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concentró en rotavapor hasta un volumen de 1.5 mL en metanol para de aquí
aplicar a TLC.
Para la separación preparativa de los componentes se utilizó la TLC antes
mencionada.
De las bandas identificadas en TLC de color rojo-naranja, la mayoritaria de
color rojo y con un Rf = 0.6, fue seleccionada por presentar mayor
concentración de pigmento a la vista, esta fue eluída y analizada por HPLC
como se describe a continuación:
La muestra se separó por HPLC utilizando una columna de fase reversa:
VYDAC C-18 250 X 4.6 mm en un equipo (Agilent Technologies Modelo
1200), se inyectaron 10 µL y para su elución se utilizó el sistema de solventes:
Solvente A : H2O pH 2.3 (ajustado con ácido acético); Solvente B : H2O/
acetonitrilo/H2O pH 2.3 (ajustado con ácido acético) en una proporción de
107/ 50 / 40 en base a volumen. El gradiente deelución se ajustó t0 = 20% B
incrementándose gradualmente hasta t45 = 70% B.
El flujo se mantuvo a 1 mlmin -1 , y se hizo un seguimiento a longitud de onda
510 nm.
A los picos con tiempo de retención de 3.427 y 3.748 (Diagrama 2)
respectivamente, se les registró la absorción en la región ultravioleta visible
desde 200 a 700 nm (Diagramas 3 y 4).
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