You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
92<br />
2. Klargør den fortyndede vaskeopløsning.<br />
3. Tag transportbakken og teststrimlerne (R1) ud af beskyttelsesposen.<br />
4. Anvend direkte uden forudgående vask af pladen og i rækkefølge:<br />
4.1 50 µl fortynder i hver brønd<br />
4.2 150 µl negativt kontrolserum (C0) i brønd A1, B1 - C1<br />
4.3 150 µl positivt kontrolserum (C1) i brønd D1-E1.<br />
4.4 150 µl prøvemateriale i brønd G1 osv. . .<br />
Det er nødvendigt med tre cellekulturmedium-kontrolprøver i stedet for kittets negative kontrol, når der testes<br />
cellekulturprøver. Sørg for, at prøvefortynderen er blandet godt med prøven (eller kontrollen).<br />
N.B : Fordelingen af prøvematerialet kan kontrolleres visuelt på dette stadium af processen: Efter tilsætning af<br />
prøven skifter fortynderen farve fra grøn til blå for at bekræfte, at en prøve (eller kontrol) er tilsat brønden. Når<br />
det er blandet ordentligt, har indholdet i hver brønd en ensartet farve. Nogle cellekulturprøver skifter ikke farve,<br />
afhængig af hvilket cellekulturmedium der er anvendt. (Se afsnit 12 om automatisk kontrol -<br />
SPEKTROFOTOMETRISK KONTROL AF PRØVEPIPETTERING).<br />
5. Afdæk mikrotiterpladen med selvklæbende film, hvis dette er muligt. Pres filmen ned over hele pladen, så en tæt<br />
forsegling sikres.<br />
6. Mikrotiterpladen inkuberes i 60 ± 5 minutter ved 37 ± 1°C eller 40 ± 1°C i et varmeskab.<br />
7. Fjern den selvklæbende film. Sug indholdet af alle brønde op i en beholder til farligt biologisk affald (en beholder<br />
med natriumhypoklorit). Tilføj mindst 0,370 ml vaskeopløsning til hver brønd. Vent 20-60 sekunder . Sug igen.<br />
Gentag denne procedure fire gange (dvs. alt i alt mindst 5 vask). Restmængden skal være mindre end 10 µl (hvis<br />
det er nødvendigt, kan pladen tørres ved at lægge den med bagsiden opad på sugende papir).<br />
Hvis der bruges en automatisk vasker, skal den samme procedure følges(se afsnit 10: Analyseprocedure).<br />
8. Fordel hurtigt 100 µl af konjugat 1 opløsningen i alle brøndene.<br />
Konjugatet skal rystes forsigtigt før brug.<br />
NB : Fordelingen af konjugatopløsning 1, der er farvet gul, kan kontrolleres visuelt på dette stadium i processen.<br />
9. Afdæk mikrotiterpladen med selvklæbende film, hvis dette er muligt. Mikrotiterpladen inkuberes i 30 ± 5 minutter<br />
ved 37 ± 1°C eller 40 ± 1°C i et varmeskab.<br />
10. Fjern den selvklæbende film. Sug indholdet af alle brønde op i en beholder til farligt biologisk affald (en beholder<br />
med natriumhypoklorit). Tilføj mindst 0,370 ml vaskeopløsning i hver brønd. Vent 20-60 sekunder. Sug igen.<br />
Gentag denne procedure fire gange (dvs. alt i alt mindst 5 vask). Restmængden skal være mindre end 10 µl (hvis<br />
det er nødvendigt, kan pladen tørres ved at lægge den med bagsiden opad på sugende papir).<br />
11. Fordel hurtigt 100 µl af konjugat 2 opløsningen i alle brøndene.<br />
Konjugatet skal rystes forsigtigt før brug.<br />
NB : Fordelingen af konjugatopløsning 2, der er farvet grøn, kan kontrolleres visuelt på dette stadium i processen.<br />
12. Afdæk mikrotiterpladen med selvklæbende film, hvis dette er muligt. Mikrotiterpladen inkuberes i 30 ± 5 minutter<br />
ved 37 ± 1°C eller 40 ± 1°C i et varmeskab.<br />
13. Fjern den selvklæbende film, tøm alle brønde ved opsugning, og vask mindst fem gange som beskrevet ovenfor.<br />
Restmængden skal være mindre end 10 µl (hvis det er nødvendigt, kan teststrimlerne tørres ved at lægge dem<br />
omvendt på sugende papir).<br />
14. Fordel hurtigt 100 µl nyforberedt udviklingsopløsning (R8 + R9) i hver brønd. Lad reaktionen foregå i mørke i<br />
30 ± 5 minutter ved stuetemperatur (18 -30°C). Undgå at bruge selvklæbende film under dyrkningen.<br />
N.B.: Fordelingen af udviklingsopløsningen, der er farvet pink, kan kontrolleres visuelt på dette stadie i<br />
manipulationen.<br />
Der er en tydelig farveforskel på en tom brønd og en brønd med den pink-farvede substratopløsning (se afsnit 12<br />
om automatisk kontrol : SPEKTROFOTOMETRISK KONTROL AF PRØVE- OG REAGENSPIPETTERING).<br />
15. Tilføj 100 µl stopopløsning (R10) i samme rækkefølge og med samme distributionsfrekvens som for<br />
substratopløsningen. Homogeniser reagensblandingen.<br />
N.B.: Fordelingen af stopopløsningen, der er ufarvet, kan kontrolleres visuelt på dette stadie i manipulationen.<br />
Efter tilsætningen af stopopløsningen forsvinder den pink farve i substratet (for de negative prøver) eller bliver blå<br />
til gul (for de positive prøver).<br />
16. Tør undersiden af pladen forsigtigt af. Mindst fire minutter efter tilsætning af stopopløsningen og senest 30<br />
minutter efter at reaktionen er stoppet aflæses den optiske densitet ved 450/620-700 nm ved hjælp af en<br />
mikropladeaflæser.<br />
17. Kontroller, at alle resultater stemmer overens, hvad angår aflæsning, plade, prøvefordeling og identifikationsoversigt.
Change language