Chang C T101 Insert - Irvine Scientific
Chang C T101 Insert - Irvine Scientific
Chang C T101 Insert - Irvine Scientific
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<strong>Chang</strong> Medium ® C<br />
For Human Amniotic Fluid Cells<br />
Catalog No. <strong>T101</strong>-019, <strong>T101</strong>-059, C100+C106, C101+C108<br />
For in vitro diagnostic use.<br />
Zum Gebrauch in der in vitro Diagnostik.<br />
Per uso diagnostico in vitro.<br />
Para uso en diagnóstico in vitro.<br />
Pour l’usage diagnostique in vitro.<br />
Para a utilização em diagnóstico in vitro.<br />
Για in vitro διαγνωστική χρήση.<br />
In vitro diagnostikum.<br />
Til in vitro-diagnostik.<br />
In vitro diagnostiseen käyttöön.<br />
Lietošanai in vitro diagnostikā.<br />
Voor in vitro diagnostisch gebruik.<br />
Do stosowania w diagnostyce in vitro.<br />
Pentru utilizarea fertilizării in vitro<br />
För in vitro-diagnostik.<br />
In vitro diagnostiliseks kasutamiseks.<br />
In vitro diagnosztikai célra.<br />
Skirta in vitro diagnostikos tyrimams.<br />
Symbols:<br />
Storage Temperature for :<br />
<strong>T101</strong>-019,<strong>T101</strong>-059,<br />
C100, C106 and C101<br />
European Representative Storage Temperature for:<br />
MPIE<br />
Schutweg 13A<br />
5145 NP Waalwijk, The Netherlands<br />
C108<br />
0050<br />
See instructions<br />
for use.<br />
Catalog Number<br />
Lot Number<br />
Sterilized using aseptic<br />
processing techniques<br />
(filtration)<br />
Expiration:<br />
Year - Month - Day<br />
Caution: See instructions<br />
for use<br />
CE Mark<br />
MPIE Schutweg 13a<br />
5145 NP Waalwijk,<br />
The Netherlands<br />
ENGLISH<br />
INTENDED USE<br />
<strong>Chang</strong> Medium C may be used for the following<br />
applications:<br />
1. the primary culture of amniotic fluid cells<br />
2. growing passaged amniotic fluid cells<br />
3. the culture of bone marrow cells<br />
4. solid amnion tissue from chorionic villi sampling.<br />
THIS MEDIUM HAS BEEN DESIGNED FOR USE IN<br />
BOTH OPEN (CULTURES EQUILIBRATED WITH A<br />
5% CO 2 ATMOSPHERE) AND CLOSED CULTURE<br />
SYSTEMS (CULTURES FLOODED WITH 5% CO 2<br />
AND INCUBATED WITH THE CULTURE VESSELS<br />
TIGHTLY CAPPED).<br />
Precaution: Do not use <strong>Chang</strong> Medium C components<br />
beyond the expiration date indicated on the<br />
individual labels.<br />
PRODUCT DESCRIPTION<br />
<strong>Chang</strong> Medium ® C was developed for the primary culture<br />
of human amniotic fluid cells for use in karyotyping and<br />
other antenatal genetic testing. THIS FORMULA HAS<br />
BEEN OPTIMIZED FOR BOTH OPEN AND CLOSED<br />
SYSTEMS.<br />
STORAGE AND STABILITY<br />
Store <strong>Chang</strong> Medium C Frozen Supplement at below<br />
-10ºC, <strong>Chang</strong> Medium C Lyophilized Supplement at<br />
2ºC to 8ºC, <strong>Chang</strong> Medium B Basal at 2ºC to 8ºC, and<br />
complete <strong>Chang</strong> Medium C at 2ºC to 8ºC. The <strong>Chang</strong><br />
Medium B Basal must not be frozen.<br />
Protect from fluorescent light.<br />
See individual component bottle labels for specific<br />
expiration dates. Complete <strong>Chang</strong> Medium C may be<br />
stored at 2ºC to 8ºC for 10 days before use without<br />
affecting its function. Storage for longer than 10 days<br />
is not recommended.<br />
DO NOT FREEZE COMPLETE CHANG MEDIUM C.<br />
COMPONENTS<br />
mg/L<br />
Salts …………………………………………….. 7900<br />
Dextrose ………………………………………… 1400<br />
Amino Acids ………………………………………1000<br />
Polypeptides ………………………………………. 66<br />
Vitamins ………………………………………... 22<br />
Deoxyribonucleosides ………………………… 21<br />
Ribonucleosides ………………………………. 20<br />
Sodium Pyruvate ……………………………….. 110<br />
Other Components ……………………………… 8<br />
Hormones and Trace Elements………… 0.0025<br />
Steroid Hormones ………………………….. 0.0013<br />
Newborn Calf Serum ……………………….. 6% v/v<br />
Fetal Bovine Serum ………………………… 6% v/v<br />
PRECAUTIONS AND WARNINGS<br />
This device is intended to be used by staff trained in<br />
procedures that include the indicated application for<br />
which the device is intended.<br />
PREPARATION FOR USE<br />
Lyophilized Supplement<br />
1. Allow <strong>Chang</strong> Medium C Lyophilized Supplement to<br />
equilibrate to room temperature.<br />
2. Using aseptic techniques, add 10 mL or 50 mL of<br />
sterile distilled water to the lyophilizate. The 10 mL<br />
vial is for 90 mL <strong>Chang</strong> Medium B Basal; the 50 mL<br />
vial is for 450 mL <strong>Chang</strong> Medium B Basal.<br />
3. Swirl the vial gently to effect complete solution.<br />
(NOTE: It may be necessary to incubate the vial at<br />
37ºC for 5 to 10 minutes to completely dissolve the<br />
supplement).<br />
4. Aseptically transfer the entire contents of the<br />
reconstituted <strong>Chang</strong> Medium C Supplement to the<br />
bottle of <strong>Chang</strong> Medium B Basal.<br />
Use of <strong>Chang</strong> Medium C for Primary<br />
Cultures: In Situ Methodologies<br />
1. Centrifuge amniotic fluid at low speed to concentrate<br />
the cells.<br />
2. Resuspend the cell pellet in a small volume of the<br />
patient’s own amniotic fluid. For example, aspirate<br />
the supernate of 10 mL of spun amniotic fluid to<br />
0.5 mL above the cell pellet and resuspend. Add<br />
sufficient <strong>Chang</strong> Medium C to the concentrated<br />
cell suspension to allow for final plating volume of<br />
0.5 mL per cover slip (total of 4 coverslips) or 2 mL<br />
perflaskette.<br />
3. Incubate cultures undisturbed at 37ºC 5% CO 2<br />
atmosphere.<br />
4. Flood cultures on day 2 by adding 2 mL of <strong>Chang</strong><br />
Medium C.<br />
5. After 4 to 5 days, the cultures should be checked<br />
for growth. Cultures should be fed once growth has<br />
been observed. Feed cultures by removing all of the<br />
culture supernatant and replacing with 2 mL of fresh<br />
<strong>Chang</strong> Medium C. It is recommended that cultures<br />
be fed every 2 days thereafter.<br />
6. Check cultures for growth on/or after day 5, and<br />
harvest when sufficient colonies are observed.<br />
7. Best results are obtained when the cultures are fed<br />
with <strong>Chang</strong> Medium C the day before the harvest.<br />
Use of <strong>Chang</strong> Medium C for Primary<br />
Cultures: Flask Methodologies<br />
1. Centrifuge amniotic fluid at low speed to concentrate<br />
cells.<br />
2. Resuspend the cell pellet in a small volume of the<br />
patient’s own amniotic fluid. For example, aspirate<br />
the supernate of 10 mL of spun amniotic fluid to 1<br />
mL above the cell pellet and resuspend. Add 4 mL<br />
of <strong>Chang</strong> Medium C for a total volume of 5 mL per<br />
flask.<br />
3. Incubate cultures undisturbed at 37ºC 5% CO 2<br />
atmosphere.<br />
4. Check for growth on day 5. <strong>Chang</strong>e medium with<br />
fresh <strong>Chang</strong> Medium C and harvest if sufficient cell<br />
growth is observed.<br />
5. Check cultures for growth and completely change<br />
medium every other day thereafter until sufficient<br />
colonies are observed and are ready to harvest.<br />
6. Best results are obtained when the cultures are fed<br />
with <strong>Chang</strong> Medium C the day before the harvest.<br />
NOTE: For closed systems, flush each culture flask<br />
with 5% CO 2 - 95% air for 20 seconds. Tighten the caps<br />
to the culture flasks and incubate them at 37°C. (It is<br />
recommended that a sterile plugged pasteur pipet be<br />
attached to the CO 2 source to ensure sterility of the<br />
incoming gas.).<br />
Use of <strong>Chang</strong> Medium C for Growing<br />
Passaged Amniotic Fluid Cells:<br />
To passage the cells, treat the cultures with trypsin (or<br />
pronase, etc.) as you would normally do when cells<br />
are grown in conventional medium. However, protease<br />
treatment should be carefully monitored. Amniotic fluid<br />
cells grown in <strong>Chang</strong> Medium C tend to be more sensitive<br />
to protease treatment than amniotic fluid cells grown in<br />
conventional medium. It may be necessary to modify<br />
your protocol to take this into account.<br />
QUALITY ASSURANCE<br />
STERILITY
2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588<br />
Telephone: 1 949 261 7800 • 1 800 437 5706<br />
Fax: 1 949 261 6522 • www.irvinesci.com<br />
PN 40200 Rev.9<br />
5. Mix the complete <strong>Chang</strong> Medium C well by swirling<br />
the bottle.<br />
6. Add L-Glutamine, 10.0 mL/L (200 mM). Antibiotics<br />
may be added if desired.<br />
Frozen Supplement<br />
1. Thaw <strong>Chang</strong> Medium C Frozen Supplement rapidly<br />
by swirling vial in a 37ºC water bath.<br />
2. Aseptically transfer the entire contents of the thawed<br />
<strong>Chang</strong> Medium C Supplement to the bottle of <strong>Chang</strong><br />
Medium B Basal.<br />
3. Mix the complete <strong>Chang</strong> Medium C well by swirling<br />
the bottle.<br />
4. Add L-Glutamine, 10.0 mL/L (200 mM). Antibiotics<br />
may be added if desired.<br />
ALIQUOTING CHANG MEDIUM C<br />
SUPPLEMENT<br />
Lyophilized Supplement<br />
If you are unable to use the complete <strong>Chang</strong> Medium C<br />
within 10 days you may wish to make up smaller amounts<br />
by following this modification of procedure:<br />
1. Reconstitute <strong>Chang</strong> Medium C Lyophilized<br />
Supplement.<br />
2. Distribute aseptically into convenient-sized aliquots<br />
and freeze.<br />
3. Also aseptically dispense the <strong>Chang</strong> Medium B Basal<br />
into a corresponding number of aliquots.<br />
4. To prepare the complete <strong>Chang</strong> Medium C, add one<br />
aliquot of thawed <strong>Chang</strong> Medium C Supplement to<br />
one aliquot of <strong>Chang</strong> Medium B Basal.<br />
5. Mix well.<br />
Frozen Supplement<br />
1. Thaw <strong>Chang</strong> Medium C Frozen Supplement.<br />
2. Distribute aseptically into convenient-sized aliquots<br />
and refreeze. (NOTE: The supplement vial contains<br />
14 mL or 70 mL. Distribute equally.)<br />
3. Also aseptically dispense the <strong>Chang</strong> Medium B Basal<br />
into a corresponding number of aliquots.<br />
4. To prepare the complete <strong>Chang</strong> Medium C, add one<br />
aliquot of thawed <strong>Chang</strong> Medium C Supplement to<br />
one aliquot of <strong>Chang</strong> Medium B Basal.<br />
5. Mix well.<br />
DIRECTIONS FOR USE<br />
THE pH OF THE MEDIUM USED TO FEED<br />
THE CULTURES MUST BE BETWEEN<br />
6.8 - 7.2 (i.e. the medium must be slightly yellowishsalmon<br />
color). pH can easily be adjusted by placing<br />
the medium in a 5% - 8% CO 2 incubator with the cap<br />
slightly loosened.<br />
The final pH must be 6.8 - 7.2.<br />
For additional details on the use of these products, each<br />
laboratory should consult its own laboratory procedures<br />
and protocols which have been specifically developed<br />
and optimized for your individual medical program.<br />
Serum used in the production of <strong>Chang</strong> Medium C<br />
Supplement has been tested for viral contamination<br />
per CFR Title 9 Part 113.53. It has also been screened<br />
for mycoplasma contamination. Both <strong>Chang</strong> Medium B<br />
Basal and <strong>Chang</strong> Medium C Supplement are sterilized<br />
by filtration through a 0.1 micron filter. Representative<br />
samples of <strong>Chang</strong> Medium B Basal and <strong>Chang</strong> Medium<br />
C Supplement are tested for possible bacteriological<br />
contamination following the sterility testing protocol<br />
described in the current USP Sterility test .<br />
<strong>Chang</strong> Medium ® is a registered trademark of <strong>Irvine</strong><br />
<strong>Scientific</strong>.
DEUTSCH<br />
BESTIMMUNGSZWECK<br />
<strong>Chang</strong> Medium C kann für folgende Methoden eingesetzt<br />
werden:<br />
1. Primär Kultur von Fruchtwasserzellen<br />
2. Zuechten passagierter Fruchtwasserzellen<br />
3. Zuechtung der Kochenmarkzellen<br />
4. Amniongewebe aus Chorion Villi<br />
Probenentnahme.<br />
Dieses Medium wurde hergestellt für die<br />
Verwendung in geoeffnete Kultursystem<br />
(in dem die Kulture ist equilibriert mit<br />
eine 5% CO 2 Atmosphaere), oder fuer ein<br />
geschlossenes Kulturesystem (in dem die<br />
Kultur ueberschwemmt mit 5% CO 2 und<br />
ausgebruetet in einem Behaelter, der fest mit<br />
einer Kappe bedeckt ist).<br />
Achtung: <strong>Chang</strong> Medium C sollte nicht über das<br />
Verfallsdatum (siehe Etikett) hinaus verwendet<br />
werden.<br />
PRODUKTBESCHREIBUNG<br />
<strong>Chang</strong> Medium ® C wird verwendet zur Primärkultur<br />
von humanen Fruchtwasserzellen, Karyotyping und<br />
anderen pränatalen genetischen Testmethoden. Diese<br />
Zusammensetzung wurde optimiert für beide die offene<br />
und geschlossene Systeme<br />
LAGERBEDINGUNGEN UND STABILITÄT<br />
Bewahren Sie <strong>Chang</strong> Medium C Frozen Supplement unter<br />
10°C, <strong>Chang</strong> Medium C Lyophilized Supplement bei 2ºC bis<br />
8ºC, <strong>Chang</strong> Medium B Basal bei 2ºC bis 8ºC, und Complete<br />
<strong>Chang</strong> Medium C bei 2ºC bis 8ºC. <strong>Chang</strong> Medium B Basal<br />
musste nicht gefroren werden.<br />
Vor fluoreszierendem Licht schützen.<br />
Die spezifische Verfalldaten sind auf die einzelne<br />
Flaschenetikett gezeigt. Complete <strong>Chang</strong> Medium C kann<br />
an 2ºC zu 8ºC bis 10 Tage vor Gebrauch aufbewahrte<br />
werden. Aufbewahrung länger als 10 Tage wird nicht<br />
empfohlen.<br />
FRIEREN SIE NICHT COMPLETE CHANG MEDIUM C.<br />
BESTANDTEILE<br />
mg/L<br />
Salze ..................................................................7900<br />
Dextrose ....................................................................1400<br />
Aminosäuren .............................................................1000<br />
Polypeptide .....................................................................66<br />
Vitamine ..........................................................................22<br />
Deoxyribonukleoside .....................................................21<br />
Ribonukleoside ..............................................................20<br />
Natrium Pyruvat ...........................................................110<br />
andere Komponenten ......................................................8<br />
Hormone und Spurenelemente ...............................0.0025<br />
Steroid Hormone .....................................................0.0013<br />
Neugeborene Kalb Serum .......................................6% v/v<br />
Foetal Rinder-Serum ...............................................6% v/v<br />
VORSICHTSMASSNAHMEN UND<br />
WARNUNGEN<br />
Diese Vorrichtung ist für die Anwendung durch Personal<br />
vorgesehen, das in Verfahren ausgebildet wurde, welche<br />
die für diese Vorrichtung angegebene zugelassene<br />
Anwendung beinhalten.<br />
VORBEREITUNG<br />
Lyophilisierte Ergänzung (Lyophilized<br />
Supplement)<br />
1. <strong>Chang</strong> Medium C Lyophilized Supplement sollte beim<br />
Raumtemperatur equilibriert werden.<br />
2. Mit aseptischen Tekniken, fuegen Sie 10 mL oder 50<br />
mL von steriles destilliertes Wasser zum lyophilisierten<br />
Medium hinzu. Die 10 mL Phiole ist fuer das 90 mL<br />
<strong>Chang</strong> Medium B Basal. Die 50 mL Phiole ist fuer das<br />
450 mL <strong>Chang</strong> Medium B Basal.<br />
3. Wirbeln Sie die Phiole leicht um eine komplete Loesung<br />
GEBRAUCHSANWEISUNG<br />
DER pH DES MEDIUMS MIT DEM DIE<br />
KULTUREN GEFUETTERT WERDEN, MUSS<br />
IM BEREICH 6.8–7.2 liegen. (d.h. das Medium<br />
sollte eine leichte gelb-rosa Färbung haben). Der pH kann<br />
einfach eingestellt werden, indem das Medium mit leicht<br />
geöffnetem Verschluss für ca. 30 Minuten in einen 5%-8%<br />
CO 2 Inkubator gestellt wird.<br />
Der pH-Wert muss 6,8 - 7,2 betragen.<br />
Für zusätzliche Details über die Verwendung<br />
dieses Produktes, sollte das Labor seine eigenen<br />
Standardverfahren und Protokolle konsultieren, die<br />
spezifisch für den einzelnen medizinischen Service<br />
entwickelt worden und optimiert worden sind.<br />
VERWENDUNG DES CHANG MEDIUM C FUER<br />
PRIMAERKULTUREN: IN SITU METHODEN.<br />
1. Fruchtwasser/Amniofluessigkeit bei niedrigen<br />
Drehzahlen zentrifugieren, um die Zellen zu<br />
konzentrieren.<br />
2. Das Zellpellet in einer kleinen Menge patienteneigener<br />
Fruchtwasser resuspendieren. zB : den Überstand<br />
von 10 ml der zentrifugierten Fruchtwasser bis auf 0,5<br />
ml über dem Zellpellet aspirieren und resuspendieren.<br />
Ausreichend <strong>Chang</strong> Medium C zu der konzentrierten<br />
Zellsuspension zugeben: 0.5 ml pro Deckglas (maximal<br />
4 Deckgläser) oder 2 ml pro Kulturflasche<br />
3. Kulturen ungestört bei 37°C in 5% CO 2 Atmosphäre<br />
inkubieren.<br />
4. Am 2. Tag die Kulturen mit 2 ml <strong>Chang</strong> Medium C fluten.<br />
5. Nach 4 bis 5 Tagen sollte das Wachstum der Kulturen<br />
überprüft werden. Die Kulturen sollten gefüttert werden,<br />
sobald sie wachsen. Dazu wird der Zellkulturüberstand<br />
entfernt und durch 2 ml neues <strong>Chang</strong> Medium C ersetzt.<br />
Danach sollten die Kulturen alle 2 Tage neu gefüttert<br />
werden.<br />
6. Kulturwachstum am oder nach dem 5.Tag überprüfen,<br />
und wenn ausreichend Kulturen vorhanden sind, ernten.<br />
7. Die besten Ergebnisse werden erzielt, wenn am Tag<br />
vor der Ernte nochmals mit <strong>Chang</strong> Medium C gefüttert<br />
wird.<br />
VERWENDUNG DES CHANG MEDIUM C FUER<br />
PRIMAERKULTUREN: KOLBEN METHODEN.<br />
1. Fruchtwasser bei niedrigen Drehzahlen zentrifugieren,<br />
um die Zellen zu konzentrieren.<br />
2. Das Zellpellet in einer kleinen Menge patienteneigener<br />
Fruchtwasser resuspendieren. zB : den Überstand von<br />
10 ml der zentrifugierten Fruchtwasser bis auf 1 ml über<br />
dem Zellpellet aspirieren und resuspendieren. Fuegen<br />
4 mL von <strong>Chang</strong> Medium C bis ein Endvolumen von<br />
5mL pro kolben.<br />
3. Kulturen ungestört bei 37°C in 5% CO 2 Atmosphäre<br />
inkubieren.<br />
4. Das Wachstum am 5.Tag überprüfen. Ersetzen mit<br />
neues <strong>Chang</strong> Medium C, und wenn ausreichend<br />
Kulturen vorhanden sind, ernten.<br />
5. Ueberpruefen das Kulturwachstum, und vollstaendig<br />
aendern das Medium alle zwei Tage danach bis<br />
ITALIANO<br />
SCOPO<br />
Il <strong>Chang</strong> Medium C può essere usato per le seguenti<br />
applicazioni:<br />
1. colture primarie di cellule di liquido amniotico<br />
2. colture secondarie di cellule di liquido amniotico<br />
3. colture di cellule di midollo osseo<br />
4. tessuto amniotico da villi coriali<br />
QUESTO TERRENO PUO’ ESSERE USATO SIA<br />
IN SISTEMI APERTI (COLTURE EQUILIBRATE IN<br />
ATMOSFERA CON IL 5 % DI CO 2 ) CHE IN SISTEMI<br />
CHIUSI (COLTURE SOTTO FLUSSO CON IL 5% DI CO 2<br />
E INCUBATI IN SUPPORTI CHIUSI ERMETICAMENTE).<br />
Precauzioni: Non usare i componenti del <strong>Chang</strong><br />
Medium C dopo la data di scadenza<br />
indicata sull’etichetta.<br />
DESCRIZIONE DEL PRODOTTO<br />
<strong>Chang</strong> Medium ® C è stato sviluppato per colture primarie<br />
di cellule di fluido amniotico umano per la determinazione<br />
del cariotipo ed altri test genetici prenatali. QUESTA<br />
FORMULA È STATA OTTIMIZZATA SIA PER SISTEMI<br />
APERTI CHE CHIUSI.<br />
ISTRUZIONI PER LA CONSERVAZIONE<br />
Conservare il <strong>Chang</strong> Medium C Frozen Supplemento al di<br />
sotto del 10°C, il <strong>Chang</strong> Medium C Supplemento Liofilizzato,<br />
il <strong>Chang</strong> Medium B Basale e il <strong>Chang</strong> Medium C completo<br />
(liofilo ricostituito + basale) a 2° - 8° C. Il <strong>Chang</strong> Medium B<br />
Basale non deve essere congelato.<br />
Proteggere da luce fluorescente.<br />
STABILITÀ<br />
Far riferimento alle etichette dei singoli componenti per<br />
le date di di scadenza specifiche. Il <strong>Chang</strong> Medium C<br />
completo può essere conservato a 2°- 8° C per 10 giorni<br />
prima dell’uso senza che le prestazioni risultino alterate.<br />
Si raccomanda di non conservare il il CHANG MEDIUM C<br />
Completo a 2-8 °C per più di 10 giorni.<br />
CONCENTRAZIONE DEI COMPONENTI<br />
mg/L<br />
Sale ............................................................................... 7900<br />
Destrosio ....................................................................... 1400<br />
Aminoacidi ..................................................................... 1000<br />
Polipeptidi .......................................................................... 66<br />
Vitamine ............................................................................. 22<br />
Deossiribonucleosidi .........................................................21<br />
Ribonucleosidi ................................................................... 20<br />
Pirovato di Sodio ................................................................ 110<br />
Altri Componenti ................................................................... 8<br />
Ormoni ed Elementi in Tracce .................................... 0.0025<br />
Ormoni Steroidei ......................................................... 0.0013<br />
Siero Bovino Neonatale ................................................ 6% v/v<br />
Siero Bovino Fetale .................................................. 6% v/v<br />
PRECAUZIONI E AVVERTIMENTI<br />
Questo dispositivo è previsto per l’uso da parte di personale<br />
addestrato nelle procedure che comprendono le applicazioni<br />
indicate per le quali il dispositivo è previsto.<br />
PREPARAZIONE PER L’USO<br />
Supplemento Liofilizzato<br />
1. Portare il CHANG MEDIUM C Supplemento Liofilizzato<br />
a temperatura ambiente.<br />
2. Usando supporti sterili, aggiungere 10 mL o 50 mL di<br />
acqua distillata sterile al liofilo. Il flaconcino da 10 mL<br />
è sufficiente per 90 mL di CHANG MEDIUM B Basale;<br />
il flacone da 50 mL è sufficiente per 450mL di <strong>Chang</strong><br />
Medium B Basile.<br />
3. Agitare gentilmente il flacone per rendere omogenea<br />
la soluzione (NOTA: Per dissolvere completamente il<br />
Supplemento può essere necessario incubare a 37 °C<br />
per 5-10 minuti).<br />
4. Trasferire in ambiente sterile l’intero contenuto del<br />
flacone di CHANG MEDIUM C Supplemento ricostituito<br />
nel flacone del CHANG Medium Basale.<br />
Uso di CHANG MEDIUM C per colture<br />
primarie:<br />
METODOLOGIE IN SITU<br />
1. Centrifugare il fluido amniotico a bassa velocità per<br />
concentrare le cellule.<br />
2. Risospendere il pellet in una piccola quantità di liquido<br />
amniotico della paziente. Ad esempio, aspirare il<br />
surnatante di 10 mL di liquido amniotico centrifugato<br />
fino a 0.5 mL al di sopra del pellet e risospendere.<br />
Aggiungere alla soluzione concentrata il CHANG<br />
MEDIUM C in modo da ottenere un volume finale di<br />
0.5 mL per cover slip (per un totale di 4 cover slips) o<br />
di 2 mL per fiasca.<br />
3. Incubare le colture a 37 °C in atmosfera al 5% di CO 2 .<br />
4. Al secondo giorno, aggiungere 2 mL di CHANG<br />
MEDIUM C alle colture.<br />
5. Dopo 4 o 5 giorni, controllare la crescita delle colture.<br />
Arricchire le colture non appena si osserva una<br />
crescita rimuovendo il surnatante e sostituendolo con<br />
2 mL di CHANG MEDIUM C fresco. Si raccomanda di<br />
continuare ad arricchire le colture in questo modo ogni<br />
due giorni.<br />
6. Controllare la crescita delle colture dopo 5 giorni e<br />
prelevarle quando si osservano sufficienti colonie.<br />
7. Risultati migliori si ottengono arricchendo con CHANG<br />
MEDIUM C le colture il giorno prima della raccolta.<br />
Uso di CHANG MEDIUM C per colture<br />
primarie:<br />
METODOLOGIE IN FIASCA<br />
1. Centrifugare il fluido amniotico a bassa velocità per<br />
concentrare le cellule.<br />
2. Risospendere il pellet in una piccola quantità di liquido<br />
amniotico della paziente. Ad esempio, aspirare il<br />
surnatante di 10 mL di liquido amniotico centrifugato fino<br />
a 1 mL al di sopra del pellet e risospendere. Aggiungere<br />
4 mL di CHANG MEDIUM C per raggiungere un volume<br />
totale di 5 mL per fiaschetta.<br />
3. Incubare le colture a 37 °C in atmosfera al 5% di CO 2 .<br />
4. Controllare la crescita al 5° giorno . Sostituire il terreno<br />
con CHANG MEDIUM C fresco e raccogliere se si<br />
osserva una sufficiente crescita cellulare.<br />
5. Tenere sotto controllo la crescita e sostituire il terreno<br />
ogni giorno successivo al quinto fino a che le colonie<br />
sono in quantità sufficiente e pronte per la raccolta.<br />
6. I migliori risultati si ottengono con colture arricchite con<br />
CHANG MEDIUM C il giorno prima della raccolta.<br />
NOTA: Per sistemi chiusi, mettere le<br />
fiaschette sotto flusso di aria al 5 % di CO 2<br />
per 20 secondi. Avvitare accuratamente i<br />
tappi delle fiaschette e incubarle a 37 °C<br />
(Si raccomanda di collegare una pipetta<br />
Pasteur sterile e tappata alla fonte di CO 2<br />
per garantire la sterilità del gas entrante).<br />
Uso di CHANG MEDIUM C per colture<br />
secondarie<br />
di liquido amniotico:<br />
Trattare la coltura con tripsina (o pronase ecc.) come nel<br />
caso di cellule in coltura in terreno convenzionale. In ogni<br />
caso il trattamento con proteasi deve essere accuratamente<br />
monitorato. Le cellule del liquido amniotico coltivate nel<br />
terreno CHANG MEDIUM C sono generalmente più sensibili<br />
al trattamento con proteasi di quelle coltivate protease<br />
coltivate in un terreno tradizionale. In ragione di ciò può<br />
essere necessario modificare il protocollo<br />
ASSICURAZIONE DI QUALITÀ
zu ergeben. (ANMERKUNG: Es kann notwendig sein,<br />
die Phiole an 37ºC fuer 5 bis 10 Minuten auszubrüten,<br />
damit vollständig die Ergänzung aufzulösen.<br />
4. Bringen Sie den gesamten Inhalt des wiederhergestellten<br />
<strong>Chang</strong> Medium C Supplement auf die Flasche von<br />
<strong>Chang</strong> Medium B basal.<br />
5. Wirbeln Sie die Flasche, damit das Complete <strong>Chang</strong><br />
Medium C gruendlich gemischt ist.<br />
6. Fuegen Sie L-Glutamin, 10 mL/L (200 mm). Falls<br />
gewunscht, koennen Sie Antibiotika hinzufuegen.<br />
Gefrorene Ergänzung (Frozen Supplement)<br />
1. Tauen Sie <strong>Chang</strong> Medium C Frozen Supplement schnell<br />
auf, indem Sie wirbeln die Phiole in einem Wasserbad<br />
37ºC.<br />
2. Bringen Sie den gesamten Inhalt des aufgetauten<br />
CHANG MEDIUM C Supplement auf die Flasche von<br />
<strong>Chang</strong> Medium B Basal.<br />
3. Wirbeln Sie die Flasche damit das Complete <strong>Chang</strong><br />
Medium C gruendlich gemischt ist.<br />
4. Fuegen Sie L-Glutamin, 10 mL/L (200 mm) hinzu. Falls<br />
gewuenscht, Antibiotika koennte auch hinzufuegen.<br />
ALIQUOTEN CHANG MEDIUM C ERGÄNZUNG<br />
Lyophilisierte Ergänzung (Lyophilized<br />
Supplement)<br />
1. Wenn Sie das Complete <strong>Chang</strong> Medium C nicht<br />
innerhalb 10 Tage verwendet kann, dann koennen<br />
Sie kleinere Menge machen, indem Sie die Verfahren<br />
folgen:<br />
2. Wiederherstellen Sie das <strong>Chang</strong> Medium C Lyophilized<br />
Supplement.<br />
3. Aseptisch Verteilen Sie es in Aliquots und frieren Sie<br />
sie.<br />
4. Teilen Sie das <strong>Chang</strong> Medium B Basal in Aliquots aus.<br />
5. Vorbereitung des Complete <strong>Chang</strong> Medium C: fuegen<br />
Sie ein Aliquot von aufgetautem <strong>Chang</strong> Medium C<br />
Supplement zu einem Aliquot von <strong>Chang</strong> Medium B<br />
Basal hinzu.<br />
6. Mischen Sie sie gruendlich.<br />
Gefrorene Ergänzung (Frozen Supplement)<br />
1. Tauen Sie das <strong>Chang</strong> Medium C Frozen Supplement<br />
2. Aseptisch verteilen Sie es in Aliquots und frieren Sie sie<br />
wieder (ANMERKUNG: Die Supplement Phiole enthaelt<br />
14 mL oder 70 mL. Verteilen Sie es gleichmaessig).<br />
3. Aseptisch teilen Sie <strong>Chang</strong> Medium B Basal in<br />
entsprechende Aliquots aus.<br />
4. Vorbereitung des Complete <strong>Chang</strong> Medium C: fuegen<br />
Sie ein Aliquot von aufgetautem <strong>Chang</strong> Medium C<br />
Supplement zu einem Aliquot von <strong>Chang</strong> Medium B<br />
Basal hinzu.<br />
5. Mischen Sie sie gruendlich<br />
ausreichende Kulturen vorhanden sind.<br />
6. Die besten Ergebnisse werden erzielt, wenn die<br />
Kulturen vor dem Tag der Ernte mit <strong>Chang</strong> Medium C<br />
gefüttert wird.<br />
ANMERKUNG: Für geschlossene Systeme spuelen Sie<br />
jede Kulturflasche mit 5% CO 2 - 95% Luft für 20 Sekunden.<br />
Verschliessen Sie die Kappen zu den Kulturflaschen fest<br />
und brüten Sie sie an 37° C. aus (es wird empfohlen, daß<br />
eine sterile verstopfte Pasteur Pipette wird angeschlossen<br />
an die CO 2 -Quelle, um Sterilität des ankommenden Gases<br />
zu sichern).<br />
VERWENDUNG DES CHANG MEDIUM C<br />
FUER ZUECHTUNG DER PASSAGIERTEN<br />
KULTUREN FRUCHTWASSERZELLEN.<br />
Zum Passagieren der Zellen werden die Kulturen mit<br />
Trypsin (oder Pronase, etc.) behandelt. Genau so, als<br />
wären die Zellen in einem konventionellen Medium<br />
gewachsen. Allerdings sollte die Protease Behandlung<br />
sorgfältig beobachtet werden, da Fruchtwasserzellen, die<br />
in <strong>Chang</strong> Medium C kultiviert wurden, sensitiver reagieren<br />
nach Protease Behandlung als Zellen in konventionellen<br />
Medien. Unter Umständen muss das Protokoll entsprechend<br />
modifiziert werden.<br />
QUALITAETSSICHERUNG<br />
STERILITÄT<br />
Serum für die Produktion von <strong>Chang</strong> Medium C wurde<br />
auf virale Kontamination nach CFR Title 9 Part 113.53<br />
und Mycoplasma Kontamination getestet. Beide <strong>Chang</strong><br />
Medium B Basal und <strong>Chang</strong> Medium C Supplement<br />
wurde sterilisiert durch Filtration mit einem 0.1µ Filter.<br />
Die Proben von <strong>Chang</strong> Medium B Basal und <strong>Chang</strong><br />
Medium C Supplement sind auf mögliche bakterielle<br />
Kontamination getestet nach dem Sterilitäts Test<br />
Protokoll beschrieben unter Sterilität (durch aktuellen<br />
USP Sterility Test ).<br />
<strong>Chang</strong> Medium ® ist ein eingetragenes Warenzeichen von<br />
<strong>Irvine</strong> <strong>Scientific</strong>.<br />
5. Miscelare accuratamente agitando il flacone.<br />
6. Aggiungere L-Glutamina, 10.0 mL/L (200 mM). Se si<br />
desidera si possono anche aggiungere antibiotici.<br />
Supplemento Congelato<br />
1. Scongelare il CHANG MEDIUM C Supplemento<br />
congelato agitando delicatamente il flacone in un bagno<br />
di acqua a 37°C.<br />
2. Trasferire in ambiente sterile l’intero contenuto<br />
del flacone di CHANG MEDIUM C Supplemento<br />
decongelato nel flacone del CHANG MEDIUM B Basale.<br />
3. Miscelare accuratamente agitando il flacone.<br />
4. Aggiungere L-Glutamina, 10.0 mL/L (200mM). Se si<br />
desidera si possono anche aggiungere antibiotici.<br />
SUDDIVISIONE DEL CHANG C SUPPLEMENTO<br />
IN ALIQUOTE<br />
Supplemento Liofilizzato<br />
Se l’intero flacone di CHANG MEDIUM C Completo non<br />
può essere utilizzato entro 10 giorni è possibile aliquotare<br />
la soluzione seguendo la procedura indicata di seguito:<br />
1. Ricostituire il CHANG MEDIUM C Supplemento<br />
Liofilizzato.<br />
2. Aliquotare in ambiente sterile e congelare.<br />
3. Sempre in ambiente sterile dispensare il CHANG<br />
MEDIUM B Basale nelle aliquote corrispondenti.<br />
4. Per preparare il CHANG MEDIUM C completo,<br />
aggiungere una un’aliquota di CHANG MEDIUM C<br />
Supplemento ad una aliquota di CHANG MEDIUM B<br />
Basale.<br />
6. Mescolare accuratamente.<br />
Supplemento Congelato<br />
1. Scongelare il CHANG MEDIUM C Supplemento<br />
congelato.<br />
2. Aliquotare in ambiente sterile e ricongelare (Nota: Il<br />
flacone del Supplemento contiene 14 mL o 70 mL.<br />
Distribuire equamente.)<br />
3. Sempre in ambiente sterile dispensare il contenuto del<br />
flacone di CHANG MEDIUM B Basale nelle aliquote<br />
corrispondenti.<br />
4. Per preparare il CHANG MEDIUM C completo,<br />
aggiungere ad una aliquota di di CHANG MEDIUM<br />
C Supplemento scongelato una aliquota di CHANG<br />
MEDIUM B Basale.<br />
5. Mescolare accuratamente.<br />
ISTRUZIONI PER L’USO<br />
Il pH DEL TERRENO USATO PER ARRICCHIRE<br />
LE COLTURE DEVE ESSERE FRA 6.8 A 7.2 (IL<br />
TERRENO DEVE ESSERE LEGGERMENTE<br />
GIALLO TENDENTE AL SALMONE). IL pH<br />
PUO’ ESSERE FACILMENTE REGOLATO PONENDO IL<br />
TERRENO IN UN INCUBATORE CON CO 2 AL 5% - 8%<br />
CON IL TAPPO LEGGERMENTE SVITATO.<br />
Il pH finale deve essere fra 6.8 e 7.2.<br />
Per ulteriori dettagli sull’uso di questo prodotto, consultare<br />
le vostre proprie procedure di laboratorio e i protocolli che<br />
sono stati specificatamente sviluppati e ottimizzati per il<br />
vostro individuale programma medicale.<br />
STERILITA’<br />
Il siero usato per la produzione del CHANG MEDIUM C<br />
Supplemento è stato testato per escludere contaminazione<br />
virale seguendo la procedura CFR Titolo 9 Parte 113.53.<br />
Il siero è stato anche testato per determinare eventuali<br />
contaminazioni da micoplasma. ll CHANG MEDIUM B<br />
Basale e il CHANG MEDIUM C Supplemento sono stati<br />
sterilizzati per filtrazione mediante filtro da 0.2 mm e sono<br />
stati testati per escludere eventuale contaminazione<br />
batteriologica seguendo il protocollo delle prove di sterilità<br />
descritto nella corrente test di sterilità USP .<br />
<strong>Chang</strong> Medium ® è un marchio registrato di <strong>Irvine</strong> <strong>Scientific</strong>.
ESPAÑOL<br />
APLICACIÓN<br />
El <strong>Chang</strong> Medium C se puede utilizar en las siguientes<br />
aplicaciones:<br />
1. Cultivo primario de células de líquido amniótico.<br />
2. Cultivo de células del líquido amniótico derivadas<br />
del cultivo primario.<br />
3. Cultivo de células de médula ósea.<br />
4. Tejido amniótico sólido obtenido de vellosidades<br />
coriónicas.<br />
ESTE MEDIO HA SIDO DISEÑADO PARA SER<br />
UTILIZADO TANTO EN INCUBADORES DE CO 2<br />
(CULTIVOS EQUILIBRADOS EN UNA ATMOSFERA<br />
CON 5% CO 2 ) COMO EN SISTEMAS DE CULTIVO<br />
CERRADO (CULTIVOS PERFUNDIDOS CON 5% DE<br />
CO 2 E INCUBADOS EN FRASCOS HERMÉTICAMENTE<br />
CERRADOS.<br />
Precaución: No use los componentes del <strong>Chang</strong> Medium<br />
C después de la fecha de caducidad indicada<br />
en las distintas etiquetas individuales.<br />
DESCRIPCIÓN DEL PRODUCTO<br />
<strong>Chang</strong> Medium ® C es un medio desarrollado para<br />
el cultivo primario de células humanas de líquido<br />
amniótico, para análisis de cariotipo y otras pruebas<br />
genéticas de diagnóstico prenatal. ESTA FORMULA<br />
SE HA OPTIMIZADA PARA TRABAJAR TANTO<br />
EN SISTEMAS ABIERTOS COMO CERRADOS.<br />
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD<br />
Conservar el Suplemento Congelado del <strong>Chang</strong> Medium C<br />
por debajo de -10°C, el Suplemento Liofilizado del <strong>Chang</strong><br />
Medium C entre 2°C y 8°C, el <strong>Chang</strong> Medium B Basal<br />
entre 2°C y 8°C, y el <strong>Chang</strong> Medium C completo entre 2°C<br />
y 8°C. El <strong>Chang</strong> Medium B Basal no se debe congelar.<br />
Proteger este producto de la luz fluorescente.<br />
Compruebe las etiquetas individuales de cada botella<br />
para ver las fechas de caducidad específicas de<br />
cada componente. El <strong>Chang</strong> Medium C Completo<br />
se puede conservar refrigerado entre 2ºC y 8ºC un<br />
máximo de 10 días sin que ello altere su funcionalidad.<br />
No se recomienda almacenarlo más de 10 días.<br />
NO CONGELE EL CHANG MEDIUM C COMPLETO.<br />
COMPONENTES<br />
mg/L<br />
Sales...............................................................7900<br />
Dextrosa..........................................................1400<br />
Aminoácidos....................................................1000<br />
Polipéptidos.........................................................66<br />
Vitaminas.............................................................22<br />
Desoxirribonucleósidos........................................21<br />
Ribonucleósidos..................................................20<br />
Piruvato de Sodio...............................................110<br />
Otros Componentes...............................................8<br />
Hormonas y otros elementos traza................0.0025<br />
Hormonas Esteroides....................................0.0013<br />
Suero de ternera recién nacida.....................6% v/v<br />
Suero fetal de ternera...................................6% v/v<br />
PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS<br />
Este dispositivo debe ser utilizado por personal<br />
capacitado en procedimientos que incluyan la aplicación<br />
prevista para el mismo.<br />
PREPARACIÓN DEL PRODUCTO<br />
Suplemento liofilizado<br />
1. Dejar equilibrar a temperatura ambiente el<br />
Suplemento Liofilizado del <strong>Chang</strong> Medium C.<br />
2. Utilizando condiciones asépticas, añadir 10 mL o 50 mL<br />
de agua destilada estéril al liofilizado. El vial de 10 mL<br />
es para el <strong>Chang</strong> Medium B Basal de 90 mL; el vial de<br />
50 mL es para el <strong>Chang</strong> Medium B Basal de 450 mL.<br />
3. Remueva suavemente el vial para facilitar<br />
la completa disolución (NOTA: puede ser<br />
necesario calentar el vial 5 minutos a 37ºC<br />
Utilización de <strong>Chang</strong> Medium C en cultivos<br />
primarios: Metodología In Situ<br />
1. Centrifugar el líquido amniótico a baja velocidad para<br />
concentrar las células.<br />
2. Resuspender el precipitado de células en un volumen<br />
pequeño del propio líquido amniótico de la paciente. Por<br />
ejemplo, aspirar el sobrenadante de 10 mL dejando 0.5<br />
mL de líquido, y resuspender. Añadir suficiente <strong>Chang</strong><br />
Medium C a la suspensión concentrada de células<br />
para alcanzar un volumen de cultivo final de 0.5 mL por<br />
cubre-objetos (un total de 4 cubre-objetos por muestra),<br />
o 2 mL por frasco.<br />
3. Sin perturbarlos, incubar los cultivos a 37°C en una<br />
atmósfera de 5% CO 2 .<br />
4. Realimentar los cultivos en el día 2 añadiendo 2 mL de<br />
<strong>Chang</strong> Medium C.<br />
5. A los 4 o 5 días, comprobar el crecimiento en los<br />
cultivos. Una vez que se observe crecimiento, aspirar<br />
todo el medio de cultivo y añadir 2 mL de <strong>Chang</strong> Medium<br />
C fresco. A partir de este momento, es recomendable<br />
cambiar el medio de los cultivos cada 2 días.<br />
6. Comprobar el crecimiento de los cultivos durante o<br />
después del quinto día, y sacrificar cuando se observe<br />
que hay suficientes colonias.<br />
7. Se obtienen mejores resultados cuando se realiza un<br />
cambio de medio con <strong>Chang</strong> Medium D el día anterior<br />
al sacrificio.<br />
Utilización de <strong>Chang</strong> Medium C en cultivos<br />
primarios: Metodología en frasco.<br />
1. Centrifugar el líquido amniótico a baja velocidad para<br />
concentrar las células.<br />
2. Resuspender el precipitado celular en un volumen<br />
pequeño del propio líquido amniótico de la paciente.<br />
Por ejemplo, aspirar el sobrenadante de 10 mL dejando<br />
1 mL de líquido y resuspender. Añadir 4 mL de <strong>Chang</strong><br />
Medium C para obtener un volumen total de 5 mL por<br />
frasco.<br />
3. Sin perturbarlos, incubar los cultivos a 37°C en una<br />
atmósfera de 5% CO 2 .<br />
4. Revisar el crecimiento en el día 5. Cambiar el medio<br />
por <strong>Chang</strong> Medium C fresco y sacrificar el cultivo si<br />
observa un crecimiento suficiente .<br />
5. Comprobar el crecimiento de los cultivos y cambiar<br />
completamente el medio cada día de aquí en adelante,<br />
hasta observar un número suficiente de colonias para<br />
sacrificar.<br />
6. Se obtienen mejores resultados cuando se realiza un<br />
cambio de medio con <strong>Chang</strong> Medium C el día anterior<br />
al sacrificio.<br />
NOTA: para sistemas cerrados, inyecte cada<br />
frasco de cultivo con una mezcla de 5%<br />
CO 2 – 95% aire durante 20 segundos. Cierre<br />
herméticamente los frascos e incúbelos a<br />
37ºC . (Se recomienda unir una pipeta pasteur<br />
estéril a la fuente de CO 2 para garantizar la<br />
esterilidad del gas que se inyecta en el medio<br />
de cultivo).<br />
UTILIZACIÓN DE CHANG MEDIUM C EN<br />
EL CULTIVO DE CÉLULAS DEL LÍQUIDO<br />
AMNIÓTICO DERIVADAS DE CULTIVO<br />
PRIMARIO.<br />
Para realizar pases de los amniocitos cultivados, tratar<br />
los cultivos con tripsina ( o pronasa, etc.) como se tratan<br />
normalmente las células en un medio convencional.<br />
Es conveniente monitorizar los cultivos al tratarlos<br />
con proteasas. Los amniocitos cultivados en Medio<br />
<strong>Chang</strong> C tienden a ser más sensibles al tratamiento con<br />
FRANÇAIS<br />
UTILISATION<br />
Le milieu <strong>Chang</strong> C peut être utilisé pour les applications<br />
suivantes :<br />
1. La culture primaire des cellules du liquide<br />
amniotique.<br />
2. Le repiquage des cellules du liquide amniotique.<br />
3. La culture des cellules de la moelle osseuse.<br />
4. La culture des tissus des prélèvements de villosités<br />
choriales.<br />
CE MILIEU A ETE CONCU POUR UNE UTILISATION<br />
DANS DES SYSTEMES DE CULTURE AUSSI BIEN<br />
OUVERTS (CULTURES EQUILIBREES EN ATMOSPHERE<br />
CO 2 5%) QUE FERMES (CULTURES INNONDEES AVEC<br />
5% CO 2 ET INCUBEES AVEC LES RECIPIENTS DE<br />
CULTURE HERMETIQUEMENT FERMES).<br />
Attention: Ne pas utiliser les composantes du milieu<br />
<strong>Chang</strong> C au-delà des dates d’expirations<br />
figurant sur leurs étiquettes individuelles.<br />
PRODUCT DESCRIPTION<br />
Le milieu <strong>Chang</strong> ® C a été développé pour la culture<br />
primaire de cellules amniotiques humaines utilisées pour<br />
les caryotypes et autres tests de diagnostic génétique<br />
anténatal. Cette formule a été optimisée pour les<br />
systèmes ouverts et fermés.<br />
CONSERVATION ET STABILITÉ<br />
Conserver le supplément congelé du milieu <strong>Chang</strong> C audessous<br />
de 10°C. Le supplément lyophilisé, le milieu de<br />
base <strong>Chang</strong> B et le milieu complet <strong>Chang</strong> C doivent être<br />
conservés entre 2° et 8°C. Le milieu de base <strong>Chang</strong> B ne<br />
doit pas être congelé.<br />
Protéger de la lumière fluorescente.<br />
Pour les dates d’expirations, se conférer aux indications sur<br />
les flacons des différentes composantes. Le milieu complet<br />
<strong>Chang</strong> C peut être conservé entre 2° et 4°C pendant 10<br />
jours avant son utilisation sans que ses fonctions soient<br />
affectées. La conservation au-delà de 10 jours est non<br />
recommandée.<br />
COMPOSANTS<br />
mg/L<br />
Sels.................................................................7900<br />
Dextrose..........................................................1400<br />
Acides aminés........................................................1000<br />
Polypeptides...............................................................66<br />
Vitamines...................................................................22<br />
Désoxyribonucléotides...............................................21<br />
Ribonucléotides..........................................................20<br />
Pyruvate de sodium..................................................110<br />
Autres composants.......................................................8<br />
Hormones et autres éléments traces..................0.0025<br />
Hormones stéroïdes............................................0.0013<br />
Sérum de veau nouveau-né................................6% v/v<br />
Sérum de veau fœtal..........................................6% v/v<br />
PRÉCAUTION ET MISE EN GARDE<br />
Ce dispositif est destiné à une utilisation par un personnel<br />
formé aux procédures comprenant l’application indiquée<br />
pour laquelle le dispositif est destiné.<br />
PRÉPARATION<br />
Supplément lyophilisé<br />
1. Permettre au supplément lyophilisé <strong>Chang</strong> C de<br />
s’équilibrer à température ambiante.<br />
2. Ajouter stérilement 10ml (correspondants aux<br />
flacons 90ml du milieu de base <strong>Chang</strong> B) ou 50 ml<br />
(correspondants aux flacons 450ml du milieu de base<br />
<strong>Chang</strong> B) d’eau distillée stérile.<br />
3. Tourner les tubes doucement pour affecter la solution<br />
complète. (Remarque : il serait peut être nécessaire<br />
d’incuber les flacons à 37°C pendant 5 à 10 minutes<br />
pour dissoudre complètement le supplément).<br />
4. Transférer stérilement le contenu du supplément <strong>Chang</strong><br />
C reconstitué flacons de milieu de base <strong>Chang</strong> B.<br />
UTILISATION DU MILIEU CHANG C POUR<br />
CULTURES PRIMAIRES : METHODE IN SITU<br />
1. Centrifuger le liquide amniotique à faible vitesse pour<br />
concentrer les cellules.<br />
2. Resuspendre le culot cellulaire dans un petit volume<br />
du liquide amniotique de la patiente. Par exemple,<br />
aspirer le surnageant obtenu en centrifugeant 10 ml<br />
de liquide amniotique et suspendre le culot dans 0,5<br />
ml de ce liquide. Ajouter suffisamment de milieu <strong>Chang</strong><br />
C à la suspension concentrée des cellules pour obtenir<br />
un volume final nécessaire pour 4 lamelles (0,5 ml par<br />
lamelle) ou 2 ml par petit flacon de culture.<br />
3. Incuber les cultures sans agitation à 37°C en<br />
atmosphère 5% CO 2 .<br />
4. Alimenter les cellules au deuxième jour en ajoutant 2<br />
ml de milieu <strong>Chang</strong> C.<br />
5. Après 4 à 5 jours, la croissance doit être examinée.<br />
Dès que des foyers ont été observés, les cultures<br />
doivent être alimentées en enlevant le surnageant et<br />
en le remplaçant par 2 ml de milieu <strong>Chang</strong> C frais. Il<br />
est ensuite recommandé d’alimenter les cultures tous<br />
les deux jours.<br />
6. Examiner la croissance des cultures au/après<br />
le cinquième jour, récolter les cellules lorsque<br />
suffisamment de colonies ont été observées.<br />
7. Les meilleurs résultats sont obtenus lorsque les cultures<br />
sont alimentées la veille de la récolte avec du milieu<br />
<strong>Chang</strong> C frais.<br />
UTILISATION DU MILIEU CHANG C POUR<br />
CULTURES PRIMAIRES : METHODE EN<br />
FLACON<br />
1. Centrifuger le liquide amniotique à faible vitesse pour<br />
concentrer les cellules.<br />
2. Resuspendre le culot cellulaire dans un petit volume<br />
du liquide amniotique de la patiente. Par exemple,<br />
aspirer le surnageant obtenu en centrifugeant 10 ml<br />
de liquide amniotique et suspendre le culot dans 1<br />
ml de ce liquide. Ajouter 4 ml de milieu <strong>Chang</strong> C à la<br />
suspension concentrée des cellules un volume final de<br />
5 ml par flacon de culture.<br />
3. Incuber les cultures sans agitation à 37°C en<br />
atmosphère 5% CO 2 .<br />
4. Examiner la croissance au cinquième jour. <strong>Chang</strong>er le<br />
milieu avec du milieu <strong>Chang</strong> C frais. Récolter les cellules<br />
si la croissance est suffisante.<br />
5. Examiner la croissance et changer complètement le<br />
milieu tous les deux jours ou jusqu’à ce que le nombre<br />
des colonies soit suffisant pour la récolte.<br />
6. Les meilleurs résultats sont obtenus lorsque les cultures<br />
sont alimentées la veille de la récolte avec du milieu<br />
<strong>Chang</strong> C frais.<br />
Remarque : Pour les systèmes fermés inonder chaque<br />
flacon de culture avec 5% CO 2 et 95% air pendant 20<br />
secondes. Bien visser les bouchons des flacons et incuber<br />
à 37°C. (Il est recommandé qu’une pipette pasteur, bouchée<br />
avec du coton et stérile, soit attaché à la source de CO 2 pour<br />
s’assurer de la stérilité du gaz allant dans la boite de culture).<br />
UTILISATION DU MILIEU CHANG C POUR<br />
LE REPIQUAGE DES CELLULES DU LIQUIDE<br />
AMNIOTIQUE<br />
Pour repiquer les cellules, traiter les cultures avec<br />
la trypsine (ou pronase, etc.) comme vous le faites<br />
normalement lorsque les cellules poussent dans un<br />
milieu conventionnel. Cependant, le traitement avec des<br />
protéases doit être conduit prudemment. Les cellules du<br />
liquide amniotique qui poussent dans le milieu <strong>Chang</strong> C ont<br />
tendance à être plus sensibles que celles qui poussent dans
para disolver completamente el suplemento).<br />
4. Tr a n s f e r i r a s é p t i c a m e n t e e l c o n t e n i d o<br />
c o m p l e t o d e l S u p l e m e n t o r e c o n s t i t u i d o<br />
a la botella de <strong>Chang</strong> Medium B Basal.<br />
5. Mezclar el <strong>Chang</strong> Medium C Completo removiendo<br />
bien la botella.<br />
6. Añadir L-Glutamina, 10 mL/L (200mM). Si se desea,<br />
se puede añadir antibióticos.<br />
Suplemento congelado<br />
1. Descongelar el Suplemento Congelado del <strong>Chang</strong><br />
Medium C agitando rápidamente el vial en un baño a<br />
37ºC.<br />
2. Transferir asépticamente el contenido completo del<br />
Suplemento descongelado a la botella de <strong>Chang</strong><br />
Medium B Basal.<br />
3. Mezclar el <strong>Chang</strong> Medium C Completo removiendo bien<br />
la botella.<br />
4. Añadir L-Glutamina 10 mL/L (200mM). Si se desea, se<br />
puede añadir antibióticos.<br />
PREPARACIÓN DE ALÍCUOTAS DE<br />
SUPLEMENTO<br />
DEL CHANG MEDIUM C<br />
Suplemento liofilizado<br />
Si no se va a utilizar el <strong>Chang</strong> Medium C Completo en un<br />
período de 10 días es conveniente preparar cantidades<br />
más pequeñas de medio siguiendo el siguiente protocolo:<br />
1. Reconstituir el Suplemento Liofilizado del <strong>Chang</strong><br />
Medium C.<br />
2. En condiciones asépticas, repartir el suplemento en<br />
alícuotas de un tamaño adecuado y congelarlas.<br />
3. También en condiciones de asepsia, dispensar el <strong>Chang</strong><br />
Medium B Basal en el mismo número de alícuotas.<br />
4. Para preparar el <strong>Chang</strong> Medium C Completo, añadir<br />
una alícuota descongelada de Suplemento de <strong>Chang</strong><br />
Medium C a una alícuota de <strong>Chang</strong> Medium B Basal.<br />
5. Mezclar bien.<br />
Suplemento congelado<br />
1. Descongelar el Suplemento Congelado del <strong>Chang</strong><br />
Medium C.<br />
2. En condiciones asépticas, repartir el suplemento en<br />
alícuotas de un tamaño adecuado y congelarlas (NOTA:<br />
el vial de suplemento contiene 14 mL o 70 mL. Distribuir<br />
uniformemente).<br />
3. Tambien en condiciones de asepsia, dispensar el <strong>Chang</strong><br />
Medium B Basal en el mismo número de alícuotas.<br />
4. Para preparar el <strong>Chang</strong> Medium C Completo, añadir<br />
una alícuota descongelada de Suplemento de <strong>Chang</strong><br />
Medium C a una alícuota de <strong>Chang</strong> Medium B Basal.<br />
5. Mezclar bien.<br />
INSTRUCCIONES DE USO<br />
El pH usado de los medios debe estar entre<br />
6.8 y 7.2 (el medio debe ser de color ligeramente<br />
asalmonado). El pH puede ajustarse fácilmente poniendo<br />
el medio en un incubador al 5% a 8% CO 2 , con el tapón<br />
ligeramente desenroscado durante unos 30 minutos.<br />
El pH final debe ser de 6.8 a 7.2.<br />
Para más detalles sobre la utilización de este producto,<br />
consulte los protocolos de trabajo de su propio laboratorio,<br />
los cuales han sido desarrollados y especialmente<br />
optimizados de acuerdo a su programa médico particular.<br />
proteasas que los cultivados en medios convencionales.<br />
Es recomendable controlar el proceso para reajustar el<br />
protocolo en caso que sea necesario.<br />
CONTROL DE CALIDAD<br />
ESTERILIDAD<br />
El suero usado en la producción de <strong>Chang</strong> Medium C<br />
se ha testado para contaminación viral de acuerdo a la<br />
normativa CFR capítulo 9, apartado 113.53. Asimismo,<br />
se ha comprobado la contaminación por Micoplasma.<br />
El Suplemento del <strong>Chang</strong> Medium C y el <strong>Chang</strong><br />
Medium B Basal están esterilizados por filtración en<br />
filtros de 0.2 micras. Muestras representativas del<br />
<strong>Chang</strong> Medium B Basal y del Suplemento del <strong>Chang</strong><br />
Medium C son testadas para posibles contaminaciones<br />
bacteriológicas siguiendo los protocolos de esterilidad<br />
descritos en el test de esterilidad USP actual.<br />
<strong>Chang</strong> Medium ® es una marca registrada de <strong>Irvine</strong> <strong>Scientific</strong>.<br />
5. Bien mélanger le milieu <strong>Chang</strong> C complet en agitant<br />
les flacons.<br />
6. Ajouter du L-Glutamine, 10mg/l (200mM) et les<br />
antibiotiques.<br />
Supplément congelé<br />
1. Décongeler le supplément congelé <strong>Chang</strong> C rapidement<br />
en agitant le flacon dans un bain marie à 37°C.<br />
2. Transférer stérilement le contenu du flacon du<br />
supplément <strong>Chang</strong> C au flacon du milieu de base <strong>Chang</strong><br />
B.<br />
3. Bien mélanger le milieu complet <strong>Chang</strong> C en agitant le<br />
flacon.<br />
4. Ajouter du L-Glutamine, 10mg/l (200mM) et les<br />
antibiotiques.<br />
PRÉPARATION D’ALIQUOTES DU<br />
SUPPLÉMENT CHANG C<br />
Supplément lyophilisé<br />
Si vous n’êtes pas prêt à utiliser la totalité du milieu complet<br />
<strong>Chang</strong> C dans les 10 jours, vous pourriez le répartir en<br />
petites quantités en suivant le protocole qui suit :<br />
1. Reconstituer le supplément lyophilisé <strong>Chang</strong> C.<br />
2. Répartir stérilement en plusieurs petits volumes à votre<br />
convenance et congeler.<br />
3. Répartir stérilement le milieu de base <strong>Chang</strong> B en un<br />
nombre égale de petits volumes.<br />
4. Préparer le milieu complet <strong>Chang</strong> C en ajoutant une<br />
aliquote du supplément <strong>Chang</strong> C décongelé à un<br />
aliquote du milieu de base <strong>Chang</strong> B.<br />
5. Bien mélanger.<br />
Supplément congelé<br />
1. Décongeler le supplément congelé <strong>Chang</strong> C.<br />
2. Répartir stérilement en plusieurs petits volumes à<br />
votre convenance et congeler. (Remarque : le flacon<br />
du supplément contient soit 14ml soit 70ml. Répartir<br />
équitablement)<br />
3. Répartir stérilement le milieu de base <strong>Chang</strong> B en un<br />
nombre égale de petits volumes.<br />
4. Préparer le milieu complet <strong>Chang</strong> C en ajoutant une<br />
aliquote du supplément <strong>Chang</strong> C décongelé à un<br />
aliquote du milieu de base <strong>Chang</strong> B.<br />
5. Bien mélanger<br />
CONSEILS D’UTILISATION<br />
Le pH du milieu utilise pour alimenter les<br />
cellules doit etre entre 6,8 et 7,2 (le milieu doit<br />
être légèrement de couleur jaunâtre-saumon). Le pH peut<br />
facilement être ajusté en plaçant les flacons du milieu dans<br />
une étuve à CO 2 (5 à 8%), le bouchon légèrement dévissé.<br />
Le pH final doit être entre 6,8 et 7,2.<br />
Pour plus de détails sur l’utilisation de ce produit, chaque<br />
laboratoire doit consulter ses propres procédures et<br />
protocoles spécialement développés et optimisés pour<br />
chaque indication médicale particulière.<br />
un milieu traditionnel. Il est nécessaire d’en tenir compte<br />
dans votre protocole.<br />
ASSURANCE QUALITÉ<br />
STÉRILITÉ<br />
Le sérum utilisée dans la fabrication du supplément<br />
<strong>Chang</strong> C a été testé pour les contaminations virales<br />
selon le code des régulations fédérales CFR Title 9 Part<br />
113.53. Il a été aussi testé pour les contaminations par<br />
mycoplasme. Le milieu de base <strong>Chang</strong> B et le supplément<br />
lyophilisé <strong>Chang</strong> C sont stérilisés par filtration avec des<br />
filtres de 0,2 µm. Des échantillons du milieu de base<br />
<strong>Chang</strong> B et du supplément <strong>Chang</strong> C sont testés pour une<br />
éventuelle contamination bactérienne selon les protocoles<br />
des tests de stérilité courants de la pharmacopée<br />
américaine (USP) .<br />
Milieu <strong>Chang</strong> ® est une marque déposée de <strong>Irvine</strong> <strong>Scientific</strong>.
PORTUGUÊS<br />
UTILIZAÇÃO PREVISTA<br />
O <strong>Chang</strong> Medium C pode ser utilizado nas seguintes<br />
aplicações:<br />
1. Cultura primária de células de líquido amniótico.<br />
2. Cultura de células do líquido amniótico derivadas<br />
da cultura primária.<br />
3. Cultura de células de medula óssea.<br />
4. Tecido amniótico sólido obtido de amostras de<br />
vilosidades coriónicas.<br />
ESTE MEIO FOI CONCEBIDO PARA SER UTILIZADO<br />
EM SISTEMAS ABERTOS (CULTURAS EQUILIBRADAS<br />
NUMA ATMOSFERA COM 5% - 8% CO 2 ) E EM SISTEMAS<br />
DE CULTURA FECHADOS (CULTURAS PERFUNDIDAS<br />
COM 5% DE CO 2 E INCUBADAS EM RECIPIENTES<br />
HERMÉTICAMENTE FECHADOS).<br />
Atenção: Não utilizar componentes do <strong>Chang</strong> Medium<br />
C depois da data de expiração indicada<br />
individualmente em cada rótulo.<br />
DESCRIÇÃO DO PRODUTO<br />
O <strong>Chang</strong> Medium ® C foi desenvolvido para a cultura<br />
primária de células humanas de líquido amniótico,<br />
para análises de cariótipo e outras provas genéticas<br />
de diagnóstico pré-natal. ESTA FÓRMULA ESTÁ<br />
OPTIMIZADA PARA SISTEMAS ABERTOS E FECHADOS.<br />
ESTABILIDADE E CONSERVAÇÃO<br />
Conservar o Suplemento Congelado <strong>Chang</strong> Medium C<br />
inferior a -10°C. O Suplemento Liofilizado <strong>Chang</strong> Medium C<br />
entre 2ºC – 8ºC. O <strong>Chang</strong> Medium B Basal entre 2ºC – 8ºC,<br />
e o <strong>Chang</strong> Medium C Completo entre 2ºC – 8ºC. O <strong>Chang</strong><br />
Medium B Basal não pode ser congelado.<br />
Proteger este produto da luz fluorescente.<br />
Verifique os rótulos individuais de cada recipiente para ver<br />
o prazo de validade específico de cada componente. O<br />
<strong>Chang</strong> Medium C Completo pode conservar-se refrigerado<br />
entre 2ºC e 8ºC no máximo de 10 dias sem que isso altere a<br />
sua funcionalidade. Não se recomenda o armazenamento<br />
por mais de 10 dias.<br />
COMPONENTES<br />
mg/L<br />
Sais .................................................................... 7900<br />
Dextrose ............................................................. 1400<br />
Aminoácidos ....................................................... 1000<br />
Polipéptidos ............................................................ 66<br />
Vitaminas ............................................................... 22<br />
Desoxirribonucleósidos ........................................... 21<br />
Ribonucleósidos ..................................................... 20<br />
Piruvato de Sodio ................................................. 110<br />
Outros Componentes ............................................... 8<br />
Hormonas e traços de outros elementos .......... 0.0025<br />
Hormonas Esteróides .......................................0.0013<br />
Soro Vitelo Recém Nascido ............................. 6% v/v<br />
Soro Bovino Fetal ............................................ 6% v/v<br />
PRECAUÇÕES E AVISOS<br />
Este dispositivo deve ser utilizado por funcionários<br />
treinados em procedimentos aos quais se destina.<br />
PREPARAÇÃO PARA UTILIZAÇÃO<br />
Suplemento liofilizado<br />
1. Deixar equilibrar à temperatura ambiente o Suplemento<br />
Liofilizado do <strong>Chang</strong> Medium C.<br />
2. Utilizando condições estéreis, adicionar 10 mL ou 50<br />
mL de água destilada estéril ao liofilizado. O recipiente<br />
de 10 mL é para o <strong>Chang</strong> Medium B Basal de 90 mL; o<br />
recipiente de 50 mL é para o <strong>Chang</strong> Medium B Basal<br />
de 450 mL.<br />
3. Agitar o recipiente suavemente para facilitar a<br />
completa dissolução (NOTA: pode ser necessário<br />
aquecer o recipiente 5 minutos a 37ºC para dissolver<br />
completamente o suplemento).<br />
4. Transferir esterilmente o conteúdo completo do<br />
Suplemento <strong>Chang</strong> Medium C reconstituído no<br />
Utilização de <strong>Chang</strong> Medium C em culturas<br />
primárias: Metodologia In Situ.<br />
1. Centrifugar o líquido amniótico a baixa velocidade para<br />
concentrar as células.<br />
2. Ressuspender o precipitado de células num volume<br />
pequeno do próprio líquido amniótico do doente. Por<br />
exemplo, aspirar o sobrenadante de 10 mL deixando<br />
0.5 mL de líquido, e ressuspender. Adicionar suficiente<br />
<strong>Chang</strong> Medium C à suspensão concentrada de células<br />
para alcançar um volume de cultura final de 0.5 mL por<br />
lamela (num total de 4 lamelas), ou 2 mL por recipiente.<br />
3. Sem perturbar, incubar as culturas a 37°C numa<br />
atmosfera de 5% - 8% CO 2 .<br />
4. No dia 2 de cultura, adicionar 2 mL de <strong>Chang</strong> Medium<br />
C.<br />
5. Após 4 ou 5 dias, comprovar o crescimento das culturas.<br />
Uma vez que se observe crescimento, aspirar todo o<br />
meio de cultura e adicionar 2 mL de <strong>Chang</strong> Medium C<br />
fresco. A partir deste momento, é recomendável mudar<br />
o meio de cultura de 2 em 2 dias.<br />
6. Verificar o crescimento das culturas durante ou depois<br />
do quinto dia, e colher quando se observem números<br />
suficientes de colónias.<br />
7. Obtém-se melhores resultados quando se muda o meio<br />
com <strong>Chang</strong> Medium C no dia anterior à colheita.<br />
Utilização de <strong>Chang</strong> Medium C em culturas<br />
primárias: Metodologia em recipiente.<br />
1. Centrifugar o líquido amniótico a baixa velocidade para<br />
concentrar as células.<br />
2. Ressuspender o precipitado de células num volume<br />
pequeno do próprio líquido amniótico do doente. Por<br />
exemplo, aspirar o sobrenadante de 10 mL deixando<br />
1 mL de líquido e ressuspender. Adicionar 4 mL de<br />
<strong>Chang</strong> Medium C para obter um volume total de 5 mL<br />
por recipiente.<br />
3. Sem perturbar, incubar as culturas a 37°C numa<br />
atmosfera de 5% - 8% CO 2 .<br />
4. Verificar o crescimento ao dia 5. Mudar o meio por<br />
<strong>Chang</strong> Medium C fresco e colher a cultura se observar<br />
um crescimento suficiente .<br />
5. Verificar o crescimento das culturas e mudar<br />
completamente o meio todos os dias daqui para a<br />
frente até observar um número suficiente de colónias<br />
para colheita.<br />
6. Obtém-se melhores resultados quando se muda o meio<br />
com <strong>Chang</strong> Medium C no dia anterior à colheita.<br />
NOTA: para sistemas fechados, injecte cada recipiente<br />
de cultura com uma mistura de 5% CO 2 – 95% ar durante<br />
20 segundos. Feche hermeticamente os recipientes e<br />
incube-os a 37ºC . (Recomenda-se a utilização de um pipeta<br />
Pasteur estéril na fonte de CO 2 para garantir a esterilidade<br />
do gás que se injecta no meio de cultura).<br />
UTILIZAÇÃO DE CHANG MEDIUM C NA<br />
CULTURA DE CÉLULAS DO LÍQUIDO<br />
AMNIÓTICO DERIVADAS DE CULTURAS<br />
PRIMÁRIAS.<br />
Para passar as células cultivadas, tratar as culturas com<br />
tripsina (ou pronase, etc.) tal como se tratam normalmente<br />
as células num meio convencional. Contudo, o tratamento<br />
com pronase deve ser monitorizado cuidadosamente. Os<br />
amniócitos cultivados em Meio <strong>Chang</strong> C tendem a ser mais<br />
sensíveis ao tratamento con proteases que os cultivados em<br />
meios convencionais. Tendo este aspecto em conta, pode<br />
ser por vezes necessário reajustar o protocolo.<br />
CONTROLO DE QUALIDADE<br />
ΕΛΛΗΝΙΚΆ<br />
ΕΠΙΔΙΩΚΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ<br />
Το <strong>Chang</strong> Medium C μπορεί να χρησιμοποιηθεί στις<br />
παρακάτω εφαρμογές:<br />
1. την πρωτογενή καλλιέργεια κυττάρων αμνιακού<br />
υγρού<br />
2. την ανάπτυξη κυττάρων διόδου αμνιακού υγρού<br />
3. την καλλιέργεια κυττάρων μυελού των οστών<br />
4. την δειγματοληψία συμπαγούς ιστού αμνίου από<br />
χοριακές λάχνες<br />
ΤΟ ΜΕΣΟ ΕΧΕΙ ΣΧΕΔΙΑΣΤΕΙ ΓΙΑ ΧΡΗΣΗ ΣΕ ΑΝΟΙΚΤΑ<br />
(ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΣ ΙΣΟΡΡΟΠΗΜΕΝΕΣ ΜΕ ΑΤΜΟΣΦΑΙΡΑ<br />
5% CO 2 ) ΚΑΙ ΚΛΕΙΣΤΑ ΣΥΣΤΗΜΑΤΑ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑΣ<br />
(ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΕΣ ΓΕΜΙΣΜΕΝΕΣ ΜΕ 5% CO 2 ΚΑΙ<br />
ΕΠΩΑΣΜΕΝΕΣ ΜΕ ΤΑ ΔΟΧΕΙΑ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑΣ ΣΦΙΧΤΑ<br />
ΚΛΕΙΣΤΑ).<br />
Προσοχή: Μην χρησιμοποιείτε τα συστατικά του <strong>Chang</strong><br />
Medium C πέρα από την ημερομηνία λήξης<br />
που αναγράφεται στις ξεχωριστές ετικέτες.<br />
ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΠΡΟΪΟΝΤΟΣ<br />
Το <strong>Chang</strong> Medium ® C δημιουργήθηκε για την<br />
πρωτογενή καλλιέργεια ανθρώπινων κυττάρων αμνιακού<br />
υγρού για χρήση σε καρυοτυποποίηση και άλλες<br />
προγεννητικές γενετικές εξετάσεις. ΑΥΤΗ Η ΣΥΝΘΕΣΗ<br />
ΕΧΕΙ ΒΕΛΤΙΣΤΟΠΟΙΗΘΕΙ ΓΙΑ ΑΝΟΙΚΤΑ ΚΑΙ ΚΛΕΙΣΤΑ<br />
ΣΥΣΤΗΜΑΤΑ.<br />
ΦΥΛΑΞΗ ΚΑΙ ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑ<br />
Φυλάσσετε το <strong>Chang</strong> Medium C Κατεψυγμένα συμπλήρωμα<br />
σε θερμοκρασία κάτω των 10°C, το <strong>Chang</strong> Medium C<br />
Λυοφιλοποιημένο Συμπλήρωμα στους 2°C έως 8°C, το<br />
<strong>Chang</strong> Medium B Βασικό στους 2°C έως 8°C, και το πλήρες<br />
<strong>Chang</strong> Medium C στους 2°C έως 8°C. Το <strong>Chang</strong> Medium<br />
B Βασικό δεν πρέπει να ψύχεται.<br />
Προστατεύστε από φθορίζον φως.<br />
ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑ<br />
Βλ. ξεχωριστές ετικέτες φιαλών για συγκεκριμένες<br />
ημερομηνίες λήξης. Το πλήρες <strong>Chang</strong> Medium C μπορεί να<br />
φυλαχτεί στους 2οC έως 8οC για 10 μέρες πριν τη χρήση,<br />
χωρίς να επηρεαστεί η λειτουργία του. Δεν συστήνεται η<br />
φύλαξη για διάστημα μεγαλύτερο των 10 ημερών.<br />
ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ ΤΟ ΠΛΗΡΕΣ CHANG MEDIUM C.<br />
ΣΥΣΤΑΤΙΚΑ<br />
mg/L<br />
Άλατα............................................................................7900<br />
Δεξτρόζη........................................................................1400<br />
Αμινοξέα........................................................................1000<br />
Πολυπεπτίδια...................................................................66<br />
Βιταμίνες...........................................................................22<br />
Δεοξυριβονουκλεοζίτες.....................................................21<br />
Ριβονουκλεοζίτες ..............................................................20<br />
Πυροσταφιλικό Νάτριο....................................................110<br />
Λοιπά Συστατικά.................................................................8<br />
Ορμόνες και Ιχνοστοιχεία..........................................0.0025<br />
Στεροειδείς Ορμόνες..................................................0.0013<br />
Ορός Νεογέννητου Μοσχαριού..................................6% v/v<br />
Ορός Εμβρυϊκού Βοοειδούς ......................................6% v/v<br />
ΔΙΑΣΦΑΛΙΣΗ ΠΟΙΟΤΗΤΑΣ<br />
Η συσκευή αυτή προορίζεται για χρήση από προσωπικό<br />
που έχει εκπαιδευτεί σε διαδικασίες που περιλαμβάνουν<br />
τη συγκεκριμένη εφαρμογή για την οποία προορίζεται<br />
η συσκευή.<br />
ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΓΙΑ ΧΡΗΣΗ<br />
Λυοφιλοποιημένο Συμπλήρωμα<br />
1. Αφήστε το <strong>Chang</strong> Medium C Λυοφιλοποιημένο<br />
Συμπλήρωμα να ισορροπήσει σε θερμοκρασία<br />
δωματίου.<br />
2. Ακολουθώντας ασηπτικές τεχνικές, προσθέστε 10 mL<br />
ή 50 mL αποστειρωμένου, απεσταγμένο νερού στο<br />
λυoφιλοποιημένο. Το φιαλίδιο των 10 mL είναι για 90<br />
mL <strong>Chang</strong> Medium B Βασικό και το φιαλίδιο των 50<br />
mL για 450 mL <strong>Chang</strong> Medium B Βασικό.<br />
ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ<br />
ΤΟ pH ΤΟΥ ΜΕΣΟΥ ΠΟΥ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΕΙΤΑΙ<br />
ΓΙΑ ΤΡΟΦΗ ΤΩΝ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΩΝ ΠΡΕΠΕΙ<br />
ΝΑ ΕΙΝΑΙ 6.8 - 7.2 (δηλαδή το μέσο θα πρέπει να<br />
έχει ελαφρώς κίτρινο χρώμα σολομού). Το pH μπορεί<br />
να προσαρμοστεί εύκολα, τοποθετώντας το μέσο σε<br />
επωαστήρα 5% - 8% CO2 με το πώμα ελαφρώς χαλαρό.<br />
Το τελικό pH πρέπει να είναι 6.8 - 7.2.<br />
Για επιπρόσθετα στοιχεία σχετικά με τη χρήση αυτών των<br />
προϊόντων, κάθε εργαστήριο θα πρέπει να συμβουλεύεται<br />
τις δικές του εργαστηριακές διαδικασίες και τα πρωτόκολλα<br />
που έχουν αναπτυχθεί και βελτιστοποιηθεί συγκεκριμένα<br />
για το δικό σας ιατρικό πρόγραμμα.<br />
Χρήση <strong>Chang</strong> Medium C για Κύριες<br />
Καλλιέργειες: In Situ Μεθοδολογίες<br />
1. Υποβάλλετε σε φυγόκεντρο το αμνιακό υγρό, σε χαμηλή<br />
ταχύτητα, για συμπύκνωση των κυττάρων.<br />
2. Ανα-αιωρείστε το κυτταρικό συσσωμάτωμα σε<br />
μικρό όγκο του αμνιακού υγρού της ασθενούς. Για<br />
παράδειγμα, αναρροφήστε το υπερκείμενο υγρό<br />
των 10 mL από νηματοποιημένο αμνιακό υγρό σε<br />
0.5 mL πάνω από το κυτταρικό συσσωμάτωμα και<br />
ανα-αιωρείστε. Προσθέστε επαρκές <strong>Chang</strong> Medium<br />
C στο συμπυκνωμένο κυτταρικό αιώρημα ώστε να<br />
έχετε τελικό όγκο καλλιέργειας 0.5 mL ανά καλυπτρίδα<br />
(σύνολο 4 καλυπτρίδες) ή 2 mL ανά φιαλίδιο.<br />
3. Επωάστε τις καλλιέργειες αδιατάρακτες σε<br />
θερμοκρασία 37ο C 5% CO 2 ατμόσφαιρα.<br />
4. Γεμίστε τις καλλιέργειες την 2η ημέρα, προσθέτοντας<br />
2 mL <strong>Chang</strong> Medium C.<br />
5. Μετά από 4 έως 5 ημέρες, ελέγξτε την ανάπτυξη<br />
των καλλιεργειών. Οι καλλιέργειες πρέπει να<br />
τρέφονται αφού παρατηρηθεί ανάπτυξη. Θρέψτε τις<br />
καλλιέργειες αφαιρώντας όλο το υπερκείμενο υγρό και<br />
αντικαθιστώντας με 2 mL φρέσκο <strong>Chang</strong> Medium C.<br />
Συστήνεται οι καλλιέργειες να τρέφονται κάθε 2 ημέρες<br />
μετά από αυτό το σημείο.<br />
6. Ελέγξετε την ανάπτυξη των καλλιεργειών την / μετά την<br />
5η ημέρα και συλλέξτε όταν παρατηρηθούν επαρκείς<br />
αποικίες.<br />
7. Τα καλύτερα αποτελέσματα λαμβάνονται όταν οι<br />
καλλιέργειες τρέφονται με <strong>Chang</strong> Medium C την ημέρα<br />
πριν τη συλλογή.<br />
Χρήση <strong>Chang</strong> Medium C για Πρωτογενείς<br />
Καλλιέργειες: Μεθοδολογίες Προχοϊδών<br />
1. Υποβάλλετε σε φυγόκεντρο το αμνιακό υγρό σε χαμηλή<br />
ταχύτητα, για συμπύκνωση των κυττάρων.<br />
2. Ανα-αιωρείστε το κυτταρικό συσσωμάτωμα σε<br />
μικρό όγκο του αμνιακού υγρού της ασθενούς. Για<br />
παράδειγμα, αναρροφήστε το υπερκείμενο υγρό των 10<br />
mL από νηματοποιημένο αμνιακό υγρό σε 1 mL πάνω<br />
από το κυτταρικό συσσωμάτωμα και ανα-αιωρείστε.<br />
Προσθέστε 4 mL από <strong>Chang</strong> Medium C για συνολικό<br />
όγκο 5 mL ανά φιαλίδιο.<br />
3. Επωάστε τις καλλιέργειες αδιατάρακτες στους 37°C<br />
5% CO 2 ατμόσφαιρα.<br />
4. Ελέγξτε την ανάπτυξη την 5η ημέρα. Αλλάξτε το μέσο με<br />
φρέσκο <strong>Chang</strong> Medium C και συλλέξτε αν παρατηρείται<br />
επαρκής κυτταρική ανάπτυξη.<br />
5. Ελέγξτε την ανάπτυξη στις καλλιέργειες και αλλάξτε<br />
πλήρως το μέσο μέρα παρά μέρα, μέχρι να<br />
παρατηρηθούν επαρκείς αποικίες και να είναι έτοιμες<br />
για συλλογή.<br />
6. Τα καλύτερα αποτελέσματα λαμβάνονται όταν οι<br />
καλλιέργειες τρέφονται με <strong>Chang</strong> Medium C την ημέρα
ecipiente do <strong>Chang</strong> Medium B Basal.<br />
5. Misturar bem o <strong>Chang</strong> Medium C Completo agitando<br />
bem o recipiente.<br />
6. Adicionar L-Glutamina, 10 mL/L (200mM). Se desejar,<br />
pode adicionar antibióticos.<br />
Suplemento congelado<br />
1. Descongelar o Suplemento Congelado do <strong>Chang</strong><br />
Medium C agitando rapidamente o recipiente em banho<br />
Maria a 37ºC.<br />
2. Transferir esterilmente o conteúdo completo do<br />
Suplemento <strong>Chang</strong> Medium C descongelado ao<br />
recipiente de <strong>Chang</strong> Medium B Basal.<br />
3. Misturar o <strong>Chang</strong> Medium C Completo agitando bem<br />
o recipiente.<br />
4. Adicionar L-Glutamina, 10 mL/L (200mM). Se desejar,<br />
pode adicionar antibióticos.<br />
PREPARAÇÃO DE ALÍQUOTAS DE<br />
SUPLEMENTO<br />
DE CHANG MEDIUM C<br />
Suplemento liofilizado<br />
Se não utilizar o <strong>Chang</strong> Medium C Completo durante um<br />
período de 10 dias é conveniente preparar quantidades<br />
mais pequenas de meio seguindo o seguinte protocolo:<br />
1. Reconstituir o Suplemento Liofilizado do <strong>Chang</strong> Medium<br />
C.<br />
2. Em condições estéreis, repartir o suplemento em<br />
alíquotas de tamanho adequado e congelá-las.<br />
3. Também em condições de esterilidade, distribuir<br />
o <strong>Chang</strong> Medium B Basal pelo mesmo número de<br />
alíquotas.<br />
4. Para preparar o <strong>Chang</strong> Medium C Completo, adicionar<br />
uma alíquota descongelada de Suplemento de <strong>Chang</strong><br />
Medium C a uma alíquota de <strong>Chang</strong> Medium B Basal.<br />
5. Misturar bem.<br />
Suplemento congelado<br />
1. Descongelar o Suplemento Congelado do <strong>Chang</strong><br />
Medium C.<br />
2. Em condições de esterilidade, repartir o suplemento<br />
em alíquotas de um tamanho adequado e congelá-las<br />
(NOTA: o recipiente de suplemento contém 14 mL ou<br />
70 mL. Distribuir uniformemente).<br />
3. Também em condições de esterilidade, repartir o <strong>Chang</strong><br />
Medium B Basal pelo mesmo número de alícuotas.<br />
4. Para preparar o <strong>Chang</strong> Medium C Completo, adicionar<br />
uma alíquota descongelada de Suplemento de <strong>Chang</strong><br />
Medium C a uma alíquota de <strong>Chang</strong> Medium B Basal.<br />
5. Misturar bem.<br />
INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃO<br />
O pH do meio utilizado deve estar entre 6.8 e<br />
7.2 (o meio deve apresentar uma coloração ligeiramente<br />
cor de salmão). O pH pode ajustar-se facilmente colocando<br />
o meio numa incubadora a 5% - 8% CO 2 , com a tampa<br />
ligeiramente desenroscada.<br />
O pH final deve ser entre 6.8 - 7.2.<br />
Para mais detalhes sobre a utilização deste produto, o<br />
laboratório deve consultar os seus próprios protocolos<br />
de trabalho, os quais foram desenvolvidos e optimizados<br />
especificamente de acordo com cada laboratório médico.<br />
ESTERILIDADE<br />
O soro utilizado na produção de Suplemento <strong>Chang</strong><br />
Medium C foi testado para a contaminação viral de<br />
acordo com a norma CFR capítulo 9, parte 113.53. Foi<br />
também testado para a contaminação por Micoplasma.<br />
Ambos, o <strong>Chang</strong> Medium B Basal e o Suplemento <strong>Chang</strong><br />
Medium C foram esterilizado por filtração com filtros de<br />
0.2 micras. Amostras representativas de <strong>Chang</strong> Medium<br />
B Basal e de Suplemento <strong>Chang</strong> Medium C foram<br />
testadas para a possível contaminação bacteriológica<br />
seguindo os protocolos de esterilidade descritos no<br />
teste de esterilidade actual da USP .<br />
<strong>Chang</strong> Medium ® é uma marca registada da <strong>Irvine</strong> <strong>Scientific</strong>.<br />
3. Στροβιλίστε απαλά το φιαλίδιο για να έχετε ένα<br />
πλήρες διάλυμα. (ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Μπορεί να χρειαστεί να<br />
επωάσετε το φιαλίδιο στους 37οC για 5 έως 10 λεπτά,<br />
ώστε να διαλυθεί πλήρως το συμπλήρωμα).<br />
4. Μεταφέρετε ασηπτικά όλα τα περιεχόμενα του<br />
ανασυσταμένου <strong>Chang</strong> Medium C Συμπληρώματος<br />
στη φιάλη του <strong>Chang</strong> Medium B Βασικού.<br />
5. Ανακατέψτε το πλήρες <strong>Chang</strong> Medium C καλά,<br />
στροβιλίζοντας τη φιάλη.<br />
6. Προσθέστε L-Γλουταμίνη, 10.0 mL/L (200 mM).<br />
Μπορείτε επίσης να προσθέσετε αντιβιοτικά, αν το<br />
επιθυμείτε.<br />
Κατεψυγμένο Συμπλήρωμα<br />
1. Αποψύξτε το <strong>Chang</strong> Medium C Κατεψυγμένο<br />
Συμπλήρωμα γρήγορα, στροβιλίζοντας το φιαλίδιο σε<br />
υδατόλουτρο θερμοκρασίας 37°C.<br />
2. Μεταφέρετε ασηπτικά όλα τα περιεχόμενα του<br />
αποψυγμένου <strong>Chang</strong> Medium C Συμπληρώματος στη<br />
φιάλη του <strong>Chang</strong> Medium B Βασικού.<br />
3. Ανακατέψτε το πλήρες <strong>Chang</strong> Medium C καλά,<br />
στροβιλίζοντας τη φιάλη.<br />
4. Προσθέσετε L-Γλουταμίνη, 10.0 mL/L (200 mM).<br />
Μπορείτε επίσης να προσθέσετε αντιβιοτικά, αν το<br />
επιθυμείτε.<br />
ΔΙΑΜΟΙΡΑΣΜΟΣ ΣΕ ΥΠΟΠΟΛΛΑΠΛΑΣΙΑ<br />
ΤΟΥ CHANG MEDIUM C ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΟΣ<br />
Λυοφιλοποιημένο Συμπλήρωμα<br />
Αν δεν μπορείτε να χρησιμοποιήσετε το πλήρες <strong>Chang</strong><br />
Medium C εντός 10 ημερών, μπορείτε να δημιουργήσετε<br />
μικρότερες ποσότητες ακολουθώντας την εξής τροποποίηση<br />
της διαδικασίας:<br />
1. Ανασυστήστε το <strong>Chang</strong> Medium C Λυοφιλοποιημένο<br />
Συμπλήρωμα.<br />
2. Διανέμετε ασηπτικά σε πρακτικού μεγέθους<br />
υποπολλαπλάσια και καταψύξτε.<br />
3. Διαχύστε επίσης ασηπτικά το <strong>Chang</strong> Medium B Βασικό<br />
σε αντίστοιχο αριθμό υποπολλαπλασίων.<br />
4. Για να προετοιμάσετε το πλήρες <strong>Chang</strong> Medium C,<br />
προσθέστε ένα υποπολλαπλάσιο αποψυγμένου <strong>Chang</strong><br />
Medium C Συμπληρώματος σε ένα υποπολλαπλάσιο<br />
<strong>Chang</strong> Medium B Βασικού.<br />
5. Ανακατέψτε καλά.<br />
Κατεψυγμένο Συμπλήρωμα<br />
1. Αποψύξτε το <strong>Chang</strong> Medium C Κατεψυγμένο<br />
Συμπλήρωμα.<br />
2. Διανέμετε ασηπτικά σε πρακτικού μεγέθους<br />
υποπολλαπλάσια και καταψύξτε ξανά. (ΣΗΜΕΙΩΣΗ:<br />
το φιαλίδιο συμπληρώματος περιέχει 14 mL ή 70 mL.<br />
Διανείμετε ίσα.)<br />
3. Διαχύστε επίσης ασηπτικά το <strong>Chang</strong> Medium B Βασικό<br />
σε αντίστοιχο αριθμό υποπολλαπλασίων.<br />
4. Για να προετοιμάσετε το πλήρες <strong>Chang</strong> Medium C,<br />
προσθέστε ένα υποπολλαπλάσιο αποψυγμένου <strong>Chang</strong><br />
Medium C Συμπληρώματος σε ένα υποπολλαπλάσιο<br />
<strong>Chang</strong> Medium B Βασικού.<br />
5. Ανακατέψτε καλά.<br />
πριν τη συλλογή.<br />
ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Για κλειστά συστήματα, ξεπλύνετε κάθε<br />
φιαλίδιο καλλιέργειας με 5% CO2 - 95% αέρα για 20<br />
δευτερόλεπτα. Σφίξτε τα πώματα στα φιαλίδια καλλιεργειών<br />
και επωάστε τα στους 37°C. (Προτείνεται να προσδένεται<br />
αποστειρωμένη πιπέτα Παστέρ στην πηγή CO2 για να<br />
διασφαλίζεται η αποστείρωση του εισερχόμενου αερίου).<br />
Χρήση <strong>Chang</strong> Medium C για Ανάπτυξη<br />
Κυττάρων Διόδου Αμνιακού Υγρού:<br />
Για να σχηματίσετε διόδους στα κύτταρα, χορηγήστε<br />
στις καλλιέργειες θρυψίνη (ή προνάση, κλπ.) όπως θα<br />
κάνατε με κύτταρα που αναπτύσσονται σε συμβατικό<br />
μέσο. Ωστόσο, η χορήγηση πρωτεάσης θα πρέπει να<br />
ελέγχεται προσεκτικά. Τα κύτταρα αμνιακού υγρού που<br />
αναπτύσσονται σε <strong>Chang</strong> Medium C τείνουν να είναι<br />
περισσότερο ευαίσθητα στην χορήγηση πρωτεάσης απ’<br />
ότι τα κύτταρα αμνιακού υγρού που αναπτύσσονται σε<br />
συμβατικά μέσα. Μπορεί να χρειαστεί να τροποποιήσετε<br />
το πρωτόκολλό σας για να λάβετε υπόψη τα παραπάνω.<br />
ΔΙΑΣΦΑΛΙΣΗ ΠΟΙΟΤΗΤΑΣ<br />
ΑΠΟΣΤΕΙΡΩΣΗ<br />
Ο ορός που χρησιμοποιείται στην παραγωγή του<br />
<strong>Chang</strong> Medium C Συμπληρώματος έχει ελεγχθεί για<br />
ιογενή μόλυνση σύμφωνα με το CFR Title 9 Part 113.53.<br />
Έχει επίσης ελεγχθεί για μόλυνση μυκοπλάσματος.<br />
Το <strong>Chang</strong> Medium B Basal και το <strong>Chang</strong> Medium C<br />
Supplement αποστειρώνονται με διήθηση μέσω φίλτρου<br />
0.1 εκατομμυριοστόμετρων. Αντιπροσωπευτικά δείγματα<br />
του <strong>Chang</strong> Medium B Βασικού και του <strong>Chang</strong> Medium C<br />
Συμπληρώματος ελέγχονται για πιθανή βακτηριολογική<br />
μόλυνση ακολουθώντας το πρωτόκολλο ελέγχου<br />
στειρότητας που περιγράφεται στην τρέχουσα εξέταση<br />
Στειρότητας της συνθήκης Φαρμακοποϊίας των ΗΠΑ.<br />
Το <strong>Chang</strong> Medium ® είναι σήμα κατατεθέν της <strong>Irvine</strong><br />
<strong>Scientific</strong>.
ČESKY<br />
,URČENÉ POUŽITÍ<br />
<strong>Chang</strong> Medium C lze použít k následujícím činnostem:<br />
1. primární kultivace buněk z plodové vody<br />
2. množení pasážovaných buněk z plodové vody<br />
3. kultivace buněk kostní dřeně<br />
4. odběr vzorků pevné amniotické tkáně z choriových<br />
klků.<br />
TOTO MÉDIUM JE URČENO K POUŽITÍ V OTEVŘENÝCH<br />
(KULTIVACE V ATMOSFÉŘE S 5 % CO 2 ) I UZAVŘENÝCH<br />
SYSTÉMECH (KULTURY INKUBOVÁNY V PEVNĚ<br />
UZAVŘENÝCH KULTIVAČNÍCH NÁDOBKÁCH V 5% CO 2 ).<br />
Upozornění: Složky média neužívejte po uplynutí doby<br />
použitelnosti uvedené na jejich štítcích.<br />
POPIS VÝROBKU<br />
<strong>Chang</strong> Medium® C bylo vyvinuto k primární kultivaci<br />
lidských buněk z plodové vody pro účely karyotypizace<br />
a jiných genetických testů. SLOŽENÍ PŘÍPRAVKU BYLO<br />
OPTIMALIZOVÁNO PRO OTEVŘENÉ I UZAVŘENÉ<br />
SYSTÉMY.<br />
UCHOVÁNÍ A STABILITA<br />
Zmrazený doplněk <strong>Chang</strong> Medium C Frozen Doplatek za<br />
cenu nižší než 10°C, Lyofilizovaný doplněk <strong>Chang</strong> Medium<br />
C při teplotě 2 až 8 ºC, základní <strong>Chang</strong> Medium B při teplotě<br />
2 až 8 ºC a úplné <strong>Chang</strong> Medium C při teplotě 2 až 8 ºC.<br />
Základní <strong>Chang</strong> Medium B nesmí být zmrazeno.<br />
Chraňte před fluorescenčním světlem.<br />
Datum použití jednotlivých složek najdete na štítku jejich<br />
lahvičky. Úplné <strong>Chang</strong> Medium C lze bez vlivu na funkci<br />
uchovávat při teplotě 2 až 8 ºC po 10 dní. Skladování déle<br />
než 10 dní se nedoporučuje.<br />
ÚPLNÉ CHANG MEDIUM C CHRAŇTE PŘED MRAZEM.<br />
SLOŽKY<br />
mg/l<br />
Soli................................................................................7900<br />
Glukóza.........................................................................1400<br />
Aminokyseliny................................................................1000<br />
Polypeptidy........................................................................66<br />
Vitamíny.............................................................................22<br />
Deoxyribonukleosidy.........................................................21<br />
Ribonukleosidy..................................................................20<br />
Pyruvát sodný..................................................................110<br />
Jiné složky..........................................................................8<br />
Hormony a stopové prvky..........................................0,0025<br />
Steroidní hormony......................................................0,0013<br />
Prekolostrální telecí sérum......................................6 % obj.<br />
Fetální telecí sérum.................................................6 % obj.<br />
BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ A VAROVÁNÍ<br />
Zařízení bylo určeno pro použití školeným personálem při<br />
zákrocích, které zahrnují indikovanou aplikaci, pro kterou<br />
je zařízení určeno.<br />
PŘÍPRAVA K POUŽITÍ<br />
Lyofilizovaný doplněk<br />
1. Lyofilizovaný doplněk <strong>Chang</strong> Medium C nechte<br />
vytemperovat na pokojovou teplotu.<br />
2. Asepticky přidejte k lyofilizátu 10 ml nebo 50 ml sterilní<br />
destilované vody. 10ml lahvička je určena pro 90ml<br />
balení základního <strong>Chang</strong> Medium B; 50ml lahvička<br />
pak pro 450ml balení základního <strong>Chang</strong> Medium B.<br />
3. Jemně lahvičkou zakružte, aby se obsah úplně rozpustil.<br />
(POZNÁMKA: Možná bude k úplnému rozpuštění nutné<br />
lahvičku 5 – 10 minut inkubovat při teplotě 37 ºC.)<br />
4. Asepticky přeneste všechen rozpuštěný doplněk do<br />
láhve se základním <strong>Chang</strong> Medium B.<br />
5. Dobře promíchejte kroužením láhve.<br />
6. Přidejte L-glutamin, 10,0 ml/l (200 mM). V případě<br />
potřeby lze přidat antibiotika.<br />
Použití média k primární kultivaci: kultivace<br />
in situ<br />
1. Odstřeďte plodovou vodu při nízkých otáčkách a<br />
koncentrujte tak buňky.<br />
2. Rozpusťte buněčnou peletu v malém objemu plodové<br />
vody stejné pacientky. Například odsajte supernatant z<br />
10 ml plodové vody a ponechte jen 0,5 ml nad peletou.<br />
Poté znovu rozpusťte. Ke koncentrované buněčné<br />
suspenzi přidejte dostatečné množství <strong>Chang</strong> Medium<br />
C, abyste měli 0,5 ml suspenze na jedno krycí sklíčko<br />
(celkem 4 krycí sklíčka) nebo 2 ml na kultivační lahvičku.<br />
3. Inkubujte kultury v klidu při teplotě 37° C a atmosféře<br />
5 % CO 2 .<br />
4. Druhý den kultury zalijte 2 ml přípravku <strong>Chang</strong> Medium<br />
C.<br />
5. Po 4 – 5 dnech zkontrolujte růst kultur. Jakmile začnou<br />
růst, je třeba dodat živiny. Odstraňte proto veškerý<br />
supernatant a nahraďte 2 ml čerstvého <strong>Chang</strong> Medium<br />
C. Poté doporučujeme doplňovat živiny každé 2 dny.<br />
6. Dále růst kultury kontrolujte průběžně a odeberte<br />
materiál, jakmile se vytvoří dostatek kolonií.<br />
7. Optimálních výsledků dosáhnete odebráním materiálu<br />
den po přidání čerstvého média.<br />
Použití <strong>Chang</strong> Medium C k primární kultivaci:<br />
kultivace v lahvích<br />
1. Odstřeďte plodovou vodu při nízkých otáčkách a<br />
koncentrujte tak buňky.<br />
2. Rozpusťte buněčnou peletu v malém objemu plodové<br />
vody stejné pacientky. Například odsajte supernatant<br />
z 10 ml plodové vody a ponechte jen 1 ml nad peletou.<br />
Poté znovu rozpusťte. Přidejte 4 ml přípravku <strong>Chang</strong><br />
Medium C do celkového objemu 5 ml na láhev.<br />
3. Inkubujte kultury v klidu při teplotě 37° C a atmosféře<br />
5 % CO 2 .<br />
4. Zkontrolujte růst 5. den. Vyměňte médium za čerstvé<br />
<strong>Chang</strong> Medium C, a pokud je kultura dostatečně<br />
narostlá, odeberte materiál.<br />
5. Poté obden kontrolujte růst kultury a zcela vyměňujte<br />
médium, dokud se nevytvoří dostatek kolonií a nejsou<br />
připraveny k použití.<br />
6. Optimálních výsledků dosáhnete odebráním materiálu<br />
den po přidání čerstvého média.<br />
POZNÁMKA: U uzavřených systémů proplachujte každou<br />
kultivační láhev 20 sekund směsí 5 % CO 2 – 95 % vzduchu.<br />
Uzavřete kultivační láhve čepičkami a inkubujte při teplotě<br />
37 °C. Doporučujeme k ústí zdroje plynu připojit sterilní<br />
Pasteurovou pipetu, abyste zajistili sterilitu plynu.<br />
Použití k množení pasážovaných buněk z<br />
plodové vody:<br />
Chcete-li buňky pasážovat, ošetřete kulturu trypsinem<br />
(nebo pronázou atd.), jak to normálně provádíte u buněk<br />
pěstovaných v konvenčním médiu. Průběh ošetření<br />
proteázou však pečlivě monitorujte. Buňky z plodové vody<br />
kultivované v přípravku <strong>Chang</strong> Medium C bývají citlivější na<br />
ošetření proteázou než buňky z konvenčního média. Možná<br />
bude nutné v tomto smyslu upravit protokol.<br />
KONTROLA KVALITY<br />
STERILITA<br />
Sérum použité k produkci doplňku média bylo testováno na<br />
možnou virovou kontaminaci dle amerického předpisu CFR<br />
Title 9 Part 113.53. Byl proveden také screening možné<br />
kontaminace mykoplazmaty. Doplněk <strong>Chang</strong> Medium C i<br />
základní <strong>Chang</strong> Medium B jsou sterilizovány filtrací přes<br />
0,1µm filtry. Reprezentativní vzorky doplňku i základního<br />
DANSK<br />
ANVENDELSE<br />
<strong>Chang</strong> Medium C kan anvendes til følgende applikationer:<br />
1. Primær dyrkning af amnionvæskeceller<br />
2. Dyrkning af passerede amnionvæskeceller<br />
3. Dyrkning af knoglemarvsceller<br />
4. Solidt amnionvæv fra chorionvilliprøver<br />
DETTE MEDIUM ER FREMSTILLET TIL BRUG I BÅDE<br />
ÅBNE (KULTURER DER ER TILPASSET EN ATMOSFÆRE<br />
PÅ 5 % CO 2 ) OG LUKKEDE DYRKNINGSSYSTEMER<br />
(KULTURER TILSAT 5 % CO 2 OG INKUBERET MED TÆT<br />
LUKKET LÅG PÅ DYRKNINGSKARRENE).<br />
Forsigtig: <strong>Chang</strong> Medium C-komponenter må ikke<br />
anvendes efter udløbsdatoen på de enkelte<br />
etiketter.<br />
PRODUKTBESKRIVELSE<br />
<strong>Chang</strong> Medium ® C blev udviklet til primær dyrkning af<br />
humane amnionvæskeceller til karyotypebestemmelse og<br />
anden antenatal genetisk testning. DENNE FORMULERING<br />
ER OPTIMERET TIL BÅDE ÅBNE OG LUKKEDE<br />
SYSTEMER.<br />
OPBEVARING OG STABILITET<br />
Opbevar <strong>Chang</strong> Medium C frossent supplement tillæg på<br />
under 10°C, <strong>Chang</strong> Medium C lyofiliseret supplement ved<br />
2-8 ºC, <strong>Chang</strong> Medium B basal ved 2-8 ºC og komplet<br />
<strong>Chang</strong> Medium C ved 2-8 ºC. <strong>Chang</strong> Medium B basal må<br />
ikke nedfryses.<br />
Beskyttes mod fluorescerende lys.<br />
Se udløbsdatoen på de enkelte flaskers etiket. Komplet<br />
<strong>Chang</strong> Medium C kan opbevares ved 2-8 ºC i højest 10 dage<br />
inden brug uden, at det mister sin virkning. Det anbefales<br />
ikke at opbevare det længere end 10 dage.<br />
KOMPLET CHANG MEDIUM C MÅ IKKE NEDFRYSES.<br />
KOMPONENTER<br />
mg/l<br />
Salte...........................................................................7900<br />
Dekstrose...................................................................1400<br />
Aminosyrer..................................................................1000<br />
Polypeptider....................................................................66<br />
Vitaminer.........................................................................22<br />
Deoxyribonukleosider.....................................................21<br />
Ribonukleosider..............................................................20<br />
Natriumpyruvat.............................................................110<br />
Andre komponenter..........................................................8<br />
Hormoner og sporelementer....................................0.0025<br />
Steroidhormoner......................................................0,0013<br />
Serum fra nyfødt kalv........................................6 % vol/vol<br />
Føtalt bovint serum...........................................6 % vol/vol<br />
FORHOLDSREGLER OG ADVARSLER<br />
Dette udstyr er beregnet til brug af personale, der er<br />
uddannet i procedurer, der inkluderer den indicerede<br />
anvendelse, som dette udstyr er beregnet til.<br />
FORBEREDELSE<br />
Lyofiliseret supplement<br />
1. Lad <strong>Chang</strong> Medium C lyofiliseret supplement nå<br />
stuetemperatur.<br />
2. Brug aseptisk teknik og tilsæt 10 ml eller 50 ml sterilt,<br />
destilleret vand til lyofilisatet. 10 ml-flasken er til 90 ml<br />
<strong>Chang</strong> Medium B basal, og 50-ml-flasken er til 450 ml<br />
<strong>Chang</strong> Medium B basal.<br />
3. Hvirvl flasken forsigtigt, så indholdet opløses helt.<br />
(BEMÆRK: Det kan være nødvendigt at inkubere<br />
flasken ved 37 ºC i 5-10 minutter for at opløse<br />
supplementet helt).<br />
4. Overfør aseptisk hele indholdet af det restituerede<br />
<strong>Chang</strong> Medium C supplement til flasken med <strong>Chang</strong><br />
Medium B basal.<br />
5. Bland det komplette <strong>Chang</strong> Medium C godt ved at<br />
hvirvle flasken.<br />
Anvendelse af <strong>Chang</strong> Medium C til primære<br />
kulturer: Metodologi in situ<br />
1. Centrifuger amnionvæsken ved lav hastighed for at<br />
koncentrere cellerne.<br />
2. Resuspender cellepelleten i en lille volumen af<br />
patientens egen amnionvæske. Aspirer fx<br />
supernatanten fra 10 ml centrifugeret amnionvæske til<br />
0,5 ml over cellepelleten, og resuspender. Tilsæt nok<br />
<strong>Chang</strong> Medium C til den koncentrerede cellesuspension<br />
for at få en endelig volumen på 0,5 ml pr. dækglas (i alt<br />
4 dækglas) eller 2 ml pr. ampul.<br />
3. Inkubér kulturerne uforstyrret ved 37 °C i en atmosfære<br />
med 5 % CO 2 .<br />
4. Skyl kulturerne på dag 2 ved at tilsætte 2 ml <strong>Chang</strong><br />
Medium C.<br />
5. Efter 4-5 dage skal kulturernes vækst kontrolleres.<br />
Kulturerne skal forsynes med nyt medium, når<br />
vækst observeres. Dette gøres ved at fjerne hele<br />
kultursupernatanten og tilsætte 2 ml friskt <strong>Chang</strong><br />
Medium C. Det anbefales, at kulturerne forsynes med<br />
friskt medium hver 2. dag herefter.<br />
6. Kontroller kulturernes vækst på/eller efter dag 5 og høst,<br />
når der kan observeres nok kolonier.<br />
7. De bedste resultater opnås, hvis kulturerne forsynes<br />
med <strong>Chang</strong> Medium C dagen inden, at de høstes.<br />
Anvendelse af <strong>Chang</strong> Medium C til primære<br />
kulturer: Metodologi med kolbe<br />
1. Centrifuger amnionvæsken ved lav hastighed for at<br />
koncentrere cellerne.<br />
2. Resuspender cellepelleten i en lille volumen af<br />
patientens egen amnionvæske. Aspirer fx supernatanten<br />
fra 10 ml centrifugeret amnionvæske til 1 ml over<br />
cellepelleten, og resuspender. Tilsæt 4 ml <strong>Chang</strong><br />
Medium C, så den totale volumen er 5 ml pr. kolbe.<br />
3. Inkubér kulturerne uforstyrret ved 37 °C i en atmosfære<br />
med 5 % CO 2 .<br />
4. Kontroller væksten på dag 5. Udskift mediet med friskt<br />
<strong>Chang</strong> Medium C og høst, hvis tilstrækkelig cellevækst<br />
kan observeres.<br />
5. Kontroller kulturernes vækst og udskift mediet<br />
fuldstændigt hver anden dag herefter, indtil nok kolonier<br />
kan observeres, som er klar til at blive høstet.<br />
6. De bedste resultater opnås, hvis kulturerne forsynes<br />
med <strong>Chang</strong> Medium C dagen inden, at de høstes.<br />
BEMÆRK: I lukkede systemer skal hver dyrkningskolbe<br />
tilsættes 5 % CO2 - 95 % luft i 20 sekunder. Luk låget tæt til<br />
på dyrkningskolberne og inkuber ved 37 °C. (Det anbefales<br />
at slutte en steril Pasteurpipette med hætte til CO2-kilden<br />
for at sikre, at den indgående gas er steril).<br />
Anvendelse af <strong>Chang</strong> Medium C til dyrkning<br />
af passerede amnionvæskeceller:<br />
Passage af cellerne opnås ved at behandle kulturerne med<br />
trypsin (eller pronase m.m.) som ved celler, der dyrkes i<br />
konventionelt medium. Proteasebehandling skal imidlertid<br />
overvåges nøje. Amnionvæskeceller, der dyrkes i <strong>Chang</strong><br />
Medium C, har en tendens til at være mere sensitive over<br />
for proteasebehandling end amnionvæskeceller, der dyrkes<br />
i konventionelt medium. Det kan være nødvendigt at ændre<br />
protokollen for at tage hensyn hertil.<br />
KVALITETSSIKRING<br />
STERILITET<br />
Det serum, der er anvendt til fremstilling af <strong>Chang</strong> Medium<br />
C supplement, er blevet testet for viruskontamination ifølge<br />
CFR Title 9 Part 113.53. Det er også blevet screenet for<br />
mykoplasmakontamination. <strong>Chang</strong> Medium B basal og
Zmrazený doplněk<br />
1. Zmrazený doplněk <strong>Chang</strong> Medium C rychle rozmrazte<br />
kroužením lahví ve vodní lázni vyhřáté na 37 °C.<br />
2. Asepticky přeneste celý obsah rozmrazeného doplňku<br />
do láhve se základním <strong>Chang</strong> Medium B.<br />
3. Dobře promíchejte kroužením láhve.<br />
4. Přidejte L-glutamin, 10,0 ml/l (200 mM). V případě<br />
potřeby lze přidat antibiotika.<br />
DÁVKOVÁNÍ DOPLŇKU CHANG MEDIUM C<br />
Lyofilizovaný doplněk<br />
Pokud nemůžete úplné <strong>Chang</strong> Medium C spotřebovat do<br />
10 dní, můžete připravit i menší množství, a to následující<br />
úpravou postupu:<br />
1. Rozpusťte Lyofilizovaný doplněk <strong>Chang</strong> Medium C.<br />
2. Asepticky rozdělte do alikvotů o vhodné velikosti a<br />
zmrazte.<br />
3. Rovněž asepticky nadávkujte základní <strong>Chang</strong> Medium<br />
B do odpovídajícího počtu alikvotů.<br />
4. Až budete chtít připravit úplné <strong>Chang</strong> Medium C,<br />
přidejte jeden díl rozmrazeného doplňku k jednomu<br />
dílu základního <strong>Chang</strong> Medium B.<br />
5. Dobře promíchejte.<br />
Zmrazený doplněk<br />
1. Rozmrazte Zmrazený doplněk <strong>Chang</strong> Medium C.<br />
2. Asepticky rozdělte do alikvotů o vhodné velikosti<br />
a znovu zmrazte. (POZNÁMKA: Lahvička doplňku<br />
obsahuje 14 ml nebo 70 ml přípravku. Rozdělte materiál<br />
rovnoměrně.)<br />
3. Rovněž asepticky nadávkujte základní <strong>Chang</strong> Medium<br />
B do odpovídajícího počtu alikvotů.<br />
4. Až budete chtít připravit úplné <strong>Chang</strong> Medium C,<br />
přidejte jeden díl rozmrazeného doplňku k jednomu<br />
dílu základního <strong>Chang</strong> Medium B.<br />
5. Dobře promíchejte.<br />
POKYNY K POUŽITÍ<br />
pH MÉDIA POUŽÍVANÉHO K DOPLNĚNÍ ŽIVIN<br />
MUSÍ BÝT V ROZMEZÍ 6,8–7,2 (médium tedy musí<br />
mít mírně nažloutlou lososovou barvu). pH lze snadno<br />
upravit vložením média s mírně povolenou čepičkou do<br />
inkubátoru s atmosférou 5-8 % CO 2 .<br />
Výsledné pH musí být v rozmezí 6,8-7,2.<br />
Pro dodatečné podrobnosti o použití těchto výrobků by<br />
každá laboratoř měla konzultovat vlastní laboratorní metody<br />
a protokoly, které byly vytvořeny a optimalizovány zvlášť pro<br />
váš konkrétní zdravotnický program.<br />
média jsou kontrolovány s ohledem na možnou kontaminaci,<br />
a to podle protokolu pro test sterility popsaného v aktuálním<br />
znění testu USP Sterility .<br />
<strong>Chang</strong> Medium ® je registrovaná ochranná známka<br />
společnosti <strong>Irvine</strong> <strong>Scientific</strong>.<br />
6. Tilsæt L-glutamin, 10,0 ml/l (200 mM). Antibiotika kan<br />
eventuelt tilsættes.<br />
Frossent supplement<br />
1. Optø hurtigt <strong>Chang</strong> Medium C frossent supplement ved<br />
at hvirvle flasken i et 37 °C vandbad.<br />
2. Overfør aseptisk hele indholdet af det optøede <strong>Chang</strong><br />
Medium C supplement til flasken med <strong>Chang</strong> Medium<br />
B basal.<br />
3. Bland det komplette <strong>Chang</strong> Medium C godt ved at<br />
hvirvle flasken.<br />
4. Tilsæt L-glutamin, 10,0 ml/l (200 mM). Antibiotika kan<br />
eventuelt tilsættes.<br />
AFMÅLING AF CHANG MEDIUM C<br />
SUPPLEMENT I MINDRE MÆNGDER<br />
Lyofiliseret supplement<br />
Hvis det komplette <strong>Chang</strong> Medium C ikke kan anvendes<br />
inden for 10 dage, kan det afmåles i mindre mængder vha.<br />
denne ændring i proceduren:<br />
1. Restituer <strong>Chang</strong> Medium C lyofiliseret supplement.<br />
2. Fordel mediet aseptisk i mængder af passende størrelse<br />
og nedfrys dem.<br />
3. Dispenser også aseptisk <strong>Chang</strong> Medium B basal i et<br />
tilsvarende antal mængder.<br />
4. Det komplette <strong>Chang</strong> Medium C klargøres ved at tilsætte<br />
én afmålt mængde optøet <strong>Chang</strong> Medium C supplement<br />
til én afmålt mængde <strong>Chang</strong> Medium B basal.<br />
5. Bland godt.<br />
Frossent supplement<br />
1. Optø <strong>Chang</strong> Medium C frossent supplement.<br />
2. Fordel mediet aseptisk i mængder af passende<br />
størrelse og nedfrys dem. (BEMÆRK: Flaskerne med<br />
supplement indholder 14 ml eller 70 ml. Fordel ligeligt).<br />
3. Dispenser også aseptisk <strong>Chang</strong> Medium B basal i et<br />
tilsvarende antal mængder.<br />
4. Det komplette <strong>Chang</strong> Medium C klargøres ved at<br />
tilsætte én afmålt mængde optøet <strong>Chang</strong> Medium C<br />
supplement til én afmålt mængde <strong>Chang</strong> Medium B<br />
basal.<br />
5. Bland godt.<br />
BRUGSANVISNING<br />
PH-VÆRDIEN AF DET MEDIUM, DER<br />
ANVENDES TIL KULTURERNE, SKAL VÆRE<br />
6,8-7,2 (dvs. at mediet skal have en let gullig laksefave).<br />
pH-værdien kan let justeres ved at anbringe mediet i en<br />
inkubator med 5-8 % CO2 med låget løsnet let.<br />
Den endelige pH-værdi skal ligge på 6,8-7,2.<br />
For yderligere oplysninger om brug af disse produkter<br />
skal hvert laboratorium henvise til egne procedurer og<br />
protokoller, som er blevet specifikt udviklet og optimeret til<br />
laboratoriets eget, medicinske program.<br />
<strong>Chang</strong> Medium C supplement er steriliseret vha. filtrering<br />
gennem et filter på 0,1 mikron. Repræsentative prøver af<br />
<strong>Chang</strong> Medium B basal og <strong>Chang</strong> Medium C supplement<br />
er blevet testet for bakteriologisk kontamination ifølge den<br />
aktuelle protokollen for sterilitetstesting som beskrevet i den<br />
aktuelle USP sterilitetstest .<br />
<strong>Chang</strong> Medium ® er et registreret varemærke tilhørende<br />
<strong>Irvine</strong> <strong>Scientific</strong>.
SUOMI<br />
KÄYTTÖTARKOITUS<br />
<strong>Chang</strong> Medium C:tä voidaan käyttää seuraaviin<br />
sovellutuksiin:<br />
1. amnionnesteen solujen primääriviljely<br />
2. viljelmässä jakautuneiden amnionnesteen solujen<br />
kasvatus<br />
3. luuydinsolujen viljely<br />
4. kiinteä amnionkudos korionvillusnäytteistä.<br />
TÄMÄ ELATUSAINE ON SUUNNITELTU KÄYTETTÄVÄKSI<br />
SEKÄ AVOIMISSA (VILJELMÄT TASAPAINOTETAAN<br />
5 % CO2-ILMAKEHÄSSÄ) ETTÄ SULJETUISSA<br />
VILJELYJÄRJESTELMISSÄ (VILJELMÄT TÄYTETÄÄN<br />
5 % CO2:LLA JA INKUBOIDAAN VILJELYPULLOJEN<br />
KORKIT TIUKASTI SULJETTUINA).<br />
Varoitus: Älä käytä <strong>Chang</strong> Medium C:n aineosia etiketissä<br />
annetun viimeisen käyttöpäivän jälkeen.<br />
TUOTTEEN KUVAUS<br />
<strong>Chang</strong> Medium® C kehitettiin ihmisen amnionnesteen<br />
solujen primääriseen viljelyyn karyotyypitystä ja muuta<br />
antenataalista geneettistä testausta varten. TÄMÄ<br />
KOOSTUMUS ON OPTIMOITU SEKÄ AVOIMIA ETTÄ<br />
SULJETTUJA JÄRJESTELMIÄ VARTEN.<br />
SÄILYTYS JA STABIILIUS<br />
Säilytä <strong>Chang</strong> Medium C Frozen Supplement alle -10 °C,<br />
<strong>Chang</strong> Medium C lyofilisoitu lisäaine lämpötilassa 2 °C – 8<br />
°C, <strong>Chang</strong> Medium B Basal lämpötilassa 2 °C – 8 °C, ja<br />
täydellinen <strong>Chang</strong> Medium C lämpötilassa 2 °C – 8 °C.<br />
<strong>Chang</strong> Medium B Basal -elatusainetta ei saa pakastaa.<br />
Suojaa fluoresoivalta valolta.<br />
Katso yksittäisten aineosien pullojen etiketeistä spesifiset<br />
viimeiset käyttöpäivät. Täydellistä <strong>Chang</strong> Medium C<br />
-elatusainetta voidaan säilyttää lämpötilassa 2 °C – 8 °C<br />
10 päivän ajan ennen käyttöä ilman että tämä vaikuttaisi sen<br />
toimintaan. Yli 10 päivän säilytystä ei suositella.<br />
ÄLÄ PAKASTA TÄYDELLISTÄ CHANG MEDIUM C<br />
-ELATUSAINETTA.<br />
AINEOSAT<br />
mg/l<br />
Suolat..........................................................................7,900<br />
Dekstroosi...................................................................1,400<br />
Aminohapot.................................................................1,000<br />
Polypeptidit.......................................................................66<br />
Vitamiinit...........................................................................22<br />
Deoksiribonukleosidit........................................................21<br />
Ribonukleosidit.................................................................20<br />
Natriumpyruvaatti............................................................110<br />
Muut aineosat.....................................................................8<br />
Hormonit ja hivenaineet.............................................0,0025<br />
Steroidihormonit.........................................................0,0013<br />
Vastasyntyneen vasikan seerumi.............................6 % v/v<br />
Fetaalinaudan seerumi.............................................6 % v/v<br />
VAROTOIMET JA VAROITUKSET<br />
Tämä laite on tarkoitettu sellaisten henkilöiden käytettäväksi,<br />
jotka on koulutettu suorittamaan toimenpiteitä, joihin kuuluu<br />
laitteen käyttötarkoituksen mukainen asianmukainen käyttö.<br />
VALMISTELU KÄYTTÖÄ VARTEN<br />
Lyofilisoitu lisäaine<br />
1. Anna <strong>Chang</strong> Medium C lyofilisoidun lisäaineen<br />
tasapainottua huoneenlämpötilaan.<br />
2. Lisää aseptisilla tekniikoilla 10 ml tai 50 ml steriiliä<br />
tislattua vettä lyofilisaattiin. 10 ml:n pullo on <strong>Chang</strong><br />
Medium B Basal -elatusainetta (90 ml) varten; 50 ml<br />
pullo on <strong>Chang</strong> Medium B Basal -elatusainetta (450<br />
ml) varten.<br />
3. Pyöritä pulloa hellävaroen täydellisen liukenemisen<br />
aikaansaamiseksi. (HUOMAUTUS: Voi olla<br />
välttämätöntä inkuboida pulloa 37 °C:n lämpötilassa<br />
5–10 minuuttia lisäaineen liuottamiseksi täysin).<br />
<strong>Chang</strong> Medium C:n käyttö primääriviljelmiin:<br />
in situ menetelmät<br />
1. Sentrifugoi amnionneste pienellä nopeudella solujen<br />
konsentroimiseksi.<br />
2. Suspendoi solusakka uudelleen pieneen tilavuuteen<br />
potilaan omaa amnionnestettä. Esimerkiksi ime<br />
sentrifugoidun amnionnesteen (10 ml) supernatantti<br />
0,5 ml:n tilavuuteen solusakan yläpuolella ja<br />
suspendoi uudelleen. Lisää riittävästi <strong>Chang</strong> Medium<br />
C:tä konsentroituun solusakkaan, jotta lopullinen<br />
maljaustilavuus on 0,5 ml per peitinlasi (kaikkiaan 4<br />
peitinlasia) tai 2 ml per pieni pullo.<br />
3. Inkuboi viljelmiä niitä liikuttamatta 37 °C:n lämpötilassa<br />
5 % CO2-ilmakehässä.<br />
4. Täytä viljelmät päivänä 2 lisäämällä 2 ml <strong>Chang</strong> Medium<br />
C:tä.<br />
5. Viljelmien kasvu tulee tarkistaa 4–5 päivän kuluttua.<br />
Viljelmiä on ruokittava kun kasvua on havaittu. Ruoki<br />
viljelmiä poistamalla kaikki viljelmän supernatantti ja<br />
vaihtamalla tilalle 2 ml tuoretta <strong>Chang</strong> Medium C:tä.<br />
Suositellaan, että viljelmiä ruokitaan tämän jälkeen<br />
joka toinen päivä.<br />
6. Tarkista viljelmien kasvu päivänä 5 tai sen jälkeen ja<br />
kerää solut, kun havaitset riittävän määrän pesäkkeitä.<br />
7. Parhaat tulokset saadaan, kun viljelmiä ruokitaan <strong>Chang</strong><br />
Medium C:llä keräämistä edeltävänä päivänä.<br />
<strong>Chang</strong> Medium C:n käyttö primääriviljelmiin:<br />
Pullossa suoritettavat menetelmät<br />
1. Sentrifugoi amnionneste pienellä nopeudella solujen<br />
konsentroimiseksi.<br />
2. Suspendoi solusakka uudelleen pieneen tilavuuteen<br />
potilaan omaa amnionnestettä. Esimerkiksi ime<br />
sentrifugoidun amnionnesteen (10 ml) supernatantti<br />
1 ml:n tilavuuteen solusakan yläpuolella ja suspendoi<br />
uudelleen. Lisää 4 ml <strong>Chang</strong> Medium C:tä niin, että<br />
kokonaistilavuus on 5 ml per pullo.<br />
3. Inkuboi viljelmiä niitä liikuttamatta 37 °C:n lämpötilassa<br />
5 % CO2-ilmakehässä.<br />
4. Tarkista kasvu päivänä 5. Vaihda elatusaine tuoreeseen<br />
<strong>Chang</strong> Medium C:hen ja kerää, jos havaitset riittävää<br />
solujen kasvua.<br />
5. Tarkista viljelmien kasvu ja vaihda kokonaan elatusaine<br />
joka toinen päivä tämän jälkeen, kunnes havaitaan<br />
riittävästi pesäkkeitä ja ne ovat valmiita kerättäviksi.<br />
6. Parhaat tulokset saadaan, kun viljelmiä ruokitaan <strong>Chang</strong><br />
Medium C:llä keräämistä edeltävänä päivänä.<br />
HUOMAUTUS: Suljetuissa järjestelmissä huuhtele jokainen<br />
viljelypullo kaasuseoksella 5 % CO2 – 95 % ilmaa 20<br />
sekunnin ajan. Sulje viljelypullojen korkit tiukasti ja inkuboi<br />
niitä 37 °C:n lämpötilassa. (On suositeltavaa, että steriili,<br />
suodattimella varustettu pasteur-pipetti kiinnitetään<br />
CO2-lähteeseen sisään tulevan kaasun steriiliyden<br />
varmistamiseksi.)<br />
<strong>Chang</strong> Medium C:n käyttö viljelmässä<br />
jakautuneiden amnionnesteen solujen<br />
kasvattamiseksi:<br />
Kun haluat antaa solujen jakautua viljelmässä, käsittele<br />
viljelmiä trypsiinillä (tai pronaasilla jne.), kuten normaalisti<br />
tekisit silloin kun soluja kasvatetaan tavanomaisessa<br />
elatusaineessa. Proteaasikäsittelyä on kuitenkin seurattava<br />
huolellisesti. Amnionnesteen soluilla, jotka kasvatetaan<br />
<strong>Chang</strong> Medium C:llä, on taipumus olla herkempiä<br />
proteaasikäsittelylle kuin amnionnesteen soluilla, jotka<br />
kasvatetaan tavanomaisessa elatusaineessa. Protokollan<br />
muuttaminen tämän ottamiseksi huomioon saattaa olla<br />
LATVISKI<br />
IETEICAMĀ IZMANTOŠANA<br />
<strong>Chang</strong> Medium C var lietot turpmāk minētajos gadījumos:<br />
1. augļa ūdeņu šūnu primārajā kultivēšanā<br />
2. nošķirtu augļa ūdeņu šūnu audzēšanā<br />
3. kaulu smadzeņu šūnu kultivēšanā<br />
4. kompaktajiem amnija audiem, kas iegūti horija<br />
bārkstiņu parauga izmeklēšanā.<br />
ŠĪ BAROTNE IR PAREDZĒTA IZMANTOŠANAI GAN<br />
VAĻĒJĀS (KULTŪRAS STABILIZĒTAS 5% CO2 VIDĒ),<br />
GAN SLĒGTĀS KULTIVĒŠANAS SISTĒMĀS (KULTŪRAS<br />
UZPLUDINĀTAS AR 5% CO2 UN KULTŪRU SATUROŠIE<br />
KONTEINERI IEVIETOTI INKUBATORĀ AR STINGRI<br />
NOSLĒGTIEM AIZBĀŽŅIEM).<br />
Uzmanību: Nelietojiet <strong>Chang</strong> Medium C veidojošās daļas<br />
pēc derīguma termiņa, kas norādīts katra<br />
konkrētā iepakojuma marķējumā.<br />
PRODUKTA APRAKSTS<br />
<strong>Chang</strong> Medium ® C ir izveidots izmantošanai cilvēka augļa<br />
ūdeņu šūnu primārajā kultivēšanā, lai veiktu kariotipu<br />
noteikšanas un citus antenatālos ģenētiskos testus. ŠIS<br />
SASTĀVS IR OPTIMIZĒTS IZMANTOŠANAI GAN AR<br />
VAĻĒJU, GAN SLĒGTU SISTĒMU.<br />
UZGLABĀŠANA UN STABILITĀTE<br />
Uzglabājiet <strong>Chang</strong> Medium C Frozen Supplement<br />
temperatūrā zem -10ºC temperatūrā, <strong>Chang</strong> Medium C<br />
liofilizēto piedevu jāuzglabā 2ºC līdz 8ºC temperatūrā,<br />
<strong>Chang</strong> Medium B Basal (pamata) jāuzglabā 2ºC līdz 8ºC<br />
temperatūrā, bet pilnīgo (complete) <strong>Chang</strong> Medium C - 2ºC<br />
līdz 8ºC temperatūrā. <strong>Chang</strong> Medium B Basal (pamata)<br />
nedrīkst saldēt.<br />
Aizsargāt no fluorescējošas gaismas iedarbības.<br />
Konkrēto derīguma termiņu skatiet atsevišķās sastāvdaļas<br />
pudeles marķējumā. Pirms lietošanas Complete <strong>Chang</strong><br />
Medium C var uzglabāt 2ºC līdz 8ºC temperatūrā 10<br />
dienas, neiespaidojot barotnes funkcijas. Šādi nav ieteicams<br />
uzglabāt ilgāk par 10 dienām.<br />
NESALDĒT COMPLETE CHANG MEDIUM C.<br />
SASTĀVDAĻAS<br />
mg/l<br />
Sāļi ……………………………………........... 7900<br />
Dekstroze ………………………………………………. 1400<br />
Aminoskābes ………………………………... 1000<br />
Polipeptīdi …………………………………….... 66<br />
Vitamīni ……………………………………........ 22<br />
Dezoksiribonukleozīdi ………………………… 21<br />
R i b o n u k l e o z ī d i … … … … … … … … … … … … 2 0<br />
Nātrija piruvāts …………………………………………….. 110<br />
Citas sastāvdaļas ………………………………………… 8<br />
Hormoni un iezīmēšanas sastāvdaļas …………… 0.0025<br />
Steroīdhormoni…………………………………….. 0.0013<br />
Jaundzimušu teļu serums ………… 6% no kopējā tilpuma<br />
Liellopu embriju serums …………... 6% no kopējā tilpuma<br />
PIESARDZĪBAS PASĀKUMI UN BRĪDINĀJUMI<br />
Šo ierīci ir paredzēts izmantot personālam, kas ir<br />
apmācīts tādu procedūru veikšanai, kuras ietver norādīto<br />
izmantošanu, kurai šī ierīce ir paredzēta.<br />
SAGATAVOŠANA LIETOŠANAI<br />
Liofilizētā piedeva<br />
1. Ļaujiet <strong>Chang</strong> Medium C liofilizētajai piedevai<br />
nostabilizēties līdz istabas temperatūrai.<br />
2. Izmantojot aseptiskus paņēmienus, pievienojiet<br />
liofilizātam 10 ml vai 50 ml sterila, destilēta ūdens. 10<br />
ml flakons ir paredzēts 90 ml <strong>Chang</strong> Medium B Basal<br />
(pamata); 50 ml flakons ir paredzēts 450 ml <strong>Chang</strong><br />
Medium B Basal (pamata).<br />
3. Uzmanīgi pagroziet flakonu, lai panāktu pilnīgu<br />
izšķīšanu. (PIEZĪME: Var būt nepieciešams inkubēt<br />
flakonu 37º C temperatūrā 10 minūtes, lai piedevu<br />
<strong>Chang</strong> Medium C lietošana primārai<br />
kultivēšanai: in situ metode<br />
1. Centrifugējiet augļa ūdeņu šķidrumu ar nelielu ātrumu,<br />
lai koncentrētu šūnas.<br />
2. Suspendējiet šūnu lodīti no jauna nelielā daudzumā<br />
paša pacienta augļa ūdeņu šķidruma. Piemēram,<br />
aspirējiet līdz 0,5 ml supernatanta no 10 ml augļa<br />
ūdeņu centrifugāta virs šūnas lodītes un resuspendējiet.<br />
Pievienojiet koncentrētajai šūnu suspensijai pietiekamu<br />
daudzumu <strong>Chang</strong> Medium C, lai galīgajam uzklāšanas<br />
daudzumam paredzētu 0,5 ml uz katru segstikliņu<br />
(pavisam 4 segstikliņi) vai 2 ml uz flakonu.<br />
3. Netraucēti inkubējiet kultūras 37º C temperatūrā 5%<br />
CO 2 vidē.<br />
4. 2. dienā uzpludiniet kultūras, pievienojot 2 ml <strong>Chang</strong><br />
Medium C.<br />
5. Pēc 4 līdz 5 dienām jāpārbauda kultivēto šūnu augšana.<br />
Tiklīdz tiek novērota kultūru augšana, tām jāpapildina<br />
barība. Papildiniet barotni, noņemot visu supernatantu<br />
no kultūras un aizvietojot to ar 2 ml svaiga <strong>Chang</strong><br />
Medium C. Pēc tam ieteicams kultūrām pievienot<br />
barotni ik pa 2 dienām.<br />
6. Pārbaudiet kultūru augšanu 5. dienā/pēc 5. dienas un<br />
veiciet ievākšanu, kad var novērot pietiekama apjoma<br />
kolonijas.<br />
7. Vislabākie rezultāti tiek iegūti, pievienojot kultūrām<br />
<strong>Chang</strong> Medium C barotni iepriekšējā dienā pirms<br />
ievākšanas.<br />
<strong>Chang</strong> Medium C lietošana primārai kultivēšanai: Flakona<br />
metode<br />
1. Centrifugējiet augļa ūdeņu šķidrumu ar nelielu ātrumu,<br />
lai koncentrētu šūnas.<br />
2. Suspendējiet šūnu lodīti no jauna nelielā daudzumā<br />
paša pacienta augļa ūdeņu šķidruma. Piemēram,<br />
aspirējiet līdz 1 ml supernatanta no 10 ml augļa<br />
ūdeņu centrifugāta virs šūnas lodītes un suspendējiet<br />
atkārtoti. Pievienojiet 4 ml <strong>Chang</strong> Medium C, lai kopējais<br />
daudzums katrā flakonā būtu 5 ml.<br />
3. Netraucēti inkubējiet kultūras 37º C temperatūrā 5%<br />
CO 2 vidē.<br />
4. 5. dienā pārbaudiet augšanu. Aizvietojiet barotni ar<br />
svaigu <strong>Chang</strong> Medium C un veiciet ievākšanu, ja<br />
novērojama pietiekami efektīva šūnu augšana.<br />
5. Pēc tam pārbaudiet kultūru augšanu un pilnībā<br />
nomainiet barotni katru otro dienu, līdz var novērot<br />
pietiekama apjoma kolonijas, kas gatavas ievākšanai.<br />
6. Vislabākie rezultāti tiek iegūti, pievienojot kultūrām<br />
<strong>Chang</strong> Medium C barotni iepriekšējā dienā pirms<br />
ievākšanas.<br />
PIEZĪME: Slēgtām sistēmām katra kultūras flakona<br />
skalošanai izmantojiet 5% CO 2 - 95% gaisa maisījumu 20<br />
sekundes. Cieši uzlieciet kultūras flakoniem aizbāžņus un<br />
inkubējiet tos 37° C temperatūrā. (Ieteicams piestiprināt CO 2<br />
avotam sterilu Pastēra pipeti ar aizbāzni, lai nodrošinātu<br />
ieplūstošās gāzes sterilitāti.)<br />
<strong>Chang</strong> Medium C lietošana nošķirtu augļa<br />
ūdeņu šūnu audzēšanā:<br />
Lai nošķirtu šūnas, apstrādājiet kultūras ar tripsīnu<br />
(vai pronāzi, u. c.), kā Jūs parasti darītu, ja šūnas tiktu<br />
audzētas standarta barotnē. Tomēr, apstrādājot ar proteāzi,<br />
jāveic uzmanīga novērošana. Augļa ūdeņu šūnām, kas<br />
audzētas <strong>Chang</strong> Medium C, ir nosliece uz lielāku jutīgumu<br />
pret apstrādi ar proteāzi nekā augļa ūdeņu šūnām, kas<br />
audzētas standarta barotnē. Var būt nepieciešams pārveidot<br />
protokolu, lai ņemtu vērā šo faktu.
4. Siirrä aseptisesti uudelleen liuotetun <strong>Chang</strong> Medium<br />
C -lisäaineen koko sisältö <strong>Chang</strong> Medium B Basal<br />
-pulloon.<br />
5. Sekoita täydellinen <strong>Chang</strong> Medium C hyvin pyörittämällä<br />
pulloa.<br />
6. Lisää L-glutamiini, 10,0 ml/l (200 mM). Muita<br />
antibiootteja voidaan lisätä haluttaessa.<br />
Pakastettu lisäaine<br />
1. Sulata <strong>Chang</strong> Medium C pakastettu lisäaine nopeasti<br />
pyörittämällä pulloa 37 °C:n vesihauteessa.<br />
2. Siirrä aseptisesti sulatetun <strong>Chang</strong> Medium C -lisäaineen<br />
koko sisältö <strong>Chang</strong> Medium B Basal -pulloon.<br />
3. Sekoita täydellinen <strong>Chang</strong> Medium C hyvin pyörittämällä<br />
pulloa.<br />
4. Lisää L-glutamiini, 10,0 ml/l (200 mM). Muita<br />
antibiootteja voidaan lisätä haluttaessa.<br />
CHANG MEDIUM C -LISÄAINEEN JAKAMINEN<br />
ERIIN<br />
Lyofilisoitu lisäaine<br />
Jos et pysty käyttämään täydellistä <strong>Chang</strong> Medium C:tä 10<br />
päivän sisällä, haluat kenties jakaa sen pienempiin määriin<br />
noudattamalla tämä muutettua menetelmää:<br />
1. Liuota <strong>Chang</strong> Medium C lyofilisoitu lisäaine.<br />
2. Jaa aseptisesti sopivan kokoisiin alikvootteihin (eriin)<br />
ja pakasta.<br />
3. Jaa myös aseptisesti <strong>Chang</strong> Medium B Basal<br />
vastaavaksi määräksi alikvootteja.<br />
4. Täydellisen <strong>Chang</strong> Medium C:n valmistamiseksi<br />
lisää yksi sulatettu <strong>Chang</strong> Medium C -lisäaineen<br />
alikvootti yhteen alikvoottiin <strong>Chang</strong> Medium B Basal<br />
-elatusainetta.<br />
5. Sekoita hyvin.<br />
Pakastettu lisäaine<br />
1. Sulata <strong>Chang</strong> Medium C pakastettu lisäaine.<br />
2. Jaa aseptisesti sopivan kokoisiin alikvootteihin (eriin)<br />
ja pakasta uudelleen. (HUOMAUTUS: Lisäainepullo<br />
sisältää 14 ml tai 70 ml. Jaa tasaisesti.)<br />
3. Jaa myös aseptisesti <strong>Chang</strong> Medium B Basal<br />
vastaavaksi määräksi alikvootteja.<br />
4. Täydellisen <strong>Chang</strong> Medium C:n valmistamiseksi<br />
lisää yksi sulatettu <strong>Chang</strong> Medium C -lisäaineen<br />
alikvootti yhteen alikvoottiin <strong>Chang</strong> Medium B Basal<br />
-elatusainetta.<br />
5. Sekoita hyvin.<br />
KÄYTTÖOHJEET<br />
VILJELMIEN RUOKKIMISEEN KÄYTETYN<br />
ELATUSAINEEN pH:N ON OLTAVA VÄLILLÄ<br />
6,8–7,2 (eli elatusaineen on oltava väriltään hieman<br />
kellertävän lohenpunainen). pH:ta voidaan säätää helposti<br />
sijoittamalla elatusaine 5 % – 8 % CO2-soluviljelykaappiin<br />
niin että korkki on hieman löysällä.<br />
Lopullisen pH:n on oltava 6,8–7,2.<br />
Lisätietoja näiden tuotteiden käytöstä kunkin laboratorion<br />
tulee hakea omista menettelyohjeistaan ja protokollista,<br />
jotka on erityisesti kehitetty ja optimoitu paikallista<br />
lääkinnällistä ohjelmaa varten.<br />
tarpeen.<br />
LAADUNVARMISTUS<br />
STERIILIYS<br />
<strong>Chang</strong> Medium C -lisäaineen tuotantoon käytettävästä<br />
seerumista on testattu viruskontaminaatio CFR Title<br />
9 Part 113.53:n mukaisesti. Sille on myös tehty<br />
mykoplasmakontaminaatiota koskeva seulontatutkimus.<br />
Sekä <strong>Chang</strong> Medium B Basal että <strong>Chang</strong> Medium C -lisäaine<br />
steriloidaan suodattamalla 0,1 mikronin suodattimen<br />
läpi. <strong>Chang</strong> Medium B Basal -elatusaineesta ja <strong>Chang</strong><br />
Medium C -lisäaineesta testataan edustavien näytteiden<br />
mahdollinen bakteerikontaminaatio noudattamalla<br />
steriiliyden testausprotokollaa, joka on kuvattu nykyisessä<br />
USP-steriiliystestissä .<br />
<strong>Chang</strong> Medium ® on <strong>Irvine</strong> <strong>Scientific</strong>in rekisteröity<br />
tavaramerkki.<br />
pilnībā izšķīdinātu).<br />
4. Aseptiski pārnesiet visu sagatavotā <strong>Chang</strong> Medium<br />
C Supplement (piedevas) saturu uz <strong>Chang</strong> Medium B<br />
Basal (pamata) pudeli.<br />
5. Labi samaisiet pilnīgo <strong>Chang</strong> Medium C, pavirpinot<br />
pudeli.<br />
6. Pievienojiet 10,0 ml (200 mM) L-glutamīna. Ja vēlams,<br />
var pievienot antibiotikas.<br />
Saldētā piedeva<br />
1. Ātri atlaidiniet <strong>Chang</strong> Medium C saldēto piedevu,<br />
pagrozot pudeli 37°C ūdens peldē.<br />
2. Aseptiski pārnesiet visu sagatavotā <strong>Chang</strong> Medium<br />
C Supplement (piedevas) saturu uz <strong>Chang</strong> Medium B<br />
Basal (pamata) pudeli.<br />
3. Labi samaisiet pilnīgo <strong>Chang</strong> Medium C, pavirpinot<br />
pudeli.<br />
4. Pievienojiet 10,0 ml (200 mM) L-glutamīna. Ja vēlams,<br />
var pievienot antibiotikas.<br />
CHANG MEDIUM C PIEDEVU IEDALĪŠANA<br />
DEVĀS<br />
Liofilizētā piedeva<br />
Ja nespējat izlietot pilnīgo <strong>Chang</strong> Medium C 10 dienu laikā,<br />
Jūs, iespējams, vēlēsieties sagatavot mazāku daudzumu,<br />
izmantojot šo modificēto procedūru:<br />
1. Izšķīdiniet <strong>Chang</strong> Medium C liofilizēto piedevu.<br />
2. Aseptiski iedaliet parocīga lieluma devās un sasaldējiet<br />
atkārtoti.<br />
3. Aseptiski iedaliet arī <strong>Chang</strong> Medium B Basal (pamata)<br />
atbilstoša skaita devās.<br />
4. Lai sagatavotu pilnīgo <strong>Chang</strong> Medium C, pievienojiet<br />
vienu devu atlaidinātas <strong>Chang</strong> Medium C Supplement<br />
(piedevas) vienai devai <strong>Chang</strong> Medium B Basal<br />
(pamata).<br />
5. Labi samaisiet.<br />
Saldētā piedeva<br />
1. Atlaidiniet <strong>Chang</strong> Medium C saldēto piedevu.<br />
2. Aseptiski iedaliet parocīga lieluma devās un sasaldējiet<br />
atkārtoti. (PIEZĪME: Flakons satur 14 ml vai 70 ml<br />
piedevas. Iedaliet vienlīdzīgās daļās.)<br />
3. Aseptiski iedaliet arī <strong>Chang</strong> Medium B Basal (pamata)<br />
atbilstoša skaita devās.<br />
4. Lai sagatavotu pilnīgo <strong>Chang</strong> Medium C, pievienojiet<br />
vienu devu atlaidinātas <strong>Chang</strong> Medium C Supplement<br />
(piedevas) vienai devai <strong>Chang</strong> Medium B Basal<br />
(pamata).<br />
5. Labi samaisiet.<br />
LIETOŠANAS NORĀDĪJUMI<br />
Tās barotnes pH, kuru izmanto kultūru<br />
barotņu papildināšanai, ir jābūt 6,8-7,2 (t. i.,<br />
barotnei jābūt nedaudz iedzeltenā laša krāsā). pH līmeni<br />
iespējams vienkārši pielāgot, ievietojot barotnes flakonu ar<br />
nedaudz vaļīgāk uzliktu aizbāzni 5%-8% CO 2 inkubatorā.<br />
Galīgajam pH līmenim ir jābūt 6,8-7,2.<br />
Lai uzzinātu papildu informāciju par šo produktu lietošanu,<br />
katrai laboratorijai jāiepazīstas ar tajā noteiktajām<br />
procedūrām un protokoliem, kas īpaši izstrādāti un optimizēti<br />
individuālas medicīniskas programmas veikšanai.<br />
KVALITĀTES NODROŠINĀŠANA<br />
STERILITĀTE<br />
<strong>Chang</strong> Medium C Supplement (piedevas) ražošanā<br />
izmantotais serums ir ticis testēts attiecībā uz kontamināciju<br />
ar vīrusiem saskaņā ar Federālā noteikumu kodeksa (CFR)<br />
9. nodaļas, sadaļas 113.53 nosacījumiem. Barotne tikusi<br />
rūpīgi testēta attiecībā uz piesārņojumu ar mikoplazmu.<br />
Gan <strong>Chang</strong> Medium B Basal (pamata), gan <strong>Chang</strong><br />
Medium C Supplement (piedeva) ir sterilizēti, filtrējot caur<br />
0,1 mikronu filtru. No <strong>Chang</strong> Medium B Basal (pamata) un<br />
<strong>Chang</strong> Medium C Supplement (piedeva) ņemtie paraugi<br />
ir pārbaudīti, lai noteiktu iespējamo bakterioloģisko<br />
piesārņojumu, ievērojot sterilitātes testēšanas protokolu,<br />
kas aprakstīts pašreizējos ASV Farmakopejas (USP)<br />
noteikumos par sterilitātes testēšanu .<br />
<strong>Chang</strong> Medium ® ir reģistrēta <strong>Irvine</strong> <strong>Scientific</strong> preču zīme.
Catalog No. <strong>T101</strong>-019, <strong>T101</strong>-059, C100+C106, C101+C108<br />
For in vitro diagnostic use.<br />
Zum Gebrauch in der in vitro Diagnostik.<br />
Per uso diagnostico in vitro.<br />
Para uso en diagnóstico in vitro.<br />
Pour l’usage diagnostique in vitro.<br />
Para a utilização em diagnóstico in vitro.<br />
Για in vitro διαγνωστική χρήση.<br />
In vitro diagnostikum.<br />
Til in vitro-diagnostik.<br />
In vitro diagnostiseen käyttöön.<br />
Lietošanai in vitro diagnostikā.<br />
Voor in vitro diagnostisch gebruik.<br />
Do stosowania w diagnostyce in vitro.<br />
Pentru utilizarea fertilizării in vitro<br />
För in vitro-diagnostik.<br />
In vitro diagnostiliseks kasutamiseks.<br />
In vitro diagnosztikai célra.<br />
Skirta in vitro diagnostikos tyrimams.<br />
<strong>Chang</strong> Medium ® C<br />
For Human Amniotic Fluid Cells<br />
Symbols:<br />
European Representative Storage Temperature for:<br />
MPIE<br />
Schutweg 13A<br />
5145 NP Waalwijk, The Netherlands<br />
C108<br />
0050<br />
See instructions<br />
for use.<br />
Catalog Number<br />
Lot Number<br />
Sterilized using aseptic<br />
processing techniques<br />
(filtration)<br />
Expiration:<br />
Year - Month - Day<br />
Caution: See instructions<br />
for use<br />
Storage Temperature for :<br />
<strong>T101</strong>-019,<strong>T101</strong>-059,<br />
C100, C106 and C101<br />
CE Mark<br />
MPIE Schutweg 13a<br />
5145 NP Waalwijk,<br />
The Netherlands<br />
NEDERLANDS<br />
BEDOELD GEBRUIK<br />
<strong>Chang</strong> Medium C kan worden gebruikt voor de volgende<br />
toepassingen:<br />
1. de primaire kweek van vruchtwatercellen<br />
2. groeiende gepasseerde vruchtwatercellen<br />
3. de kweek van beenmergcellen<br />
4. vast amnionweefsel uit chorion villi-monsters.<br />
DIT MEDIUM IS GESCHIKT VOOR GEBRUIK IN<br />
ZOWEL OPEN (KWEKEN DIE ZIJN GEËQUILIBREERD<br />
MET EEN 5% CO2-ATMOSFEER) EN GESLOTEN<br />
KWEEKSYSTEMEN (KWEKEN VOLLEDIG BEDEKT MET<br />
5% CO2 EN GEÏNCUBEERD MET KWEEKFLESSEN MET<br />
GOED VASTGEDRAAIDE DOPPEN).<br />
Voorzichtig: gebruik <strong>Chang</strong> Medium C-componenten niet<br />
na de vervaldatum die op de afzonderlijke<br />
stickers is vermeld.<br />
PRODUCTBESCHRIJVING<br />
<strong>Chang</strong> Medium® C werd ontwikkeld voor de primaire<br />
kweek van humane vruchtwatercellen voor gebruik bij<br />
karyotypering en ander prenataal genetisch onderzoek.<br />
DEZE FORMULE IS GEOPTIMALISEERD VOOR ZOWEL<br />
OPEN ALS GESLOTEN SYSTEMEN.<br />
BEWAREN EN STABILITEIT<br />
Bewaar Store <strong>Chang</strong> Medium C Frozen Supplement minder<br />
dan 10°C, <strong>Chang</strong> Medium C gelyofiliseerd supplement bij<br />
2 ºC tot 8 ºC, <strong>Chang</strong> Medium B basaal bij 2 ºC tot 8 ºC en<br />
compleet <strong>Chang</strong> Medium C bij 2 ºC tot 8 ºC. <strong>Chang</strong> Medium<br />
B basaal mag niet worden ingevroren.<br />
Beschermen tegen fluorescerend licht.<br />
Zie de afzonderlijke componentenstickers op de flessen<br />
voor de specifieke vervaldatum. Compleet <strong>Chang</strong> Medium<br />
C mag worden bewaard bij 2 ºC tot 8 ºC gedurende<br />
10 dagen voordat het wordt gebruikt, zonder dat dit de<br />
werking beïnvloedt. Bewaren gedurende meer dan 10<br />
dagen wordt afgeraden.<br />
COMPLEET CHANG MEDIUM C MAG NIET WORDEN<br />
INGEVROREN.<br />
COMPONENTEN<br />
mg/l<br />
Zouten..................................................................7900<br />
Dextrose...............................................................1400<br />
Aminozuren..........................................................1000<br />
Polypeptiden............................................................66<br />
Vitaminen.................................................................22<br />
Deoxyribonucleosiden..............................................21<br />
Ribonucleosiden.......................................................20<br />
Natriumpyruvaat.....................................................110<br />
Andere componenten.................................................8<br />
Hormonen en sporenelementen........................0,0025<br />
Steroïdehormonen.............................................0,0013<br />
Serum van pasgeboren kalveren......................6% v/v<br />
Serum van ongeboren kalveren (FBS)..............6% v/v<br />
VOORZORGSMAATREGELEN EN<br />
WAARSCHUWINGEN<br />
Dit hulpmiddel is bedoeld voor gebruik door personeel<br />
dat opgeleid is voor procedures inclusief de aangegeven<br />
toepassing waarvoor het hulpmiddel is bedoeld.<br />
PREPAREREN VAN COMPLEET CHANG<br />
MEDIUM C<br />
Gelyofiliseerd supplement<br />
1. Laat <strong>Chang</strong> Medium C gelyofiliseerd supplement op<br />
omgevingstemperatuur komen.<br />
2. Voeg op aseptische wijze 10 ml of 50 ml steriel<br />
gedistilleerd water toe aan het lyofilisaat. De 10 ml<br />
flacon is voor 90 ml <strong>Chang</strong> Medium B basaal; de 50 ml<br />
flacon is voor 450 ml <strong>Chang</strong> Medium B basaal.<br />
3. Draai de flacon voorzichtig rond om een goede<br />
oplossing te krijgen. (OPM.: het kan noodzakelijk zijn om<br />
de flacon in een incubator te zetten bij 37 ºC gedurende<br />
5 tot 10 minuten om het supplement volledig te laten<br />
Gebruik van <strong>Chang</strong> Medium C voor primaire<br />
kweken: in situ-methode<br />
1. Centrifugeer het vruchtwater met lage snelheid om de<br />
cellen te concentreren.<br />
2. Resuspendeer het celpellet in een kleine hoeveelheid<br />
van het eigen vruchtwater van de patiënt. Voorbeeld:<br />
aspireer het supernatant van 10 ml gecentrifugeerd<br />
vruchtwater tot 0,5 ml boven het celpellet en<br />
resuspendeer. Voeg voldoende <strong>Chang</strong> Medium C toe<br />
aan de geconcentreerde celsuspensie zodat er een<br />
eindvolume van 0,5 ml per afdekplaatje (in totaal 4<br />
afdekplaatjes) of 2 ml per fles beschikbaar is.<br />
3. Zet de kweken ongestoord in de incubator bij 37 °C en<br />
5% CO2-atmosfeer.<br />
4. Bedek de kweken op dag 2 volledig door 2 ml <strong>Chang</strong><br />
Medium C toe te voegen.<br />
5. Na 4 tot 5 dagen moet de groei van de kweken worden<br />
gecontroleerd. De kweken moeten worden gevoed<br />
als eenmaal is vastgesteld dat zij groeien. Voed de<br />
kweken door al het kweeksupernatant te verwijderen<br />
en te vervangen door 2 ml vers <strong>Chang</strong> Medium C. Het<br />
verdient aanbeveling de kweken<br />
daarna om de 2 dagen te voeden.<br />
6. Controleer de kweken op groei op/na dag 5, en oogst<br />
als voldoende kolonies worden waargenomen.<br />
7. De beste resultaten worden verkregen als de kweken<br />
worden gevoed met <strong>Chang</strong> Medium C op de dag vóór<br />
het oogsten.<br />
Gebruik van <strong>Chang</strong> Medium C voor primaire<br />
kweken: flesmethode<br />
1. Centrifugeer het vruchtwater met lage snelheid om de<br />
cellen te concentreren.<br />
2. Resuspendeer het celpellet in een kleine hoeveelheid<br />
van het eigen vruchtwater van de patiënt. Voorbeeld:<br />
aspireer het supernatant van 10 ml gecentrifugeerd<br />
vruchtwater tot 1 ml boven het celpellet en<br />
resuspendeer. Voeg 4 ml <strong>Chang</strong> Medium C toe zodat<br />
het totaalvolume per fles 5 ml bedraagt.<br />
3. Zet de kweken ongestoord in de incubator bij 37 °C en<br />
5% CO2-atmosfeer.<br />
4. Controleer op groei op dag 5. Vervang het medium door<br />
vers <strong>Chang</strong> Medium C en oogst als voldoende celgroei<br />
wordt waargenomen.<br />
5. Controleer of de kweken groeien en vervang het<br />
medium volledig elke dag daarna totdat voldoende<br />
kolonies worden waargenomen en kunnen worden<br />
geoogst.<br />
6. De beste resultaten worden verkregen als de kweken<br />
worden gevoed met <strong>Chang</strong> Medium C op de dag vóór<br />
het oogsten.<br />
OPM.: bij gesloten systemen moet elke kweekfles<br />
gedurende 20 seconden met 5% CO2 - 95% lucht worden<br />
gespoeld. Draai de doppen van de kweekflessen vast en<br />
zet deze in de incubator bij 37 °C. (Het verdient aanbeveling<br />
een steriel, afgesloten Pasteurpipet aan te sluiten op de<br />
CO2-bron om de steriliteit van het instromende gas te<br />
garanderen.).<br />
Gebruik van <strong>Chang</strong> Medium C voor groeiende<br />
gepasseerde vruchtwatercellen:<br />
Om de cellen te passeren, behandel de kweken met<br />
trypsine (of pronase etc.) zoals u dat normaal gesproken<br />
zou doen als cellen groeien in een traditioneel medium. De<br />
proteasebehandeling dient echter zorgvuldig in de gaten<br />
te worden gehouden. Vruchtwatercellen die gekweekt<br />
zijn in <strong>Chang</strong> Medium C hebben de neiging gevoeliger<br />
te zijn voor proteasebehandeling dan vruchtwatercellen
2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588<br />
Telephone: 1 949 261 7800 • 1 800 437 5706<br />
Fax: 1 949 261 6522 • www.irvinesci.com<br />
PN 40200 Rev.9<br />
oplossen).<br />
4. Breng de gehele inhoud van het gereconstitueerde<br />
<strong>Chang</strong> Medium C supplement op aseptische wijze over<br />
naar de fles met <strong>Chang</strong> Medium B basaal.<br />
5. Meng het complete <strong>Chang</strong> Medium C goed door de fles<br />
rond te draaien.<br />
6. Voeg L-glutamine toe, 10,0 ml/l (200 mM). Antibiotica<br />
kunnen, indien gewenst, worden toegevoegd.<br />
Bevroren supplement<br />
1. Ontdooi <strong>Chang</strong> Medium C bevroren supplement snel<br />
door de flacon rond te draaien in een 37 ºC waterbad.<br />
2. Breng de gehele inhoud van het ontdooide <strong>Chang</strong><br />
Medium C supplement op aseptische wijze over naar<br />
de fles met <strong>Chang</strong> Medium B basaal.<br />
3. Meng het complete <strong>Chang</strong> Medium C goed door de fles<br />
rond te draaien.<br />
4. Voeg L-glutamine toe, 10,0 ml/l (200 mM). Antibiotica<br />
kunnen, indien gewenst, worden toegevoegd.<br />
OPDELEN VAN CHANG MEDIUM C<br />
SUPPLEMENT<br />
Gelyofiliseerd supplement<br />
Als u het complete <strong>Chang</strong> Medium C binnen 10 dagen niet<br />
kunt gebruiken, kunt u kleinere hoeveelheden aanmaken<br />
met de onderstaande gewijzigde procedure:<br />
1. Reconstituteer <strong>Chang</strong> Medium C gelyofiliseerd<br />
supplement.<br />
2. Verdeel het op aseptische wijze in gemakkelijk<br />
hanteerbare delen en vries deze in.<br />
3. Verdeel <strong>Chang</strong> Medium B basaal ook op aseptische<br />
wijze in een overeenkomstig aantal delen.<br />
4. Om het complete <strong>Chang</strong> Medium C te prepareren, voeg<br />
één deel ontdooid <strong>Chang</strong> Medium C supplement toe aan<br />
één deel <strong>Chang</strong> Medium B basaal.<br />
5. Meng het goed.<br />
Bevroren supplement<br />
1. Ontdooi <strong>Chang</strong> Medium C bevroren supplement.<br />
2. Verdeel het op aseptische wijze in gemakkelijk<br />
hanteerbare delen en vries deze opnieuw in. (OPM.:<br />
de supplementflacon bevat 14 ml of 70 ml. Verdeel dit<br />
in gelijke delen.)<br />
3. Verdeel <strong>Chang</strong> Medium B basaal ook op aseptische<br />
wijze in een overeenkomstig aantal delen.<br />
4. Om het complete <strong>Chang</strong> Medium C te prepareren, voeg<br />
één deel ontdooid <strong>Chang</strong> Medium C supplement toe<br />
aan één deel <strong>Chang</strong> Medium B basaal.<br />
5. Meng het goed.<br />
GEBRUIKSAANWIJZING<br />
DE pH VAN HET MEDIUM DAT WORDT<br />
GEBRUIKT OM DE KWEKEN TE VOEDEN<br />
MOET LIGGEN TUSSEN 6,8 EN 7,2 (d.w.z. het<br />
medium moet een lichtgele zalmkleur hebben). De pH<br />
kan iets worden aangepast door het medium met iets<br />
losgedraaide dop in een 5%-8% CO2-incubator te zetten.<br />
De definitieve pH moet liggen tussen 6,8 en 7,2.<br />
Voor aanvullende informatie over het gebruik van<br />
deze producten, dient elk laboratorium haar eigen<br />
laboratoriumprocedures en -protocollen te raadplegen<br />
die speciaal zijn ontwikkeld en geoptimaliseerd voor uw<br />
individueel medisch programma.<br />
die zijn gekweekt in een traditioneel medium. Het kan<br />
noodzakelijk zijn om uw protocol te wijzigen om hiermee<br />
rekening te houden.<br />
KWALITETISBORGING<br />
STERILITEIT<br />
Het serum dat is gebruikt bij de productie van <strong>Chang</strong><br />
Medium C Supplement is getest op virale besmetting<br />
volgens CFR Title 9, Part 113.53. Het is ook getest op<br />
mycoplasmabesmetting. Zowel <strong>Chang</strong> Medium B basaal<br />
als <strong>Chang</strong> Medium C supplement zijn gesteriliseerd middels<br />
filtratie met behulp van een 0,1 micron filter. Representatieve<br />
<strong>Chang</strong> Medium B basaal- en <strong>Chang</strong> Medium C supplementmonsters<br />
zijn getest op mogelijke bacteriologische<br />
besmetting volgens het steriliteitstestprotocol zoals<br />
beschreven in de huidige USP-steriliteitstest .<br />
<strong>Chang</strong> Medium ® is een gedeponeerd handelsmerk van<br />
<strong>Irvine</strong> <strong>Scientific</strong>.
POLSKI<br />
ZASTOSOWANIE<br />
Pożywka <strong>Chang</strong> Medium C może być używana w<br />
następujących procedurach:<br />
1. hodowla pierwotna komórek ludzkiego płynu<br />
owodniowego<br />
2. rosnące pasażowane komórek płynu owodniowego<br />
3. hodowla komórek szpiku kostnego<br />
4. biopsja stałej tkanki owodni z kosmówki.<br />
POŻYWKA TA JEST PRZEZNACZONA DO UŻYCIA<br />
Z A R Ó W N O W S Y S T E M A C H O T W A R T Y C H<br />
(RÓWNOWAŻONYCH W ATMOSFERZE 5% CO2),<br />
JAK I ZAMKNIĘTYCH (POSIEWY TRAKTOWANE 5%<br />
CO2 I INKUBOWANE W SZCZELNIE ZAMKNIĘTYCH<br />
NACZYNIACH NA POSIEW).<br />
Środki ostrożności: Nie stosować składników <strong>Chang</strong><br />
Medium C po upływie daty ważności<br />
podanej na poszczególnych etykietach.<br />
OPIS PRODUKTU<br />
Pożywka <strong>Chang</strong> Medium® C została wyprodukowana<br />
dla hodowli pierwotnych komórek ludzkiego płynu<br />
owodniowego do kariotypowania i przeprowadzania innych<br />
przedporodowych testów genetycznych. TA PROCEDURA<br />
ZOSTAŁA ZOPTYMALIZOWANA ZARÓWNO DLA<br />
OTWARTYCH, JAK I ZAMKNIĘTYCH SYSTEMÓW.<br />
PRZECHOWYWANIA I STABILNOŚĆ<br />
Przechowywać zamrożony dodatek pożywki <strong>Chang</strong><br />
Medium C w temperaturze poniżej -10°C, liofilizowany<br />
dodatek <strong>Chang</strong> Medium C w temperaturze od 2°C do 8°C,<br />
podstawową pożywkę w temperaturze od 2°C do 8°C i<br />
całkowitą pożywkę <strong>Chang</strong> Medium C w temperaturze od<br />
2°C do 8°C. Podstawowa pożywka <strong>Chang</strong> Medium B nie<br />
może być zamrożona.<br />
Chronić przed światłem fluorescencyjnym.<br />
Data ważności znajduje się na etykietach butelek<br />
poszczególnych składników. Całkowita pożywka <strong>Chang</strong><br />
Medium C może być przechowywana w temperaturze od<br />
2°C do 8°C przez 10 dni bez negatywnego wpływu na jej<br />
działanie. Nie zaleca się przechowywania dłużej niż 10 dni.<br />
NIE ZAMRAŻAĆ CAŁKOWITEJ POŻYWKI CHANG<br />
MEDIUM C.<br />
SKŁADNIKI<br />
mg/l<br />
Sole......................................................................7900<br />
Dekstroza.............................................................1400<br />
Aminokwasy..........................................................1000<br />
Polipeptydy...............................................................66<br />
Witaminy...................................................................22<br />
Dezoksyrybonukleozydy...........................................21<br />
Rybonukleozydy.......................................................20<br />
Pirogronian sodu....................................................110<br />
Inne składniki.............................................................8<br />
Hormony i elementy śladowe............................0,0025<br />
Hormony steroidowe.........................................0,0013<br />
Surowica nowonarodzonego cielęcia................6% v/v<br />
Płodowa surowica bydlęca................................6% v/v<br />
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI I OSTRZEŻENIA<br />
To urządzenie jest przeznaczone do użycia przez personel<br />
wykwalifikowany w dziedzinie procedur obejmujących<br />
wskazane zastosowanie, dla którego to urządzenie jest<br />
przeznaczone.<br />
PRZYGOTOWANIE CAŁKOWITEJ POŻYWKI<br />
CHANG MEDIUM C.<br />
Dodatek liofilizowany<br />
1. Pozostawić liofilizowany dodatek <strong>Chang</strong> Medium C do<br />
osiągnięcia temperatury pokojowej.<br />
2. Stosując technikę aseptyczną, dodać 10 ml lub 50 ml<br />
sterylnej wody destylowanej do liofilizatu. Fiolka 10<br />
ml jest przeznaczona dla 90 ml pożywki podstawowej<br />
<strong>Chang</strong> Medium B; fiolka 50 ml jest przeznaczona dla<br />
450 ml pożywki podstawowej <strong>Chang</strong> Medium B.<br />
INSTRUKCJE UŻYCIA<br />
pH pożywki używanej do odżywiania hodowli<br />
musi mieścić się w granicach 6,8 – 7,2 (tzn. kolor<br />
pożywki musi być lekko zółtawo-różowy). pH można łatwo<br />
dostosować przez umieszczenie pożywki w inkubatorze<br />
5%-8% atmosferze CO2 z lekko poluzowaną zatyczką.<br />
Końcowe pH musi być 6,8 – 7,2. Zob.<br />
Aby zapoznać się z dodatkowymi szczegółami użycia<br />
tych produktów, każde laboratorium powinno odwołać się<br />
do jego własnych procedur laboratoryjnych i protokołów,<br />
które zostały specjalnie opracowane i zoptymalizowane<br />
dla indywidulanego programu medycznego.<br />
Użycie <strong>Chang</strong> Medium C do hodowli<br />
pierwotnych: metodologie in situ.<br />
1. Wirować płyn owodniowy przy niskich obrotach, aby<br />
spowodować skupienie komórek.<br />
2. Ponownie zawiesić pelet w małej objętości własnego<br />
płynu owodniowego pacjentki. Na przykład odebrać<br />
10 ml nadsączu z wirowanego płynu owodniowego do<br />
0,5 ml peletu ponad komórkami i ponownie zawiesić.<br />
Dodać wystarczającą ilość pożywki <strong>Chang</strong> Medium<br />
C do stężonej zawiesiny komórek, aby zapewnić<br />
ostateczną objętość posiewu bakterii na pożywce stałej<br />
wynoszacą 0,5 ml na szkiełko nakrywkowe (razem 4<br />
szkiełka nakrywkowe) lub 2 ml na kolbkę.<br />
3. Inkubować hodowle nienaruszone w temperaturze<br />
37°C, 5% atmosferze CO2.<br />
4. W drugim dniu przepłukać hodowle poprzez dodanie 2<br />
ml <strong>Chang</strong> Medium C.<br />
5. Po 4 do 5 dniach należy sprawdzić wzrost hodowli.<br />
Hodowle należy odżywiać po zaobserwowaniu wzrostu.<br />
Odżywiac hodowle poprzez odebranie wszystkich<br />
nadsączy i wymianę z 2 ml świeżej pożywki <strong>Chang</strong><br />
Medium C. Zaleca się, żeby hodowle były nastepnie<br />
odżywiane co 2 dni.<br />
6. Sprawdzić wzrost hodowli w piątym dniu lub póżniej<br />
i zebrać je jeśli zaobserwowano wystarczającą ilość<br />
kolonii.<br />
7. Najlepsze wyniki otrzymywano, gdy hodowle były<br />
odżywiane pożywką <strong>Chang</strong> Medium C na dzień przed<br />
zebraniem.<br />
Użycie <strong>Chang</strong> Medium C do hodowli<br />
pierwotnych: metodologie dla kolb<br />
1. Wirować płyn owodniowy przy niskich obrotach, aby<br />
spowodować skupienie komórek.<br />
2. Ponownie zawiesić pelet w małej objętości własnego<br />
płynu owodniowego pacjentki. Na przykład odebrać 10<br />
ml nadsączu z wirowanego płynu owodniowego do 1 ml<br />
peletu ponad komórkami i ponownie zawiesić. Dodać<br />
4 ml <strong>Chang</strong> Medium C do całkowitej objętości 5 ml na<br />
kolbę.<br />
3. Inkubować hodowle nienaruszone w temperaturze<br />
37°C, 5% atmosferze CO2.<br />
4. Sprawdzić wzrost dnia 5-ego. Jeżeli zaobserwowano<br />
wystarczający wzrost, zmienić pożywkę na świeżą<br />
<strong>Chang</strong> Medium C i zebrać.<br />
5. Sprawdzić wzrost hodowli i całkowicie zmieniać<br />
pożywkę codziennie do zaobserwowania wystarczającej<br />
ilości kolonii, gotowej do zbioru.<br />
6. Najlepsze wyniki otrzymywano, gdy hodowle były<br />
odżywiane pożywką <strong>Chang</strong> Medium C na dzień przed<br />
zebraniem.<br />
UWAGA: W przypadku systemów zamkniętych, przepłukać<br />
każdą kolbę na posiew mieszaniną 5% CO2 - 95%<br />
ROMÂNĂ<br />
INDICAŢIILE UTILIZĂRII MEDIULUI<br />
<strong>Chang</strong> Medium C poate fi utilizată pentru următoarele<br />
aplicaţii:<br />
1. Cultura primară de lichid de celule amniotice<br />
2. Tranziţia celulelor lichidului amniotic în creştere<br />
3. Cultura celulelor de măduvă osoasă<br />
4. Ţesutul solid de amnion din mostre chorionic villi<br />
ACEST MEDIU POATE FI UTILIZAT PENTRU AMBELE<br />
SISTEME: DESCHISE (CULTURI ECHILIBRATE CU 5%<br />
CO2 ATMOSFERIC) ŞI SISTEME DE CULTURĂ ÎNCHISE<br />
(CULTURI INUNDATE CU 5% CO 2 ŞI INCUBATE CU VASE<br />
DE CULTURĂ ÎNCHISE ERMETIC)<br />
Precauţiunii: A nu se utiliza componenţii <strong>Chang</strong> Medium<br />
C după data expirări indicată pe etichetele<br />
individuale.<br />
DESCRIEREA PRODUSULUI<br />
<strong>Chang</strong> Medium ® C este destinată pentru culturile primare de<br />
celule din lichidul amniotic uman pentru utilizarea în caritipuri<br />
şi alte analize prenatale genetice. ACEASTĂ FORMULĂ<br />
POATE FI UTILIZATĂ PENTRU AMBELE SISTEME:<br />
DESCHISE SAU ÎNCHISE.<br />
MODUL DE PĂSTRARE ŞI TERMENUL DE<br />
VALABILITATE<br />
Păstraţi Suplementul congelat de <strong>Chang</strong> Medium C la sub<br />
-10ºC, Suplementul <strong>Chang</strong> Medium C Lipolizat de la 2 ºC<br />
până la 8 ºC, <strong>Chang</strong> Medium B Basal de la 2 ºC până la 8<br />
ºC, şi <strong>Chang</strong> Medium C complet de la 2 ºC până la 8 ºC.<br />
<strong>Chang</strong> Medium B Basal nu trebuie congelat.<br />
Feriţi de lumină fluorescentă.<br />
MODUL DE PĂSTRARE ŞI TERMENUL DE<br />
VALABILITATE<br />
Vezi componentele individuale pe eticheta sticlei pentru<br />
date specifice de expirare. <strong>Chang</strong> Medium C complet se<br />
poate păstra de la 2 ºC până la 8 ºC pe 10 zile înainte de<br />
utilizare fără să afecteze proprietăţile. Nu se recomandă<br />
păstrarea peste 10 zile.<br />
COMPONENŢII<br />
mg/L<br />
Săruri............................................................................. 7900<br />
Dextroză ....................................................................... 1400<br />
Amino Acizi .................................................................... 1000<br />
Polipeptide ...................................................................... 66<br />
Vitamine ........................................................................... 22<br />
Dezoxiribonicleotide ......................................................... 21<br />
Ribonucleotide .................................................................. 20<br />
Piruvat de Sodiu ............................................................... 110<br />
Alte Componente ................................................................. 8<br />
Hormoni şi Elemente Reziduale .................................... 0.0025<br />
Hormoni Steroizi ......................................................... 0.0013<br />
Serum de Viţel nou născut ............................................... 6% v/v<br />
Ser de Bovină fetală ...................................................... 6% v/v<br />
AVERTISMENTE ŞI PRECAUŢIUNI<br />
Acest dispozitiv este destinat să fie utilizat de personalul<br />
specializat în proceduri care includ aplicarea indicată pentru<br />
care a fost creat dispozitivul.<br />
PREPARAREA PENTRU UTILIZARE<br />
Suplimentul Liofilizat<br />
1. Permiteţi Suplimentul Liofilizat <strong>Chang</strong> Medium C să fie<br />
echilibrat la temperatura camerei.<br />
2. Utilizând technici aseptice, adăugaţi 10 mL sau 50 mL<br />
de apă destilată sterilă la liofilizat. La flaconul de 10 mL<br />
este 90 mL de <strong>Chang</strong> Medium Basal; la flaconul de 50<br />
mL este 450 mL <strong>Chang</strong> Medium B Basal.<br />
3. Învârtiţi flaconul cu grijă pentru ca să formeze soluţia.<br />
(NOTĂ: Poate să necesite să fie incubat flaconul la<br />
37 ºC pentru 5 - 10 minute ca să se dizolve complet<br />
suplimentul).<br />
4. Transferaţi aseptic tot conţinutul reconstituit de<br />
Suplimentul <strong>Chang</strong> Medium C la sticla de <strong>Chang</strong><br />
Medium B Basal.<br />
Utilizaţi <strong>Chang</strong> Medium C pentru Culturi<br />
Primare: Metodologie In Situ<br />
1. Centrifugaţi lichidul amniotic la viteză joasă pentru a<br />
concentra celulele.<br />
2. Resuspendaţi celula pelată într-un volum mic de<br />
lichid amniotic al pacientei. De exemplu, aspiraţi<br />
supernatantul de 10 mL de lichid amniotic la 0.5 mL<br />
deasupra celulei pelate şi resuspendaţi. Adăugaţi<br />
<strong>Chang</strong> Medium C suficient la concentratul de celulă<br />
suspensie pentru a permite acoperirea finală a<br />
volumului de 0.5 mL pe lamelă (total 4 lamele) sau 2<br />
mL pe flaconaşe.<br />
3. Incubaţi culturile nedistribuite la 37 ºC 5% CO 2<br />
atmosferic.<br />
4. Inundaţi culturile în ziua două prin adăugarea de 2mL<br />
de <strong>Chang</strong> Medium C.<br />
5. După 4 la 5 zile, culturile trebuie verificată dezvoltarea<br />
culturilor. Culturile trebuie să fie hrănite odată ce se<br />
obsearvă dezvoltarea lor. Hrăniţi culturile prin eliminarea<br />
supernatantului şi înlocuiţi cu 2 mL de <strong>Chang</strong> Medium<br />
C proaspăt. Este recomandat să fie hrănite culturile în<br />
fiecare 2 zile după aceea.<br />
6. Verificaţi culturile pentru dezvoltare în/sau după ziua<br />
5-a, şi recoltaţi când colonii suficiente sunt observate.<br />
7. Cele mai bune rezultate sunt obţinute când culturile sunt<br />
hrănite cu <strong>Chang</strong> Medium C ziua înainte de recoltare.<br />
Utilizaţi <strong>Chang</strong> Medium C pentru Culturi<br />
Primare: Metodologie Flacone<br />
1. Centrifugaţi lichidul amniotic la viteză joasă pentru a<br />
concentra celulele.<br />
2. Resuspendaţi celula pelată într-un volum mic de<br />
lichid amniotic al pacientei. De exemplu, aspiraţi<br />
supernatantul de 10 mL de lichid amniotic la 1 mL<br />
deasupra celulei pelate şi resuspendaţi. Adăugaţi 4 mL<br />
de <strong>Chang</strong> Medium C la volumul total de 5 mL pe flacon.<br />
3. Incubaţi culturile nedistribuite la 37 ºC 5% CO 2<br />
atmosferic.<br />
4. Verificaţi dezvoltarea în ziua a 5-a. Schimbaţi mediul cu<br />
<strong>Chang</strong> Medium C proaspăt şi recoltaţi dacă sunt celule<br />
suficiente dezvoltate.<br />
5. Verificaţi culturile pentru dezvoltare şi schimbaţi complet<br />
mediul la două zile după acea până când apar colonii<br />
suficiente gata pentru recoltare.<br />
6. Cele mai bune rezultate sunt obţinute când culturile sunt<br />
hrănite cu <strong>Chang</strong> Medium C ziua înainte de recoltare.<br />
(NOTĂ: Pentru sisteme închise clătiţi fiecare flacon cu 5%<br />
CO 2 – 95% aer pentru 20 de secunde. Strângeţi capacul<br />
falconului de cultură şi după acea incubaţi la 37 ºC. (Este<br />
recomandat ca să fie ataşată o pipetă sterilă de sursa CO 2<br />
pentru a asigura sterilitatea gazului introdus).<br />
Utilizarea <strong>Chang</strong> Medium C pentru celule de<br />
tranziţie de lichid amniotic:<br />
Pentru a transfera celulele, trataţi cultura cu tripsină (sau<br />
pronase, etc.) aşa cum aţi proceda normal când celulele<br />
se dezvoltă în mediu convenţional. Oricum, tratamentul<br />
de protează trebuie să fie supravegheat cu mare atenţie.<br />
Celule de lichidul amniotic a celulelor dezvoltate in <strong>Chang</strong><br />
Medium C au tendinţă să fie mai sensibile la tratamentul<br />
de protează decât cele dezvoltate în mediul convenţional.<br />
Poate fi necesară modificarea protocolului D-vs. Pentru a<br />
lua aceasta în considerare.<br />
ASIGURAREA CALITĂŢII<br />
STERILITATE<br />
Serul utilizat la producţia Suplimentului de <strong>Chang</strong> Medium
3. Potrząsnąć delikatnie fiolkę ruchem wirowym, aby<br />
doprowadzić do powstania roztworu. (UWAGA: Może<br />
być konieczne inkubowanie fiolki w temperaturze 37°C<br />
przez 5 do 10 minut, aby całkowicie rozpuścić dodatek).<br />
4. Przenieść aseptycznie całą zawartość rozpuszczonego<br />
dodatku <strong>Chang</strong> Medium C do butelki z podstawową<br />
pożywką <strong>Chang</strong> Medium B.<br />
5. Wymieszać całkowitą pożywkę <strong>Chang</strong> Medium C przez<br />
wirowanie butelki.<br />
6. Dodać L-glutaminę, 10,0 ml/l (200 mM). W razie<br />
potrzeby można zastosować dodatkowe antybiotyki.<br />
Dodatek zamrożony<br />
1. Szybko rozmrozić dodatek <strong>Chang</strong> Medium C przez<br />
wirowanie fiolki w łaźni wodnej o temperaturze 37°C.<br />
2. Przenieść aseptycznie całą zawartość rozpuszczonego<br />
dodatku <strong>Chang</strong> Medium C do butelki z podstawowa<br />
pożywką <strong>Chang</strong> Medium B.<br />
3. Wymieszać calkowitą pożywkę <strong>Chang</strong> Medium C przez<br />
wirowanie butelki.<br />
4. Dodać L-glutaminę, 10,0 ml/l (200 mM). W razie<br />
potrzeby można zastosować dodatkowe antybiotyki.<br />
ROZDZIAŁ DODATKU CHANG MEDIUM C<br />
NA ALIKWOTY<br />
Dodatek liofilizowany<br />
Jeżeli nie jest możliwe zużycie całkowitej pożywki <strong>Chang</strong><br />
Medium C w ciągu 10 dni, można przygotować mniejsze<br />
ilości przez następujące zmodyfikowanie procedury:<br />
1. Rozpuścić liofilizowany dodatek <strong>Chang</strong> Medium C.<br />
2. Rozdzielić aseptycznie na odpowiednie wielkościowo<br />
alikwoty i zamrozić.<br />
3. Także rozdzielić aseptycznie pożywkę podstawową<br />
<strong>Chang</strong> Medium B do odpowiadających<br />
alikwotów.<br />
4. Aby przygotować całkowitą pożywkę <strong>Chang</strong> Medium<br />
C, dodać jeden alikwot rozmrożonego dodatku <strong>Chang</strong><br />
Medium C do jednego alikwotu podstawowej pożywki<br />
<strong>Chang</strong> Medium B.<br />
5. Wymieszać dokładnie.<br />
Dodatek zamrożony<br />
1. Rozmrozić zamrożony dodatek <strong>Chang</strong> Medium C.<br />
2. Rozdzielić aseptycznie na odpowiednie wielkościowo<br />
alikwoty i ponownie zamrozić. (UWAGA: Fiolka z<br />
dodatkiem zawiera 14 ml lub 70 ml. Rozdzielić po<br />
równo.)<br />
3. Także rozdzielić aseptycznie pożywkę podstawową<br />
<strong>Chang</strong> Medium B do odpowiadających alikwotów.<br />
4. Aby przygotować całkowitą pożywke <strong>Chang</strong> Medium<br />
C, dodać jeden alikwot rozmrożonego dodatku <strong>Chang</strong><br />
Medium C do jednego alikwotu podstawowej pożywki<br />
<strong>Chang</strong> Medium B.<br />
5. Wymieszać dokładnie.<br />
powietrze przez 20 minut. Szczelnie zamknąć zatyczki<br />
kolb z posiewami I inkubować w temperaturze 37°C. (Jest<br />
zalecane, aby sterylna pipeta Pasteura została dołączona<br />
do źródła CO2, aby zapewnić sterylność wchodzącego<br />
gazu).<br />
Użycie <strong>Chang</strong> Medium C do posiewów<br />
wzrastających pasażowanych komórek płynu<br />
owodniowego:<br />
W celu pasażowania komórek poddać hodowle działaniu<br />
trypsyny (lub pronazy, itd.), tak jak postępuje się w<br />
przypadkach gdy komórki wzrastają na konwencjonalnej<br />
pożywce. Jednakże, działanie proteazy należy dokładnie<br />
monitorować. Komórki płynu owodniowego rosnące na<br />
pożywce <strong>Chang</strong> Medium C są bardziej czułe na działanie<br />
proteazy niż komórki płynu owodniowego rosnące na<br />
pożywce konwencjonalnej. Jeśli wziąć to pod uwagę może<br />
być konieczna modyfikacja protokołu.<br />
KONTROLA JAKOŚCI<br />
STERYLNOŚĆ<br />
Surowica używana do produkcji dodatku <strong>Chang</strong> Medium<br />
C została przetestowana na zanieczyszczenia wirusowe,<br />
zgodnie z CFR Title 9 Part 113.53. Pożywka ta była<br />
też badana przesiewowo na obecność zanieczyszczeń<br />
mykoplazmą. Pożywka podstawowa <strong>Chang</strong> Medium B i<br />
dodatek <strong>Chang</strong> Medium C są sterylizowane przez filtrację<br />
przy zastosowaniu filtra o wielkości porów 0,1 mikrona.<br />
Wybrane próbki pożywki podstawowej <strong>Chang</strong> Medium<br />
B i dodatku <strong>Chang</strong> Medium C zostały przetestowane na<br />
obecność zanieczyszczeń bakteriologicznych, zgodnie z<br />
protokołem testowania sterylności, opisanym w bieżącym<br />
teście sterylności USP .<br />
<strong>Chang</strong> Medium ® jest zarejestrowanym znakiem towarowym<br />
<strong>Irvine</strong> <strong>Scientific</strong>.<br />
5. Amestecaţi complet <strong>Chang</strong> Medium C bine prin<br />
învârtirea sticlei.<br />
6. Adăugaţi Glutamina -L, 10.0 mL/L (200 mM). Pot fi<br />
adăugate antibiotice dacă doriţi.<br />
Suplimentul Congelat<br />
1. Decongelaţi Suplimentul <strong>Chang</strong> Medium C Congelat<br />
repede prin învârtirea flaconului în baie de apă la 37 ºC.<br />
2. Transferaţi aseptic tot conţinutul reconstituit dezgheţat<br />
de Suplimentul <strong>Chang</strong> Medium C la sticla de <strong>Chang</strong><br />
Medium B Basal.<br />
3. Amestecaţi complet <strong>Chang</strong> Medium C bine prin<br />
învârtirea sticlei.<br />
4. Adaugaţi Glutamina -L, 10.0 mL/L (200 mM). Pot fi<br />
adăugate antibiotice dacă doriţi.<br />
ALICOTAREA SUPLIMENTULUI DE CHANG<br />
MEDIUM C<br />
Supliment Liofilizat<br />
Dacă nu puteţi să completaţi <strong>Chang</strong> Medium C în timp de<br />
10 zile puteţi să preparaţi porţiuni mai mici prin următoarele<br />
modificări de procedură:<br />
1. Reconstiuiţi Suplimentul Liofilizat <strong>Chang</strong> Medium C.<br />
2. Distribuiţi aseptic în porţiuni conveniabile de alicot şi<br />
congelaţi.<br />
3. De asemenea distribuiţi aseptic <strong>Chang</strong> Medium B Basal<br />
în număr corespunzător de alicoţi.<br />
4. Pentru a prepara <strong>Chang</strong> Medium C complet, adăugaţi<br />
alicot dezgheţat de Suplimentul <strong>Chang</strong> Medium C la<br />
alicotul de <strong>Chang</strong> Medium B Basal.<br />
5. Amestecaţi bine.<br />
Suplimentul Congelat<br />
1. Dezgheţaţi Suplimentul de <strong>Chang</strong> Medium C congelat.<br />
2. Distribuiţi aseptic în porţiuni conveniabile de alicot şi<br />
recongelaţi. (NOTĂ: Suplimentul de flacon conţine 14<br />
mL sau 70 mL. Distribuiţi egal).<br />
3. De asemenea distribuiţi aseptic <strong>Chang</strong> Medium B Basal<br />
în număr corespunzător de alicoţi.<br />
4. Pentru a prepara <strong>Chang</strong> Medium C complet, adăugaţi<br />
alicot dezgheţat din Suplimentul <strong>Chang</strong> Medium C la<br />
alicotul de <strong>Chang</strong> Medium B Basal.<br />
5. Amestecaţi bine.<br />
INSTRUCŢIUNI DE UTILIZARE<br />
Ph –ul MEDIULUI UTILIZAT SĂ HRĂNIŢI<br />
CULTURILE TREBUIE SĂ FIE ÎNTRE 6.8—7.2<br />
(de exemplu mediul trebuie să fie galben roz-portocaliu în<br />
culoare). pH-ul poate fi ajustat prin amplasarea mediului în<br />
5% - 8% incubator CO 2 cu capacul puţin slăbit.<br />
Ph –ul final trebuie să fie între 6.8- 7.2.<br />
Pentru detalii suplimentare privind folosirea acestui produs,<br />
fiecare laborator trebuie să consulte protocolul pentru<br />
procedurile utilizate în laborator care sunt specifice şi<br />
optimizate pentru programul medical individual.<br />
C au fost testate pentru contaminări virale pe baza CFR<br />
titlul 9 partea 1113.53. Deasemenea a fost verificat pentru<br />
contaminare cu mycoplasmă. Ambele medii: <strong>Chang</strong><br />
Medium B Basal şi Suplimentul <strong>Chang</strong> Medium C au fost<br />
sterilizate prin filtrare cu un filtru de 0.1 microni. Mostre<br />
reprezentative de <strong>Chang</strong> Medium B Basal şi Supliment<br />
de <strong>Chang</strong> Medium C au fost testate pentru posibilitatea<br />
contaminări bacteriologice urmând protocolul curent pentru<br />
testul de sterilizare descris în USP -ul test de sterilitate.<br />
<strong>Chang</strong> Medium ® este o marcă înregistrată de către <strong>Irvine</strong><br />
<strong>Scientific</strong>.
SVENSKA<br />
AVSEDD ANVÄNDNING<br />
<strong>Chang</strong> Medium C kan användas för följande tillämpningar:<br />
1. primärodling av celler i amnionvätska<br />
2. odling av celler från amnionvätska i efterföljande<br />
passage<br />
3. odling av benmärgsceller<br />
4. för fast vävnad från chorionvilli-prov.<br />
DETTA MEDIUM HAR UTVECKLATS FÖR ANVÄNDNING<br />
I BÅDE ÖPPNA (KULTURER EKVILIBRERADE I EN 5<br />
% CO2-ATMOSFÄR) OCH SLUTNA ODLINGSSYSTEM<br />
(KULTURER FLÖDADE MED 5 % CO2 OCH INKUBERADE<br />
MED ODLINGSKÄRLEN TÄTT FÖRSLUTNA).<br />
Obs! Använd inte <strong>Chang</strong> Medium C-komponenterna efter<br />
de utgångsdatum som anges på de individuella etiketterna.<br />
PRODUKTBESKRIVNING<br />
<strong>Chang</strong> Medium® C har utvecklats för primärodling av celler<br />
i human amnionvätska för karyotypbestämning och andra<br />
antenatala genetiska tester. DENNA NÄRINGSLÖSNING<br />
HAR OPTIMERATS FÖR BÅDE ÖPPNA OCH SLUTNA<br />
SYSTEM.<br />
FÖRVARING OCH HÅLLBARHET<br />
<strong>Chang</strong> Medium C fryst supplement skall förvaras vid<br />
under –10°C, <strong>Chang</strong> Medium C frystorkat supplement vid<br />
2–8 ºC, <strong>Chang</strong> Medium B basaltt vid 2–8 ºC och komplett<br />
<strong>Chang</strong> Medium C vid 2–8 ºC. <strong>Chang</strong> Medium B basalt<br />
får inte frysas.<br />
Skyddas från fluorescerande ljus.<br />
Se flasketiketterna på de individuella komponenterna för<br />
specifika utgångsdatum. Komplett <strong>Chang</strong> Medium C kan<br />
förvaras vid 2–8 ºC i 10 dagar före användning utan att<br />
dess funktion påverkas. Förvaring under längre tid än 10<br />
dagar rekommenderas ej.<br />
KOMPLETT CHANG MEDIUM C FÅR EJ FRYSAS.<br />
KOMPONENTER<br />
mg/L<br />
Salter....................................................................7900<br />
Dextros.................................................................1400<br />
Aminosyror............................................................1000<br />
Polypeptider...............................................................66<br />
Vitaminer...................................................................22<br />
Deoxiribonukleosider................................................21<br />
Ribonukleosider........................................................20<br />
Natriumpyruvat........................................................110<br />
Andra komponenter....................................................8<br />
Hormoner och spårämnen.................................0.0025<br />
Steroider.............................................................0.0013<br />
Serum från nyfödda kalvar................6 % volym/volym<br />
Fetalt bovint serum............................6 % volym/volym<br />
FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER OCH<br />
VARNINGAR<br />
Denna produkt är avsedd att användas av personal med<br />
utbildning i procedurer vilka inkluderar den indicerade<br />
tillämpning för vilken produkten är avsedd.<br />
BEREDNING AV KOMPLETT CHANG MEDIUM<br />
C<br />
Frystorkat supplement<br />
1. Låt <strong>Chang</strong> Medium C frystorkat supplement uppnå<br />
rumstemperatur.<br />
2. Använd aseptisk teknik för att tillsätta 10 mL eller 50<br />
mL sterilt destillerat vatten till det frystorkade pulvret.<br />
10 mL-ampullen är avsett för 90 mL <strong>Chang</strong> Medium B<br />
basalt; 50 mL-ampullen är avsedd för 450 mL <strong>Chang</strong><br />
Medium B basalt.<br />
3. Snurra ampullen varligt så att allt pulver löses<br />
upp. (OBS! Det kan vara nödvändigt att inkubera<br />
ampullen vid 37 ºC i 5–10 minuter för att helt lösa upp<br />
supplementet).<br />
4. Överför aseptiskt hela mängden rekonstituerat <strong>Chang</strong><br />
Medium C-supplement till flaskan med <strong>Chang</strong> Medium<br />
Användning av <strong>Chang</strong> Medium C för<br />
primärodling: In situ-metodik<br />
1. Centrifugera amnionväskan på låg hastighet så att<br />
cellerna koncentreras.<br />
2. Resuspendera pelleten i en liten volym av patientens<br />
egen amnionvätska. Aspirera t.ex. supernatanten<br />
från 10 mL centrifugerad amnionvätska till 0,5 mL<br />
ovanför cellpelleten och resuspendera pelleten.<br />
Tillsätt tillräckligt med <strong>Chang</strong> Medium C till den<br />
koncentrerade cellsuspensionen för att möjliggöra en<br />
slutlig utstryksvolym av 0,5 mL per täckglas (totalt 4<br />
täckglas) eller 2 mL per flaskett.<br />
3. Inkubera kulturerna utan att störa dem vid 37 ºC i 5 %<br />
CO2-atmosfär.<br />
4. Flöda kulturerna på dag 2 genom att tillsätta 2 mL <strong>Chang</strong><br />
Medium C.<br />
5. Efter 4-5 dagar bör kulturerna kontrolleras med<br />
avseende på växt. När växt har observerats bör<br />
kulturerna tillföras näring. Tillför näring till kulturerna<br />
genom att avlägsna all supernatant och ersätta den med<br />
2 mL färskt <strong>Chang</strong> Medium C. Det rekommenderas att<br />
därefter tillföra näring till kulturerna varannan dag.<br />
6. Kontrollera kulturerna med avseende på växt på/efter<br />
dag 5 och skörda dem när tillräckligt med kolonier<br />
observeras.<br />
7. Bästa resultat erhålls när kulturerna tillförs näring med<br />
<strong>Chang</strong> Medium C dagen innan de skördas.<br />
Användning av <strong>Chang</strong> Medium C för<br />
primärodling: Metod med flaska<br />
1. Centrifugera amnionväskan på låg hastighet så att<br />
cellerna koncentreras.<br />
2. Resuspendera pelleten i en liten volym av patientens<br />
egen amnionvätska. Aspirera t.ex. supernatanten från<br />
10 mL centrifugerad amnionvätska till 1 mL ovanför<br />
cellpelleten och resuspendera pelleten. Tillsätt 4 mL<br />
<strong>Chang</strong> Medium C till en total volym på 5 mL per flaska.<br />
3. Inkubera kulturerna utan att störa dem vid 37 ºC i 5 %<br />
CO2-atmosfär.<br />
4. Kontrollera kulturerna med avseende på växt på dag 5.<br />
Byt till färskt <strong>Chang</strong> Medium C och skörda om tillräcklig<br />
cellväxt observeras.<br />
5. Kontrollera kulturerna med avseende på växt och byt<br />
därefter ut mediet varannan dag tills tillräckligt med<br />
kolonier observeras och är klara att skördas.<br />
6. Bästa resultat erhålls när kulturerna tillförs näring med<br />
<strong>Chang</strong> Medium C dagen innan de skördas.<br />
OBS! I slutna system flushas varje odlingsflaska med<br />
5 % CO2 – 95 % luft i 20 sekunder. Dra åt locket på<br />
odlingsflaskorna och inlubera dem vid 37 °C. (Det<br />
rekommenderas att ansluta en steril, pluggad pasteurpipett<br />
till CO2-källan för att säkerställa att den inkommande<br />
gasen är steril.).<br />
Användning av <strong>Chang</strong> Medium C för odling<br />
av celler från amnionvätska i efterföljande<br />
passage:<br />
För passage av cellerna behandlas kulturerna med<br />
trypsin (eller pronas, etc.) på normalt sätt som vid odling<br />
av celler i konventionellt medium. Proteasbehandlingen<br />
bör dock noga övervakas. Celler från amnionvätska som<br />
odlas i <strong>Chang</strong> Medium C tenderar att vara känsligare för<br />
proteasbehandling än celler från amnionvätska som odlas i<br />
konventionellt medium. Laboratoriets protokoll kan behöva<br />
modifieras för att ta hänsyn till detta faktum.<br />
KVALITETSSÄKRING<br />
STERILITET<br />
EESTI<br />
KASUTUSVALDKOND<br />
Söödet <strong>Chang</strong> Medium C võib kasutada järgmisteks<br />
rakendusteks:<br />
1. amnionivedeliku rakkude tüvikultuuri kultiveerimine<br />
2. passaaži läbinud amnionivedeliku rakkude<br />
kasvatamine<br />
3. luuüdirakkude kultiveerimine<br />
4. kõldkestahattudest tahkete amnioni kudede<br />
proovide võtmine.<br />
SÖÖDE ON KOOSTATUD KASUTAMISEKS NII LAHTISE<br />
(5% CO2-ATMOSFÄÄRIGA TASAKAALUSTATUD<br />
KULTUURIDEGA) KUI KA KINNISE KULTUURI<br />
SÜSTEEMIDES (5% CO2-GA LOPUTATUD JA TIHEDALT<br />
KORGISTATUD KULTUURIANUMATES KULTUURIDEGA).<br />
Ettevaatust: Ärge kasutage söötme <strong>Chang</strong> Medium<br />
C komponente pärast iga komponendi etiketile märgitud<br />
kõlblikkusaja lõppu.<br />
TOOTE KIRJELDUS<br />
Sööde <strong>Chang</strong> Medium® C arendati välja inimese<br />
amnionivedeliku rakkude tüvikultuuri kultiveerimiseks<br />
karüotüübi määramise otstarbel ja muuks antenataalseks<br />
geneetiliseks testimiseks. SEGU ON OPTIMEERITUD<br />
NII LAHTISTES KUI KA KINNISTES MEETODITES<br />
KASUTAMISEKS.<br />
SÄILITAMINE JA STABIILSUS<br />
Hoidke külmutatud lisas <strong>Chang</strong> Medium C Frozen<br />
Supplement temperatuuril -10ºC, lüofiliseeritud lisand<br />
<strong>Chang</strong> Medium C Lyophilized Supplement temperatuuril 2ºC<br />
kuni 8ºC, põhisööde <strong>Chang</strong> Medium B Basal temperatuuril<br />
2ºC kuni 8ºC ja täissööde <strong>Chang</strong> Medium C temperatuuril<br />
2ºC kuni 8ºC. Põhisöödet <strong>Chang</strong> Medium B Basal ei tohi<br />
külmutada.<br />
Kaitske fluorestsentsvalguse eest.<br />
Kontrollige iga komponendi pudelil selle komponendi<br />
kõlblikkusaja lõppu. Täissöödet <strong>Chang</strong> Medium C võib hoida<br />
temperatuuril 2ºC kuni 8ºC 10 päeva enne selle kasutamist<br />
selle funktsiooni kahjustamata. Hoidmine rohkem kui 10<br />
päeva ei ole soovitatav.<br />
ÄRGE KÜLMUTAGE TÄISSÖÖDET CHANG MEDIUM C.<br />
KOMPONENDID<br />
mg/L<br />
Soolad.......................................................7900<br />
Dekstroos..................................................1400<br />
Aminohapped.............................................1000<br />
Polüpeptiidid..................................................66<br />
Vitamiinid.......................................................22<br />
Desoksüribonukleosiidid.................................21<br />
Ribonukleosiidid.............................................20<br />
Naatriumpüruvaat.........................................110<br />
Muud komponendid..........................................8<br />
Hormoonid ja mikroelemendid..................0,0025<br />
Steroidhormoonid....................................0,0013<br />
Vastsündinud vasika seerum....................6% v/v<br />
Veise loote seerum..................................6% v/v<br />
ETTEVAATUSABINÕUD JA HOIATUSED<br />
See seade on ette nähtud kasutamiseks tervishoiutöötajatele,<br />
kes on saanud vastava koolituse, kaasa arvatud selle<br />
seadme kavandatud kasutuse alal.<br />
TÄISSÖÖTME CHANG MEDIUM C<br />
VALMISTAMINE<br />
Lüofiliseeritud lisand<br />
1. Lubage lüofiliseeritud lisandil <strong>Chang</strong> Medium C<br />
Lyophilized Supplement tasakaalustuda<br />
toatemperatuurini.<br />
2. Aseptilisi tehnikaid kasutades lisage lüofilisaadile 10<br />
mL või 50 mL steriilset destilleeritud vett. 10 mL viaal<br />
on mõeldud 90 mL põhisöötme <strong>Chang</strong> Medium B Basal<br />
jaoks; 50 mL viaal on mõeldud 450 mL põhisöötme<br />
<strong>Chang</strong> Medium B Basal jaoks.<br />
3. Keerutage viaali õrnalt, et lahustumine oleks täielik.<br />
Toodete kasutamise üksikasjaliku informatsiooni vajamise<br />
korral peab iga labor kasutama oma labori protseduure<br />
ja protokolle, mis on välja arendatud ja optimeeritud<br />
konkreetselt teie oma meditsiiniprogrammi jaoks.<br />
C h a n g M e d i u m C f o r k a s u t a m i n e<br />
tüvikultuuride kultiveerimiseks: In Situ<br />
meetod<br />
1. Tsentrifuugige amnionivedelik madalal kiirusel, et rakud<br />
kontsentreeruks.<br />
2. Resuspendeerige rakukämp väheses patsiendi oma<br />
amnionivedelikus. Näiteks – aspireerige tsentrifuugitud<br />
10 mL amnionivedeliku supernatant kuni seda on<br />
rakukämbu kohale jäänud 0,5 mL ja resuspendeerige.<br />
Lisage kontsentreeritud rakususpensioonile küllalt<br />
söödet <strong>Chang</strong> Medium C, et see lubab lõpuks<br />
esemeklaasi iga katteklaasi (kokku 4 katteklaasi) alla<br />
kanda 0,5 mL ehk 2 mL kolbikese kohta.<br />
3. Inkubeerige kultuurid segamatult 5% CO2-atmosfääris<br />
temperatuuril 37 °C.<br />
4. Loputage kultuurid 2. päeval, kasutades selleks 2 mL<br />
söödet <strong>Chang</strong> Medium C.<br />
5. 4 kuni 5 päeva möödudes kontrollige kultuuride<br />
kasvu. Kasvu täheldamisel tuleb kultuure hakata<br />
söötma. Söötke kultuurid kogu kultuuri supernatandi<br />
eemaldades ja seda asendades 2 mL värske söötmega<br />
<strong>Chang</strong> Medium C. Pärast seda on soovitatav kultuuride<br />
söötmine iga 2 päeva tagant.<br />
6. Kontrollige kultuuride kasvu 5. päeval või pärast seda ja<br />
piisaval arvul kolooniate tekkimise korral koguge need<br />
kokku.<br />
7. Parimad tulemused saate siis, kui söödate kultuure<br />
söötmega <strong>Chang</strong> Medium C päev enne nende kokku<br />
kogumist.<br />
Söötme <strong>Chang</strong> Medium C kasutamine<br />
tüvikultuuride kultiveerimiseks: kolbi meetod<br />
1. Tsentrifuugige amnionivedelik madalal kiirusel, et rakud<br />
kontsentreeruks.<br />
2. Resuspendeerige rakukämp väheses patsiendi oma<br />
amnionivedelikus. Näiteks – aspireerige tsentrifuugitud<br />
10 mL amnionivedeliku supernatant kuni seda on<br />
rakukämbu kohale jäänud 1 mL ja resuspendeerige.<br />
Lisage 4 mL söödet <strong>Chang</strong> Medium C et igas kolbis<br />
oleks vedeliku lõplik kogus 5mL.<br />
3. Inkubeerige kultuurid segamatult 5% CO2atmosfääris<br />
temperatuuril 37 °C.<br />
4. Kontrollige kultuuride kasvu 5. päeval. Kui täheldate<br />
piisavat rakkude kasvu, vahetage sööde välja värske<br />
söötme <strong>Chang</strong> Medium C vastu ja koguge kokku.<br />
5. Kontrollige kultuuride kasvu ja vahetage sööde täielikult<br />
välja ülepäeviti pärast seda kuni täheldate piisaval arvul<br />
kolooniaid ja need on kogumiseks valmis.<br />
6. Parimad tulemused saate siis, kui söödate kultuure<br />
söötmega <strong>Chang</strong> Medium C päev enne nende kokku<br />
kogumist.<br />
MÄRKUS: Kinnises süsteemis loputage iga kultuurikolb 20<br />
sekundit 5% CO2 - 95% õhuga. Tihendage kultuurikolbide<br />
korgid ja inkubeerige temperatuuril 37°C. (Soovitatav on<br />
steriilse tropiga Pasteuri pipeti kinnitamine CO2 allikale, et<br />
tagada sissevoolava gaasi steriilsus.).<br />
Söötme <strong>Chang</strong> Medium C kasutamine<br />
passaaži läbinud amnionivedeliku rakkude<br />
kultiveerimiseks:<br />
Rakkude passaaži teostamiseks töödelge kultuure<br />
trüpsiiniga (või proteinaasi vms) nagu rakkude harilikult<br />
konventsionaalses söötmes kasvatamise puhul. Töötlemist
B basalt.<br />
5. Blanda det kompletta <strong>Chang</strong> Medium C väl genom att<br />
snurra flaskan.<br />
6. Tillsätt L-glutamin, 10,0 mL/L (200 mM). Antibiotika kan<br />
tillsättas om så önskas.<br />
Fryst supplement<br />
1. Tina <strong>Chang</strong> Medium C fryst supplement snabbt genom<br />
att snurra ampullen i ett 37 °C vattenbad.<br />
2. Överför aseptiskt hela mängden tinat <strong>Chang</strong> Medium<br />
C-supplement till flaskan med <strong>Chang</strong> Medium B basalt.<br />
3. Blanda det kompletta <strong>Chang</strong> Medium C väl genom att<br />
snurra flaskan.<br />
4. Tillsätt L-glutamin, 10,0 mL/L (200 mM). Antibiotika kan<br />
tillsättas om så önskas.<br />
ALIKVOTERING AV CHANG MEDIUM<br />
C-SUPPLEMENT<br />
Frystorkat supplement<br />
Om det kompletta <strong>Chang</strong> Medium C inte kommer att<br />
användas upp inom 10 dagar kan det vara lämpligt att<br />
dela upp det i mindre mängder med hjälp av följande<br />
modifierade procedur:<br />
1. Rekonstituera <strong>Chang</strong> Medium C frystorkat supplement.<br />
2. Fördela mediet aseptiskt i alikvoter av lämplig storlek<br />
och frys ner dem.<br />
3. Dela även aseptiskt upp <strong>Chang</strong> Medium B basalt i<br />
motsvarande antal alikvoter.<br />
4. För att bereda komplett <strong>Chang</strong> Medium C tillsätts en<br />
alikvot tinat <strong>Chang</strong> Medium C-supplement till en alikvot<br />
av <strong>Chang</strong> Medium B basalt.<br />
5. Blanda väl.<br />
Fryst supplement<br />
1. Tina <strong>Chang</strong> Medium C fryst supplement.<br />
2. Fördela mediet aseptiskt i alikvoter av lämplig storlek<br />
och frys ner dem på nytt. (OBS! Ampullen med<br />
supplement innehåller 14 mL eller 70 mL. Fördela<br />
jämnt.)<br />
3. Dela även aseptiskt upp <strong>Chang</strong> Medium B basalt i<br />
motsvarande antal alikvoter.<br />
4. För att bereda komplett <strong>Chang</strong> Medium C tillsätts en<br />
alikvot tinat <strong>Chang</strong> Medium C-supplement till en alikvot<br />
av <strong>Chang</strong> Medium B basalt.<br />
5. Blanda väl.<br />
BRUKSANVISNING<br />
pH I DET MEDIUM SOM ANVÄNDS FÖR<br />
NÄRINGSTILLFÖRSEL TILL KULTURERNA<br />
MÅSTE VARA MELLAN 6,8,8–7,2 (dvs. mediet<br />
måste ha svagt gulaktig-laxfärg). pH kan enkelt justeras<br />
genom att mediet placeras i en 5–8 % CO2-inkubator med<br />
locket lätt lossat.<br />
Det slutliga pH måste vara 6,8–7,2.<br />
För ytterligare information om användning av dessa<br />
produkter bör varje laboratorium konsultera sina egna<br />
laboratorieförfaranden och -protokoll som utvecklats och<br />
optimerats särskilt för de egna medicinska programmen.<br />
Det serum som används vid framställningen av <strong>Chang</strong><br />
Medium C-supplement har testats för viral kontamination<br />
enligt CFR titel 9 del 113.53. Det har också screenats för<br />
kontamination av mykoplasma. Både <strong>Chang</strong> Medium B<br />
basalt och <strong>Chang</strong> Medium C-supplement har steriliserats<br />
genom filtrering genom ett 0,1 mikron-filter. Representativa<br />
prover av <strong>Chang</strong> Medium B basalt och <strong>Chang</strong> Medium<br />
C-supplement testas för bakteriell kontamination enligt<br />
det sterilitetstestningsprotokoll som beskrivs i aktuell<br />
USP Sterility test (sterilitetstest enligt United States<br />
Pharmacopeia).<br />
<strong>Chang</strong> Medium ® är ett registrerat varumärke som tillhör<br />
<strong>Irvine</strong> <strong>Scientific</strong>.<br />
(MÄRKUS: Viaali inkubeerimine 5 kuni 10 minutit<br />
temperatuuril 37 ºC võib osutuda vajalikuks, et lisand<br />
täielikult lahustuks).<br />
4. Aseptiliselt viige kogu rekonstitueeritud lisand <strong>Chang</strong><br />
Medium C Supplement põhisöödet <strong>Chang</strong> Medium B<br />
Basal sisaldavasse pudelisse.<br />
5. Segage täissööde <strong>Chang</strong> Medium C pudelit keerutades<br />
korralikult läbi.<br />
6. Lisage L-glutamiin, 10,0 mL/L (200 mM). Soovi korral<br />
võite lisada antibiootikume.<br />
Külmutatud lisand<br />
1. Kiirelt sulatage külmutatud lisand <strong>Chang</strong> Medium C<br />
Frozen Supplement viaali 37°C vesivannis keerutades.<br />
2. Aseptiliselt viige kogu sulatatud lisand <strong>Chang</strong> Medium<br />
C Supplement põhisöödet <strong>Chang</strong> Medium B Basal<br />
sisadavasse pudelisse.<br />
3. Segage täissööde <strong>Chang</strong> Medium C pudelit keerutades<br />
korralikult läbi.<br />
4. Lisage L-glutamiin, 10,0 mL/L (200 mM). Soovi korral<br />
võite lisada antibiootikume.<br />
LISANDI CHANG MEDIUM C SUPPLEMENT<br />
ALIKVOOTIDE VÕTMINE<br />
Lüofiliseeritud lisand<br />
Kui teil ei ole võimalik täissöödet <strong>Chang</strong> Medium C 10<br />
päeva jooksul ära kasutada, võib-olla soovite valmis<br />
segada väiksemaid koguseid järgmise modifitseeritud<br />
protseduuri järgi:<br />
1. Rekonstitueerige lüofiliseeritud lisand <strong>Chang</strong> Medium<br />
C Lyophilized Supplement.<br />
2. Jagage aseptiliselt sobiva suurusega alikvootideks ja<br />
külmutage.<br />
3. Jagage aseptiliselt ka põhisööde <strong>Chang</strong> Medium B<br />
Basal sama paljudeks alikvootideks.<br />
4. Täissöötme <strong>Chang</strong> Medium C valmistamiseks lisage<br />
üks alikvoot sulatatud lisandit <strong>Chang</strong> Medium C<br />
Supplement ühele alikvoodile põhisöödet <strong>Chang</strong><br />
Medium B Basal.<br />
5. Segage hästi.<br />
Külmutatud lisand<br />
1. Sulatage külmutatud lisand <strong>Chang</strong> Medium C Frozen<br />
Supplement.<br />
2. Jagage aseptiliselt sobiva suurusega alikvootideks ja<br />
külmutage uuesti. (MÄRKUS: Lisandiviaal sisaldab 14<br />
mL või 70 mL. Jagage võrdeteks osadeks.)<br />
3. Jagage aseptiliselt ka põhisööde <strong>Chang</strong> Medium B<br />
Basal sama paljudeks alikvootideks.<br />
4. Täissöötme <strong>Chang</strong> Medium C valmistamiseks lisage<br />
üks alikvoot sulatatud lisandit <strong>Chang</strong> Medium C<br />
Supplement ühele alikvoodile põhisöödet <strong>Chang</strong><br />
Medium B Basal.<br />
5. Segage hästi.<br />
KASUTUSJUHISED<br />
Kultuuride söötmiseks kasutatava söötme<br />
pH peab olema 6,8...7,2 (st sööde peab olema<br />
kergelt kollakat lõhevärvi). pH-d saab kergesti korrigeerida<br />
lõdvalt korgistatud söötme asetamisega 5%...8% CO2<br />
inkubaatorisse.<br />
Lõplik pH peab olema 6,8...7,2.<br />
proteinaasiga tuleb aga hoolikalt jälgida. Söötmes <strong>Chang</strong><br />
Medium C kasvatatud amnionivedeliku rakud kipuvad<br />
olema tundlikumad proteinaasiga töötlemisele kui tavalises<br />
söötmes kasvatatud amnionivedeliku rakud. Seda arvesse<br />
võttes võib protokolli muutmine osutuda vajalikuks.<br />
KVALITEEDI GARANTII<br />
STERIILSUS<br />
Lisandi <strong>Chang</strong> Medium C Supplement tootmisel kasutatud<br />
seerumit on testitud viirusega kontaminatsiooni suhtes<br />
vastavalt koodeksi CFR 9. peatüki osale 113.53. Seda<br />
on skriinitud ka mükoplasmaga kontaminatsiooni suhtes.<br />
Põhisööde <strong>Chang</strong> Medium B Basal ja lisand <strong>Chang</strong><br />
Medium C Supplement on steriliseeritud kasutades 0,1<br />
mikronilist filtrit. Põhisöötme <strong>Chang</strong> Medium B Basal ja<br />
lisandi <strong>Chang</strong> Medium C Supplement proovid on testitud<br />
võimaliku bakteriaalse saastatuse suhtes järgides kehtivas<br />
USP steriilsuse testis toodud steriilsuse kontrollimise<br />
protokolli.<br />
<strong>Chang</strong> Medium ® on firma <strong>Irvine</strong> <strong>Scientific</strong> registreeritud<br />
kaubamärk.
MAGYAR<br />
RENDELTETÉS<br />
A <strong>Chang</strong> Medium C használható a következő<br />
alkalmazásokban:<br />
1. magzatvíz sejtjeinek primer tenyészete<br />
2. passzált magzatvíz sejtek növekedése<br />
3. csontvelő sejtek tenyészete<br />
4. szilárd amnionszövet a chorionboholy mintából<br />
EZT A MÉDIUMOT MIND NYITOTT (TENYÉSZET<br />
EKVILIBÁRLTATVA VAN 5%-OS CO2 ATMOSZFÉRÁBAN)<br />
MIND PEDIG ZÁRT KULTÚRÁS RENDSZEREKRE<br />
(TENYÉSZET ELÁRASZTVA 5% CO2-VEL ÉS INKUBÁLVA<br />
SZOROSAN LEZÁRT TENYÉSZTŐEDÉNYBEN)<br />
TERVEZTÉK.<br />
Figyelmeztetés: Ne használja <strong>Chang</strong> Medium C<br />
komponenseit az egyes adott címkéken feltüntetett lejárati<br />
határidőn túl.<br />
TERMÉKLEÍRÁS<br />
A <strong>Chang</strong> Medium® C-t humán magzatvíz sejtek primer<br />
tenyészetéhez tervezték kariotipizálásban és más<br />
antenatális genetikai vizsgálatokban való alkalmazásnál.<br />
EZT A FORMULÁT OPTIMALIZÁLTÁK NYITOTT ÉS ZÁRT<br />
RENDSZERRE EGYARÁNT.<br />
TÁROLÁS ÉS STABILITÁS<br />
Tárolja a <strong>Chang</strong> Medium C fagyasztott kiegészítőt -10°C,<br />
<strong>Chang</strong> Medium C liofilizált kiegészítőt 2°C és 8°C között,<br />
<strong>Chang</strong> Medium B alapot 2°C és 8°C között, <strong>Chang</strong> Medium<br />
C-t 2°C és 8°C között. A <strong>Chang</strong> Medium B alapot nem<br />
szabad fagyasztani!<br />
Védje a fluoreszcens fénytől.<br />
Nézze meg az adott komponens üvegének címkéjén a<br />
specifikus lejárati időpontot. A teljes <strong>Chang</strong> Medium C<br />
10 napig tárolható a használat előtt 2°C és 8°C között<br />
anélkül, hogy az hatással lenne a működésére. 10 napon<br />
túli tárolása nem javasolt.<br />
NE FAGYASSZA A TELJES CHANG MEDIUM C-T!<br />
ALKOTÓK<br />
mg/ml<br />
sók........................................................................7900<br />
dextróz..................................................................1400<br />
aminosavak...........................................................1000<br />
polipeptidek..............................................................66<br />
vitaminok..................................................................22<br />
dezoxi-ribonukleiozidok............................................21<br />
ribonukleozidok.........................................................20<br />
nátrium-piruvát........................................................110<br />
más alkotók................................................................8<br />
hormonok és nyomelemek................................0.0025<br />
szteroid hormonok..............................................0.0013<br />
újszülött borjúszérum........................................6% v/v<br />
magzati marhaszérum.......................................6% v/v<br />
ÓVINTÉZKEDÉSEK ÉS FIGYELMEZTETÉSEK<br />
Ezt az eszközt úgy tervezték, hogy használata az eszköz<br />
tervezett alkalmazását is magába foglaló eljárásokban<br />
kiképzett személyzet által történjen.<br />
BEREDNING FÖR ANVÄNDNING<br />
Liofilizált kiegészítő<br />
1. Hagyja a <strong>Chang</strong> Medium C liofilizát kiegészítőt<br />
egyensúlyba kerülni szobahőmérsékleten.<br />
2. Aszeptikus technikát alkalmazva adjon 10 ml vagy 50<br />
ml steril desztillált vizet a liofilizátumhoz. A 10 ml fiola<br />
a 90 ml <strong>Chang</strong> Medium B alaphoz, az 50 ml fiola a 450<br />
ml <strong>Chang</strong> Medium B alaphoz való.<br />
3. Rázza a fiolát óvatosan a teljes feloldás eléréséhez.<br />
(MEGJEGYZÉS: Lehet, hogy 5 -10 percig inkubálni<br />
kell a fiolát 37 °C-on ahhoz, hogy a kiegészítő teljesen<br />
feloldódjon.)<br />
4. Aszeptikusan vigye át az újra összeállított <strong>Chang</strong><br />
Medium C kiegészítő teljes tartalmát a <strong>Chang</strong> Medium<br />
B alap üvegébe.<br />
<strong>Chang</strong> Medium C használata primer<br />
tenyészethez: In Situ módszerek:<br />
1. Centrifugálja a magzatvizet kis sebességgel a sejtek<br />
koncentrálására.<br />
2. Szuszpendálja újra a pelletet a beteg saját<br />
magzatvizének kis térfogatával. Például, szívja le<br />
a 10 ml centrifugált magzatvizet a sejtpellet felett<br />
0,5 ml-re és szuszpendálja újra. Adjon megfelelő<br />
mennyiségű <strong>Chang</strong> Medium C-t a koncentrált sejt<br />
szuszpenzióhoz, szánjon 0,5 ml végtérfogatot a<br />
bevonathoz fedőlemezenként ( összesen 4 fedőlemez)<br />
vagy 2 ml-t üvegcsékként.<br />
3. Inkubálja a tenyészeteket nyugalomban, 37°C-on 5%<br />
CO2 atmoszférában.<br />
4. Árassza el a tenyészetet a 2. napon 2 ml <strong>Chang</strong> Medium<br />
C hozzáadásával.<br />
5. 4-5 nap eltelte után ellenőrizni kell a tenyészeteket<br />
növekedését. A tenyészeteket táplálni kell, ha<br />
növekedést tapasztalt. Táplálja a tenyészetet úgy,<br />
hogy eltávolít minden felülúszót és helyettesíti 2 ml<br />
friss <strong>Chang</strong> Medium C-vel. Tanácsos a tenyészeteket<br />
ezután minden 2 napban táplálni.<br />
6. Ellenőrizze a tenyészeteket növekedését az 5. napon<br />
vagy 5 nap után, és végezze el a begyűjtést, ha a<br />
kolóniák megfelelőek.<br />
7. A legjobb eredményt akkor kapja, ha a tenyészetet<br />
a begyűjtést megelőző napon <strong>Chang</strong> Medium C-vel<br />
táplálta.<br />
<strong>Chang</strong> Medium C alkalmazása primer<br />
tenyészeteknél: Lombik módszerek<br />
1. Centrifugálja a magzatvizet kis sebességgel a sejtek<br />
koncentrálására.<br />
2. Szuszpendálja újra a pelletet a beteg saját<br />
magzatvizének kis térfogatával. Például, szívja le a<br />
10 ml centrifugált magzatvizet a sejtpellet felett 1ml-re<br />
és szuszpendálja újra. Adjon 4 ml <strong>Chang</strong> Medium C-t<br />
lombikonként 5 ml össztérfogathoz.<br />
3. Inkubálja a tenyészeteket nyugalomban 37°C-on 5%<br />
CO2 atmoszférában.<br />
4. Ellenőrizze a növekedést az 5. napon. Cserélje ki<br />
a médiumot friss <strong>Chang</strong> Medium C-re és végezzen<br />
begyűjtést, ha megfelelő sejtnövekedést tapasztalt.<br />
5. Ellenőrizze a tenyészeteket növekedését és cserélje<br />
ki teljesen a médiumot minden második nap ezután<br />
addig, amíg megfelelő kolóniákat nem észlel és kész<br />
a begyűjtésre.<br />
6. A legjobb eredményeket akkor éri el, ha a tenyészetet<br />
a begyűjtést megelőző napon <strong>Chang</strong> Medium C-vel<br />
táplálta.<br />
MEGJEGYZÉS: Zárt rendszerhez, öblítsen át minden<br />
tenyésztőedényt 5% CO2- 95% levegővel 20 másodpercre.<br />
Zárja le a tenyésztő lombikok kupakját és inkubálja azokat<br />
37 °C-on. (Ajánlatos egy steril bedugott pasteur pipettát<br />
csatlakoztatni a CO2 forráshoz a bejövő gáz sterilitásának<br />
biztosítására).<br />
<strong>Chang</strong> Medium C alkalmazása passzált<br />
magzatvíz sejtek növekedésére:<br />
A sejtpasszáláshoz kezelje a kultúrát tripszinnel<br />
(vagy pronázzal, stb.) ahogy normálisan teszi, amikor<br />
hagyományos közegben tenyészti a sejteket. A proteáz<br />
kezelést azonban szigorúan monitorozni kell. A magzatvíz<br />
sejtek növekedése a <strong>Chang</strong> Medium C-ben érzékenyebbnek<br />
tűnik a proteáz kezelésre, mint a hagyományos mediumban<br />
növelt magzatvíz sejteké. Lehetséges, hogy meg kell<br />
változtatnia a protokollját ennek figyelembevételére.<br />
LIETUVIŲ K.<br />
REKOMENDUOJAMA TAIKYMO SRITIS<br />
<strong>Chang</strong> Medium C terpė gali būti naudojama pagal tokią<br />
paskirtį:<br />
1. pirminės vaisiaus vandenų ląstelių kultūros<br />
auginimas<br />
2. vaisiaus vandenų persėtos kultūros ląstelių<br />
auginimas<br />
3. kaulų čiulpų ląstelių kultūros auginimas<br />
4. kietųjų amniono audinių kultūrų auginimas iš<br />
chorionų gaurelių mėginių.<br />
ŠI TERPĖ SUKURTA NAUDOTI TIEK ATVIROSIOSE<br />
( K U LT Ū R O S P U S I A U S V I R I N A M O S 5 % C O 2<br />
ATMOSFEROJE), TIEK UŽDAROSIOSE KULTIVAVIMO<br />
SISTEMOSE (KULTŪROS VEIKIAMOS 5% CO2 IR<br />
INKUBUOJAMOS SANDARIUOSE KULTIVAVIMO<br />
INDUOSE).<br />
Perspėjimas: <strong>Chang</strong> Medium C komponentų naudoti<br />
negalima pasibaigus atskirose etiketėse nurodytam<br />
tinkamumo laikui.<br />
PRODUKTO APRAŠYMAS<br />
<strong>Chang</strong> Medium ® C terpė buvo sukurta pirminės žmogaus<br />
vaisiaus vandenų ląstelių kultūros auginimui atliekant<br />
kariotipavimo ir kitus antenatalinius genetinius tyrimus. ŠI<br />
RECEPTŪRA YRA OPTIMIZUOTA TIEK ATVIROSIOMS,<br />
TIEK UŽDAROSIOMS KULTIVAVIMO SISTEMOMS.<br />
LAIKYMO SĄLYGOS<br />
<strong>Chang</strong> Medium C šaldytą priede mažesnis kaip -10 °C<br />
temperatūroje, <strong>Chang</strong> Medium C liofilizuotą priedą laikyti<br />
2 °C–8 °C temperatūroje, <strong>Chang</strong> Medium B bazinę terpę<br />
laikyti 2 °C–8 °C temperatūroje, o kompleksinę <strong>Chang</strong><br />
Medium C terpę laikyti 2 °C–8 °C temperatūroje. <strong>Chang</strong><br />
Medium B bazinės terpės negalima užšaldyti.<br />
Saugoti nuo fluorescencinių spindulių.<br />
STABILUMAS<br />
Specifinis tinkamumo laikas nurodytas atskirų komponentų<br />
butelių etiketėse. Prieš naudojimą kompleksinę <strong>Chang</strong><br />
Medium C terpę galima laikyti 2 °C–8 °C temperatūroje 10<br />
dienų nepakenkiant jos funkcinėms savybėms. Laikyti ilgiau<br />
kaip 10 dienų nerekomenduojama.<br />
KOMPLEKSINĖS CHANG MEDIUM C TERPĖS NEGALIMA<br />
UŽŠALDYTI.<br />
SUDĖTIS<br />
mg/l<br />
Druskos................................................................7900<br />
Dekstrozė.............................................................1400<br />
Aminorūgštys.......................................................1000<br />
Polipeptidai................................................................66<br />
Vitaminai...................................................................22<br />
Deoksiribonukleozidai...............................................21<br />
Ribonukleozidai........................................................20<br />
Natrio piruvatas.......................................................110<br />
Kiti sudėtiniai komponentai.........................................8<br />
Hormonai ir mikroelementai...............................0,0025<br />
Steroidiniai hormonai.........................................0,0013<br />
Atsivesto veršiuko serumas...............................6% v/v<br />
Galvijų vaisiaus serumas...................................6% v/v<br />
ATSARGUMO PRIEMONĖS IR ĮSPĖJIMAI<br />
Šis prietaisas yra skirtas naudoti darbuotojams,<br />
apmokytiems atlikti procedūras, susijusias su prietaiso<br />
taikymu pagal numatytą paskirtį.<br />
KOMPLEKSINĖS CHANG MEDIUM C<br />
TERPĖS RUOŠIMAS<br />
Liofilizuotas priedas<br />
1. Leiskite <strong>Chang</strong> Medium C liofilizuotam priedui kambario<br />
temperatūroje nusistovėti iki pusiausvirosios būsenos.<br />
2. Laikydamiesi aseptikos reikalavimų, į liofilizatą įpilkite<br />
10 ml arba 50 ml sterilaus distiliuoto vandens. 10 ml<br />
buteliukas yra skirtas 90 ml <strong>Chang</strong> Medium B bazinei<br />
terpei; ml buteliukas yra skirtas 450 ml <strong>Chang</strong> Medium<br />
B bazinei terpei.<br />
<strong>Chang</strong> Medium C terpės naudojimas<br />
pirminėms kultūroms: in situ metodai<br />
1. Vaisiaus vandenis centrifuguokite mažu greičiu<br />
koncentruotai ląstelių masei gauti.<br />
2. Nusėdusias ląsteles resuspenduokite nedideliame<br />
pačios pacientės vaisiaus vandenų kiekyje. Pavyzdžiui,<br />
nusiurbkite 10 ml centrifuguotų vaisiaus vandenų<br />
supernatantą palikdami 0,5 ml virš ląstelių nuosėdų<br />
ir resuspenduokite. Į koncentruotą ląstelių suspensiją<br />
pridėkite pakankamai <strong>Chang</strong> Medium C terpės, kad<br />
galutinis po kiekvienos plokštelės dengiamuoju stikleliu<br />
tenkantis tūris būtų 0,5 ml (iš viso 4 dengiamieji stikleliai)<br />
arba po 2 ml vienam flakonėliui.<br />
3. Kultūras netrukdomai inkubuokite 37 °C temperatūroje<br />
5% CO2 atmosferoje.<br />
4. 2-ą dieną ant kultūrų užliekite po 2 ml <strong>Chang</strong> Medium<br />
C terpės.<br />
5. Praėjus 4–5 dienoms, reikia patikrinti kultūrų augimą.<br />
Pastebėjus augimą, kultūras reikia pamaitinti. Kultūras<br />
maitinkite nusiurbdami visą virš pasėlio susidariusį<br />
supernatantą ir jį pakeisdami 2 ml šviežios <strong>Chang</strong><br />
Medium C terpės. Po to kultūras rekomenduojama<br />
maitinti kas 2 dienas.<br />
6. 5-ą dieną arba po 5 dienų patikrinkite kultūrų augimą ir<br />
aptikę pakankamai kolonijų ląsteles surinkite.<br />
7. Geriausių rezultatų pasiekiama <strong>Chang</strong> Medium C terpe<br />
pasėlius maitinant dieną prieš ląstelių surinkimą.<br />
<strong>Chang</strong> Medium C terpės naudojimas<br />
pirminėms kultūroms: kultivavimo flakonuose<br />
metodai<br />
1. Vaisiaus vandenis centrifuguokite mažu greičiu<br />
koncentruotai ląstelių masei gauti.<br />
2. Nusėdusias ląsteles resuspenduokite nedideliame<br />
pačios pacientės vaisiaus vandenų kiekyje. Pavyzdžiui,<br />
nusiurbkite 10 ml centrifuguotų vaisiaus vandenų<br />
supernatantą palikdami 1 ml virš ląstelių nuosėdų ir<br />
resuspenduokite. Pridėkite 4 ml <strong>Chang</strong> Medium C<br />
terpės, kad bendras tūris flakone būtų 5 ml.<br />
3. Kultūras netrukdomai inkubuokite 37 °C temperatūroje<br />
5% CO2 atmosferoje.<br />
4. 5-ą dieną patikrinkite augimą. Terpę pakeiskite šviežia<br />
<strong>Chang</strong> Medium C terpe ir pastebėję pakankamai<br />
priaugusių ląstelių jas surinkite.<br />
5. Po to kas antrą dieną patikrinę kultūrų augimą visiškai<br />
pakeiskite terpę, kol bus priaugę pakankamai kolonijų,<br />
kurias galima surinkti.<br />
6. Geriausių rezultatų pasiekiama <strong>Chang</strong> Medium C terpe<br />
pasėlius maitinant dieną prieš ląstelių surinkimą.<br />
PASTABA: Kultivuodami uždarosiose sistemose,<br />
kiekvieną pasėlio flakonėlį 20 sekundžių eksponuokite<br />
5% CO2 ir 95% oro mišiniu. Sandariai prisukę dangtelius,<br />
flakonus su kultūromis inkubuokite 37 °C temperatūroje.<br />
(Rekomenduojama prie CO2 šaltinio prijungti sterilią Pastero<br />
pipetę su kamštuku, užtikrinant įeinančių dujų sterilumą.)<br />
<strong>Chang</strong> Medium C terpės naudojimas vaisiaus<br />
vandenų persėtų kultūrų ląstelėms auginti:<br />
Norėdami persėti ląsteles, kultūras apdorokite tripsinu (arba<br />
pronaze ar kt.), kaip kad paprastai darytumėte augindami<br />
ląsteles įprastinėje terpėje. Visgi apdorojimo proteazėmis<br />
procesą būtina atidžiai stebėti. <strong>Chang</strong> Medium C terpėje<br />
augintos vaisiaus vandenų ląstelės turi didesnį polinkį<br />
jautriau reaguoti į apdorojimą proteazėmis negu įprastinėje<br />
terpėje augintos vaisiaus vandenų ląstelės. Į tai atsižvelgiant<br />
gali prireikti pakoreguoti tyrimo metodo protokolą.<br />
KOKYBĖS LAIDAVIMAS
5. Keverje össze a teljes <strong>Chang</strong> Medium C-t alaposan az<br />
üveg rázogatásával.<br />
6. Adjon hozzá 10 ml/l (200 mM ) L-glutamint. Szükség<br />
szerint antibiotikum adható hozzá.<br />
Fagyasztott kiegészítő<br />
1. Olvassza fel <strong>Chang</strong> Medium C fagyasztott kiegészítőt<br />
a fiolát 37°C vízfürdőben körkörösen mozgatva.<br />
2. Aszeptikusan vigye át a felengedett <strong>Chang</strong> Medium<br />
C kiegészítő teljes tartalmát <strong>Chang</strong> Medium B alap<br />
üvegébe.<br />
3. Keverje össze a teljes <strong>Chang</strong> Medium C-t jól, az üveg<br />
körkörös mozgatásával.<br />
4. Adjon hozzá 10,0 ml/l (200mM) L-glutamint. Szükség<br />
szerint antibiotikum adható hozzá.<br />
CHANG MEDIUM C KIEGÉSZITŐ<br />
ALIQUOTOLÁSA<br />
Liofilizált kiegészítő<br />
Ha nem tudja a teljes <strong>Chang</strong> Medium C-t 10 napon belül<br />
felhasználni, célszerű kisebb mennyiségeket készíteni,<br />
követve ezt a módosított eljárást:<br />
1. Rekonstruálja a <strong>Chang</strong> Medium C liofilizált kiegészítőt.<br />
2. Ossza szét aszeptikusan megfelelő méretű aliquotokra<br />
és fagyassza le újra.<br />
3. Szintén aszeptikusan, ossza szét <strong>Chang</strong> Medium B<br />
alapot a megfelelő számú aliquotra.<br />
4. A teljes <strong>Chang</strong> Medium C elkészítéséhez adjon egy<br />
aliquot felengedett <strong>Chang</strong> Medium C kiegészítőt egy<br />
aliquot <strong>Chang</strong> Medium B alaphoz.<br />
5. Keverje össze jól.<br />
Fagyasztott kiegészítő<br />
1. Olvassza fel <strong>Chang</strong> Medium fagyasztott kiegészítőt.<br />
2. Ossza szét aszeptikusan megfelelő méretű aliquotokra<br />
és fagyassza le újra. (MEGJEGYZÉS: A kiegészítő fiola<br />
14 ml vagy 70 ml-t tartalmaz. Ossza egyenlő részekre.)<br />
3. Szintén aszeptikusan, ossza szét <strong>Chang</strong> Medium B<br />
alapot a megfelelő számú aliquotra.<br />
4. A teljes <strong>Chang</strong> Medium C elkészítéséhez adjon egy<br />
felengedett <strong>Chang</strong> Medium C kiegészítőt egy aliquot<br />
<strong>Chang</strong> Medium B alaphoz.<br />
5. Keverje össze jól.<br />
HASZNÁLATI UTASITÁS<br />
A TENYÉSZETEKET TÁPLÁLÓ MÉDIUM pH<br />
–JA 6,8 ÉS 7,2 KÖZÖTT KELL LEGYEN (azaz<br />
a médium gyengén sárgás lazacszínű kell legyen). A pH<br />
könnyen beállítható a médiumot 5%-8% CO2-s inkubátorba<br />
helyezve, meglazított fedővel.<br />
A végső pH 6,8-7,2 között kell, hogy legyen.<br />
E termékek használatára vonatkozóan a további részletekért<br />
minden laboratóriumnak a sajátos orvosi programjukra<br />
speciálisan kifejlesztett és optimalizált saját laboratóriumi<br />
eljárásaikban és protokolljaikban kell utánanéznie.<br />
MINŐSÉGBIZTOSITÁS<br />
STERILITÁS<br />
A <strong>Chang</strong> Medium kiegészítő készítésekor használt szérumot<br />
vizsgálták vírus szennyezésre CFR 9. /113.53. szerint.<br />
Ellenőrizték Mycoplasma szennyezére is. Mind <strong>Chang</strong><br />
Medium B alap, mind pedig <strong>Chang</strong> Medium C kiegészítő<br />
sterilizált, 0,1 mikronos szűrőn szűrt. A <strong>Chang</strong> Medium<br />
B alap és a <strong>Chang</strong> Medium C kiegészítő reprezentatív<br />
mintáit vizsgálták lehetséges baktérium szennyezettségre<br />
a jelenlegi USP sterilitási tesztben leirt sterilitási<br />
tesztprotokoll szerint.<br />
<strong>Chang</strong> Medium ® az <strong>Irvine</strong> <strong>Scientific</strong> bejegyzett márkaneve.<br />
3. Atsargiai pasukdami buteliuką sumaišykite visą tirpalą.<br />
(PASTABA: Buteliuką gali prireikti 5–10 minučių<br />
inkubuoti 37 °C temperatūroje, kol priedas visiškai<br />
ištirps).<br />
4. Aseptiniu būdu visą atskiesto <strong>Chang</strong> Medium C priedo<br />
turinį perpilkite į <strong>Chang</strong> Medium B bazinės terpės butelį.<br />
5. Sukdami butelį gerai sumaišykite kompleksinę <strong>Chang</strong><br />
Medium C terpę.<br />
6. Pridėkite L-glutamino, 10,0 ml/l (200 mM). Pageidaujant<br />
galima papildyti antibiotikais.<br />
Šaldytas priedas<br />
1. <strong>Chang</strong> Medium C šaldytą priedą greitai atitirpinkite<br />
sukiodami buteliuką 37 °C vandens vonelėje.<br />
2. Aseptiniu būdu visą atšildyto <strong>Chang</strong> Medium C priedo<br />
turinį perpilkite į <strong>Chang</strong> Medium B bazinės terpės butelį.<br />
3. Sukdami butelį gerai sumaišykite kompleksinę <strong>Chang</strong><br />
Medium C terpę.<br />
4. Pridėkite L-glutamino, 10,0 ml/l (200 mM). Pageidaujant<br />
galima papildyti antibiotikais.<br />
CHANG MEDIUM C PRIEDO DALIJIMAS Į<br />
PORCIJAS<br />
Liofilizuotas priedas<br />
Jei negalėsite kompleksinę <strong>Chang</strong> Medium C terpę<br />
sunaudoti per 10 dienų, gali būti tikslinga pasigaminti<br />
mažesnius kiekius pagal toliau pateikiamą modifikuotą<br />
procedūrą.<br />
1. Atskieskite <strong>Chang</strong> Medium C liofilizuotą priedą.<br />
2. Aseptiniu būdu išpilstykite reikiamo dydžio alikvotinėmis<br />
dalimis ir jas užšaldykite.<br />
3. Taip pat aseptiniu būdu į atitinkamą skaičių alikvotinių<br />
dalių išpilstykite <strong>Chang</strong> Medium B bazinę terpę.<br />
4. Ruošdami kompleksinę <strong>Chang</strong> Medium C terpę, į vieną<br />
<strong>Chang</strong> Medium B bazinės terpės porciją dėkite vieną<br />
atšildyto <strong>Chang</strong> Medium C priedo porciją.<br />
5. Gerai sumaišykite.<br />
Šaldytas priedas<br />
1. Atšildykite <strong>Chang</strong> Medium C šaldytą priedą.<br />
2. Aseptiniu būdu išpilstykite reikiamo dydžio alikvotinėmis<br />
dalimis ir vėl užšaldykite. (PASTABA: Priedo buteliuke<br />
yra 14 ml arba 70 ml tirpalo. Paskirstykite vienodai.)<br />
3. Taip pat aseptiniu būdu į atitinkamą skaičių alikvotinių<br />
dalių išpilstykite <strong>Chang</strong> Medium B bazinę terpę.<br />
4. Ruošdami kompleksinę <strong>Chang</strong> Medium C terpę, į vieną<br />
<strong>Chang</strong> Medium B bazinės terpės porciją dėkite vieną<br />
atšildyto <strong>Chang</strong> Medium C priedo porciją.<br />
5. Gerai sumaišykite.<br />
NAUDOJIMO NURODYMAI<br />
Kultūroms maitinti naudojamos terpės<br />
rūgštingumas turi būti pH 6,8–7,2 (t. y. terpė turi<br />
būti šiek tiek gelsvai lašišinės spalvos). pH galima lengvai<br />
pakoreguoti terpę palaikant 5%–8% CO2 inkubatoriuje su<br />
šiek tiek atlaisvintu dangteliu.<br />
Galutinė pH reikšmė turi būti 6,8–7,2.<br />
Dėl išsamesnių šių produktų naudojimo gairių kiekviena<br />
laboratorija turi žiūrėti savo vidaus darbo tvarkos taisykles ir<br />
metodinius nurodymus, specialiai parengtus ir optimizuotus<br />
pagal atskiros medicininės programos nuostatas.<br />
STERILUMAS<br />
Serumas, naudotas gaminant <strong>Chang</strong> Medium C priedą,<br />
virusinių užkratų atžvilgiu yra ištirtas pagal 9 CFR<br />
kodekso 113.53 dalies standartus. Taip pat patikrinta, ar jis<br />
neužkrėstas mikoplazmomis. Tiek <strong>Chang</strong> Medium B bazinė<br />
terpė, tiek <strong>Chang</strong> Medium C priedas yra sterilizuoti filtruojant<br />
per 0,1 mikronų filtrus. <strong>Chang</strong> Medium B bazinės terpės ir<br />
<strong>Chang</strong> Medium C priedo tipiniai pavyzdžiai yra išbandyti<br />
bakteriologinio užkrėtimo rizikai nustatyti pagal šiuo metu<br />
patvirtintą Jungtinių Valstijų farmakopėjos (USP) sterilumo<br />
bandymų protokolą .<br />
<strong>Chang</strong> Medium ® yra „<strong>Irvine</strong> <strong>Scientific</strong>“ bendrovės<br />
registruotas prekės ženklas.