GENETIC SYSTEMS™ HIV-1 Ag EIA

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6 - PRECAUZIONI La qualità dei risultati dipende dal rispetto delle buone pratiche di laboratorio di seguito riportate : • Non utilizzare i reagenti dopo la data di scadenza. • Non modificare la procedura operativa. • Ricostituire con cura i reagenti evitando qualunque contaminazione. • Non mescolare reagenti di lotti diversi nel corso di uno stesso dosaggio. Nota : È possibile utilizzare altri lotti di soluzione di lavaggio (R2, indicata 10 x in blu sull’etichetta), di tampone substrato (R8, indicato con TMB buf. in blu), di cromogeno (R9, identificato con TMB 11x. in viola) e di soluzione di arresto (R10, indicata con 1N in rosso) diversi da quelli inclusi nel kit con riserva di utilizzare un solo e unico lotto nel corso dello stesso dosaggio. Detti reattivi possono essere utilizzati con altri prodotti della nostra ditta. Contattare il nostro servizio di assistenza tecnica per informazioni dettagliate. • Prima dell'utilizzo è necessario attendere 30 minuti affinché i reagenti si riportino alla temperatura del laboratorio (18-30°C). • Non eseguire il test in presenza di vapori reattivi (acidi, alcalini, aldeidi) o di polveri che potrebbero alterare l'attività enzimatica dei coniugati. • Utilizzare recipienti di vetro perfettamente lavati e risciacquati con acqua distillata o preferire materiale mono-uso. • Non lasciare che la micropiastra si asciughi tra la fine del lavaggio e la distribuzione dei reagenti. • Verificare l'esattezza e la precisione delle pipette e il buon funzionamento degli strumenti utilizzati. • Lavaggio: è indispensabile attenersi scrupolosamente alle procedure di lavaggio al fine di ottenere dal test prestazioni ottimali. • Non utilizzare mai lo stesso recipiente per distribuire il coniugato e la soluzione di rivelazione. • La reazione enzimatica è molto sensibile a tutti i metalli o ioni metallici. Di conseguenza, nessun elemento metallico deve venire a contatto con le diverse soluzioni contenenti i coniugati o il substrato. • La soluzione di rivelazione (tampone substrato + cromogeno) deve essere di colore rosa. La presenza di una colorazione diversa nei minuti successivi alla ricostituzione indica che il reagente è inutilizzabile e deve essere sostituito. Per questa preparazione utilizzare preferibilmente recipienti e materiale in plastica mono-uso distribuiti in commercio o recipienti in vetro precedentemente lavati con acido cloridrico 1N, risciacquati con acqua distillata e asciugati. Conservare la soluzione al riparo dalla luce. 7 - CAMPIONI Prelevare un campione di sangue secondo le pratiche d'uso. È possibile utilizzare i campioni seguenti: siero, plasma o campioni di coltura cellulare. Sono stati valutati e considerati utilizzabili anche gli anticoagulanti EDTA, eparina, citrato di sodio, CPDA-1 e ACD. I campioni prelevati mediante provette anticoagulanti devono riempire la provetta stessa fino al livello indicato onde evitare una cattiva diluizione. Estrarre il siero o il plasma dal coagulo o dai globuli rossi non appena possibile per evitare emolisi. Un'emolisi molto evidente può avere ripercussioni sulle prestazioni del test. I campioni che presentano grumi devono essere chiarificati prima del test mediante centrifugazione. Le particelle o aggregati di fibrina in sospensione possono produrre risultati falsi positivi. I campioni di coltura di cellule che necessitano di diluizione prima dell'uso possono essere diluiti con terreno di coltura cellulare equivalente al mezzo impiegato per la coltura. NON UTILIZZARE CAMPIONI INATTIVATI MEDIANTE CALORE. Se il monitoraggio è eseguito entro 7 giorni i campioni vanno conservati a +2-8°C oppure possono essere congelati a - 20°C. Lo scongelamento dei plasmi deve essere rapido mediante riscaldamento per qualche minuto a 40°C (per limitare la precipitazione della fibrina). A causa dell'instabilità dell'Ag HIV al calore, non sarà possibile adottare temperature superiori a 40°C. Si raccomanda di non utilizzare i campioni sottoposti a più di tre cicli di congelamento/scongelamento. Se i campioni devono essere trasportati, imballarli secondo le normative vigenti in materia di trasporto di agenti eziologici. Estrarre il siero o il plasma dal coagulo o dai globuli rossi non appena possibile per evitare emolisi. NON UTILIZZARE SIERI O PLASMI CONTAMINATI, IPER-LIPEMICI O IPER-EMOLIZZATI Nota : Non sono state messe in evidenza interferenze sia nei campioni contenenti 80 mg/l di bilirubina, 36 mg/l di immunoglobulina M o G sia nei campioni lipemici contenenti fino a 5 g/l di lipidi sia nei campioni emolizzati contenenti fino a 5 g/l di emoglobina. 56
8 - RICOSTITUZIONE DEI REAGENTI Tutti i reagenti devono essere a temperatura ambiente (18 – 30°C) prima dell'uso, ad eccezione dei coniugati concentrati 1 e 2 (R4 e R5). 1) Reagenti pronti per l'uso Reagente R1 : Micropiastra Ciascun telaio supporto contenente 12 strip è confezionato in una bustina "ZIP". Tagliare la bustina con le forbici o un taglierino ad una distanza di 0,5 - 1 cm sotto la ZIP. Aprire la bustina ed estrarre il telaio. Riporre nella bustina le strip inutilizzate. Richiudere la bustina con cura e riporla a +2-8°C. Reagent R3 : Diluente per campioni Reagent C0 : Siero di controllo negativo Reagent C1 : Siero di controllo positivo Reagent R10 : Soluzione di arresto. 2) Reagenti da ricostituire Soluzione di lavaggio concentrata 10 volte (R2) Diluire a 1/10 la soluzione R2 in acqua distillata. Omogeneizzare. NOTA: La soluzione di lavaggio Genetic Systems EIA (30X), che fa parte di altri kit Genetic Systems, può essere utilizzata anche per questo test. In tal caso, diluire un volume di soluzione di lavaggio concentrata in 29 volumi di acqua. Soluzione di lavoro coniugato 1 (R4 + R6) e Soluzione di lavoro coniugato 2 (R5 + R6) I coniugati 1 (R4) e 2 (R5) sono soluzioni concentrate (100 X). Preparare separatamente la soluzione di lavoro coniugato 1 e la soluzione di lavoro coniugato 2 diluendo ciascuno a 1:101 nel diluente di coniugato (R6). Eseguire la preparazione in recipienti di plastica puliti. Trascrivere sul recipiente il numero di lotto, la data e l'ora della preparazione e la data dei coniugati concentrati (1 o 2) come pure l'ora limite di utilizzo (24 ore dopo la preparazione). Mescolare delicatamente le soluzioni di lavoro prima dell'uso. Dopo essere state mescolate, la soluzione di lavoro coniugato 1 risulta essere gialla e la soluzione di lavoro coniugato 2 verde.. Preparazione della soluzione di lavoro coniugato 1 o 2 per strip Numero di strip 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12* 24** necessarie Quantità di coniugato 20 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 240 concentrato (µl) Quantità di diluente del 2 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 24 coniugato (ml) * una piastra intera **due piastre intere Soluzione di rivelazione enzimatica R8 + R9 Diluire il reagente R9 nel reagente R8 in proporzione pari a 1/11 (esempio: 1 ml di reagente R9 in 10 ml di reagente R8) sapendo che per l'analisi di 12 strip sono necessari e sufficienti 10 ml. Omogeneizzare. 9 - VALIDITÀ E CONSERVAZIONE Il kit deve essere conservato a +2-8°C. Una volta aperto, ciascun componente del kit Genetic SystemsTM HIV-1 Antigen EIA conservato a +2-8°C può essere utilizzato fino alla data di scadenza indicata sulla confezione, salvo diversa indicazione specifica: R1 : Una volta aperta la bustina, le strip conservate a +2-8°C nella loro bustina originaria ben chiusa rimangono stabili per 1 mese. R2 : Una volta diluita, la soluzione di lavaggio si conserva per un massimo di 14 giorni a +2-8°C in un contenitore di plastica. R8 - R9 : Dopo la ricostituzione, i reagenti conservati al riparo dalla luce rimangono stabili per 6 ore a temperatura ambiente (18-30°C). R4 - R5 : Dopo la ricostituzione i coniugati rimangono stabili per 24 ore a temperatura ambiente (18-30°C). 57
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