GENETIC SYSTEMS™ HIV-1 Ag EIA

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3) Calcul de la valeur seuil La valeur seuil est calculée par la somme d’un facteur constant (0,070) avec la valeur d’absorbance moyenne des contrôles négatifs (CNX). Valeur seuil = 0,070 + CNX Exemple : CNX = 0.033 Valeur Seuil = 0,070 + 0,033 = 0,103 4) Interprétation des résultats La présence ou l'absence des antigènes VIH1 est déterminée en comparant pour chaque échantillon l'absorbance enregistrée à celle de la valeur seuil calculée. Les échantillons dont les valeurs d’absorbance sont inférieures à 0,000 doivent être de nouveau testés. Les échantillons dont les valeurs d’absorbance sont supérieures aux limites de linéarité du lecteur sont considérés réactifs. Les échantillons dont les valeurs d’absorbance sont inférieures à la valeur seuil sont considérés non réactifs au test EIA antigène VIH-1 GENETIC SYSTEMS et peuvent être considérés comme négatifs pour l’antigène VIH-1. Dans ce cas, il n’est pas nécessaire d’effectuer un autre test. Les échantillons dont les valeurs d’absorbance sont supérieures ou égales à la valeur seuil sont considérés comme initialement réactifs au test EIA GENETIC SYSTEMS antigène VIH-1. Les échantillons initialement réactifs doivent être de nouveau testés deux foix afin de valider les résultats du test initial. Si à la suite de ces nouveaux tests les deux nouvelles valeurs d’absorbance obtenues sont inférieures à la valeur seuil, le résultat initial est non reproductible et l’échantillon d’origine est déclaré négatif pour l’antigène VIH-1 selon le test "GENETIC SYSTEMS HIV-1 Antigen". L'origine des réactions non reproductibles est souvent en relation avec les causes suivantes : • lavage insuffisant des microplaques, • contamination croisée d’échantillons non réactifs par un échantillon fortement titré en antigène VIH-1. • contamination ponctuelle de la solution de révélation par des agents chimiques oxydants (eau de javel, ions métalliques, etc...). • contamination ponctuelle de la solution d'arrêt. Si après la répétition de l'essai, la valeur d’absorbance mesurée sur l'un des deux doublets est supérieure ou égale à la valeur seuil, le résultat initial est reproductible et l’échantillon est déclaré réactif selon le test GENETIC SYSTEMS HIV-1 Antigen, conformément aux limites décrites ci-après. Les échantillons dont la réactivité a été répétée avec le test GENETIC SYSTEMS HIV-1 Antigen - EIA doivent être confirmés avec le test GENETIC SYSTEMS HIV-1 Antigen Confirmatory Assay (code : 71121). L’échantillon peut être considéré positif pour l’antigène VIH-1 seulement si l’antigène VIH-1 est neutralisé lors de la procédure de confirmation. 12 - VÉRIFICATION SPECTROPHOTOMÉTRIQUE DU DÉPÔT DES ÉCHANTILLONS ET DES RÉACTIFS Vérification spectrophotométrique du dépôt des échantillons Après la distribution successive du diluant des échantillons (R3) puis des échantillons, il est possible de vérifier la présence des échantillons à tester dans les cupules par une lecture spectrophotométrique à 620 nm : la densité optique d'une cupule contenant un échantillon devra être supérieure à 0,250 (une DO inférieure indique une mauvaise distribution de celui-ci). Remarque : les échantillons de culture cellulaire peuvent ne pas changer de couleur en fonction du milieu de culture utilisé. Dans ce cas ne pas appliquer cette vérification automatique. Vérification spectrophotométrique du dépôt de la solution de révélation Il est possible de vérifier la présence de la solution de révélation rosée par lecture automatique à 490 nm : une cupule contenant la solution de révélation doit avoir une densité optique supérieure à 0.100 (une DO plus faible indique une mauvaise distribution de la solution de révélation). Il y a une différence de coloration significative entre une cupule vide et une cupule contenant la solution de révélation rosée. 13 - PERFORMANCES Sensibilité diagnostique • 138 échantillons de patients infectés par le VIH à différents stades de l'infection (AIDS, ARC, autres) ont été testés et trouvés positifs avec le test GENETIC SYSTEMS HIV-1 Antigen EIA. • 20 panels de séroconversion bien documentés ont été étudiés. Les résultats obtenus sont comparables aux résultats obtenus avec d’autres tests de dosage de l’antigène HIV. • 55 surnageants de cultures cellulaires de VIH1 (dont 53 de groupe M et 2 de groupe O) ainsi que le panel de 24
dilution "Ag VIH SFTS 96" ont tous été trouvés positifs avec le test Genetic Systems HIV-1 Antigen EIA à l'exception de 2 dilutions d'un surnageant de culture cellulaire de groupe O. - Les 53 surnageants de cultures cellulaires de VIH1 de groupe M sont composés des génotypes suivants : 10 de génotype A, 10 de B, 9 de C, 5 de D, 11 de E, 2 de F, 2 de G, 1 de H, 2 de J et 1 de N. - Le panel de dilution "Ag VIH SFTS 96" comprend les génotypes suivants : A, B, C, D, E, F, G, H du groupe M et 1 génotype de groupe O. Sensibilité analytique Le seuil de sensibilité du test a été étudié sur une gamme de dilutions préparées à partir de l’étalon national français (lysat viral purifié de génotype B dilué en plasma citraté négatif) ainsi que sur le panel BBI (PRA 801). Lors de ces essais, le seuil de détection a été estimé à 8 pg/ml d'antigène HIV, quelque soit le protocole utilisé. La gamme d’étalonnage obtenue avec le standard “HIV-1 Ag Standard” (code 72217) de BIO-RAD est linéaire de 0 à 100 pg/ml. Spécificité diagnostique La spécificité du test déterminée à partir : • d’une population de 4038 donneurs de sang est estimée à 99,95%. • d’une population de 209 patients hospitalisés est estimée à 100%. Un panel de 105 échantillons de patients a été testé. Il comprend des échantillons : • contenant des anticorps dirigés contre HAV, HCV, HTLV, HSV, EBV, Rubella, Toxoplasma Gondii, Treponema pallidum, CMV • contenant des autoanticorps, des taux d’IgG, d’IgM de facteur rhumatoïde élevés provenant de femmes enceintes, de cirrhotiques, de polytransfusés ainsi que de patients atteints de Lupus Erythémateux Systématique. Un seul échantillon provenant d’un patient atteint de Lupus Erythémateux a été trouvé réactif avec le test GENETIC SYSTEMS HIV-1 Antigen EIA mais n’a pas été confirmé positif avec le test de confirmation. Précision La répétabilité intra-essai a été étudiée en testant 3 échantillons positifs et 1 négatif 30 fois chacun lors du même essai. La reproductibilité inter-essai é été étudiée en testant 3 échantillons positifs et un négatif en triplicate pendant 5 jours par deux techniciens différents. Les coefficients de variation obtenus sur les échantillons positifs testés sont inférieurs à 10%. 14 - LIMITES DU TEST • La procédure du test GENETIC SYSTEMS HIV-1 Antigen - EIA et le mode d’interprétation des résultats doivent être utilisés pour la recherche de l’antigène VIH-1 dans des échantillons de sérum, de plasma ou de cultures cellulaires. Il est recommandé aux utilisateurs de ce kit de lire la présente notice d’utilisation avec attention avant réalisation du test. Les procédures du test doivent tout particulièrement être respectées en ce qui concerne le pipetage des échantillons et des réactifs, le lavage des plaques et la durée des étapes d’incubation. • Un échantillon ne doit pas être considéré comme réactif pour l’antigène VIH-1 à partir d’un seul résultat réactif. Afin d’établir la spécificité de la réactivité de chaque échantillon selon ce test, il est nécessaire d’effectuer de nouveaux dosages comme par exemple un test de confirmation. • Tout test immunoenzymatique hautement sensible peut être sujet à des réactions non spécifiques qui peuvent entraîner des résultats faussement positifs. La proportion des échantillons réactifs faussement réactifs dépend de la sensibilité et de la spécificité du kit utilisé. • Des résultats négatifs peuvent être obtenus pour des échantillons dont le taux en antigène VIH est trop bas comparativement aux limites de détection du test, tout comme des résultats négatifs peuvent être observés si le marqueur recherché n’est pas présent au stade de la maladie auquel l’échantillon a été prélevé. • La variabilité des virus VIH ne permet pas d'exclure la possibilité de réactions faussement négatives. Aucune méthode connue ne peut offrir l'assurance que le virus VIH est absent. • Si l’addition d’échantillon ou de réactif n’a pas été faite conformément aux instructions, il est possible d’obtenir un résultat faussement négatif. Il faut envisager d’effectuer un nouveau dosage en cas de suspicion clinique d’infection ou d’erreur au cours de la procédure. • Une valeur d’absorbance inférieure à 0,000 UA signale une erreur au cours de la procédure ou un problème lié au matériel. L’échantillon concerné doit alors être retesté. • Les facteurs pouvant affecter la validité des résultats sont les suivants : mauvais dépôt de l’échantillon dans le puits, mauvais lavage des puits des microplaques, non respect des temps et températures d’incubation indiqués, erreurs dans les dépôts des réactifs, présence de métaux ou d’eau de javel dans les puits. • Les performances de ce test n’ont pas été évaluées sur des échantillons post mortem ou sur fluides biologiques 25
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