Infociencia 2013

Preparación de los discos de sensibilidad: De cada dilución de extracto se tomaron 0.1 uL,
con los que se impregnó un disco de papel Whatman N. 54 estéril de 6 mm de diámetro.
Cada disco se colocó en una caja de Petri conteniendo agar Mueller hinton inoculado con
S. mutans aislado, identificado e incubado por 24 horas a 37 °C. En el método de dilución
se realizó por disco difusión basado en el trabajo de Kirby Bauer y colaboradores.
Con un asa bacteriológica se tocaron cuatro o cinco colonias bien aisladas del mismo tipo
morfológico y se inoculó en 4 a 5 ml de caldo nutritivo y se dejaron incubar a 35°C hasta
que apareció una turbidez ligeramente visible. Posteriormente se introdujo un hisopo
estéril en el inóculo bacteriano preparado, de manera de embeberlo completamente,
escurriendo el exceso sobre las paredes del tubo, inmediatamente, se sembró la placa de
agar Mueller Hinton de manera de obtener un crecimiento confluente, para lo cual se
estrió con el hisopo en forma paralela y compacta abarcando toda la superficie de la placa.
Luego se repitió el procedimiento rotando la placa 60° en dos oportunidades más para
asegurar la siembra de borde a borde y se dejó secar en área estéril de 3 a 5 minutos
antes de colocar los discos ya impregnados con 10 uL de extracto vegetal. Trascurridas 24
horas, se midió el halo de crecimiento para ambas substancias.
Tiempo mínimo de inhibición: En un Erlenmeyer de 50 ml de capacidad, se adicionaron 10
ml de caldo nutritivo estéril y 10 ml de cada dilución de extracto de gel de Aloe vera de
cada concentración de Syzygium aromaticum y cada uno se inoculó con 0.1 ml de
suspensión de S. mutans aislado.
Para construir la curva de crecimiento, se midió la absorbencia inicial y a cada hora de
cada dilución durante doce horas continuas, con un blanco como testigo y con el cual se
calibró el cero del programa de lectura y luego se registraron los datos en una hoja de
Excel. La concentración bactericida mínima se dio transcurridas las 12 horas, de cada
Erlenmeyer se tomó un inóculo y se sembró en agar selectivo y se dejó incubar a 37°C x 24
horas en condiciones de anaerobiosis para luego proceder a registrar las lecturas.
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