GENETIC SYSTEMS™ HIV-1 Ag EIA

3 - Cálculo do valor de cut-off
O valor de cut-off é calculado pela soma de um factor constante (0,070) com o valor de absorvência médio dos
controlos negativos (CNX).
Valor cut-off = 0,070 + CNX
Exemplo:
CNX = 0.033
Valor cut-off = 0,070 + 0,033 = 0,103
4 - Interpretação dos resultados
A presença ou a ausência dos antigénios HIV1 é determinada comparando, para cada amostra, a absorvência
registada com a do valor de cut-off calculado.
As amostras cujos valores de absorvência sejam inferiores a 0,000 devem ser testadas de novo. As amostras cujos
valores de absorvência sejam superiores aos limites de linearidade do leitor são considerados reactivos.
As amostras cujos valores de absorvência sejam inferiores ao valor de cut-off são consideradas não reactivas ao
teste EIA antigénio HIV-1 Genetic Systems e podem ser consideradas como negativas para o antigénio HIV-1. Neste
caso, não é necessário efectuar outro teste.
As amostras cujos valores de absorvência sejam superiores ou iguais ao valor de cut-off são consideradas como
inicialmente reactivas ao teste EIA Genetic Systems antigénio HIV-1. As amostras inicialmente reactivas devem ser
novamente testadas, duas vezes, a fim de validar os resultados do teste inicial. Se, depois disso, estes novos testes
de absorvência obtidos forem inferiores ao valor de cut-off, o resultado inicial é não reprodutível e a amostra de
origem é declarada negativa para o antigénio HIV-1, segundo o teste "Genetic Systems HIV-1 Antigen". A origem
de reacções não reprodutíveis está, muitas vezes, relacionada com as causas seguintes:
• lavagem insuficiente das microplacas,
• contaminação cruzada das amostras não reactivas, por uma amostra fortemente titulada em antigénio HIV-1.
• contaminação pontual da solução de revelação, por agentes químicos oxidantes (lixívia, iões metálicos, etc.).
• contaminação pontual da solução de paragem.
Se, após a repetição do ensaio, o valor de absorvência medido numa das duas repetições for superior ou igual ao
valor de cut-off, o resultado inicial é reprodutível e a amostra é declarada reactiva segundo o teste Genetic
Systems HIV-1 Antigen, em conformidade com os limites a seguir descritos. As amostras cuja reactividade tenha
sido repetida com o teste Genetic Systems HIV-1 Antigen - EIA devem ser confirmadas com o teste Genetic
Systems HIV-1 Antigen Confirmatory Assay (ref.: 71121). A amostra só pode ser considerada positiva para o
antigénio HIV-1 se este antigénio for neutralizado durante o processo de confirmação.
12 - VERIFICAÇÃO ESPECTROFOTOMÉTRICA DA DISTRIBUIÇÃO DAS AMOSTRAS
VERIFICAÇÃO ESPECTROFOTOMÉTRICA DO DEPÓSITO DAS AMOSTRAS E DOS REAGENTES
Após a distribuição sucessiva do diluente das amostras (R3), seguido das amostras, é possível verificar a presença
de amostras a testar nos poços, através de leitura espectrofotométrica a 620 nm: a densidade óptica de um poço
contendo uma amostra deverá ser superior a 0,250 (uma DO inferior indica uma deficiente distribuição desta).
Nota: as amostras de cultura celular podem não mudar de cor, em função do meio de cultura utilizado. Neste caso,
não aplicar esta verificação automática.
VERIFICAÇÃO DO DEPOSITO DA SOLUÇÃO DE REVELAÇÃO
É possível verificar a presença da solução de revelação rosa por leitura automática a 490nm : um poço contendo
a solução de revelação deve apresentar uma densidade óptica superior a 0.100 (uma DO mais fraca indica uma
distribuição incorrecta da solução de revelação).
Observa-se uma diferença de coloração significativa entre um poço vazio e um poço contendo a solução de
revelação rosa.
13 - DESEMPENHOS
Sensibilidade de diagnóstico
• 138 amostras de doentes infectados pelo HIV, em diferentes fases da infecção (SIDA, ARC, outras) foram testados
e comprovados como positivos com o teste Genetic Systems HIV-1 Antigen EIA.
• Foram estudados 20 painéis de seroconversão bem documentados. Os resultados obtidos são comparáveis aos
resultados obtidos com outros testes de quantificação do antigénio HIV.
• 55 sobrenadantes de culturas celulares de HIV1 (dos quais 53 do grupo M e 2 do grupo O), bem como o painel
de distribuição "Ag VIH SFTS 96" foram testados e comprovados como positivos com o teste Genetic Systems
HIV-1 Antigen EIA, à excepção de duas diluições de um sobrenadante de cultura celular do grupo O.
- Os 53 sobrenadantes de culturas celulares de HIV1 do grupo M são constituídos pelos genotipos seguintes:
10 de genotipo A, 10 de B, 9 de C, 5 de D, 11 de E, 2 de F, 2 de G, 1 de H, 2 de J e 1 de N.
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