brix (sólidos
Como puede ser apreciado, se encontraron diferencias significativas entre
los tratamientos evaluados, correspondientes a dosis de nitrógeno de 120,
90 y 0 kg/ha respectivamente; no obstante, entre el tratamiento de la
Norma Técnica y la variante con biofertilizantes, a pesar de que no difieren,
se observa una ligera tendencia a la disminución de la acidez así como al
incremento de los sólidos solubles totales y al porcentaje de materia seca.
En estos resultados se manifiesta, que desde el puyúo de vista de obtener
bajos contenidos de nitratos en los frutos, se hace aconsejable la
utilización de la dosis de 90 kg N/ha, muy importante al valorar esta
variedad para consumo fresco. En cuanto al tratamiento testigo absoluto, el
resultado obtenido se corresponde con lo reportado por Luh, Ukai y Chung
(1973) citados por Albina Maestrey (1986) quienes consideran que el
contenido de sólidos solubles totales de los frutos disminuye en más de
8% cuando se encuentran bajos niveles de nitrógeno en el suelo.
Tabla 7.
Efecto de los tratarnientos en la calidad interna de los frutos.
Tratamiento Acidez % Brix % Mat. seca %
1 Norma técnica 120 KgN/ha 0.48 a 4.46a 5.51a
2.PGPR + MVA +90 kgN/ha 0.45 a 5.12a 5.94 a
3.Testigo absoluto +0 N/ ha 0.38 b 3.07 b 4.23 b
ESx 0.03*** 1.09*** 0.69***
Medias con letras comunes no difieren significativamente para. p

De los resultados obtenidos se deduce, que la calidad interna de los frutos
no se afecta al ser utilizados niveles batos de fertilizante nitrogenado
combinado con biofertilizante, dado que en este caso, el valor obtenido se
corresponde con los resultados publicados por Marta Alvarez (1996) al
caracterizar la variedad de tomate INCA-17; existiendo además una
estrecha relación con el rendimiento agrícola alcanzado por el cultivo a
niveles nutricionales de 90 kg/ha de nitrógeno, el cuál no difiere de la
Norma Técnica donde se establecen de 120-150 kg de nitrógeno/ha según
el tipo de suelo; lo que, desde el punto de vista ecológico , resulta una
buena alternativa a tener en cuenta para la conservación de los
agroecosistemas.
5. ANALISIS DE LA EFICIENCIA AGRONOMICA.
La eficiencia agronómica del uso por las plantas del nitrógeno aportado
mediante la fertilización mineral combinada con la nzobacteria
estimuladora del crecimiento vegetal Azospirillum sp (Tabla 8), tuvo los
más altos valores en los tratamientos 4 (exp .2) y 6 (exp . 3), difiriendo
significativamente de los restantes tratamientos en estudio , lo que resulta
lógico si se tiene en cuenta que la eficiencia agronómica, tal y como su
fórmula lo expresa, está en estrecha relación con el peso de los frutos
obtenidos, siendo éste superior en los tratamientos antes mencionados; por
otra parte , este índice se encuentra en relación inversa a la cantidad de
nutrientes aplicados, obteniéndose que a mayores dosis de fertilizante
nitrogenado menor eficiencia agronómica de ese tratamiento.
Al referirse a este aspecto, Albina Maestrey (1986), trabajando en tomate
sembrado en un suelo Ferralítico Rojo de Cuba , reporta una tendencia
decreciente de la eficiencia agronómica con dosis elevadas de fertilizante
67

nitrogenado en comparación con los niveles más bajos del nutriente
aportado al suelo, resultado que corrobora los obtenidos en este trabajo.
Así mismo, Adjanohun (1996), trabajando en tomate (cv.
Campbell-28)
encontró que la eficiencia agronómica fue superior cuando aplicó 60 kg/ha
de nitrógeno con respecto a dosis de 240 kg/ha.
Este resultado refleja el hecho de que el aumento de cosecha producido por
unidad de incremento del nutriente en estudio es proporcional al
decremento del rendimiento máximo; lo que se conoce como Ley de
Mitsherlich.
Tabla 8. Eficiencia Agronómica (EA) de las diferentes
combinaciones estudiadas.
Experim . 2 Tratamiento E.A. %
1 35.2 d
2 35.5 d
3 41.7 c
4 62.7a
5 42.3 c
6 51.2 b
ESx 0.572**
Experim . 3 4 40.05 b
5 39.62 b
6 64.33 a
7 32.21 c
ESx 0.572**
Medias con letras comunes no difieren significativamente para p < 0.001

Estos resultados reafirman la posibilidad de utilización de algunos
microorganismos que, en su acción como biofertilizantes, permiten
disminuir el consumo de fertilizantes minerales sin producirse afectaciones
en el sistema, dado que se logra una alta eficiencia agronómica del mismo;
por lo cual, las variantes presentadas pueden constituir una alternativa
sumamente promisoria para la Agricultura cubana.
6. Evaluación Económica.
El efecto provocado por la introducción de los biofertilizantes, permite
lograr beneficios económicos que se traducen, por una parte en una
ganancia del orden de $4044.98 /ha -2 cultivada (Tabla 9), lograda
fundamentalmente por concepto de ahorro del 30% del fertilizante
nitrogenado, lo que redunda en un ahorro de dinero a invertir en la compra .
de este producto que cada día resulta más inalcanzable para el productor
agrícola..
Por otra parte, las ganancias obtenidas estuvieron vinculadas además al
acortamiento del ciclo biológico del cultivo, lo que permite un menor tiempo
de ocupación de la tierra por los semilleros, así como se logra un ahorro de
combustible al reducirse el número de riegos y de atenciones fitosanitarias,
siendo menores también las labores manuales (escardes), que de forma
intensiva se deben mantener en los semilleros durante los 28,30 días que
dura este período.
69

Tabla 9. Valoración Económica.
86.9
1 Ficha de costo
Norma Técnica 3432.20 6417.84 2985.64 86.9 0.59
(120Kg N/ha)
2-Biofert. + (90 Kg N/ha) 3308.08 7353.06 4044.98 122.2 0.44
Puede considerarse además que, desde el punto de vista social, es un
resultado relevarte, ya que permite preservar los recursos naturales de
una forma ecológicamente sostenible, al lograrse mediante la vía de
introducción de los biofertilizantes, disminuir el consumo de fertilizantes
químicos los que contribuyen en la actualidad a la contaminación del suelo
y el manto freático por el uso indiscriminado que se hace de ellos.
70

7. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
A partir del análisis de los resultados alcanzados , se llegaron a las
siguientes conclusiones, válidas fundamentalmente para la variedad y las
condiciones del estudio.
1- La bacteria asociativa Azospirillum sp logia establecerse en la zona
rizosférica de plántulas de tomate en poblaciones altas durante la fase de
semillero del cultivo.
2-Azospirillum sp provocó en las plantas inoculadas un efecto positivo
sobre el crecimiento del cultivo.
3- La utilización de esta bacteria como biofertilizante permitió acortar el
período de semillero del cultivo, reduciéndose este en 10 días en
comparación con lo recomendado en las Normas Técnicas.
4- La inoculación simple con Azospirillum sp o la coinoculación con
Azospirillum sp y Glomus manihotis permitió disminuir el consumo de
fertilizante nitrogenado en un 30%, lográndose rendimientos satisfactorios,
contribuyendo de esta forma a minimizar las afectaciones al ambiente.
5- La coinoculación combinada con 90 kg de nitrogeno/ha, permite contar
con un sistema eficientemente agronómico.
6- La combinación biofertilizantes fertilizante nitrogenado resultó ser una
altemativa económicamente viable.
71

Las recomendaciones que se derivan del presente trabajo son:
• Incluir la combinación Azospirillum sp - Glomus manihotis + 90 kg N/ha
como alternativa nutricional sostenible en el cultivo del tomate.
• Continuar los estudios de los biofertilizantes en el tomate mediante la
inoculación con otros géneros, especies o cepas de microorganismos
promotores del crecimiento vegetal.
• Profundizar en los estudios sobre el efecto ecológico provocado por la
aplicación de estos microorganismos con énfasis en las características
físico-químicas y la microflora del suelo asociada.
• Trabajar en la introducción a la producción de los resultados obtenidos
en el presente trabajo.
72

8. BIBLIOGRAFIA
Academia de Ciencias de Cuba. Clasificación genética de los suelos de
Cuba. 1989
Adjanohoum,
A Nutrición y fertilización del tomate Lycopersicon
escu1entum Mill) bajo fertirrigación con nitrógeno y potasio por goteo en un
suelo Ferralítico Rojo . Tesis en opción por el grado de Doctor en Ciencias
La Habana.Cuba. 1996
.
Alvarez, Marta. Variedad de tomate INCA- 17. Cultivos Tropicales. 17(2):
81- 83. 1996
Arshad, M y W. T. Frankerberguer. Microbial production of piara growth
regulators . En: Soil Mlcrobial Ecology Application in Agricultura)
Environmental Management , F. b. Metting. Ed. Marre¡ Dekker, Inc, New York,
312pp. 1993
Atherton , J. G. The tomato crop : a scientifc basic for improvement. 1986
ASA. Mycon ize in Sustainable Agriculture. Special ublication . No.54.
Madison, Wisconsin. USA. 1992
Azcon, R and JA Ocampo. Factors affecting the vesicular- arbuscular
infection and mycorrhizal dependency of thieteen wheat cultivars. New
Phytol. 87:677-685. 1981
Bashan, Y and H. Levanony . Factors affecting adsorption of Azospirülum
brasilense Cd to root hairs as compared with root surface of weat . Cnadian
Joumal of Microbiology. 35; 936-944. 1989

Bashan,
Y and H. Levanony. Current status of Azospirillum as a
chanllenge for agricultura. Canadian Joumal of Microbiology. Vol 36. 1990
Bashan, YandMltlku, G. Estimation of minimal numbers ofAwspirülum
brasilense uning time-iimited liquid enrichment combined with enzyme-
Iinked lnmunosorbent-assay. Soil biology and Biochemestry. Vol 23(2): 138.
1991
- Bashan, Y and H. Levanony. Root surface colonization of non- cereal crop
plants by pleomoiphic Awspirülum brasilense Cal
Joumal of general
microbiology. 137. pp 187-196. 1991
Barca, JM,; Bonis, A.F.
hiteractions between Azospirillum and VA
myconhixa and their effects on growth and nutrition of maize and rye grass.
Soil Biology and Biochemestry. 17:1; 119- 121. 1985
Barea, JM The rol of mycorrhiza in improving the stablishment and
function of the Rhiwbium legume system under feld conditions. En.:
Nitrogen Fixation by legumes in mediterranean agriculture. ICARDA,
Netherland, p. 153-162. 1988
Berge, O; Fagea, J,' Minara D and Balandreau, J effects of inoculation
with Bacillus circulan and Azospirillum lipoferum on crop yield gmwn
malze. Symbiosis. 9; 259-266. 199 0
Bethlenfalvay,
G.J and R.G.Linderman. Mycorrhizae in Sustainable
Agriculture. ASA Special Pubiication. No. 54. 1992
Bonet, C. Respuesta del cultivo del tomate (Lycopersicon esculentum) al
agua en las distintas fases de su desarrollo. Ciencia y Técnica de la

Agricultura . Riego y drenaje . 4(1):5- 17.1981
Carpena, O; Zomoza, P. Influencia de la relación NO3 NH 4 en la raárición
mineral de la planta de tomate . Anales de Edafología y Agrobiologla. 42(9-
10):1711-1723.1983
Casanova, A. El manejo del cultivo del tomate . Documento Técnico
Informativo. La Habana . Istituto de Investigaciones Hortícolas "Liliana
Dimitrova". 1991
CIAT Intemacional. Vol.12(2). 1993
Collins , Nancy. J and Pfleger. Vesicular-arbuscular mycorrhize and
cultural strees. ASA Special Publication. No. 54. 1992
Cobas, D. Folleto de Fisiopatología Vegetal . Curso de posgrado. INIFAT.
1990
Chiluvane, Ana, A. Influencia de diferentes biofertilizantes en el
rendimiento del maíz y en el ahorro del nitrógeno. Tesis de diploma. 1994
Chrlstian,
W. C. Influence of azospirillum spp on the nitrogen supply of a
gmmineous host. 101pp. 1991
Del Amico et al. Efecto de diferentes normas de riego sobre el cultivo del
tomate . 1. Dinámica de la humedad del suelo, rendimientos y calidad
interna de los frutos. Cultivos Tropicales . 12(2):33-38, 1991
De Troch, P. Bacterial surface polisaccharides in relation to plant
interaction :
a genetic and chemical study on Azospirillum brasilense.
Disertaciones de Agricultura #238. 1993

Djassi, M. Efectividad de algunos biofertilizantes y bioestimuladores en
le cultivo del tomate. trabajo de diploma. ISCAH. 1994.
Dominguez, U.A. Abonado de hortalizas aprovechado por sus frutos.
Ministerio de la Agricultura, Pesca y Alimentación. 1982
Domini,Maria. E. Nueva estructura varietal de tomate (Lycopersicon
esculentum, Mill) para diferntes épocas de siembras .
Tesis de Maestría en
Ciencias Agrícolas . La Habana. 1996
FAO. Informe del curso Internacional en investigación y producción
Hortícola, 31 Agosto- 11 Septiembre. Brasilia. Brasil . Red de Cooperación
Técnica en Producción de cultivos alimenticios . Cult-35. 1989
FAO. Producción, Postcosecha, Procesamiento y Comercializción afijo,
cebolla y tomate, 413pp. 1992
FAO. Desarrollo Agropecuario. De la dependencia al protagonismo del
agricultor/ FAO. 3' ed. 140p. 1993
Fernández, A. Azospirfllum Iipoferum y Azospirillum brasilense. Sus
relaciones con maíz y caña de azúcar.
Tesis de grado (MC en Ciencias
Biológicas). Facultad de Biología. 1995
Fernández, F. Uso, Maneyia y comercialización de los hongos
micorrizógenos VA. Curso de postgrado. INCA. 1996
Fernández, Ana I y Pelaez, I. Evaluación de plantas de Zea mays
inoculadas con Azospirillum. I. Activiadad de la nitratoreductasa y
contenido de proteínas solubles en las hojas. Ciencias de la Agricultura.
39. 1990

Flsher, K I Eect of nitrogen supply in nutrlent culture on rult ylel d in
the frst truss of the tomatoes . Tour. Hort . Se¡. 44. 1981
Gabor, J.B. Myconhizae and crop productivlty. ASA Special Publication.
No.54. 1992
Guerrero , A.G. Variantes ecológicas para favorecer la reducción del
período de aviveramiento en café (Coffea arabica L. var .
Catunu). Tesis de
diploma. 1996
Gomez, R et al . Tecnología para peletizar semillas con biofertilizantes,
una nueva opción para sustituir o reducir los insumos químicos para lograr
una agricultura más ecológica y sostenible .
II Encuentro Nacional de
Agricultura Orgánica. Libro resúmenes. 1995
Gomez, Olimpia y Casanova, A. Encuentro de productores hortícolas.
1996
Gonzales, C.C y Ferrera, R. Los hongos endomico~genosen la
producción de cultivos de interés ornamental. Chapingo. Serie Horticultura
No.1. 1994
- Guerreo, R.R. Fertilización, calidad y contaminación de suelos y agua.
Revista Agronomía. Vol. 6(1). p24-27. 1993
Habib, R. Algunas reflexiones sobre problemas de fertilización en zonas
de regadío .
Problemática actual en el uso de fertilizantes. XVII Jornada de
estudio (Zaragoza). Vol. extra . No.6. 1986

' Hadus, R and Okon, Y. effect of Azosplrillum brasilense inoculacion on
root morphology and respiration in tomato seed hngs. biology Ferfility soils.
5, pp 241-247. 1987
Hamdi, Y.A. La fijación del nitrógeno en la explotación de los suelos.
Boletín de suelos de la FAO. 49, 188p. 1985
Hernández,
Ana N. Selección de rizobacterias para la bioferfilización en
el cultivo del maíz.
Tesis en opción a la Maestría en Ciencias Biológicas.
1996
Hernández, Marta, Madeline Pereira y Tong, M utilización de los
microorganismos biofertilizantes en los cultivos tropicales. Pastos y
Forra es, 17:183. 1994
- Hernández Yolanda, Mariela Sarmiento y Oiga García . Influencia dei
método de inoculación con Azospirtllum en el comportamiento de
gramineas de pastos . Rev. Cubana de ciencias Agrícolas . 30:225, 1996.
Hetrick, B.A.D. Mycorrhlzas\znd root architecture F,xperientia. 47:355-
362. 1991
Hubell ,
D.H. Fación biológica del nitrógeno. Departamento de Ciencias
del suelo . Universidad de Florida. Gernasville. Florida. 1985
Huerres , Consuelo y Caraballo, L.L. Horticultura. 1991
Jacho, T.J. Comportamiento de Azospirillum lipofer un como
biofertilizante para el cultivo del tomate (Iycopersicon esculentum,
Mill).
Tesis en opción al grrxdo de ingeniero agrónomo . ISCAH. 1995

- Kloepper, J.M, Beauchamp, C.J. A review of issues related to measuring
colorrization of plant roots by bacteria .
Canadian Joumal of Microbiology.
38:1229-1232. 1992
Lewis, L.A. Comportamiento del cultivo del alb (Allium sativum L) ante
los efectos de dosis, momentos y formas de aplicación de Azotobacter
chroococcum como estimulador del crecimiento y desarrollo .
Tesis de
Maestría. ISCAH. 1997
Linderman , R.G. Vesicular-Arbuscular Mycorrflizae and soil Mlcmbial
bzteractions . ASA Special Publiccúion. NO. 54. 1992
Lunch, JM. The rhizosphere .
En: Methods in microbiology and ecology.
ed.Bums, R.G. Oxford.• Blackwell Sci in press. 1981
- Maestrey, Al bina,B. Fertilización del tomate cultivado en primavera.
Tesis de Candidatura. La Habana, 1986
Martinez, V.R; Dibut,B; Gonzales,R; Martin,B. Resultados obtenidos en
condiciones de producción mediante la aplicación de un método
bioteceólógico que permite incrementar los rendimientos de tomate sobre un
suelo Ferralitico Roo.INIFAT. MINAG . La Habana . Informe J1nal. 1992
Martínez, V.R. El uso de biofertilizantes . Curso de Agricultura Orgánica.
ICA. La Habana. 1994
Medina,
BN. La biofertilización como alternativa nutricional mineral del
tomate (Lycopersicon esculentum, Mill). VII Reunión Latinoamericana de
Rizobiologia . Programa y Resumenes . La Habana. 1994

Menezes dos Santos, R .J. Producción de tomate en América Latina y el
Caribe . Centro Nacional de Pesquisas en hortalizas . Brasil. 1992
Metting, F.B. Soil Microbial Ecology . Application in Agricultura) and
environmental Management . MarceI Dekker. Inc. New York, 450pp. 1993
MINAGRL. Instructivo Técnico del cultivo del tomate. Cuba. 1984
MINAGRI Resumen del Dictamende
las comisiones de trababa que
revisará la tecnología de los cultivos de viandas y hortalizas
de La
Habana el día 13 de julio de 1991 . La Habana.. Cuba . 41pp. 1991
Montañez, L. Fertilizantes .
Normas y recomendaciones para cultivos
agrícolas y hortícolas . ed. Acribea. 1986
- Morton, JB and Benny, G.L. Revised classilcation of arbuscular
myconiiizal Jungi (Lygomycetes). a new order,
Glomales, two new
suborders , Glominae and Gigasporineae, and two new familiesa,
Acaulosporaceae and Gigasporaceae . Mycotaxon, 37.•471 -491. 1990
Mosse, B. Advance in the study of V.A. mycont lza. Ann.Rev.
Phytopathol. 11:171-196. 19 73
- Navale, AM y Konde, B.K. Response of oilseed crops to azotroph
inoculation . Indian IçJaumal of Microbiology . 30(1):99- 102. 1990
Nieto , K y Frankerberger . Mlcrobial production of cytokinins Soti
Biochemestry. 6:191 -248. 1990
Nonnecke, I. L. Vegetable production . Van Nostrand Reinhold. New York.
1989

Nuez F. El cultivo del tomate . Ed. Mundl-Prensa Madrid.Barcelona-
Mexico. 1995
Orphanos, Y and Papadopoulus , L ?he nitrogen, phosphorus and
potasium requeriment
of tomatoes gmwing pots. doumal Horticultural
sciences. 55(4):415-423. 1980
Ortega, E. Curso de Nutrición mineral de las plantas .
Curso de posgrado.
INCA. 1998
Pacovsky, R.S y Fuller. in luence of inoculation with Azospir llum
brasilense and Glomus fasciculatum on sorghum nutrttion. Plant and Soil.
No. 110, 283-28 7. 1988
Papadopoulos ,
A.P. Growing greenhouse tomatoes in soil and in soilles
media. 79pp. 1991
Peña, M Explotación de pastos y forrajes/ Manuel Peña . La Habana.
1991
_ Pequeño Perez , J Agroquimica. Ed. Universitaria . La Habana. 1966
Pelaez, Ileana y Fernández, Al Efecto de la inoculación con
Azospiririlum sp sobre aspectos fisiológicos de plantas con metabolismo
C4. Revista Biología . Vol.6(2). 1992
Phyllips, D.M y Hayman, D.S. Improved procederes for clearing roots and
staining parasities and vesicular-arbuscular mycorrhizai fungí for rapid
assessment for infection Trans. British Mycol. Soc (Londres) 55:101-188.
1970

Pino, Maria de los A./et al/. El maíz como cultivo protector del tomate
plantado en condiciones de estrés ambiental Cultivos Tropicales . 15(2).57-
59. 1994
Pozzon,
G; Giorgetti, H; Martfnez,R; Aschar, G. Biofentilización del trigo por
inoculación con cepas nativas de Azospirillum brasilense. investigación
Agraria. producción y protección de vegetales . Vol 8(1). 1993
Pulido , L.D y Peralta, H.B. Uso de biofertilizants en la producción de
posturas de tomate . Vil binada Cientffica . BVIFAT. Resumenes. 1996
Ragimova, A. influencia de diferentes dosis de fertilizantes potásicos en
la cosecha y calidad de los tomates . Referativnii Zhumal. Serie 13(50:26.
1981
- Ruiz, F.G. Agricultura bio-,intensiva sostenible en el minifundio mexicano.
Una alternativa para la producción de alimentos y el manejo ecológico del
suelo./ EcLJ.F Ruiz. Universidad Autónoma de Chapingo. 78p. 1991
- Sánchez de Prager, M. La simbiosis micorrica vesículo- arbuscular (MVA)
en soya (Glycine max L,
Merili). Universidad Nacional de Colombia.
Boletín Técnico . 2:53. 1991
Sánchez Marina. La simbiosis micorriza vesfculo arbuscular (AMA) en
soya (Glycine Max (L) Merril). Acta Agronómica. 2(1):53-67. 1991
Serrano , C.Z. Técnicas de in vemedero . Sevilla . España, 1990
Silvia, DM and Schenck, N.C. Application of superphosphate to
mycorr i al plants sporulation of phosphorous tolerant vesicular
mycorrhlzal fungí . New Pphytol., 95: 655-661. 1983

Siqueira, JO. Reuniao Brasileira sobre micorr zas. Depto de Ciencia de
Solo . Escola Superior de Agriculture de Lamas. 1986
Subba-Rao, N S; ?Ylak, KVBR. Effect of combined inoculation of
Azospirillum brasilense and vesicular-arbuscular mycorrhiza on pearl
millet (Pennisetum americanum). Piant and Soil. 84 :2, 283-286. 1985
Subba-Rao, N .S,
Tilak,KVBR. Synergistic effect of vesicular-arbuscular
mycorrhizas and Azospirillum brasilense on the growth of balley in pots.
Soil Biology and Biochemestry . 17:1; 119- 121. 1985
Subbiah,
R. Nitrogen and Azospirillum interaction on fruit yield and
nitrogen use efficiency in tomato. South Indian Horticulture . 38:6, 342-344.
1990
Schroth, M.N; Hancok,JG. Selected topics in biological control .
Annual
Rev.Micmbiology . 34; 453-476.1981
Stigter,
C.J. Mlcroclimate management and manipulation in traditional
farming. Agricultura) meteorology . Repon (25). 1988
Tilak, K. V.B.R, and N .S. Subba Rao. Association of Azospirillum
brasilense with pearl millet (etum americanum (I) Leek). Biol. Fert.
Soils . 4:97-102. 1987
Treto Eolia.
La nutrición de las plantas por la vía de la Agricultura
Org•nica . Clase pr•ctica. ISCAH. 1993
Urquiaga, S y Johanna Dobereiner. fijación biológica del nitrógeno
asociada con gramineas , cereales y caña de azúcar. 1989
Vasudevan et al . Biofertilizers forplantation crops. The du. 1993

Vergara, M.A. Biofertiiizantes (Azospirillum spp); alternativa nutricional
en maíz (lea mays L). Chapingo Vol.XV(69-70). 1990
Villareal, R. Tomates. Instituto Latinoamericano de Cooperación para la
Agricultura . Costa Rica. 1982
Waelkens, Franciska.
Azospirillum genetics : a serch for genes invol ved
in plant-bacterium interactions . Disertaciones de agricultura . No. 179. 1989
Wani ,
S.P. Inoculation with associative nitro gen-fixing bacteria: role in
cereal grain production improvement.Indian Journal of Microbiology.
30:363. 1990
Wal ker, T. L; Safir, G.R; Stephenson, SN. Evidence for succession of
mycorrhizae fungí inMichigan asparagus fiel ds. Acta horticultural. 271:273-
279. 1990
Yahalom, E; Kapuinik, Y; Okon, Y. Response of Setaria italica to
inoculation with Awspirillum brasilense as compartid to Awtobacter
chmococcum. Plant and soil. 82:1; pp77-85. 1984