GENETIC SYSTEMS™ HIV-1 Ag EIA

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Ejemplo : CNX = 0,033 Valor umbral = 0,070 + 0,033 = 0,103 4) Interpretación de los resultados La presencia o la ausencia del antígeno VIH1 se determinan comparando para cada muestra la absorbancia registrada con la del valor umbral calculado. Las muestras cuyos valores de absorbancia sean inferiores a 0,000 se deben someter a un nuevo test. Las muestras cuyos valores de absorbancia sean superiores a los límites de linealidad del lector están consideradas como reactivas. Las muestras cuyos valores de absorbancia sean inferiores al valor umbral están consideradas como no reactivas al test EIA Antigen VIH-1 Genetic Systems y pueden ser consideradas como negativas para el antígeno VIH-1. En este caso, no es necesario efectuar otro test. Las muestras cuyos valores de absorbancia sean superiores o iguales al valor umbral están consideradas como inicialmente reactivas al test EIA Genetic Systems Antigen VIH-1. Las muestras inicialmente reactivas se deben someter a un nuevo test dos veces, con el fin de validar los resultados del test inicial. Si después de estos nuevos tests los dos nuevos valores de absorbancia obtenidos son inferiores al valor umbral, el resultado inicial no es reproducible y la muestra de origen se considera negativa para el antígeno VIH-1 según el test «Genetic Systems HIV-1 Antigen». El origen de las reacciones no reproducibles está a menudo relacionado con las causas siguientes: • lavado insuficiente de las microplacas, • contaminación cruzada de muestras no reactivas por una muestra con fuerte valoración de antígeno VIH-1. • contaminación puntual de la solución de revelado por agentes químicos oxidantes (lejía, iones metálicos, etc.). • contaminación puntual de la solución de interrupción. Si después de repetir el ensayo, el valor de absorbancia medido sobre uno de ambos dobletes es superior o igual al valor umbral, el resultado inicial es reproducible y la muestra se considera reactiva según el test Genetic Systems HIV-1 Antigen, conforme a los límites descritos a continuación. Las muestras cuya reactividad ha sido repetida con el test Genetic Systems HIV-1 Antigen - EIA se deben confirmar con el test Genetic Systems HIV-1 Antigen Confirmatory Assay (código : 71121). La muestra se puede considerar como positiva para el antígeno VIH-1 solamente si el antígeno VIH-1 queda neutralizado en el momento del procedimiento de confirmación. 12 - VERIFICACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA DEL PIPETEADO DE LAS MUESTRAS Y DELOS REACTIVOS Verificatión espectrofotométrica del pipeteado de las muestras Después de la distribución sucesiva del disolvente de las muestras (R3) y luego de las muestras, es posible verificar la presencia de las muestras que hay que someter a un test en los pocillos mediante una lectura espectrofotométrica de 620 nm: la densidad óptica de una pocillo que contiene una muestra deberá ser superior a 0,250 (una DO inferior indica una mala distribución de ésta). Observación : las muestras de cultivo celular pueden no cambiar color con arreglo al medio utilizado de cultivo. En este caso, no se aplica esta comprobación automática. Verificatión espectrofotométrica de la distribución de la solución de revelado Se puede comprobar la presencia de la solución de revelado rosada mediante la lectura automática a 490 nm: un pocillo que contiene la solución de revelado debe tener una densidad óptica superior a 0,100 (una DO más baja indica una distribución incorrecta de la solución de revelado). Existe una diferencia de coloración significativa entre un pocillo vacío y un pocillo que contiene la solución de revelado rosada. 13 - RESULTADOS Sensibilidad diagnóstica • 138 muestras de pacientes infectados por el VIH en diferentes estadios de la infección (AIDS, ARC, otros) fueron sometidas a un test y dieron positivo con el test Genetic Systems HIV-1 Antigen EIA. • Se han estudiado 20 grupos de seroconversión bien documentados. Los resultados obtenidos son comparables a los resultados obtenidos con otros tests de dosificación del antígeno HIV. • 55 sobrenadantes de cultivos celulares de VIH1 (entre ellos 53 del grupo M y 2 del grupo O), así como el grupo de dilución «Ag VIH SFTS 96», dieron positivo con el test Genetic Systems HIV-1 Antigen EIA, a excepción de 2 diluciones de un sobrenadante de cultivo celular de grupo O. - Los 53 sobrenadantes de cultivos celulares de VIH1 de grupo M estaban compuestos por los siguientes genotipos: 10 del genotipo A, 10 de B, 9 de C, 5 de D, 11 de E, 2 de F, 2 de G, 1 de H, 2 de J y 1 de N. - El grupo de dilución «Ag VIH SFTS 96» comprende los genotipos siguientes: A, B, C, D, E, F, G, H del grupo M y 1 genotipo de grupo O. 36
Sensibilidad analítica El umbral de sensibilidad del test ha sido evaluado con una serie de diluciones preparadas según el estándar nacional francés (lisado vírico purificado de genotipo B diluido en plasma citrado negativo), así como el grupo BBI (PRA 801). En el momento de estos ensayos, el umbral de detección tenía un valor de 8 pg / ml de antígeno HIV, sea cual sea el protocolo utilizado. La gama de amplitud obtenida con el estándar HIV-1 Ag Standard (código 72217) de Bio-Rad es lineal de 0 a 100 pg / ml. Especificidad diagnóstica La especificidad diagnóstica del test, determinada a partir de una población de 4038 donantes de sangre, se estima en un 99,95 %. En 209 pacientes clínicos se estimó al 100%. Se sometió a un test un grupo de 105 muestras de pacientes. Comprendía muestras : • Que contenían anticuerpos dirigidos contra HAV, HCV, HTLV, HSV, EBV, Rubeola, Toxoplasma Gondii, Treponema pallidum, CMV • Que contenían autoanticuerpos, índices elevados de IgG, de IgM de factor reumatoideo • Provenientes de mujeres embarazadas, de enfermos con cirrosis, de pacientes que habían recibido muchas transfusiones y de pacientes cons lupus eritematoso generalizado. Sólo se encontró una muestra reactiva con el test Genetic Systems HIV-1 Antigen EIA, proveniente de un pacientes con lupus eritematoso generalizado, pero no fue confirmada con el test de confirmación. Precisión Se estudió la reproducibilidad dentro del mismo ensayo sometiendo a test 3 muestras positivas y 1 negativa, 30 veces cada una, durante el mismo ensayo. Se estudió la reproducibilidad entre ensayos diferentes sometiendo a test 3 muestras positivas y 1 negativa por triplicado durante 5 días, por dos técnicos diferentes. Los coeficientes de variación obtenidos con las muestras positivas sometidas a un test fueron inferiores al 10 %. 14 - LÍMITES DEL TEST • El procedimiento del test Genetic Systems HIV-1 Antigen - EIA y el modo de interpretación de los resultados se deben utilizar para la búsqueda del antígeno VIH-1 en muestras de suero, de plasma o de cultivos celulares. Se recomienda a los usuarios de este estuche que lean con atención la presente nota de utilización antes de llevar a cabo el test. Es importante respetar los procedimientos del test, en particular en lo relativo al pipeteado de las muestras y de los reactivos, al lavado de las placas y a la duración de las etapas de incubación. • No se debe considerar que una muestra es como reactiva al el antígeno VIH-1 a partir de un solo resultado reactivo. Con el fin de establecer la especificidad de la reactividad de cada muestra según este test, es necesario efectuar nuevas dosificaciones, por ejemplo, un test de confirmación. • Todo test inmunoenzimático altamente sensible puede estar sujeto a reacciones no específicas que pueden dar lugar a resultados falsamente positivos. La proporción de las muestras reactivas falsamente reactivas depende de la sensibilidad y de la especificidad del estuche utilizado. • Se pueden obtener resultados negativos con muestras cuyo índice de antígeno VIH es demasiado bajo en comparación con los límites de detección del test y, asimismo, se pueden observar resultados negativos si el marcador buscado no está presente en el estadio de la enfermedad en que se obtuvo la muestra. • La variabilidad del virus VIH no permite excluir la posibilidad de reacciones falsamente negativas. Ningún método conocido puede ofrecer la seguridad de que el virus VIH está ausente. • Si la adición de muestra o de reactivo no se ha llevado a cabo conforme a las instrucciones, es posible obtener un resultado falsamente negativo. En caso de sospecha clínica de infección o de error en el curso del procedimiento se debe prever el efectuar una nueva dosificación • Un valor de absorbancia inferior a 0,000 UA señala un error en el curso del procedimiento o un problema vinculado al material. Se debe someter a un nuevo test la muestra concernida. • Los factores que pueden afectar la validez de los resultados son los siguientes : depósito deficiente de la muestra en el pozo, mal lavado de los pocillos de las microplacas, incumplimiento de los tiempos y de las temperaturas de incubación indicados, errores en los depósitos de los reactivos, presencia de metales o de lejía en los pocillos. • Las realizaciones de este test no han sido evaluados con muestras post mortem o con otros fluidos biológicos aparte de suero o plasma o muestras de cultivo celular. • La sensibilidad analítica, considerada como 8 pg / ml en el momento de las evaluaciones del test, puede variar con arreglo a las condiciones operatorias y a la variabilidad entre los lotes. En consecuencia, Bio-Rad sólo puede garantizar una sensibilidad analítica inferior a 15 pg / ml. • La coloración del disolvente de las muestras puede no modificarse en presencia de muestras de cultivo celular, en función del medio de cultivo utilizado. 37
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