GENETIC SYSTEMS™ HIV-1 Ag EIA

1 - KLINISCHE BEDEUTUNG
Erreger des Immunschwächesyndroms AIDS (Acquired Immunodeficiency Syndrome) ist ein Retrovirus, das
sogenannte humane Immundefizienzvirus (HIV). HIV wurde von AIDS-Patienten sowie von gesunden Personen mit
hohem AIDS-Risiko isoliert ( 1,2 ). Das Virus wird durch Sexualkontakt, über kontaminierte Nadeln, durch Transfusionen
kontaminierter Blutprodukte und perinatal von der infizierten Mutter auf den Föten oder das Kind übertragen.( 1,8 )
Eine frühere Exposition gegenüber HIV wird in der Regel durch vorhandene virusspezifische Antikörper im Serum
oder Plasma nach Exposition gegenüber dem Virus nachgewiesen. Bevor nachweisbare Antikörper vorhanden sind,
zirkulieren in einem frühen Stadium Virusantigene im Blut. Eines dieser Virusantigene ist das Virus-Core-Protein p24.
Mit HIV-Antigen-Assays können vorhandene Virusantigene und somit eine HIV-Infektion vor der Serokonversion
nachgewiesen werden. Der Zeitraum der Antigenämie vor Auftreten von HIV-Antikörpern schwankt bei Infizierten
zwischen Tagen und Wochen. Bei der Serokonversion bilden virusspezifische Antikörper mit den zirkulierenden
Antigenen einen Komplex, so dass die Konzentrationen an freien Antigenen im Blut sinken oder nicht mehr
nachweisbar sind.( 9,11 ) Im Verlauf der Krankheit kann sich jedoch erneut eine Antigenämie entwickeln 12 .
Der Genetic Systems HIV-1 Antigen EIA ist für das Screening von Blut- und Plasmaspenden und als Hilfe für die
Diagnose und Prognose einer HIV-1-Infektion vorgesehen.
2 - PRINZIP DES GENETIC SYSTEM HIV-1 ANTIGEN EIA
Der Genetic Systems HIV-1 Antigen EIA basiert auf der Verwendung einer mit monoklonalemMaus-Anti--HIV-1-
Antigen beschichteten Festphase, eines ersten Konjugates aus biotinyliertem Anti-p24-Antikörper (Schaf) und einem
zweiten Konjugat aus Avidin, gebunden an Meerrettich-Peroxidase.
Die Testdurchführung umfasst folgende Reaktionsschritte:
1. Probenverdünnungsmittel wird in jede Vertiefung pipettiert. Die zu testenden Proben und die Kontrollseren werden
in die entsprechenden Vertiefungen pipettiert. Ist HIV-1 Ag in der Probe vorhanden, bindet dieses an die
Antikörper in der Vertiefung. Gebundenes HIV-1 Ag bleibt während des darauf folgenden Waschschrittes
gebunden.
Die Farbe des Probenverdünnungsmittels ändert sich von grün nach blau. Damit wird bestätigt, dass Probe (oder
Kontrolle) in die Vertiefung pipettiert wurde.
2. Konjugat 1 wird jeder Vertiefung zugesetzt und die Mikrotiterplatte wird inkubiert. Dadurch kann der biotinylierte
Anti-p24-Antikörper (Schaf) in Konjugat 1 an das in der Vertiefung gebundene HIV-1 Ag binden. Die Antigen-
Antikörper-Komplexe bleiben während des darauf folgenden Waschschrittes gebunden.
3. Anschließend wird Konjugat 2 jeder Vertiefung zugesetzt und die Mikrotiterplatte wird erneut inkubiert. Das
Avidin in Konjugat 2 bindet spezifisch an die Antikörper-HIV-1 Ag-Komplexe in der Vertiefung. Durch den
nachfolgenden Waschschritt wird ungebundenes Konjugat entfernt.
4. Die angesetzte TMB- Lösung wird der Platte zugesetzt und inkubiert. Eine blaue oder blau-grüne Färbung
entwickelt sich im Verhältnis zu der in der Probe vorhandenen Menge an HIV-1 Ag. Die Farbentwicklung wird
durch Zugabe von Säure gestoppt, so dass die Farbe von blau-grün nach gelb umschlägt. Die Extinktion der
Proben und Kontrollen wird in einem Spektrophotometer bei einer Wellenlänge von 450/620-700 nm bestimmt.
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