GENETIC SYSTEMS™ HIV-1 Ag EIA

1 - INTERÉS CLÍNICO
El agente etiológico del síndrome de immunodeficiencia adquirida (SIDA) es un retrovirus que recibió la
denominación de Virus de la Immunodeficiencia Humana (VIH). El VIH ha sido aislado en pacientes afectados por
el SIDA, así como en individuos sanos que forman parte de una población sometida a un riesgo de padecer el
SIDA 1,2 . Se sabe que la transmisión tiene lugar por vía sexual, por la utilización de agujas contaminadas, por
transfusión de productos sanguíneos contaminados y también por vía placentaria, desde la madre infectada al feto
o al recién nacido 1,8 .
Normalmente, es posible detectar anticuerpos específicos contra el virus en la sangre o en el plasma de un individuo
que ha sido expuesto al virus, lo cual confirma así la exposición. En la fase que precede a la aparición de
anticuerpos detectables, ya existen antígenos víricos libres que circulan en la sangre. Uno de estos antígenos víricos
es el antígeno p24, que corresponde a la principal proteína de la nucleocápside.
Los tests de detección del antígeno del VIH se pueden utilizar para detectar la presencia de antígenos víricos y, por
lo tanto, para diagnosticar una infección por el VIH, y ello antes de que haya tenido lugar la seroconversión.
El periodo de antigenemia, que precede a la aparición de los anticuerpos anti-VIH, es variable y puede durar desde
algunos días a varias semanas entre los individuos infectados. En el momento de la seroconversión, los anticuerpos
específicos del virus forman complejos inmunes con los antígenos circulantes, de tal manera que tiene lugar una
fuerte caída del índice de antígenos libres en la sangre y, eventualmente, la desaparición completa de estos
antígenos 9,11 . La antigenemia puede reaparecer más tarde en el curso de la progresión de la enfermedad 12 .
El test Genetic Systems HIV-1 Antigen - EIA está destinado a su utilización como ayuda en el diagnóstico y el
pronóstico de la infección por el VIH-1.
2 - PRINCIPIO DEL GENETIC SYSTEM HIV-1 ANTIGEN EIA
El test Genetic Systems HIV-1 Antigen - EIA es un test inmunoenzimático para la detección in vitro del antígeno
p24 de la cápside del virus de la inmunodeficiencia humana de tipo 1 (VIH-1) libre en muestras humanas de suero,
de plasma y del sobrenadante del cultivo celular. El test «Genetic Systems HIV-1 Antigen Confirmatory Assay»
(código 71121) se utiliza como complemento del test Genetic Systems HIV-1 Antigen-EIA para confirmar la
presencia de antígeno p24 del VIH en muestras repetidamente reactivas.
El test Genetic Systems HIV-1 Antigen – EIA se basa en la utilización de una fase sólida preparada con
anticuerpos monoclónicos de ratón anti-VIH-1, de un primer conjugado preparado con anticuerpos biotinilados de
carnero anti-p24 y de un segundo conjugado preparado con avidina acoplada a la peroxidasa de Raifort.
La realización del test comprende las siguientes etapas reactivas:
1. Las muestras que hay que estudiar, así como los sueros de control, se distribuyen en sus pocillos respectivos, a
los cuales se les ha añadido con anterioridad el disolvente de las muestras. En el caso de que existan antígenos
VIH-1 en la muestra sometida a test, éstos se fijan entonces a los anticuerpos que tapizan los pocillos, donde
quedan fijos durante la siguiente etapa de lavado.
El depósito de las muestras queda confirmado por un cambio de color del disolvente de muestra, que pasa del
verde al azul.
2. El conjugado 1 se añade luego en cada pocillo y se somete después a incubación. Esto permite a los anticuerpos
biotinilados de carnero anti-p24 presentes en el conjugado 1 que se fijen a los antígenos-anticuerpos VIH-1 fijos
en los pocillos. Estos complejos antígeno-anticuerpo permanecen fijos en los pocillos en el momento de la
siguiente etapa de lavado.
3. El conjugado 2 se distribuye entonces y luego se incuba. La avidina del conjugado 2 se liga de forma específica
a los complejos antígeno-anticuerpo VIH-1 fijos en los pocillos. El excedente no fijo del conjugado se elimina
mediante lavado.
4. Se añade la solución de trabajo TMB y se procede después a incubación. Aparece una coloración azul o verde
azulada, proporcional a la cantidad de antígeno VIH-1 presente en la muestra. Se detiene la reacción
colorimétrica añadiendo ácido, que modifica la coloración, desde el azul verdoso al amarillo. La densidad óptica
de las muestras y de los controles se determina por espectrofotometría a una longitud de onda de 450/620-700 nm.
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