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5. MATERIALES Y MÉTODOS 5.1. MATERIAL BIOLÓGICO Liofilizados de fenoles, flavonoides y antocianinas hechos a partir de extractos metanólicos puros de frutos de fresa de las variedades extranjeras Chiflon, Cristal, Festival, Albión y las dos variedades mexicanas de reciente liberación Jacona y Zamorana. Los extractos fueron obtenidos y valorados en su concentración de fenoles, flavonoides y antocianas según la técnica descrita por Chávez y col. (2011). 5.2. ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE: MÉTODO DPPH El fundamento del método desarrollado por Brand y col., en 1995, consiste en que este radical (DPPH), de color violeta, tiene un electrón desapareado y se decolora hasta amarillo pálido por la reacción con una sustancia antioxidante, siendo medida espectrofotométricamente a 517 nm. Por diferencia de absorbancia se determina el porcentaje de captación de radical libre DPPH a una concentración de 20 mg L-1 . DPPH al 0.1 mM (PM= 394.3 mg mmol-1 ) se diluye con metanol al 80 %. Para las lecturas se tomaron 100 μL de muestra, se utilizó metanol al 80 % como valor de referencia y se adicionaron a un micro tubo con 1900 μL de DPPH. Se dejaron reposar por 30 min en obscuridad y a temperatura ambiente. La lecturas se hicieron de forma aleatorizada en un espectro absorción UV/Visible leyendo absorbancia a una longitud de 517 nm. Los resultados se expresaron en % de inhibición % 100 5.3. ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE: MÉTODO ABTS Este método es el más adecuado para evaluar la capacidad antioxidante de compuestos que puedan presentar una absorbancia máxima cercana al 30
espectro infrarrojo (700-750 nm) como las antocianinas, pero una de las ventajas que tiene esta técnica es que presenta varios máximos de absorbancia; 414, 654, 754, y 815 por lo que puede adaptarse a diferentes compuestos (Moon y Shibamoto, 2009). El ABTS es un compuesto coloreado, entre azul marino y morado oscuro, cuya naturaleza simula lo que sería una especie reactiva de oxígeno o radical libre. Se emplea para determinar la capacidad antioxidante de materiales biológicos, compuestos puros o extractos de plantas de naturaleza hidrofílica o lipofílica, este radical debe ser generado a partir de reacciones ya sean químicas o enzimáticas y es soluble en agua o solventes orgánicos (Kuskoski y col., 2005). Se preparó la solución madre de ABTS, pesando 0.1920 g de ABTS (SIGMA: A1888) y se agregaron 331 mg de K2S2O8 en un matraz aforado de 50 mL, se agregó un poco de agua desionizada para disolver, una vez disuelto se aforó a 50 mL llegando a una concentración final de 2.45 mM. La solución se transfirió a un tubo para centrífuga de 5º mL envuelto en papel aluminio para protegerlo de la luz. Se requieren mínimo de 16 horas para que se genere el radical). Se pesaron 25 mg de cada extracto y se colocaron en tubos para centrífuga de 15 mL previamente envueltos en papel aluminio para protegerlos de la luz y se diluyeron en un volumen de 5 mL de metanol al 80 % cada uno, obteniendo una concentración final de 5 mg mL -1 de muestra. Se tomó 1 mL de la solución madre de ABTS y se diluyó en 40-50 mL de metanol, se ajustó hasta una lectura entre 0.68 y 0.72 nm en el espectro de absorción de luz visible. En micro tubos de 1.5 mL, se colocaron 10 μL de muestra más 1 mL del ABTS (todo por triplicado). Se mezclaron en vórtex por 45 s. Se dejó reposar la muestra por 8 min, en completa oscuridad (Miller y col., 1993). Se leyó absorbancia en un espectro absorción UV/Visible a una longitud de 734 nm. Las lecturas se realizaron en celdas de cuarzo, se colocó una celda de cuarzo con alcohol al 80 % para usar como blanco. Las muestras se leyeron de forma aleatorizada. Los resultados se expresaron en % de inhibición 31
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Liofilizados de fenoles, flavonoides y antocianinas hechos a partir de extractos<br />
metanólicos puros de frutos de fresa de las variedades extranjeras Chiflon,<br />
Cristal, Festival, Albión y las dos variedades mexicanas de reciente liberación<br />
Jacona y Zamorana. Los extractos fueron obtenidos y valorados en su<br />
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por Chávez y col. (2011).<br />
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El fundamento del método desarrollado por Brand y col., en 1995, consiste en<br />
que este radical (DPPH), de color violeta, tiene un electrón desapareado y se<br />
decolora hasta amarillo pálido por la reacción con una sustancia antioxidante,<br />
siendo medida espectrofotométricamente a 517 nm. Por diferencia de<br />
absorbancia se determina el porcentaje de captación de radical libre DPPH a<br />
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Los resultados se expresaron en % de inhibición<br />
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Este método es el más adecuado para evaluar la capacidad antioxidante de<br />
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