ÍNDICE 1 - INTERESSE CLÍNICO 2 - PRINCÍPIO DO DISPOSITIVO <strong>GENETIC</strong> SYSTEM <strong>HIV</strong>-1 ANTIGEN <strong>EIA</strong> 3 - COMPOSIÇÃO DO DISPOSITIVO <strong>GENETIC</strong> SYSTEM <strong>HIV</strong>-1 ANTIGEN <strong>EIA</strong> 4 - MATERIAL NECESSÁRIO MAS NÃO FORNECIDO 5 - INSTRUÇÕES DE HIGIENE E SEGURANÇA 6 - PRECAUÇÕES 7 - AMOSTRAS 8 - RECONSTITUIÇÃO DOS REAGENTES 9 - VALIDADE – CONSERVAÇÃO 10 - PROCEDIMENTO 11 - CÁLCULOS E INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS 12 - VERIFICAÇÃO ESPECTROFOTOMÉTRICA DO DEPÓSITO DAS AMOSTRAS E DOS REAGENTES 13 - DESEMPENHOS 14 - LIMITES DO TESTE 15 - REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 64
1 - INTERESSE CLÍNICO O agente etiológico do síndrome de imunodeficiência adquirida (SIDA) é um retrovírus ao qual foi dado o nome de Vírus da Imunodeficiência Humana (<strong>HIV</strong>). O <strong>HIV</strong> foi isolado em doentes com SIDA e em indivíduos saudáveis, constituintes de uma população de risco para a SIDA 1,2 . Sabe-se que a transmissão se processa por via sexual, pela utilização de agulhas contaminadas, por transfusão de produtos sanguíneos contaminados e pela mãe infectada ao feto ou ao recém-nascido, por via placentária 1,8 . Normalmente, é possível detectar, no sangue ou no plasma de um indivíduo que tenha estado exposto ao vírus, anticorpos específicos do vírus, confirmando deste modo a exposição. Na fase que antecede o aparecimento de anticorpos detectáveis, antigénios virais livres estão já em circulação no sangue. Um destes antigénios virais é o antigénio p24 que corresponde à principal proteína da nucleocápside. Os testes de detecção do antigénio do <strong>HIV</strong> podem ser utilizados para detectar a presença de antigénios virais e, deste modo, diagnosticar uma infecção pelo <strong>HIV</strong>, antes de se verificar a seroconversão. O período de antigenemia, que precede o aparecimento de anticorpos anti-<strong>HIV</strong>, é variável e pode durar desde alguns dias até algumas semanas, nos indivíduos infectados. Na seroconversão, os anticorpos específicos do vírus formam complexos imunes com os antigénios circulantes, o que tem como consequência uma forte quebra da taxa de antigénios livres no sangue, acabando por conduzir ao desaparecimento completo destes antigénios 9,11 A antigenemia pode reaparecer mais tarde, com a progressão da doença 12 . O teste Genetic Systems <strong>HIV</strong>-1 Antigen - <strong>EIA</strong> destina-se a ser utilizado como auxiliar de diagnóstico e prognóstico da infecção pelo <strong>HIV</strong>-1. 2 - PRINCÍPIO DO DISPOSITIVO <strong>GENETIC</strong> SYSTEM <strong>HIV</strong>-1 ANTIGEN <strong>EIA</strong> O teste Genetic Systems <strong>HIV</strong>-1 Antigen - <strong>EIA</strong> é um teste imunoenzimático para detecção in vitro do antigénio p24 da cápside do vírus da imunodeficiência humana de tipo 1 (<strong>HIV</strong>-1) livre, em amostras de soro ou de plasma humanos e do sobrenadante de cultura celular. O teste «Genetic Systems <strong>HIV</strong>-1 Antigen Confirmatory Assay» (ref. 71121) é um teste utilizado em complemento do teste Genetic Systems <strong>HIV</strong>-1 Antigen-<strong>EIA</strong> para confirmação da presença do antigénio p24 do <strong>HIV</strong> em amostras cuja reactividade tenha sido repetida. O teste Genetic Systems <strong>HIV</strong>-1 Antigen – <strong>EIA</strong> assenta na utilização de uma fase sólida, preparada com anticorpos monoclonais anti-<strong>HIV</strong>-1 de ratinho, de um primeiro conjugado preparado com anticorpos biotilinados anti-p24 de carneiro e um segundo conjugado, preparado com avidina ligada à peroxidase de Raifort . A preparação do teste compreende as seguintes fases reaccionais: 1. As amostras a estudar, bem como os soros de controlo, são distribuídos pelos respectivos poços, aos quais se adicionou previamente diluente de amostras. Se os antigénios <strong>HIV</strong>-1 estiverem presentes na amostra testada, estes ligam-se então aos anticorpos que revestem os poços, onde permanecerão fixados durante a fase de lavagem que se segue. O depósito das amostras é confirmado por uma alteração de cor do diluente da amostra, de verde para azul. 2. O conjugado 1 é, em seguida, adicionado em cada poço, e depois incubado. Isto permite que os anticorpos biotinilados anti-p24 de carneiro, presentes no conjugado 1, se liguem aos anticorpos/antigénios <strong>HIV</strong>-1 capturados nos poços. Estes complexos antigénios/anticorpos permanecem fixados aos poços, durante a etapa de lavagem que se segue. 3. O conjugado 2 é então distribuído e, depois, incubado. A avidina do conjugado 2 liga-se especificamente aos complexos anticorpos/antigénios <strong>HIV</strong>-1 ligados aos poços. O excedente não ligado do conjugado é eliminado por lavagem. 4. A revelação da reacção processa-se por adição, seguida de incubação, da solução de trabalho TMB. Uma coloração azul ou azul esverdeada desenvolve-se proporcionalmente à quantidade de antigénio <strong>HIV</strong>-1 presente na amostra. A reacção colorimétrica é interrompida por adição de ácido, que modifica a coloração de azul esverdeado para amarelo. A densidade óptica das amostras e dos controlos é determinada por espectrofotometria a um comprimento de onda de 450/620-700 nm. 65
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