GENETIC SYSTEMS™ HIV-1 Ag EIA

1 - INTERESSE CLÍNICO
O agente etiológico do síndrome de imunodeficiência adquirida (SIDA) é um retrovírus ao qual foi dado o nome de
Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV). O HIV foi isolado em doentes com SIDA e em indivíduos saudáveis,
constituintes de uma população de risco para a SIDA 1,2 . Sabe-se que a transmissão se processa por via sexual, pela
utilização de agulhas contaminadas, por transfusão de produtos sanguíneos contaminados e pela mãe infectada ao
feto ou ao recém-nascido, por via placentária 1,8 .
Normalmente, é possível detectar, no sangue ou no plasma de um indivíduo que tenha estado exposto ao vírus,
anticorpos específicos do vírus, confirmando deste modo a exposição. Na fase que antecede o aparecimento de
anticorpos detectáveis, antigénios virais livres estão já em circulação no sangue. Um destes antigénios virais é o
antigénio p24 que corresponde à principal proteína da nucleocápside.
Os testes de detecção do antigénio do HIV podem ser utilizados para detectar a presença de antigénios virais e, deste
modo, diagnosticar uma infecção pelo HIV, antes de se verificar a seroconversão.
O período de antigenemia, que precede o aparecimento de anticorpos anti-HIV, é variável e pode durar desde alguns
dias até algumas semanas, nos indivíduos infectados. Na seroconversão, os anticorpos específicos do vírus formam
complexos imunes com os antigénios circulantes, o que tem como consequência uma forte quebra da taxa de
antigénios livres no sangue, acabando por conduzir ao desaparecimento completo destes antigénios 9,11
A antigenemia pode reaparecer mais tarde, com a progressão da doença 12 .
O teste Genetic Systems HIV-1 Antigen - EIA destina-se a ser utilizado como auxiliar de diagnóstico e prognóstico da
infecção pelo HIV-1.
2 - PRINCÍPIO DO DISPOSITIVO GENETIC SYSTEM HIV-1 ANTIGEN EIA
O teste Genetic Systems HIV-1 Antigen - EIA é um teste imunoenzimático para detecção in vitro do antigénio p24
da cápside do vírus da imunodeficiência humana de tipo 1 (HIV-1) livre, em amostras de soro ou de plasma
humanos e do sobrenadante de cultura celular. O teste «Genetic Systems HIV-1 Antigen Confirmatory Assay» (ref.
71121) é um teste utilizado em complemento do teste Genetic Systems HIV-1 Antigen-EIA para confirmação da
presença do antigénio p24 do HIV em amostras cuja reactividade tenha sido repetida.
O teste Genetic Systems HIV-1 Antigen – EIA assenta na utilização de uma fase sólida, preparada com anticorpos
monoclonais anti-HIV-1 de ratinho, de um primeiro conjugado preparado com anticorpos biotilinados anti-p24 de
carneiro e um segundo conjugado, preparado com avidina ligada à peroxidase de Raifort .
A preparação do teste compreende as seguintes fases reaccionais:
1. As amostras a estudar, bem como os soros de controlo, são distribuídos pelos respectivos poços, aos quais se
adicionou previamente diluente de amostras. Se os antigénios HIV-1 estiverem presentes na amostra testada, estes
ligam-se então aos anticorpos que revestem os poços, onde permanecerão fixados durante a fase de lavagem
que se segue.
O depósito das amostras é confirmado por uma alteração de cor do diluente da amostra, de verde para azul.
2. O conjugado 1 é, em seguida, adicionado em cada poço, e depois incubado. Isto permite que os anticorpos
biotinilados anti-p24 de carneiro, presentes no conjugado 1, se liguem aos anticorpos/antigénios HIV-1
capturados nos poços. Estes complexos antigénios/anticorpos permanecem fixados aos poços, durante a etapa
de lavagem que se segue.
3. O conjugado 2 é então distribuído e, depois, incubado. A avidina do conjugado 2 liga-se especificamente aos
complexos anticorpos/antigénios HIV-1 ligados aos poços. O excedente não ligado do conjugado é eliminado
por lavagem.
4. A revelação da reacção processa-se por adição, seguida de incubação, da solução de trabalho TMB. Uma
coloração azul ou azul esverdeada desenvolve-se proporcionalmente à quantidade de antigénio HIV-1 presente
na amostra. A reacção colorimétrica é interrompida por adição de ácido, que modifica a coloração de azul
esverdeado para amarelo. A densidade óptica das amostras e dos controlos é determinada por
espectrofotometria a um comprimento de onda de 450/620-700 nm.
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