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lastosporas; liberación de toxinas y muerte del hospedero; producción de micelio; y producción de nuevas esporas. En Chile se ha recolectado más de 600 aislamientos de B. bassiana, algunos de los cuales poseen una alta patogenicidad hacia artrópodos plagas de importancia para nuestro país (France et al., 2000; Gerding et al., 2000). En el caso particular de D. pallens, el aislamiento QU-B931 fue obtenido a partir de larvas de esta especie que se encontraban infectadas en una pradera en las cercanías de Osorno, Décima Región. Pruebas de laboratorio y de campo, tanto a pequeña como gran escala, han demostrado que el nivel de control de cuncunilla negra utilizando este hongo es similar al nivel de control alcanzado con el uso del insecticida lambda-cyhalotrina (Cisternas et al., 2003). Sin embargo, el control utilizando esporas del aislamiento QU-B931 presenta particularidades que lo diferencian de otros tipos de control: 1. El CB mediante este tipo de microorganismos se ha realizado preferentemente utilizando el enfoque inundativo (Bellows et al., 1999), es decir, con la aplicación masiva y concentrada de grandes cantidades de propágulos del microorganismo en un ambiente, sin que necesariamente se establezca ni propague. Esto implica que cada vez que sea necesario se realiza una nueva aplicación. 2. Entre los agentes utilizados en CB, la reproducción sexual es más común en los macroorganismos, mientras que la reproducción asexual predomina en los microorganismos. Lo anterior implica que la diversidad genética de los microorganismos utilizados en CB generalmente sea menor que la diversidad genética de los macroorganismos usados en CB. La primera de estas singularidades (predominancia del enfoque inundativo) implica que los hongos entomopatógenos generalmente son utilizados en ambientes donde ya estaban presentes, pero en menor cantidad. Por lo tanto, su uso no implica la expansión de su rango geográfico, pero sí involucra la posibilidad de desplazar poblaciones locales conespecíficas, 11
con la consiguiente pérdida o disminución de algunos genes (Hintz et al., 2001; Teng y Yang, 1993). La segunda de estas consideraciones (predominancia de la reproducción asexual) implica que la identificación individual de un genotipo seleccionado, en el caso de un hongo entomopatógeno, suele ser más difícil que en otro tipo de organismos utilizados en control biológico. Los aislamientos seleccionados para ser usados como insecticidas microbianos, tal como el aislamiento QU-B931, requieren ser caracterizados a un nivel infra-específico (Jenkins y Grzywacz, 2000), ya que aislamientos diferentes muestran una considerable especialización en cuanto a su hospedero y por ende la identificación a nivel de especie resulta insuficiente (Humber, 1997). La escasez de caracteres morfológicos confiables en el género Beauveria dificulta distinguir entre especies y sobre todo entre aislamientos al interior de la especie. Lo anterior ha impulsado la búsqueda de otros caracteres taxonómicos, en especial de tipo molecular: isoenzimas, RFLP mitocondrial, inmunología, secuencias de rRNA, RFLP, RAPD, microsatélites, secuencias de la región ITS e intrones de la subunidad mayor del rDNA (St Leger et al., 1992; Piatti et al., 2000; Valderrama et al., 2000; Bidochka et al., 1994; Castrillo y Brooks, 1998; Rehner y Buckley, 2005). Antecedentes sobre los efectos no deseados producidos por el uso de Beauveria spp. A pesar que cerca del 50% de casos de aplicaciones inundativas de microorganismos entomopatógenos han producido algún tipo de efecto no deseado en otras poblaciones, ellas son consideradas suficientemente seguras debido a su relativa falta de persistencia y el consecuente carácter temporal de sus impactos negativos (Lynch y Thomas, 2000). El enfoque tradicional para evaluar este tipo de efectos ha incluido realizar pruebas de patogenicidad del aislamiento seleccionado hacia especies de interés particular (rango de hospederos potencial o máximo) y posteriormente evaluar el efecto a nivel de campo en esas especies (rango de hospederos realizado) [Amano y Haseeb, 2001]. Siguiendo este esquema de evaluación, se ha reportado que algunos aislamientos de Beauveria spp. han 12
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con la consiguiente pérdida o disminución <strong>de</strong> algunos genes (Hintz et al., 2001; Teng y<br />
Yang, 1993).<br />
La segunda <strong>de</strong> estas consi<strong>de</strong>raciones (predominancia <strong>de</strong> la reproducción asexual) implica<br />
que la i<strong>de</strong>ntificación individual <strong>de</strong> un genotipo seleccionado, en el caso <strong>de</strong> un hongo<br />
entomopatógeno, suele ser más difícil que en otro tipo <strong>de</strong> organismos utilizados en <strong>control</strong><br />
<strong>biológico</strong>. Los aislamientos seleccionados para ser usados como insecticidas microbianos,<br />
tal como el aislamiento QU-B931, requieren ser caracterizados a un nivel infra-específico<br />
(Jenkins y Grzywacz, 2000), ya que aislamientos diferentes muestran una consi<strong>de</strong>rable<br />
especialización en cuanto a su hospe<strong>de</strong>ro y por en<strong>de</strong> la i<strong>de</strong>ntificación a nivel <strong>de</strong> especie<br />
resulta insuficiente (Humber, 1997).<br />
La escasez <strong>de</strong> caracteres morfológicos confiables en el género Beauveria dificulta<br />
distinguir entre especies y sobre todo entre aislamientos al interior <strong>de</strong> la especie. Lo<br />
anterior ha impulsado la búsqueda <strong>de</strong> otros caracteres taxonómicos, en especial <strong>de</strong> tipo<br />
molecular: isoenzimas, RFLP mitocondrial, inmunología, secuencias <strong>de</strong> rRNA, RFLP,<br />
RAPD, microsatélites, secuencias <strong>de</strong> la región ITS e intrones <strong>de</strong> la subunidad mayor <strong>de</strong>l<br />
rDNA (St Leger et al., 1992; Piatti et al., 2000; Val<strong>de</strong>rrama et al., 2000; Bidochka et al.,<br />
1994; Castrillo y Brooks, 1998; Rehner y Buckley, 2005).<br />
Antece<strong>de</strong>ntes sobre los efectos no <strong>de</strong>seados producidos por el uso <strong>de</strong> Beauveria spp.<br />
A pesar que cerca <strong>de</strong>l 50% <strong>de</strong> casos <strong>de</strong> aplicaciones inundativas <strong>de</strong> microorganismos<br />
entomopatógenos han producido algún tipo <strong>de</strong> efecto no <strong>de</strong>seado en otras poblaciones, ellas<br />
son consi<strong>de</strong>radas suficientemente seguras <strong>de</strong>bido a su relativa falta <strong>de</strong> persistencia y el<br />
consecuente carácter temporal <strong>de</strong> sus impactos negativos (Lynch y Thomas, 2000).<br />
El enfoque tradicional para evaluar este tipo <strong>de</strong> efectos ha incluido realizar pruebas <strong>de</strong><br />
patogenicidad <strong>de</strong>l aislamiento seleccionado hacia especies <strong>de</strong> interés particular (rango <strong>de</strong><br />
hospe<strong>de</strong>ros potencial o máximo) y posteriormente evaluar el efecto a nivel <strong>de</strong> campo en<br />
esas especies (rango <strong>de</strong> hospe<strong>de</strong>ros realizado) [Amano y Haseeb, 2001]. Siguiendo este<br />
esquema <strong>de</strong> evaluación, se ha reportado que algunos aislamientos <strong>de</strong> Beauveria spp. han<br />
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