GENETIC SYSTEMS™ HIV-1 Ag EIA

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INHALT 1 - KLINISCHE BEDEUTUNG 2 - PRINZIP DES GENETIC SYSTEM TM HIV-1 ANTIGEN EIA 3 - INHALT DES GENETIC SYSTEM TM HIV-1 ANTIGEN EIA KITS 4 - BENÖTIGTE,JEDOCH NICHT MITGELIEFERTE MATERIALIEN 5 - SICHERHEITSVORSCHRIFTEN 6 - VORSICHTSMASSNAHMEN 7 - ENTNAHME UND HANDHABUNG DER PROBEN 8 - REKONSTITUTION DER REAGENZIEN 9 - LAGERUNGSBEDINGUNGEN - HALTBARKEIT 10 - TESTDURCHFÜHRUNG 11 - BERECHNUNG UND INTERPRETATION DER ERGEBNISSE 12 - SPEKTROPHOTOMETRISCHE ÜBERPRÜFUNG DER PROBEN- UND REAGENZPIPETTIERUNG 13 - LEISTUNGSFÄHIGKEIT DES TESTS 14 - GRENZEN DES TESTS 15 - LITERATUR 40
1 - KLINISCHE BEDEUTUNG Erreger des Immunschwächesyndroms AIDS (Acquired Immunodeficiency Syndrome) ist ein Retrovirus, das sogenannte humane Immundefizienzvirus (HIV). HIV wurde von AIDS-Patienten sowie von gesunden Personen mit hohem AIDS-Risiko isoliert ( 1,2 ). Das Virus wird durch Sexualkontakt, über kontaminierte Nadeln, durch Transfusionen kontaminierter Blutprodukte und perinatal von der infizierten Mutter auf den Föten oder das Kind übertragen.( 1,8 ) Eine frühere Exposition gegenüber HIV wird in der Regel durch vorhandene virusspezifische Antikörper im Serum oder Plasma nach Exposition gegenüber dem Virus nachgewiesen. Bevor nachweisbare Antikörper vorhanden sind, zirkulieren in einem frühen Stadium Virusantigene im Blut. Eines dieser Virusantigene ist das Virus-Core-Protein p24. Mit HIV-Antigen-Assays können vorhandene Virusantigene und somit eine HIV-Infektion vor der Serokonversion nachgewiesen werden. Der Zeitraum der Antigenämie vor Auftreten von HIV-Antikörpern schwankt bei Infizierten zwischen Tagen und Wochen. Bei der Serokonversion bilden virusspezifische Antikörper mit den zirkulierenden Antigenen einen Komplex, so dass die Konzentrationen an freien Antigenen im Blut sinken oder nicht mehr nachweisbar sind.( 9,11 ) Im Verlauf der Krankheit kann sich jedoch erneut eine Antigenämie entwickeln 12 . Der Genetic Systems HIV-1 Antigen EIA ist für das Screening von Blut- und Plasmaspenden und als Hilfe für die Diagnose und Prognose einer HIV-1-Infektion vorgesehen. 2 - PRINZIP DES GENETIC SYSTEM HIV-1 ANTIGEN EIA Der Genetic Systems HIV-1 Antigen EIA basiert auf der Verwendung einer mit monoklonalemMaus-Anti--HIV-1- Antigen beschichteten Festphase, eines ersten Konjugates aus biotinyliertem Anti-p24-Antikörper (Schaf) und einem zweiten Konjugat aus Avidin, gebunden an Meerrettich-Peroxidase. Die Testdurchführung umfasst folgende Reaktionsschritte: 1. Probenverdünnungsmittel wird in jede Vertiefung pipettiert. Die zu testenden Proben und die Kontrollseren werden in die entsprechenden Vertiefungen pipettiert. Ist HIV-1 Ag in der Probe vorhanden, bindet dieses an die Antikörper in der Vertiefung. Gebundenes HIV-1 Ag bleibt während des darauf folgenden Waschschrittes gebunden. Die Farbe des Probenverdünnungsmittels ändert sich von grün nach blau. Damit wird bestätigt, dass Probe (oder Kontrolle) in die Vertiefung pipettiert wurde. 2. Konjugat 1 wird jeder Vertiefung zugesetzt und die Mikrotiterplatte wird inkubiert. Dadurch kann der biotinylierte Anti-p24-Antikörper (Schaf) in Konjugat 1 an das in der Vertiefung gebundene HIV-1 Ag binden. Die Antigen- Antikörper-Komplexe bleiben während des darauf folgenden Waschschrittes gebunden. 3. Anschließend wird Konjugat 2 jeder Vertiefung zugesetzt und die Mikrotiterplatte wird erneut inkubiert. Das Avidin in Konjugat 2 bindet spezifisch an die Antikörper-HIV-1 Ag-Komplexe in der Vertiefung. Durch den nachfolgenden Waschschritt wird ungebundenes Konjugat entfernt. 4. Die angesetzte TMB- Lösung wird der Platte zugesetzt und inkubiert. Eine blaue oder blau-grüne Färbung entwickelt sich im Verhältnis zu der in der Probe vorhandenen Menge an HIV-1 Ag. Die Farbentwicklung wird durch Zugabe von Säure gestoppt, so dass die Farbe von blau-grün nach gelb umschlägt. Die Extinktion der Proben und Kontrollen wird in einem Spektrophotometer bei einer Wellenlänge von 450/620-700 nm bestimmt. 41
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