GENETIC SYSTEMS™ HIV-1 Ag EIA

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ÍNDICE 1 - INTERÉS CLÍNICO 2 - PRINCIPIO DEL GENETIC SYSTEM HIV-1 ANTIGEN EIA 3 - COMPOSICIÓN DEL ESTUCHE GENETIC SYSTEM HIV-1 ANTIGEN EIA 4 - MATERIAL NECESARIO, PERO NO INCLUIDO 5 - CONSIGNAS DE HIGIENE Y DE SEGURIDAD 6 - PRECAUCIONES 7 - MUESTRAS 8 - RECONSTITUCIÓN DE LOS REACTIVOS 9 - VALIDEZ – CONSERVACIÓN 10 - MODO OPERATORIO 11 - CÁLCULO E INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS 12 - VERIFICACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA DEL PIPETEADO DE LAS MUESTRAS Y DE LOS REACTIVOS 13 - RESULTADOS 14 - LÍMITES DEL TEST 15 - REFERENCIAS BIBLIOGÁFICAS 28
1 - INTERÉS CLÍNICO El agente etiológico del síndrome de immunodeficiencia adquirida (SIDA) es un retrovirus que recibió la denominación de Virus de la Immunodeficiencia Humana (VIH). El VIH ha sido aislado en pacientes afectados por el SIDA, así como en individuos sanos que forman parte de una población sometida a un riesgo de padecer el SIDA 1,2 . Se sabe que la transmisión tiene lugar por vía sexual, por la utilización de agujas contaminadas, por transfusión de productos sanguíneos contaminados y también por vía placentaria, desde la madre infectada al feto o al recién nacido 1,8 . Normalmente, es posible detectar anticuerpos específicos contra el virus en la sangre o en el plasma de un individuo que ha sido expuesto al virus, lo cual confirma así la exposición. En la fase que precede a la aparición de anticuerpos detectables, ya existen antígenos víricos libres que circulan en la sangre. Uno de estos antígenos víricos es el antígeno p24, que corresponde a la principal proteína de la nucleocápside. Los tests de detección del antígeno del VIH se pueden utilizar para detectar la presencia de antígenos víricos y, por lo tanto, para diagnosticar una infección por el VIH, y ello antes de que haya tenido lugar la seroconversión. El periodo de antigenemia, que precede a la aparición de los anticuerpos anti-VIH, es variable y puede durar desde algunos días a varias semanas entre los individuos infectados. En el momento de la seroconversión, los anticuerpos específicos del virus forman complejos inmunes con los antígenos circulantes, de tal manera que tiene lugar una fuerte caída del índice de antígenos libres en la sangre y, eventualmente, la desaparición completa de estos antígenos 9,11 . La antigenemia puede reaparecer más tarde en el curso de la progresión de la enfermedad 12 . El test Genetic Systems HIV-1 Antigen - EIA está destinado a su utilización como ayuda en el diagnóstico y el pronóstico de la infección por el VIH-1. 2 - PRINCIPIO DEL GENETIC SYSTEM HIV-1 ANTIGEN EIA El test Genetic Systems HIV-1 Antigen - EIA es un test inmunoenzimático para la detección in vitro del antígeno p24 de la cápside del virus de la inmunodeficiencia humana de tipo 1 (VIH-1) libre en muestras humanas de suero, de plasma y del sobrenadante del cultivo celular. El test «Genetic Systems HIV-1 Antigen Confirmatory Assay» (código 71121) se utiliza como complemento del test Genetic Systems HIV-1 Antigen-EIA para confirmar la presencia de antígeno p24 del VIH en muestras repetidamente reactivas. El test Genetic Systems HIV-1 Antigen – EIA se basa en la utilización de una fase sólida preparada con anticuerpos monoclónicos de ratón anti-VIH-1, de un primer conjugado preparado con anticuerpos biotinilados de carnero anti-p24 y de un segundo conjugado preparado con avidina acoplada a la peroxidasa de Raifort. La realización del test comprende las siguientes etapas reactivas: 1. Las muestras que hay que estudiar, así como los sueros de control, se distribuyen en sus pocillos respectivos, a los cuales se les ha añadido con anterioridad el disolvente de las muestras. En el caso de que existan antígenos VIH-1 en la muestra sometida a test, éstos se fijan entonces a los anticuerpos que tapizan los pocillos, donde quedan fijos durante la siguiente etapa de lavado. El depósito de las muestras queda confirmado por un cambio de color del disolvente de muestra, que pasa del verde al azul. 2. El conjugado 1 se añade luego en cada pocillo y se somete después a incubación. Esto permite a los anticuerpos biotinilados de carnero anti-p24 presentes en el conjugado 1 que se fijen a los antígenos-anticuerpos VIH-1 fijos en los pocillos. Estos complejos antígeno-anticuerpo permanecen fijos en los pocillos en el momento de la siguiente etapa de lavado. 3. El conjugado 2 se distribuye entonces y luego se incuba. La avidina del conjugado 2 se liga de forma específica a los complejos antígeno-anticuerpo VIH-1 fijos en los pocillos. El excedente no fijo del conjugado se elimina mediante lavado. 4. Se añade la solución de trabajo TMB y se procede después a incubación. Aparece una coloración azul o verde azulada, proporcional a la cantidad de antígeno VIH-1 presente en la muestra. Se detiene la reacción colorimétrica añadiendo ácido, que modifica la coloración, desde el azul verdoso al amarillo. La densidad óptica de las muestras y de los controles se determina por espectrofotometría a una longitud de onda de 450/620-700 nm. 29
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