GENETIC SYSTEMS™ HIV-1 Ag EIA

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6 - PRECAUCIONES La calidad de los resultados depende del respeto de las buenas prácticas de laboratorio siguientes : • No se utilizarán los reactivos después de la fecha de caducidad. • No se modificará el modo operatorio. • Se reconstituirán con sumo cuidado los reactivos y se evitará cualquier contaminación. • No mezclar en un mismo ensayo reactivos que procedan de lotes diferentes. Nota: se pueden utilizar otros lotes de solución de lavado (R2, identificada 10 x en azul sobre la etiqueta), de tampón sustrato (R8, identificado TMB buf. en azul), de cromógeno (R9, identificado TMB 11x. en violeta) y de solución de parada (R10, identificado 1N en rojo), diferentes a los suministrados en el kit siempre y cuando se utilice un mismo y único lote durante todo el ensayo. Estos reactivos también pueden utilizarse con otros productos de nuestro laboratorio; contacte con nuestros servicios técnicos para una información más detallada. • Antes de la utilización, se esperarán 30 minutos para que los reactivos se equilibren a la temperatura del laboratorio (18-30°C). • No se llevará a cabo el test en presencia de vapores reactivos (ácidos, alcalinos, aldehídos) o de polvos que pudieran alterar la actividad enzimática de los conjugados. • Se utilizarán frascos de vidrio perfectamente lavados y enjuagados con agua destilada o, con preferencia, material de uso único. • No se dejará secar la microplaca entre el final del lavado y el principio de la distribución de los reactivos. • Se verificará la exactitud y la precisión de las pipetas y el buen funcionamiento de los aparatos utilizados. • Lavado: es indispensable respetar escrupulosamente los procedimientos de lavado con el fin de obtener los resultados máximos del test. • No se utilizará jamás el mismo recipiente para distribuir el conjugado y la solución de revelado. • La reacción enzimática es muy sensible a todo metal o iones metálicos. En consecuencia, ningún elemento metálico deberá entrar en contacto con las diferentes soluciones que contienen los conjugados o el substrato. • La solución de revelado (tampón sustrato + cromógeno) debe estar coloreada en rosa. La aparición de otra coloración en los minutos siguientes a la reconstitución indica que el reactivo es inutilizable y se debe sustituir. Para esta preparación, utilizar preferentemente recipientes y material de distribución de plástico de uso único o una cristalería previamente lavada con ácido clorhídrico 1N y perfectamente aclarada con agua destilada y secada. Conservar esta preparación protegida de la luz. 7 - MUESTRAS Se obtendrá una muestra de sangre según las prácticas habituales. Las muestras que se pueden utilizar son: suero, plasma o las muestras de cultivo celular. Los anticoagulantes EDTA, heparina, citrato sódico, CPDA-1 y ACD han sido evaluados y están considerados como utilizables. La cantidad de las muestras obtenidas con la ayuda de tubos anticoagulantes deberá llegar hasta la altura del nivel indicado, con el fin de evitar una mala dilución. Se extraerá cuanto antes el suero o el plasma del coágulo o de los glóbulos rojos para evitar cualquier hemólisis. Una hemólisis muy pronunciada puede afectar los resultados del test. Las muestras que tengan agregados han de ser clarificadas mediante centrifugación antes del test. Las partículas o los agregados de fibrina en suspensión pueden dar resultados falsamente positivos. Las muestras de cultivo de células que necesitan una dilución antes de su utilización pueden diluirse con un medio de cultivo celular equivalente al medio utilizado para el cultivo. NO SE UTILIZARÁN MUESTRAS INACTIVADAS POR EL CALOR. Las muestras se conservarán a + 2-8°C si la detección se lleva a cabo durante los 7 días posteriores a su obtención, o bien se pueden conservar congeladas a – 20°C. Los plasmas se someterán a un descongelado rápido por calentamiento durante varios minutos a 40°C (para limitar la precipitación de fibrina). Debido a la inestabilidad del Ag VIH al calor, no se podrán utilizar temperaturas superiores a 40°C. Las muestras que han sido congeladas y descongeladas más de 3 veces no se deberán utilizar. Si las muestras deben ser transportadas, habrá que embalarlas según los reglamentos existentes para el transporte de agentes etiológicos. Se extraerá cuanto antes el suero o el plasma del coágulo o de los glóbulos rojos para evitar cualquier hemólisis. NO SE UTILIZARÁN SUEROS O PLASMAS CONTAMINADOS, HYPERLIPÉMICOS O HIPERHEMOLIZADOS. Observación: no se ha observado interferencia alguna en las muestras que contenían 80 mg / l de bilirrubina, 36mg / l de inmunoglobulina M o G, así como en las muestras lipémicas que contenían hasta 5 g/l de lípidos y en las muestras hemolizadas que contenían hasta 5 g/l de hemoglobina. 32
8 - RECONSTITUCIÓN DE LOS REACTIVOS Todos los reactivos deben estar a temperatura ambiente (18 a 30°C) antes de su utilización, con excepción de los conjugados concentrados 1 y 2 (R4 y R5). 1) Reactivos listos para su empleo Reactivo R1 : microplaca Cada marco soporte con 12 tiras está incluido en un saquito "CREMALLERA". Córtese el saquito con la ayuda de unas tijeras o una hoja de bisturí a una distancia de entre 0,5 y 1 cm por encima de la CREMALLERA. Ábrase el saquito y sáquese el marco. Se repondrán en el saquito las tiras no utilizadas. Luego, se cerrará el saquito cuidadosamente y se volverá a conservar a + 2-8°C. Reactivo R3 : disolvente para muestras Reactivo C0 : suero de control negativo Reactivo C1 : suero de control positivo Reactivo R10 : solución de interrupción 2) Reactivos para reconstituir Solución de lavado concentrada 10 veces (R2) Se diluye al 1/10 la solución R2 en agua destilada. Se homogeniza. OBSERVACIÓN : La solución de lavado Genetic Systems EIA (30X), que forma parte de otro estuche Genetic Systems, se puede también utilizar para este test. En tal caso, se diluye un volumen de solución de lavado concentrada en 29 volúmenes de agua. Solución de trabajo conjugado 1 (R4 + R6) y Solución de trabajo conjugado 2 (R5 + R6) Los conjugados 1 (R4) y 2 (R5) son unas soluciones concentradas (100 X). Se prepara por separado la solución de trabajo conjugado 1 y la solución de trabajo conjugado 2 diluyendo cada una de ellas al 1:101 en el disolvente de conjugado (R6). Se lleva a cabo la preparación en recipientes limpios de plástico. Se inscribe sobre el recipiente el número de lote, la fecha y la hora de preparación, y la fecha de los conjugados concentrados (1 o 2), así como la hora límite de utilización (24 horas después de la preparación). Se mezclan despacio las soluciones de trabajo antes de su utilización. Una vez mezcladas, la solución de trabajo conjugado 1 es amarilla y la solución de trabajo conjugado 2 es verde. Preparación de la solución de trabajo conjugado 1 o 2 por tira Número de tiras 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12* 24** necesarias Cantidad de conjugado 20 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 240 concentrado (µl) Cantidad de disolvente 2 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 24 de conjugado (ml) *una placa entera ** dos placas enteras Solución de revelado enzimático (R8 + R9) Se diluye R9 en R8 al 1/11 (ejemplo : 1 ml de reactivo R9 en 10 ml de reactivo R8) a sabiendas de que 10 ml son necesarios y suficientes para tratar 12 tiras. Se homogeneiza. 9 - VALIDEZ – CONSERVACIÓN El estuche debe conservarse a + 2-8°C. Cada elemento del estuche Genetic SystemsTM HIV-1 Antigen EIA conservado a + 2-8°C se puede utilizar después de una primera abertura hasta la fecha de caducidad indicada sobre el estuche, salvo indicación específica: R1 : después de la abertura del saquito, las tiras conservadas a + 2-8°C en su saquito de origen, cerrado con cuidado, son estables durante 1 mes. R2 : después de la dilución, la solución de lavado se conserva durante 14 días como máximo a + 2-8°C en un recipiente de plástico. R8 + R9 : después de la reconstitución, los reactivos conservados al abrigo de la luz son estables durante 6 horas a temperatura ambiente (18-30°C). R4 - R5 : después de la reconstitución, los conjugados son estables durante 24 horas a temperatura ambiente (18-30°C). 33
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