GENETIC SYSTEMS™ HIV-1 Ag EIA

1 - KLINISK VÆRDI
Det ætiologisk aktive organisme i Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS) er en retrovirus, som kaldes Human
Immunodeficiency Virus (HIV). HIV er isoleret fra patienter med AIDS og fra raske personer med stor risiko for at få
AIDS 1,2 . Man ved, at overførsel sker ved intim seksuel kontakt, ved brug af inficerede nåle, ved transfusioner af
inficerede blodprodukter og perinatalt fra inficerede mødre til foster eller barn. 1,8 .
Tegn på, at patienten har været udsat for HIV, ses normalt ved tilstedeværelsen af virusspecifikke antistoffer i
vedkommendes serum eller plasma efter eksponering for virusen. Før de sporbare antistoffer viser sig, er der en tidlig
periode i forløbet, hvor frie, virale antigener cirkulerer i blodet. Et af disse virale antigener er det virale kerneprotein
p24. HIV-antigenanalyser kan anvendes til at konstatere tilstedeværelsen af virale antigener, og dermed en HIV-infektion,
før serokonversion. Perioden med tilstedeværelse af antigener, som går forud for forekomsten af HIV-antistoffer, varierer
og kan vare i dage eller uger hos smittede personer. Når serokonverteringen finder sted, danner virusspecifikke
antistoffer komplekser med de cirkulerende antigener, således at niveauet af frie antigener i blodet falder eller forsvinder
fuldstændigt. 9,11 . Senere i sygdomsforløbet kan der igen forekomme frie antigener. 12
Genetic Systems TM HIV-1 Antigen EIA er beregnet til screening af doneret blod og plasma og som en hjælp i
diagnosticering og prognosticering af HIV-1-infektion.
2 - PRINCIP FOR GENETIC SYSTEM HIV-1 ANTIGEN EIA
Genetic Systems TM HIV-1 Antigen EIA er en enzymimmunteknik til påvisning af HIV-1 kerneantigenet (p24) i humane
serum- og plasmaprøver. "Genetic Systems HIV-1 Antigen Confirmatory" Test (kode 71121) er en supplerende
analyse til brug sammen med HIV-1 Antigen EIA for at bekræfte tilstedeværelsen af HIV p24 antigenet i gentagne
reaktive prøver.
Genetic Systems TM HIV-1 Antigen EIA er baseret på anvendelsen af en fast fase belægt med monoklonale antistoffer
fra mus mod HIV-1 Antigen, et primært konjugat med biotinyleret anti-p24 antistof fra får og et sekundært konjugat
med avidin bundet til peroxidase fra peberrod.
Udførelsen af testen omfatter følgende trin i reaktionsforløbet:
1. Prøvefortynder tilsættes hver brønd. De prøver, der skal testes, og kontrolsera tilføres deres respektive brønde. Hvis
der findes HIV-1 Ag i prøven, binder det sig til antistofferne i brønden. HIV-1 Ag bundet til brønden forbliver der
under efterfølgende vask.
Prøvefortynderens farve skifter fra grøn til blå for at bekræfte, at en prøve (eller kontrol) er tilsat brønden.
2. Konjugat 1 tilsættes herefter hver brønd, og disse inkuberes. Det biotinylerede fåre-anti-p24 antistof i konjugat 1
binder sig til HIV-1 Ag somer bundet til HIV-1 antistof i brønden. Antigen-antistofkomplekserne forbliver bundet
under det efterfølgende vask.
3. Konjugat 2 tilsættes herefter hver brønd og inkuberes. Avidinen i konjugat 2 bindes specifikt til antistof-HIV-1 Agkomplekserne,
som er bundet til brønden. Ubundet konjugat vaskes bort.
4. TMB-opløsning tilsættes herefter pladen og inkuberes. En blå eller grøn farve udvikles i forhold til den mængde
HIV-1 Ag, der findes i prøven.
Farveudviklingen standses ved tilsætning af syre, hvorved den blå-grønne farve skifter til gul. Den optiske
absorption af prøverne og kontrollerne bestemmes spektrofotometrisk ved en bølgelængde på 450/620-700 nm.
87