GENETIC SYSTEMS™ HIV-1 Ag EIA

OBS ! Provfördelning kan kontrolleras visuellt i detta hanteringssteg. Efter tillsats av prov ändrar spädningsvätskan
färg från grönt till blått för att visa att provet eller kontrollen är tillsatt i brunnen. När innehållet i varje brunn
blandas väl är färgen enhetlig. Cellodlingsprover uppvisar eventuellt inte någon färgförändring beroende på det
cellodlingsmedium som används. (Se punkt 12 angående automatisk verifiering - SPEKTROFOTOMETRISK
VERIFIERING AV PROV- OCH REAGENSPIPETTERING)
5. Täck om möjligt mikroplattan med självhäftande film. Tryck fast den ordentligt över plattan så att det blir tätt.
6. Inkubera plattan i 60 ± 5 minuter vid 37 ± 1°C eller 40 ± 1°C i en statisk inkubator med torr värme.
7. Ta bort den självhäftande filmen. Aspirera innehållet i alla brunnar till en behållare för smittförande avfall
(innehållande natriumhypoklorit). Fördela minst 0,370 ml tvättlösning till varje brunn. Vänta under en blötningstid
på 20 till 60 sekunder. Sug upp igen. Upprepa detta 4 gånger (dvs. totalt minst 5 tvättar). Den återstående
volymen måste vara mindre än 10 µL. (Om det behövs kan du torka mikroplattan genom att vända den upp och
ned på ett absorberande papper).
Om automatisk tvättare används ska samma förfarande följas.
8. Fördela snabbt 100 µL av konjugatarbetslösning 1 till alla brunnar.
Konjugatet måste skakas varsamt innan användning.
OBS ! Tillsats av konjugatarbetslösning 1 som är färgad gul kan kontrolleras visuellt vid detta steg av analysen.
9. Täck om möjligt mikroplattan med självhäftande folie. Inkubera plattan i 30 ± 5 minuter vid 37 ± 1°C eller
40 ±1°C i en statisk inkubator med torr värme.
10. Ta bort den självhäftande filmen. Aspirera innehållet i alla brunnar i en behållare för smittförande avfall
(innehållande natriumhypoklorit). Fördela minst 0,370 ml tvättlösning till varje brunn. Vänta under en blötningstid
på 20 till 60 sekunder. Sug upp igen. Upprepa detta 4 gånger (dvs. totalt minst 5 tvättar). Den återstående
volymen måste vara mindre än 10 µl. (Om det behövs kan du torka mikroplattan genom att vända den upp och
ned på ett absorberande papper.)
11. Fördela snabbt 100 µL av konjugatarbetslösning 2 till alla brunnar.
Konjugatet måste skakas varsamt innan användning.
Observera : Tillsats av konjugatarbetslösning 2 som är grönfärgad kan kontrolleras visuellt vid detta steg av analysen.
12. Täck om möjligt mikroplattan med självhäftande film. Inkubera plattan i 30 ± 5 minuter vid 37 ± 1°C eller
40 ± 1°C i en statisk inkubator med torr värme.
13. Ta bort den självhäftande filmen, töm alla brunnar genom att suga upp vätskan och tvätta minst 5 gånger enligt
ovanstående beskrivning. Den återstående volymen måste vara mindre än 10 µl. (Om det behövs kan du torka
remsorna genom att vända dem upp och ned på ett absorberande papper.)
14. Fördela snabbt i varje brunn 100 µl av framkallningslösningen (R8+R9) som beretts strax före användningen. Låt
reaktionen fortgå i mörker i 30 ± 5 minuter vid rumstemperatur (18–30°C). Använd ingen självhäftande folie
under denna inkubering.
Obs ! Fördelningen av framkallningslösningen, som är rosafärgad, kan kontrolleras visuellt i denna fas av
hanteringen. Det finns en klar färgskillnad mellan tomma brunnar och brunnar med den rosafärgade substratlösningen.
(Se avsnitt 12 om automatisk verifiering : SPEKTROFOTOMETRISK PROV- OCH REAGENSPIPETTERING)
15. Tillsätt 100 µl av stopplösningen (R10). Använd samma ordningsföljd och fördelningshastighet som för
substratlösningen. Homogenisera reaktionsblandningen.
OBS ! Fördelningen av stopplösningen, som är färglös, kan kontrolleras visuellt i denna fas av hanteringen. Efter
tillsats av stopplösningen försvinner substratets rosa färg (för negativa prover) eller ändrar färg från blått till gult
(för positiva prover).
16. Torka noggrant av mikroplattans botten. Vänta minst 4 minuter efter tillsatsen av stopplösningen innan avläsning
görs. Avläs den optiska densiteten vid 450/620-700 nm med hjälp av mikroplattans avläsare inom 30 minuter
efter att reaktionen har avbrutits.
17. Kontrollera alla resultat med avseende på överensstämmelse mellan avläsning och provtillsats- och identifieringsprotokoll
för plattan.
11 - BERÄKNING OCH UTVÄRDERING AV RESULTAT
1) Validering av resultat
En analysomgång är giltig om följande kriterier uppfylls :
• Absorbansvärdet för varje negativ kontroll (NC) (eller cellodlingskontroll, om tillämpligt) är större än 0,000 AU och
mindre än eller lika med 0,100 AU. Ett värde för den negativa kontrollen kan kasseras om det faller utanför
gränsvärdet. NC-medelvärdet kan beräknas från de två återstående absorbansvärdena. Om två eller fler negativa
kontroller ligger utanför gränsen, är plattan ogiltig och testet måste upprepas.
• Medelvärdet för de positiva kontrollerna (PCX) måste vara större än eller lika med 0,500 AU och de enskilda
absorbansvärdena måste ligga inom intervallet för reproducerbarheten på 0,65 till 1,35 gånger PCX. Inget värde
för den positiva kontrollen får uteslutas.
82